LAPORAN PRAKTIKUM MIKROBIOLOGI DASAR ACARA II ISOLASI BAKTERI KELOMPOK 3 Penanggung jawab:
Erni Astutiningsih (A1M013038)
KEMENTERIAN PENDIDIKAN DAN KEBUDAYAAN NASIONAL UNIVERSITAS JENDERAL SOEDIRMAN
FAKULTAS PERTANIAN PURWOKERTO
I. PENDAHULUAN A. Latar Belakang
Mikroba yang hidup di alam terdapat dalam bentuk populasi campuran. Jarang sekali kita temukan mikroba di alam yang hidup hanya satu spesies atau spesies tunggal. Agar mikroba dapat diidentifikasi maka langkah yang pertama harus dilakukan adalah memisahkan spesies tersebut dari organisme lain yang ada dihabitatnya, selanjutnya dikembangkan menjadi biakan murni yaitu suatu biakan yang terdiri dari sel-sel dari satu jenis mikroba. Maka dari itu harus dilakukan isolasi maupun permurnian agar didapatkan bakteri dalam keadaan murni. Isolasi adalah cara yang dilakukan untuk memisahkan mikroba tertentu dari lingkungannya, sehingga diperoleh kultur murni. Kultur murni ialah kultur yang sel-sel mikrobianya berasal dari pembelahan dari satu sel tunggal. Maka dari itu pada praktikum ini kita akan mengetahui dan mempraktekan teknik isolasi mikroba sehingga kita dapat membiakkan dan menumbuhkan bakteri yang murni. Cara isolasi mikroba yang dilakukan pada praktikum kali ini adalah metode tuang (pour plate), metode goresan (streak plate), agar miring (slant culture), dan agar tegak (stab culture) (Thalib, 2004)
B. Tujuan
II. TINJAUAN PUSTAKA
Isolasi adalah mengambil mikroorganisme yang terdapat di alam dan menumbuhkannya pada medium buatan. Prinsip dari isolasi mikroba adalah memisahkan satu jenis mikroba dengan mikroba lainnya yang berasal dari campuran berbagai macam mikroba. Isolasi bakteri atau biakan yang terdiri dari satu jenis mikroorganisme (bakteri) dikenal sebagai biakan murni atau biakan aksenik. Biakan yang berisi lebih dari satu macam mikroorganisme (bakteri) dikenal sebagai biakan campuran, jika hanya terdiri dari dua jenis mikroorganisme, yang dengan sengaja dipelihara dikenal sebagai biakan dua-jenis.
Prinsip dari isolasi mikroba adalah memisahkan satu jenis mikroba dengan mikroba lain yang berasal dari campuran bermacam-macam mikroba. Hal ini dapat dilakukan dengan menumbuhkannya dalam media padat, sel-sel mikroba akan membentuk koloni sel yang tetap pada tempatnya (Indriyani, 2007).
Biakan murni diperlukan dalam berbagai metode mikrobiologis, antara lain digunakan dalam mengidentifikasi mikroba. Untuk mengamati ciri-ciri kultural morfologi, fisiologi dan serologi dibutuhkan mikroba yang berasal dari satu spesies (Suriawiria, 2005).
Dikenal beberapa cara atau metode untuk memperoleh biakan murni dari suatu biakan campuran. Dua diantaranya yang paling sering digunakan adalah metode cawan gores dan metode cawan tuang, yang didasarkan pada prinsip pengenceran dengan maksud untuk memperoleh spesies individu. Dengan anggapan bahwa setiap koloni dapat terpisah dari satu jenis sel yang dapat diamati (Afrianto, 2004).
Media adalah suatu bahan yang terdiri dari campuran zat-zat hara (nutrien) yang berguna untuk membiakkan mikroba. Agar mikroba dapat tumbuh baik dalam suatu media, maka medium tersebut harus memenuhi syarat-syarat, antara lain: harus mengandung semua zat hara yang mudah digunakan oleh mikroba, harus mempunyai tekanan osmosis, tegangan permukaan dan pH yang sesuai
dengan kebutuhan mikroba yang akan tumbuh, tidak mengandung zat-zat yang dapat menghambat pertumbuhan mikroba, harus berada dalam keadaan steril sebelum digunakan, agar mikroba yang ditumbuhkan dapat tumbuh dengan baik (Plezar, 2006).
Ada empat metode mengisolasi bakteri yaitu : a. Pour plate atau metode tuang
Beberapa ml bakteri dicampur dengan medium yang masih cair. Setelah inkubasi pada suhu dan waktu tertentu, koloni akan tumbuh pada permukaan dan bagian bawah agar.
b. Streak plate atau metode gores
Kawat ose mengandung bakteri digoreskan permukaan agar-agar dalam cawan petri sebanyak tiga baris.metode ini membutuhkan keterampilan karena jika salah menggoreskan jarum ose akan mengakibatkan medium agar tergores.
c. Slant culture atau agar miring
Kawat ose yang mengandung bakteri digoreskan pada permukaan agar miring dalam tabung reaksi. Penggoresan dilakukan dengan cara menggoreskan secara zig-zag pada permukaan agar miring.
d. Stab culture atau agar tegak
Kawat ose yang mengandung bakteri ditusukkan pada media kira-kira ¾ bagian agar dalam tabung reaksi. Cara ini digunakan untuk menguji bakteri yang bersifat anerob atau tidak memerlukan oksigen. (Afriyanto, 2004)
III. METODE PRAKTIKUM A. Alat dan Bahan
Alat :
1. Cawan petri steril 2. Tabung reaksi 3. Jarum ose 4. Lampu spiritus Bahan :
1. Sampel bakteri dari air sungai pada medium NA 2. Medium NA
B. Prosedur Kerja
1. Metode tuang (pour plate)
Diinkubasi cawan petri selama 2 hari dalam posisi terbalik. Dituang medium NA ke dalam cawan, diratakan.
Diambil 1 ose bakteri dari medium NA dimasukan dalam cawan petri steril dan dicampur dengan akuades.
Disiapkan cawan petri steril, diteteskan 1 ml akuades steril. Disiapkan medium NA steril suhu sekitar 450-500C.
2. Metode goresan (streak plate)
3. Agar miring (slant culture)
Diinkubasi cawan petri selama 2 hari.
Dibagi cawan petri menjadi 4 kuadran. digoreskan 3 baris pada kuadran pertama, kemudian pada kuadran kedua sebanyak 3 baris menyambung
goresan pertama dan seterusnya.
Diambil 1 ose bakteri, digoreskan pada permukaan agar dalam cawan petri. Dituangkan medium ke dalam cawan petri steril, diratakan dan dibiarkan
memadat.
Disiapkan medium NA steril suhu sekitar 450-500C
Ditutup tabung reaksi dan diinkubasi selama 2 hari.
Diambil 1 ose bakteri murni, digoreskan zig-zag pada permukaan agar. Disiapkan medium agar miring steril dalam tabung reaksi.
4. Agar tegak (stab culture)
Ditutup tabung reaksi dan diinkubasi selama 2 hari.
Diambil 1 ose bakteri murni, dan ditusukan kedalam agar sepanjang 3/4 bagian.
IV. HASIL DAN PEMBAHASAN A. Hasil
Pour Plate
Udara Air Sumur
Air Sungai Tanah
Streak Plate
Udara Air Sumur
Air Sungai Tanah
Slant Culture
Udara Air Sumur
Air Sungai Tanah
Stab Culture
Udara Air Sumur
Air Sungai Tanah
B. Pembahasan
Dalam praktikum isolasi bakteri, diperlukan medium yang berisi zat hara untuk metabolisme sel, sintesis sel dan pertumbuhan sel. Yang digunakan dalam praktikum adalah medium padat yaitu agar. Media yang digunakan dalam praktikum adalah NA karena yang akan di biakan adalah bakteri. Metode yang dilakukan antara lain :
1. Metode tuang (pour plate)
Metode tuang terdiri dari penginokulasian biakan murni dalam hal ini digunakan bakteri dari udara, air sumur, air sungai tanah dan makanan yang sudah dibuat dalam acara 1 dengan medium NA dalam cawan petri. Akuades dituang ditengah cawan, lalu diambil 1 ose bakteri dan dicampurkan dengan akuades yang ada ditengah cawan. Selanjutnya dituangkan media ke dalam cawan petri, media yang digunakan yaitu NA pada suhu 45 oC – 50 0C. Cawan ini kemudian diputar untuk mencampur isinya dan dibiarkan memadat. Setelah memadat, diinkubasi selama 2 hari dan terlihatlah koloni yang ada pada media tersebut. Tujannya adalah memisahkan sel-sel bakteri satu sama lain sehingga terbentuk menjadi koloni-koloni yang terpisah dalam medium yang padat. Pada percobaan isolasi bakteri dengan menggunakan teknik pour plate bentuk koloni bakteri menyebar tidak teratur. Bakteri yang ada pada medium bentuknya tidak beraturan, ukurannya titik dan ada beberapa yang berukuran kecil. Kenampakan bentuknya datar atau flat, dan bagian tepi koloni seperti terdapat filamen.
2. Metode goresan (streak plate)
Metode goresan terdiri dari penginokulasian biakan murni dalam hal ini digunakan bakteri dari udara, air sumur, air sungai tanah dan makanan yang sudah dibuat dalam acara 1 dengan medium NA dalam cawan petri. Medium NA dengan suhu 45 0C – 50 0C dituangkan kedalam cawan petri steril dan diratakan selanjutnya dibiarkan dingin dan memadat. Setelah medium NA padat, ambil 1 ose bakteri pada acara 1 kemudian goreskan pada permukaan agar. Cara
menggoreskannya yaitu cawan dibagi menjadi 4 bagian kemudian goreskan bakteri pada permukaan agar tiga baris yang menyambung dari cawan kuadran ke-1 sampai ke cawan kuadran ke-4. Setelah diinkubasi selama 2 hari akan terlihat koloni bakteri berkumpul pada goresan-goresan tersebut. Seharusnya pada kuadran ke-1 terdapat mikroba dalam jumlah yang penuh kemudian semakin berkurang pada setiap kuadrannya, dan seharusnya pada kuadran ke-4 mampu diamati koloni mikrobanya. Dikarenakan pada saat penggoresan yang kurang baik, atau terjadinya kontaminasi sehingga bakteri menyebar ke semua bagian cawan. Bakteri yang dihasilkan ada bermacam-macam ukuran ada yang besar dan kecil, bentuk koloni bakteri tidak beraturan, kenampakan bentuk koloni datar dan bagian tepi koloni tidak rata dan cenderung bergelombang.
3. Agar miring (slant culture)
Metode ini mirip dengan metode streak plate, hanya saja metode slant culture ini (agar miring) media NA disiapkan dalam tabung reaksi dengan posisi miring. Satu ose bakteri diambil dari acara I dan digoreskan dengan arah zig-zag dimulai dari bawah tabung. Setelah itu diinkubasi selama 2 X 24 jam untuk melihat pertumbuhan bakteri. Dalam percobaan yang dilakukan ada pertumbuhan bakteri yang terlihat di permukaan agar. Bakteri yang tumbuh disekitar goresan berukuran titik dan kecil. Bakteri yang tumbuh bersifat aerob.
4. Agar tegak (stab culture)
Medium NA disiapkan dalam tabung reaksi, kemudian 1 ose koloni bakteri diambil dari acara I dan ditusukkan dengan menggunakan jarum ose yang ujungnya runcing. Setelah itu tabung ditutup menggunakan kapas dan plastik dan diinkubasi selama 2 hari. Setelah 2 hari inkubasi terdapat pertumbuhan mikroba pada agar ditusukkan sebelumnya. Bakteri yang tumbuh memiliki bentuk seperti gelembung dan bakteri yang tumbuh bersifat anaerob. Pada metode stab culture ini teerjadi kontaminasi dengan mikro organisme lain yang menyebabkan permukaan agar tegak menjadi berwarna hijau kebiru-biruan.
V. PENUTUP A. Kesimpulan
Kesimpulan yang didapat setelah melakukan praktikum isolasi mikroba antara lain :
1. Isolasi adalah mengambil mikroorganisme yang terdapat di alam dan menumbuhkannya dalam medium buatan. Prinsip dari isolasi mikroba adalah memisahkan satu jenis mikroba dengan mikroba lainnya yang berasal dari campuran bermacam-macam mikroba.
2. Isolasi bakteri yang dilakukan pada praktikum ini dengan cara metode tuang (pour plate), metode goresan (streak plate), agar miring (slant culture), dan agar tegak (stab culture) yang semuanya menggunakan sample dari medium NA dari acara 1.
3. Medium yang digunakan medium NA karena medium ini cocok untuk menumbuhkan bakteri.
B. Saran
Dalam pelaksanaan praktikum, sebaiknya lebih teliti lagi dalam setiap metode yang dilakukan, supaya hasilnya bisa sesuai dengan yang diharapkan. Keadaan lab, alat- alat yang digunakan dan praktikan juga harus diperhatikan, untuk mengurangi adanya kontaminasi dari luar (udara).
DAFTAR PUSTAKA
Afrianto, L., 2004, Menghitung Mikroba Pada Bahan Makanan, Cakrawala (Suplemen pikiran rakyat untuk iptek), Farmasi FMIPA ITB : Bandung. Buckle. 2007. Mikrobiologi Terapan. Universitas Gajah Mada: Yogyakarta Indriyani, Nur dan Asnani, 2007, Penuntun Praktikum Mikrobiologi Akuatik,
Fakultas Perikanan dan Ilmu Kelautan, Unhalu : Kendari. Plezar.2006. Dasar-Dasar-Mikrobiologi. Jakarta : UI Press
Suriawiria, U. 2005. Mikrobiologi Dasar. Papas Sinar Sinanti, Jakarta Amilius Thalib, Widiawati Y., dan Hamid H., 2004, Uji Efektif Isolasi
Bakteri Hasil Isolasi Mikroba Rumen dengan Media Asetogen sebagai Inhibutor Metanogenesis, JLTV, Vol. 9 (4).
