Penentuan Kadar Protein Secara Biuret

PENENTUAN KADAR PROTEIN SECARA BIURET

I. TUJUAN PRAKTIKUM

Tujuan dalam praktikum ini adalah agar dapat melakukan penetapan kadar protein dengan merode biuret.

II. TINJAUAN PUSTAKA

Protein berasal dari kata protos atau proteos yang berarti pertama atau utama. Protein merupakan komponen penting atau komponen utama sel hewan atau manusia. Oleh karea itu, sel merupakan pembentuk tubuh, maka protein yan terdapat dalam makanan berfungsi sebagai zat utama dalam pembentukan dan pertumbuhan tubuh (Poedjiadi dan Supriyanti, 2006).

Protein merupakan molekul besar dengan bobot molekul bervariasi antara 5000 sampai jutaan. Dengan cara hidrolisis oleh asam atau oleh enzim, protein akan menghasilkan asam-asam amino. Ada 20 jenias asam amino yang terdapat dalam molekul protein. Asam-asam amino ini terikat satu sama lain dengan ikatan peptida. Komposisi rata-rata unsur kimia yang terdapat dalam molekul protein ialah sebagai berikut : karbon 50%, hidrogen 7%, oksigen 23%, nitrogen 16%, belerang 0-3%, dan fosfor 0-3%. Dengan berpedoman pada kadar nitrogen sebesar 16%, dapat dilakukan penentuan kandungan protein dalam suatu bahan makanan. Unsur nitrogen ditentukan secara kuatitatif, misalnya dengan cara Kjedahl, yaitu dengan cara destruksi dengan asam pekat.berat protein yang ditetukan adalah 6,25 kali berat unsur nitrogen (Poedjiadi dan Supriyanti, 2006).

Ikatan yang terjadi antara dua dua asam amino tersebu dinamakan ikata peptida. Jadi, pada satu molekul dipeptida terdapat satu ikatan peptida. Suatu senyawa yang terdiri atas tiga buah asam amino yang berikatan disebut tripeptida. Pada satu molekul tripeptida ini terdapat dua buah ikatan peptida. Ikatan peptida yaitu :

Ikatan peptida O

▸ Baca selengkapnya: benedict dan biuret

Melalui suatu proses tertetu, sejumlah besar molekul asam amino dapat membentuksuatu senyawa yang memiliki banyak ikatan peptida. Molekul senyawa ini merupakan suatu molekul besar atau makromolekul yang terdiri atas banyak molekul asam amino dan karenanya disebut polipeptida. Protein adalah salah satu makromolekul yang terdiri atas sejumlah besar asam amin (Poedjiadi dan Supriyanti, 2006).

Suatu peptida yang mempunyai dua ikatan peptida ata lebih dapat bereaksi dengan ion Cu++ dalam suasana basa dan membentuk suatu senyawa kompleks yang berwarna biru ungu. Reaksi ini dikenal dengan nama reaksi biuret (Poedjiadi dan Supriyanti, 2006).

Telur merupakan salah satu sumber protein hewani yang dikonsumsi oleh masyarakat. Hampir semua zat gizi yang diperlukan oleh tubh ada di dalam telur. Salah satunya protein telur, mengadung semua asam amino esssensial yang dibutuhkan tubuh untuk hidup sehat. Protein merupakan salah satu dari sekian banyak zat yang erat dengan proses kehidupan. Fungsi protein adalah sebagai zat pembangun tubuh, baik pembentuk sel-sel yang baru meupun mengganti sel-sel yang rusak (Hidayati dan Mardiono, 2009).

Kadar protein pada putih telur dapat ditentukan dengan menggunaknan metode gunning yang dibagi menjadi tiga tahap, yaitu tahap destruksi, tahap destilasi dan tahap titrasi (Hidayati, Mardiono, 2009).

III. ALAT DAN BAHAN A. Alat

Adapun alat-alat yang digunakan dalam praktikum ini antara lain :

- Pipet ukur 10 ml - Gelas kimia 100 ml - Kuvet

- Tabung reaksi - Rak tabung reaksi - Filler

- Labu takar 100 ml

B. Bahan

Adapun bahan-bahan digunakan dalam praktikum ini antara lain :

IV. CARA KERJA

Putih telur

- Dipipet 10 ml dan dimasukan dalam labu takar 100 ml

- Ditambahkan dengan akuades sampai batas tera/ tanda batas

- Dikocok dan didiamkan

- Dipipet masing-masing 0,1 ml; 0,2 ml; 0,3 ml; 0,4 ml; 0,6 ml; 0,7 ml; dan 1ml untuk larutan sampel

- Masing-masing ditambahkan akades hingga 1 ml (kecuali larutan sampel) - Dikocok dan didiamkan ±30 menit - Masing-masing diukur serapannya

dengan spektrofotometer

V. HASIL PRAKTIKUM 1) Tabel Hasil Pengamatan

Hasil pengamatan yang diperoleh disajikan dalam tabel berikut :

Tabung Absorbansi (Å) Panjang

gelombang (ʎ )

VIII (1 ml larutan sampel) 0,171

VI. PEMBAHASAN

Protein merupakan suatu makromolekul yang terdiri dari monomer-monomer berupa asam amino. Protein memiliki peran yang sangat penting, salah satunya sebagai pembangun tubuh. Protein dapat diperoleh dari tumbuhan (protien nabati) maupun dari hewan (protein hewani). Salah satu contohnya ialah telur. Pada percobaan ini, dilakukan penentuan kadar protein pada putih telur ayam.

Dalam percobaan, penentuan kadar protein pada putih telur ayam dilakukan dengan cara biuret dan digunakan alat berupa spektrofotometer.sebelumnya, larutan putih telur ayam yang telah diencerkan dengan air ditambahkan dengan pereaksi biuret. Tujuan penambahan pereaksi biuret adalah untuk membuat larutan menjadi berwarna, karena penentuan selanjutnya dengan menggunakan spektrofotometer, di mana larutan hendaknya berwarna.

Penambahan biuret pada putih telur meghasilkan warna biru. Secara teori perubahan warna yang seharusnya setelah penambahan biuret pada larutan protein ialah warna ungu. Perbedaan hasil yang diperoleh dengan teori yang telah dikemukakan sebelumnya kemungkinan dipengaruhi oleh pereaksi biuret yang digunakan sudah tidak memenuhi syarat atau sudah mengalami kerusakan. Adapun perubahan warna tersebut dapat terjadi karena adanya pembantukan kompleks antara ion Cu2+ _{pada pereaksi biuret} dengan gugus amino pad protein. Reaksi biuret bergantung pada pembentukan suatu kompleks antara ion Cu2+ _{dan 4 atom N-peptida pada protein dalam suasana basa.}

Prinsip kerja spektrofotometer ialah dengan memasukkan suatu larutan blanko dalam kuvet dan memasukkannya dalam spektrofotometer, kemudian absorbansi pada spektrofotometer di-nol-kan. Larutan blanko merupakan pelarut yang digunakan untuk melarutkan sampel dan diperlakukan sama dengan larutan sampel. Dalam praktikum ini, larutan blanko yang digunakan adalah air, sedangkan larutan sampel ialah putih telur 1 ml.

Berdasarkan hasil pengamatan yang diperoleh menunjukkan bahwa semakin banyak volume putih telur yang ditambahkan, nilai absorbansi atau serapanya pun semakin meningkat. Hal rsebut berkaitan dengan besarnya konsetrasi putih telur pada larutan tersebut. Semakin banyak volume putih telur yang ditambahkan maka semakin tinggi pula konsentrasinya. Nilai konsentrasi berbanding lurus dengan absorbansi suatu larutan., di mana penngkatan konsentrasi larutan tersebut akan diikuti oleh peningkatan serapan atau absorbansinya.

Hal serupa pula ditunjukkan oleh grafik hasil pengamatan, di mana volume putih telur yang diplot teradap absorbansi menunjukkan peningkatan dari titik ke titik. Diperoleh absorbansi terendah yaitu 0,019 pada tabung I dengan penambahan putih telur sebanyak 0,1 ml dn peambahan air sebanyak 0,9 ml, sedangkan nilai absorbansi teringgi yaitu 0,171 pada larutan sampel 1ml dengan tidak ditambahkan pelarut air, kemudian diikuti dengan nilai absorbansi 0,121 pada tabung 7 dengan penambahan putih telur 0,7 ml dan penambahan airnya 0,3 ml. hasil terebut juga menunjukkan semakin banyak pelarut yang ditambahkan terhadap larutan putih telur yang volumenya diturunkan membuat konsentrasi putih telur menurun, sehingga nilai absorbansinya pun menurun

VII. KESIMPULAN

DAFTAR PUSTAKA

Dangeubun, J.L., dan Putnarubun. C, 2009, Isolasi dan Penentuan Aktivitas Enzim Proteolitik Dari Pancreas Ikan Lele, Percikan, Vol. 104, Edisi September 2009, Hal. 111.

Hidayati, Nur dan Mardiyono, 2009, Pengaruh waktu Pengasinan Terhadap Kadar Protein Putih Telur, Biomedika, Vol. 2, No.1, Hal, 81-82.