دزی یقودص دیهش یکشزپ مولع هاگشناد یشهوژپ یملع هلجم

(1)

نیزه یگزتع ىاراکوّ ٍ

یقٍذص ذيْش یکششپ مَلػ ُاگشًاد یشٍّضپ یولػ ِلجه دشی

:تفایرد خیرات 22

/ 02 / 1400

ُرٍد یع ُراوش ، کی ، يیدرٍزف 1401 :ػزیذپ خیرات

03 / 05 / 1400

سناسا ریثات هایگ

نژ نایب رب یرامزر کیتوتپوپآ

یلولس هدر رد BIM

MCF-7 ناتسپ ناطرس

یئايً صخش ىاگضه داًَْکيً ظگزً ،1

فطل یدابآ

*

زيقح ِوطاف ،1

تاداغلا

2

یشٍّضپ ِلاقه

:ِهذقه ىبعطؾ ىبتؿپ غیبق يیطت ىبعطؾ ضز يیث ىبًظ ةَؿحه یه

زَق

ٍ ىبهضز ىآ بث وضاَػ یًاٍاطف

ُاطوّ

تؾا . ىبّبیگ ییٍضاز

تجؿً

ِث یبٍّضاز ییبیویق وضاَػ

یطتوک سًضاز ظا يیا تْج ضز ىبهضز یضبیؿث ظا یضبویث بّ‌ تیوّا

ُػیٍ

یا سًضاز . ُبیگ یضبهظض

ِث

لیلز يتقاز لاَذ یتًآ یًاسیؿکا تاطثا

سض یًبعطؾ زضاز . فسّ

ظا يیا

ِؼلبغه یثبیظضا طثا ؽًبؾا

ُبیگ یضبهظض طث ىبیث ىغ (BIM Bcl-

2-like 11

ضز )

ُزض یلَلؾ

MCF-7

ىبعطؾ ىبتؿپ تؾا .

:یعرزب ػٍر ضز

يیا

ِؼلبغه

،یثطجت تْج یثبیظضا تیوؾ یلَلؾ ؽًبؾا

،یضبهظض لَلؾ یبّ

MCF-7

ِث تسه 24

، 48

ٍ 72 تػبؾ

ضز وطؼه تظلغ‌ یبّ

یفلتره ظا ؽًبؾا ضاطل

ِتفطگ

ٍ ؽپؾ یبمث یلَلؾ بث

ُزبفتؾا ظا ـٍض یؾضطث MTT

سق .

،ؽپؾ لَلؾ‌ یبّ

MCF-7

ِث تسه 24 تػبؾ ضز وطؼه ؽًبؾا ضاطل

ُزاز سًسق بت ىاعیه ىبیث ىغ بث BIM

ُزبفتؾا ظا کیٌکت

Real Time PCR

زضَه

فجٌؾ ضاطل زطیگ . عیلبًآ یضبهآ

ُزاز‌ بّ

بث

ُزبفتؾا ظا تؿت یضبهآ

T-Student

ٍ مطً

ضاعفا

SPSS version 16

مبجًا تفطگ .

:جیاتً

جیبتً

لنبح ظا فیبهظآ ىبكًMTT

یه سّز

ِک گطه یلَلؾ

ِتؿثاٍ

ِث ظٍز

ٍ ىبهظ تؾا . يیطتوک ىاعیه بمث 19

% ؽپ ظا 72

تػبؾ زَث

ٍ بث فیاعفا تظلغ

،ؽًبؾا گطه یلَلؾ عیً

فیاعفا تفبی (

P<0.05

.) جیبتً

Real Time PCR

ىبكً

ُسٌّز فیاعفا

یٌؼه یضاز ضز ىبیث ىغ ؽپBIM

ظا ضبویت بث ؽًبؾا یه سقبث (

P<0.05

.)

ِجيتً

:یزيگ جیبتً

يیا

ِؼلبغه طگًبیث طثا کیؿکَتَتیبؾ ؽًبؾا

یضبهظض طث یٍض

¬لَلؾ یبّ

یًبعطؾ ىبتؿپ

ُزَث

ٍ بث فیاعفا ىبیث ىغ

کیتَتپَپآ یهBIM

سًاَت تجؾ یبملا تاطثا سض یًبعطؾ سقبث .

ُصاٍ

:یذيلک یاّ

ؽًبؾا

،یضبهظض ىغ

، BIM

لَلؾ

MCF-7

، ىبعطؾ ىبتؿپ

:عاجرا

مرق

،ىبگػه یئبیً

زبًَْکیً

فغل یزبثآ

،ؽگطً

طیمح تازبؿلا

ِوعبف . زيثات ظًاعا

ُايگ یراهسر زب ىايب ىص کيتَتپَپآ ردBIM

ُدر یلَلع

MCF-7 ىاطزع ىاتغپ . یکقعپ مَلػ ُبگكًاز یكٍّػپ یولػ ِلجه ن سیْق

یلٍس زعی 1401 ؛ 30 ( 1 :) 61 - 4452 .

1 - ناریا ،دسی ،رنه و نلع هبگشناد ،مولع هدکشناد ،یسبنش تسیز هورگ .

2 - نف و مولع هورگ ب

یرو یقودص دیهش ینبهرد و یتشادهب تبهدخو یکشسپ مولع هبگشناد ،یکشسپاریپ هدکشناد ،نیون یبه دسی

ناریا ،دسی ، .

(*

؛)لوئسه هدنسیون :نفلت

90133333190 یکینورتکلا تسپ ،

[email protected]: ،

: یتسپ قودنص 9013913139

[ DOI: 10.18502/ssu.v30i1.9100 ] [ Downloaded from jssu.ssu.ac.ir on 2024-01-13 ]

(2)

ِلجه دشی یقٍذص ذيْش یًاهرد ـ یتشاذْب تاهذخ ٍ یکششپ مَلػ ُاگشًاد ُرٍد

یع ُراوش ، کی ، يیدرٍزف 1401

4453

ِهذقه

ث ىبعطؾ ی ضبو ی غت طثا ضز ِک تؾا یی

تاط تًغ ی ک ی غ ی ط لَوؼه

ِث ىغ ضز فْج ِغؾاٍ

بّ

ی ىغَکًا ٍ ضَهَت ُسٌٌک ضبْه ٍ بّ

هٍظَهٍطک تلالاتذا ی

ا ی زبج ه ی ذا بها .زَق ی

ًاط ُسق مركه

ه ىبعطؾ ِک تؾا ی

غت طثا ضز سًاَت یی

تاط پا ی تًغ ی ک ی ً ی ع ا ی زبج

ه ی زَق ( 1 ىبعطؾ .) ىبتؿپ

یکی ظا جیاض يیطت عاًَا

ٍ ىبعطؾ

يیهٍز لهبػ گطه

ٍ طیه یقبً

ظا ىبعطؾ ضز ىبیه ىبًظ یه بث سق

( 2 ) ىغٍطتّ یضبویث کی ىبتؿپ ىبعطؾ . تلػ ِث ِک ُزَث

تاطییغت

ِث بی ىزاز تؾز ظا سًٌبه یکیتًغ ىزضٍآ تؾز

مٍظَهٍطک ىَیؾبتَه ،بّ

یه خض یهًَغ ییاضآظبث ٍ بّ

سّز ( 3 ) . ضز

ث لبؾ ی ف ظا ی ک ه ی ل ی ىَ

ركت ىبتؿپ ىبعطؾ ی

م ه ُزاز ی زَق

ث ِک ی ف ظا 500 ا طثا ضز طفً ضاعّ

ی ي ث ی ضبو ی ه تَف ی سًَق ( 4 .)

لَلؾ يیا ظَتپَپآ سٌیآطف ضز ممً ٍ یؼیجعطیغ سقض یاضاز بّ

یه سٌقبث . وْه فمً ظَتپَپآ ضز ممً

ی لَلؾ سقض ضز بّ

ی

ًبعطؾ ی

ُزاز .زضاز بّ

ی ذا ی ط ِک تؾا ُزاز ىبكً

یBIM ک

ئتٍطپ َضػ ی

ي ظَتپَپآ ی

ُزاًَبذ ظا Bcl-2

ىاٌَػ ِث ی

ک ِغؾاٍ

اطث نْه ی یبملا ظَتپَپآ ٍ ىبعطؾ ضز ىبهضز بّ

ی ظا فلتره

ىبعطؾ ِلوج تؾا ىَذ

( 5 .) ىغ یBIM ک ی نْه ظا طت ی ي

ىغ ؿه یبّ

ی ط لذاز ی ه(

ی ضسٌکَت یب یی تؾا ظَتپَپآ ) (

6 ).

ـٍض یبّ

لهبق ىبعطؾ ىبهضز ؼضَه ىبهضز

ی کیوتؿیؾ ٍ

تؾا ِک یؼضَه ىبهضز لهبق

زضاَه حاطج ی زاض ٍ ی پاطتَ

ی

، پ ی سًَ

ىبهضز ،ىاَرتؾا عغه یپاطتًََویا

ٍ بّ

ی هَتطپ ی یه .سقبث

ىبهضز بّ

ی ؾ ی وتؿ ی ک ق لهبق ی و ی

ًبهضز ی

ًبهضز ىَهضَّ ٍ ی

ىبیه ظا .تؾا ـٍض

یبّ

یًبهضز ق ی و ی

ًبهضز ی ث ی طتك ی ي زطثضبک

زضاز اض تؾا یًاٍاطف وضاَػ یاضاز یلٍ

ا وضاَػ ظا . ی

ي ـٍض

ه ی ىاَت ض ِث ی ـع ٍ ِظفبح تلاکكه ،ةاَذ تلالاتذا ،َه

ُضبقا عکطوت زَوً

( 7 .) سٌیبقَذبً وضاَػ ِث ِجَت بث ـٍض

یبّ

ـٍض يتفبی طث ـلات ُضاَوّ ،ىبعطؾ یًبهضز بث تبجیکطت ٍ بّ

بویث ظا ٍُطگ يیا یاطث تیؾآ للاسح َجتؿج ٍ ِجَت زضَه ىض

،بتؾاض يیا ضز .تؾا ُزَث گ ظا ُزبفتؾا

ی ىبّب

ٍضاز یی ىبهظ ظا بّ

ی

ؿث ی ضب سل ی ن

ِّز ضز ٍ تؾا ُزَث حطغه بّ

ی ذا ی ط ا ظا ُزبفتؾا ی

ي

گ ی ىبّب بّ ُزضٍاطف تضَن ِث ی

ٍضاز یی یه ُزبفتؾا زَق

( 8 ).

گ ضز زَجَه طثَه زاَه ی

ىبّب یٍضاز ی لز ِث ی ل زاَه بث ىزَث ُاطوّ

پ طگیز ی

ِتؾَ

ث لزبؼت تلبح کی ظا ی

کیغَلَ

ٍ سٌتؿّ ضازضَذطث

تً ضز ی

ِج وً ِتقبجًا ىسث ضز ی

سًَق جًبج تاطثا ٍ ی

ضبث ِث

وً

ی سًضٍآ ( 9 .) ُبیگ ضبهظض ی ( Salvia rosmarinus )

ِث كلؼته

ُزاًَبذ Labiabida ا ظا لبؼف ءاعجا .تؾا

ی ي ُزاًَبذ ظا گ ی ىبّب

ظا سٌتضبجػ یز

يپطت بّ

ٍ یطت يپطت بّ

. ا ی ي کطت ی تبج تاطثا

تًآ ی ؿکا ی

ًاس ی لابث یی سًضاز نّ . يیٌچ ؾا ی س لَؾضٍا ی ک اضاز ی

ًبعطؾ سض لاَذ ی

ثبْتلا سض ٍ ی

تؾا ( 12 - 10 .) ِث ِجَت بث

ٍ ییبیویق یبٍّضاز ظا ُزبفتؾا وضاَػ فّبک ضَظٌه ِث

يیا

ٍ وضاَػ نّ

ضز یّبیگ تبجیکطت یكرثطثا یؾضطث تْج يیٌچ

ىبعطؾ زَجْث

، يیا فٍّػپ .سق مبجًا ِث ِجَت بث

سض لاَذ

یتًآ ٍ یًبعطؾ ،یضبهظض تبجیکطت یًاسیؿکا

ا مبجًا ظا فسّ

ی ي

ؾضطث ِؼلبغه ی

ضبهظض ؽًبؾا طثا ی

ث طث ی ىب ىغ ُزض ضز BIM

لَلؾ ی MCF-7 ه ىبتؿپ ىبعطؾ

ی .سقبث

ػٍر یعرزب

یراهسر ُايگ عکطه ظا یضبهظض ُبیگ سقض

سحاٍ

یبّ

ضٍبٌف ىبّبیگ ییٍضاز

زبْج یّبگكًاز ِیْت زعی

ِث ُزبفتؾا ىبهظ بت ٍ کكذ تضَن

ق یضاسْگً ُسق .س

ظًاعا جازختعا تْج .سق ُزبفتؾا طجًَلک ُبگتؾز ظا یضبهظض ؽًبؾا ِیْت ضز

یضبهظض ُبیگ استثا تضَن ِث

ضزَپ ،ؽًبؾا ِیْت ضَظٌه ِث .سهآضز

ُبیگ ضزَپ يلبث ضز

ُبگتؾز ٍ ُسق ِتریض 3

/ 2 طپ طغمه ةآ ظا يلبث

.سق لنبح ؽًبؾا ظا ؽپ

6 یطیگ ؽًبؾا تػبؾ غوج

یضٍآ

سیزطگ

ِث ؽًبؾا . ضز ُسهآ تؾز

ٍ لبچری ضٍز

ظا ضًَ

ىبهظ بت

ُزبفتؾا یضاسْگً

سق .

تشک لَلع

ُزض یلَلؾ ىبعطؾ ىبتؿپ ( MCF-7 ) ظا کًبث یلَلؾ

َتیتؿًا

ضَتؾبپ )ىاطیا ،ىاطْت(

ِیْت سق یاطث . ظا لَلؾ تكک ظیحه

تكک یٍبح DMEM

10 % مطؾ ( )FBS ٍ ُسق ُزبفتؾا

لَلؾ یبهز بث ضَتبثَکًا ضز بّ

°C 37 یاضاز ظیاطق ضز ٍ 5

% CO2

تثَعض ٍ 95

% .سًسق یضاسْگً

(3)

زيثات ظًاعا

ُدر یلَلع MCF-7 ىاطزع ىاتغپ

ُاگشًاد زتخد ىایَجشًاد رد یقاچ عَيش ىازیا یاّ

تاهذخ ٍ یکششپ مَلػ ُاگشًاد ِلجه دشی یقٍذص ذيْش یًاهرد ـ یتشاذْب

ُرٍد یع ُراوش ، کی ، يیدرٍزف 1401

4454

یعرزب زثا یلَلع تيوع یراهسر ظًاعا

تغت(

)MTT

زاسؼت ِلحطه يیا ضز 10

ضاعّ

لَلؾ 7 - ظا کّبچ طّ ضزMCF

تیلپ 96 ًِبذ ظا ؽپ ٍ ُسق ُزاز تكک 24

تػبؾ چ ٍ ىسیجؿ

کّبچ فک ِث بْلَلؾ

،بّ

تظلغ وطؼه ضز ظا یفلتره یبّ

ؽًبؾا

یضبهظض لهبق 500

، 250

، 125

، 100

، 50

، 25

ٍ 10 مطگٍطکیه

طث یلیه .سق ُزاز ضاطل طتیل تقصگ ظا ؽپ

ىبهظ یبّ

24 ، 48 ٍ 72

تػبؾ ، تیلپ بّ

وطؼه ضز ؽپؾ ٍMTT

(DMSO Dimethyl

sulfoxide )

تیبًْ ضز .سًسق ُزاز ضاطل

، جیبتً

تیلپٍطکیه ظؾَت

ضسیض جَه لَع ضز 570

طتهًَبً

سیزطگ تئاطل .

ِبعاحه IC50

یبّ ىبهظ ظا کی طّ ضز 24

، 48

ٍ 72 تػبؾ

، ِجؾبحه IC50

ؾز ِث تْج لَلؾ یتبیح ىاَت سنضز ىزضٍآ ت

یبّ

MCF-7 ؽًبؾا ظا یهركه یبّظٍز لثبمه ضز

ُبیگ یضبهظض .سق مبجًا

ىص ىايب یعرزب BIM

جازختعا RNA

جاطرتؾا تیک تکطق ظا RNA

)ىاطیا ،سْكه( تؿیظ بًز

.سق ِیْت ضز

يیا

ِلحطه 500 لَلؾ ضاعّ

ىٍضز طّ

کّبچ ظا

تیلپ 6

ًِبذ .سق ُزاز تكک ؽپ

ظا 24 تػبؾ

، ؽًبؾا یضبهظض

تظلغ بث یبّ

125 ، 100 ٍ 50 یلیه طث مطگٍطکیه طتیل

ِث

کّبچ بّ

ِفبضا سق . تقصگ ظا سؼث 24

جاطرتؾا تػبؾ RNA

تکطق( ُسق یضاسیطذ تیک لوؼلاضَتؾز كثبغه ،تؿیظ بًز

لکق( سق مبجًا )،سْكه 1

.)

لکق 1 : جاطرتؾا لحاطه RNA

یعرزب تيفيک RNA

تیفیک ظا ىبٌیوعا تْج

ًَِوً ،ُسق جاطرتؾاRNA بّ

ظضبگآ لغ یٍض 2

.سًسق ُسّبكه سنضز

تيوک یعرزب RNA

یوک یؾضطث لَلذ ٍ تظلغ لهبق ُسق جاطرتؾاRNA

.سق یثبیظضا حاضزًَبً ُبگتؾز ظا ُزبفتؾا بث ىآ شتٌع cDNA

تذبؾ ظا cDNA

یبّ RNA جاطرتؾا

ُسق ظؾَت تیک

RT–PCR kit تذبؾ

تکطق ؼضبپ ت ؼَ

( سْكه )ىاطیا ، مبجًا

.سق

،ؽپؾ بث

ُزبفتؾا ظا

ُبگتؾز

ٍPCR طث ؼبؾا

ِهبًطث ییبهز

ٍ یًبهظ

ُضبقا

ُسق ضز لٍسج 1

، سق عتٌؾcDNA

. زویازپ یحازط

اّ

ىغ یاطث طویاطپ یحاطع یبّ

ٍBIM GAPDH ظا ُزبفتؾا بث

مطً

ضاعفا Primer 3 لٍسج كثبغه

2 ىغ .تفطگ تضَن

GAPDH .سیزطگ ضَظٌه یلذاز لطتٌک ىاٌَػ ِث

Real Time PCR فٌکاٍ مبجًا ظا فسّ

Real Time PCR ىاعیه فجٌؾ

ىغ ىبیث یه یضبهظض ؽًبؾا طیثبت تحت BIM

.سقبث تْج

مبجًا Real Time PCR

، استثا ًَِوً طّ یاطث فٌکاٍ طَلره

( ٍطكیپ یبّطویاطپ لهبق ( ٍطؿپ ٍ )F

،ینبهتذا )R ،cDNA

طجیبؾ گًض ( يیطگ

Takara, Japan ِیْت ظبئلکًَ ىٍسث ةآ ٍ )

ییبًْ نجح بث دی یٍض طث ُسق ُزبهآ فٌکاٍ طَلره ؽپؾ .سق

(4)

دشی یقٍذص ذيْش یًاهرد ـ یتشاذْب تاهذخ ٍ یکششپ مَلػ ُاگشًاد ِلجه ُرٍد

4455

20 ِهبًطث طیثأت تحت فٌکاٍ فلتره لحاطه یع طتیلٍطکیه

لٍسج حطق ِث یًبهظ ییبهز 3

.سٌتفطگ ضاطل ىبیبپ ظا ؽپ

ضَضح مسػ ٍ لَهحه ىزَث ینبهتذا سییأت ضَظٌه ِث فٌکاٍ

لاَهحه .تفطگ تضَن ةٍش یٌحٌه عیلبًآ ،ینبهتذاطیغ ت

ـٍض ظا طظً زضَه ىغ ىبیث تاطییغت یثبیظضا تْج

–ΔΔCt

2

.سق ُزبفتؾا ليلحت ٍ ِیشجت یراهآ

ُزاز تضَن ِث بّ

Mean ± SD عیلبًآ .سًسق ـضاعگ

یضبهآ

ُزاز یبّ

لنبح ظا مطً ظا ُزبفتؾا بث ِؼلبغه يیا ضاعفا

VERSION 16 یؾضطث تْج .تفطگ تضَن SPSS

تٍبفت یبمث ىاعیه طث ؽًبؾا طیثبت ظا یقبً ُسق زبجیا یبّ

ىغ ىبیث ٍ یلَلؾ لَلؾ ضز BIM

ؽًبؾا بث ُسق ضبویت یبّ

( ؽًبیضاٍ لیلحت ىَهظآ ظا یضبهظض ANOVA

ٍ ) Student's

T-test یٌؼه حغؾ ضز یضاز

05 / 0 .سیزطگ ُزبفتؾا

یقلاخا تاظحلاه یضٍضبثبً تبمیمحت عکطه ظؾَت فٍّػپ يیا لاظَپٍطپ قلاذا سک بث زعی یلٍسن سیْق یکقعپ مَلػ ُبگكًاز

IR.SSU.RSI.REC.1398.039 زضَه

أت یی س ِتفطگ ضاطل

.تؾا

لٍسج 1 : عتٌؾ یبّ لکیؾ cDNA

فیدر لحازه

ىاهس تذه

1 یبهز ضز ىسق ِثَکًا

25 ِجضز 10

ِمیلز

2 یبهز ضز ىسق ِثَکًا

47 ِجضز 60

ِمیلز

3 یبهز بث فٌکاٍ ىبیبپ

85 ِجضز 5

ِمیلز

لٍسج 2 : بّطگظبغآ تبهركه

لَصحه لَط یلاَت TM

ىص ماً

85 60

GGCCCCTACCTCCCTACA BIM F

GGGGTTTGTGTTGATTTGTCA BIM R

66 60

AGCCACATCGCTCAGACAC GAPDH F

GCCCAATACGACCAAATCC GAPDH R

لٍسج 3 :

ِهبًطث فٌکاٍ ییبهز یًبهظ Real Time PCR

اهد ىاهس

ِلحزه

95

ِجضز 15

ِمیلز Pre- denaturing

)لکیؾ کی(

95

ِجضز 20

ِیًبث Denaturing

( 40 )لکیؾ

60

ِجضز 40

ِیًبث Annealing

( 40 )لکیؾ

جیاتً

تيوع زثا یعرزب یلَلع

زب لَلع یاّ

MCF-7

یضبهظض ؽًبؾا یتیؿیؿکَتَتیبؾ ىاعیه بث

ُزبفتؾا ظا تؿت

ىاعیه ِک زاز ىبكً جیبتً .سق یؾضطث MTT

ىبهظ ٍ ظٍز ِث ِتؿثاٍ یضبهظض ؽًبؾا یتیؿیؿکَتَتیبؾ یه .سقبث لکق ضز 2

، طیثبت ؽًبؾا یضبهظض ضز ىبهظ یبّ

24

، 48

ٍ 72 تػبؾ طث ىاعیه بمث ی یلَلؾ ىبكً

ُزاز

ُسق تؾا .

ؽپ ظا تقصگ 24

، 48

ٍ 72 تػبؾ ( ضز طّ

ِؾ ىبهظ ) ىاعیه

یبمث یلَلؾ ( viability )

یٌؼه ضَع ِث یضاز

بث فیاعفا تظلغ

ؽًبؾا فّبک

ِتفبی

ِک يیا فّبک بث فیاعفا تظلغ ؽًبؾا

تؾبٌته

ُزَث تؾا ( 023 / 0 .)P=

جیبتً

ىبكً

یه سّز

ِک

یبمث سنضز ضز لنبح تاطییغت ٍ یلَلؾ تیوؾ ظٍطث ىاعیه

(5)

4456

لَلؾ ىبتؿپ ىبعطؾ یبّ

ضز مبوت تظلغ بّ

تٍبفت یٌؼه ضاز ی

یه ىبكً زَذ ظا اض سّز

( لکق 2 ) لٍسج . 4 ىاعیه IC50

لَلؾ طث یضاصگطثا ظا ؽپ یضبهظض ؽًبؾا ،ىبتؿپ ىبعطؾ یبّ

یلَلؾ ُزض MCF-7

یبّ ىبهظ ضز 24

، 48

ٍ 72 اض تػبؾ

یه ىبكً

سّز .

زویازپ ذيیات تغت طظً زضَه یلاَت ِث طویاطپ لبهتا یبهز ٌِیْث تؿت يیا ضز

مبجًا یاطث PCR

لغ بث ( 1 )سنضز ث ظضَفٍطتکلا

ِ ِث .سهآ تؾز

بهز ِک تضَن يیا 60

ِجضز زاطگیتًبؾ طظً ضز طویاطپ یاطث

ُبگتؾز نیظٌت بث ٍ سق ِتفطگ PCR

یاطث بّبهز يیا یٍض 2

تلاَهحه ،ًَِوً

PCR سق ُزطث لغ یٍض .

ىص ىايب یعرزب یراهسر ظًاعا زيثات تحتBIM

ىغ ِث طَثطه ةٍش یٌحٌهعیلبًآ یبّ‌

ٍBIM GAPDH

یگػیٍ ظا طگیز یکی ُبگتؾز یبّ

Real Time PCR نؾض

سیتَئلکًَ زاسؼت ٍ لَع ِث ةٍش یبهز .سقبث یه ةٍش یٌحٌه ىبوتذبؾ سنضز ٍDNA

لکق( زضاز یگتؿثGC 3

.)

ىَهسآ جیاتً

Real Time PCR

ىغ ىبیث ىاعیه تاطییغت لکق( ضزBIM

4 ُسق ُزاز ىبكً )

یه ُسّبكه ِک ضَع ىبوّ .تؾا ىغ ىبیث ززطگ

ىاٌَػ ِثBIM

ِث تجؿً ؽًبؾا تظلغ فیاعفا بث ظَتپَپآ ُسًطث فیپ ىغ کی یٌؼه ضَع ِث لطتٌک ٍُطگ تؾا ِتفبی فیاعفا یضاز

( 018 / 0 )P=

لکق 2 : ثبت ی ط ضبهظض ؽًبؾا ی

بمث سنضز طث ی

لَلؾ ی ىبهظ ضز بّ

ی 24 ، 48 ٍ 72 تػبؾ

لٍسج 4 : IC₅₀ ظا یقبً

طثا یضاصگ طث یضبهظض ؽًبؾا لَلؾ

ىبتؿپ ىبعطؾ یبّ

IC50 (µg/ml) Time

2 / 119 24

تػبؾ

97 48

تػبؾ

53 72

تػبؾ

لکق 3 : ةٍش یٌحٌه یبّ ىغ

BIM ٍ GAPDH لَلؾ ضز

ضبویت یبّ

یضبهظض ؽًبؾا بث ُسق تؾا فٌکاٍ لَهحه ىزَث ینبهتذا طگًبیبوً ِک

.

طّ

کیپ طگًبیبوً

کی لَهحه .تؾاPCR

(6)

4457

لکق 4 : ىغ ىبیث ىاعیه ِؿیبمه لَلؾ ضزBIM

ضز یضبهظض ؽًبؾا بث ُسق ضبویت یبّ

لطتٌک ٍُطگ بث ِؿیبمه .

* P˂0.05 ه فلاتذا یه ىبكً اض لطتٌک ٍُطگ بث ضازبٌؼ سّز

.

ثحب

ظَتپَپآ کی سٌیاطف یلَلؾ نظٌه

ٍ تتطه تؾا

ِک ضز ظیاطق

کیغَلَیعیف

ٍ کیغَلَتبپ قبفتا

یه ستفا . تذبٌق معیًبکه

ِیبپ

ظَتپَپآ نْه تؾا اطیظ فمً

یوْه ضز عًغَتبپ یضبیؿث ظا

یضبویث بّ

زضاز . ىبعطؾ یکی ظا ییبَّیضبٌؾ تؾا

ِک ظَتپَپآ

ضبیؿث یوک ىآ ضز خض یه سّز

ٍ تجَه لَلؾ یبّ

ویذسث ی

یه زَق

ِک یوً

سًطیه . غیبق ىبتؿپ ىبعطؾ ضز ىبعطؾ يیطت

ًِلابؾ ،ىاطیا ضز سیسج ضبهآ كجع .تؾا یًاطیا ىبًظ ىبیه 6160

یه ُزاز میركت ىبتؿپ ىبعطؾ ٍ زَق

1063 طیه ٍ گطه زضَه

تؾا ىآ ظا یقبً

( 14،13 ) لاَذ یضبهظض ؽًبؾا .

یتًآ یتبجیکطت زَجٍ تلػ ِث تینبذ يیا ِک زضاز یًاسیؿکا

کیٌیضبهظض ،یلٌَف تبجیکطت ىَچوّ

،سیؾا کیئفبک ،سیؾا

سیئًٍٍَلاف ٍ لَؾًَضبک زضَه ىبعطؾ ىبهضز ضز ِک تؾا بّ

یه ضاطل ُزبفتؾا طیگ

ً س ( 9 ) . ،طضبح ِؼلبغه ضز ظضا تْج

ی ثب ی

وؾ ی ت ضبهظض ؽًبؾا ی

ىَهظآ ظا ِکMTT

ی ک آ ىَهظ زضاسًبتؾا

اطث ی ظضا ی ثب ی ه ی ىاع ه لَلؾ ءبمث ی

بتً .سق ُزبفتؾا سقبث ی

ج

ا ظا لنبح ی

ي ضَع ِث فٍّػپ لک

ی

، ضبْه تاطثا ی

ضبهظض ؽًبؾا ی

لَلؾ ُزض طث اض ی

ِتفبی .زاز ىبكً ىبتؿپ ىبعطؾ یتبمیمحت یبّ

ضبهظض ؽًبؾا ِک تؾا يیا ظا یکبح ِتقصگ ی

ظا یذطث ـطتؿگ

یه ضبْه اض یضَهَت یبّ لَلؾ

ٌک س لبؾ ضز 2011

، SUONG

N. T. NGO ضبهظض طثا فًاضبکوّ ٍ

ی

ٍض طث اض ی ىبعطؾ

ؾضطث لبتکضَلَک ی

ىآ .سًزطک محت ضز بّ

ی ىبكتبم ولػ سّاَق ِث ی

لبؾ ظا ُسق طكتٌه تبؼلبغه مبوت ظا 1996

ؼضبه بت 2010 ضز لَهذ

تظفبحه تاطثا ی

ضبهظض ی

ٍض طث ی ٍ لبتکضَلَک ىبعطؾ

بؾ ی ط قا ىبعطؾ عاًَا

ُضب

ُزطک سًا . ،يیا طث ٍُلاػ سض لاَذ

ًبعطؾ ی ضبهظض ی طع ظا ی ك غت یی تاط لَکلَه ی آطف ضز ی سٌ

سٌچ

ا ِلحطه ی تفبث ًِ تؾا ظٍز ِث ِتؿثاٍ ِک ىبعطؾ ِؼؾَت یب

َگ لبذ ًِ

، ضبهظض ِک تؾا ُسق ُزاز ىبكً .تؾا ُسق فكک ی

ِث ضزبل سٌچ ضز ضَهَت ىزطک ةَکطؾ ی

ي ،ىَلَک ِلوج ظا ماسًا

تؿپ

،ىب نّ ٍ ُسؼه ،سجک

ٌچ ی ي لَلؾ ٍ مًَلاه بّ

ی وؾَل ی اض

زضاز بتً . ی ج تبؼلبغه يیا زاز ىبكً

تؾا ُ

ِک ُبیگ تبجیکطت

یضبهظض لَکلَه فلتره فاسّا ی

ُزاز ضاطل طیثأت تحت اض اعجا ٍ

ی

مذبق ىآ لبؼف بّ

ی فه ی س مفَه ی ت بهظآ ضز ی تبك پ ی گك ی ط ی

ق ی و ی ب یی ىبعطؾ یه سٌقبث ( 10 ) . لبؾ ضز 2015 ، Margarita

Gonzalez-Vallinas ضبهظض ُضبهػ طثا فًاضبکوّ ٍ

ی ِث

ىاٌَػ ی ک ىبعطؾ ىبهضز ضز َُملبث لهبػ اض

ؾطث ی ضز .سًزطک

ىآ تبقضاعگ ضبهظض ِک تؾا ُسهآ بّ

ی اضاز ی لبؼف ی ت ىبعطؾ سض

تبؼلبغه ضز in vitro

ح ٍ ی

ًاَ

ی نبذ .تؾا ی

ت ضَهَت سض ی

ضبهظض ی لز ِث ی ل لبؼف ی ت تًآ ی ؿکا ی

ًاس ی بتً .تؾا ىآ ی

ج ظا لنبح

محت ی تبم ىآ ه ىبكً بّ

ی ضبهظض ُضبهػ ِک سّز ی

نبذ ی ت سض

ضَهَت ی ع ضز فلتره ی

ف

ُزطتؿگ ا ی .زضاز اض ىبعطؾ عاًَا ظا

فه ی س ا ىزَث ی ي اطث لوکه لهبػ ىاٌَػ ِث ُضبهػ ی

ث ی ىاضبو لبذ

ًبعطؾ ی تؾا ( 15 ).

لبؾ ضز 2013 ، Sakina M. Petiwala ٍ

ثبت فًاضبکوّ

ی ط لپ ی

ٌف گ ل ی

ُب ضبهظض ی

ٍض طث ی تبتؾٍطپ ىبعطؾ

ؾضطث زضَه اض ی

پا تبؼلبغه .سًزاز ضاطل ی

هس ی غَلَ

ی ک ىبكً

ه ی ث ضز ىبعطؾ ِث لاتثا طغذ سّز ی

ًاضبو ی ضبهظض ِک ی فطهه

(7)

4458

ه ی ه فّبک سٌٌک ی

ی سثب ظًَضبک غلاٍ ضز . ی

ک ؾا ی س لَؾًَضبک ٍ

َجَه ز ضبهظض ضز ی ه ضبْه اض تبتؾٍطپ ىبعطؾ ی

غلاٍ ضز .سٌک

ظًَضبک ی ک ؾا ی س طع ظا لَؾًَضبک ٍ ی

ك

ٍطت ی ج ضبْه ٍ ظَتپَپآ

ؿه ی ط ؾ ی لبٌگ ی گٌ

PI3K/Akt ِک

ی ک ظٌت ی ن ضز نْه ُسٌٌک

بمث ی لَلؾ بّ

ی ضَهَت ی ه ضبْه اض تؾا ی

سٌک ( 16 ).

يیا ضز

نّ ِؼلبغه يیٌچ

ت أث ی ط ضبهظض ؽًبؾا ی

ث طث ی ىب ىغ کیتَتپَپآٍطپ

ٍض طثBIM ی لَلؾ ُزض( ىبتؿپ ىبعطؾ یبّ

لَلؾ ی MCF-7 )

ٌکت ظؾَت ی

ک Real Time PCR ؾضطث زضَه

ی .تفطگ ضاطل

بتً

ی ج ه ىبكً

ی ضبهظض ؽًبؾا سّز ی

ثػبث فیاعفا ث ی ىب ىغ BIM

زطگ ی

ُس بتً .تؾا ی ج محت ی تبم طث ِتفطگ تضَن طیثأت

ؽًبؾا

گ ی ىبّب ث طث فلتره ی

ىب ىغ بّ

ی

َتپَپآ کیت ىبعطؾ عاًَا ضز بّ

ىبكً

یه یبملا ِث ضزبل یّبیگ تبجیکطت ِک سّز ىاعیه ضز طییغت

ىبیث ا ی ي ىغ ه بّ

ی قبث

ٌ .س لبؾ ضز 2017 سوحا ، ی ىاضبکوّ ٍ ٍ

لبؾ ضز 2018 ىاضبکوّ ٍ سٌهظٍطیپ ، ثبت

ی ط

ُضبهػ ؽًبؾا ٍ یبّ

یلّ ُبیگ ٍ ضسؾ گطث( یّبیگ ىغ ىبیث طث اض )مٍعیطک

یبّ

کیتَتپَپآ ىبعطؾ ضز

ضاطل یثبیظضا زضَه ىَلَک ٍ ىبتؿپ یبّ

.سًزاز بتً

ی ج کبح ی ظا زَث ىآ

ُضبهػ ِک ضَکصه یبّ

اعفا ثػبث ی ف

ٌؼه ی ضاز ی کیتَتپَپآٍطپ ىغ ىبیث ضز گطه فیاعفا ٍ BAX

لَلؾ ىَلَک ٍ ىبتؿپ ىبعطؾ ٍز طّ ضز یًبعطؾ یبّ

ؾا ُسق ت

( 18،17 .)

ِتفبی بث تبؼلبغه يیا جیبتً

فٍّػپ يیا ظا لنبح یبّ

ىبكً ِک ىبیث ىاعیه طییغت ضز یضبهظض ُبیگ تبجیکطت ىاَت ُسٌّز

ىغ

ٍطپ کیتَتپَپآ لَلؾ گطه فیاعفا ٍ

ىبتؿپ ىبعطؾ یبّ

یه زضاز تمثبغه ،سقبث .

ِؼلبغه یع فًاضبکوّ ٍ Park ضز یا

لبؾ 2016 نْه ِک سیؾا کیظًَضبک ِک سًزاز ىبكً

ظا ءعج يیطت

ُبیگ تبجیکطت یه تؾا یضبهظض

ىغ ىبیث فیاعفا بث سًاَت یبّ

زَق ِیلک یبهٌَیؾضبک ضز ظَتپَپآ یبملا تجؾ کیتَتپَپآٍطپ ( 19 .)

ِتفبی ِؼلبغه یبّ

Moore لبؾ ضز ىاضبکوّ ٍ

2016

یضبهظض کیظًَضبک سیؾا ِک زاز ىبكً

یلَلؾ ُزض ضز MDA-

MB-361 ،ىبتؿپ ىبعطؾ ظا

ىغ ىبیث فّبک بث یتًآ

کیتَتپَپآ Bcl-2

ىبیث فیاعفا ٍ کیتَتپَپآٍطپ ىغ

یه BIM یبمث سًاَت

لَلؾ سٌک ضبْه اض یًبعطؾ یبّ

( 20 )

ِتفبی . ِؼلبغه ٍز طّ یبّ

.زضاز تمثبغه طضبح فٍّػپ جیبتً بث ِتجلا

ىبیبق تؾا طکش

زضَه تیکطت یكرثطثا یؾضطث مسػ ،طضبح ِؼلبغه تیزٍسحه ظیاطق ضز ُزبفتؾا in vivo

یه .سقبث

ِجيتً

یزيگ

بث زبٌتؾا

ِتفبی ِث تبؼلبغه ِث ِجَت بث ٍ فٍّػپ يیا یبّ

فٍّػپ طیبؾ ،ىاطگ

ِک تفطگ ِجیتً ىاَت یه

ًلابوتحا ُبیگ

لیلز ِث یضبهظض کیظًَضبک سیؾا ىَچوّ یتبجیکطت زَجٍ

ضزبل

ىغ ىبیث ضز یتاطییغت ءبملا ِث ضبْه ِجیتً ضز ٍ کیتَتپَپآ یبّ

لَلؾ یًبعطؾ یبّ

يیا ضز .تؾا

،ِؼلبغه سییبت ِث ِجَت بث

یضبهظض ؽًبؾا یًاسیؿکا یتًآ تینبذ ظا لنبح جیبتً ٍ

لَلؾ یبمث یؾضطث سییبت ٍ یضبهظض ؽًبؾا بث ضبویت طثا ضز بّ

لَلؾ یٍض طث ؽًبؾا يیا یگسٌكک تینبذ ُزض یبّ

MCF-7

لَلؾ يیا یبمث فّبک ٍ بّ

ظا ، یضبهظض ؽًبؾا یه

ػ ِث ىاَت ىاٌَ

یبؾ ٍ ىاسیؿکا یتًآ تبجیکطت ت

کیؿکَتَ

لَلؾ ِیلػ یبّ

ُزض یًبعطؾ MCF-7

.زطیگ ضاطل ُزبفتؾا زضَه نّ

ضز يیٌچ

یه یسؼث تبؼلبغه ىاَت

طث اض یضبهظض ؽًبؾا یكرثطثا طیبؾ

ىغ یبّ

ٍ یظَتپَپآ یبّطیؿه

گٌیلبٌگیؾ یطگیز

ٍز طّ ضز

ظیاطق in vitro ٍ

in vivo .زاز ضاطل یؾضطث زضَه

طاپع یراشگ

لنبح ِؼلبغه يیا ىبیبپ

يیسث .تؾا ییَجكًاز ِهبً

ِلیؾٍ

ضسل ٍ طکكت تتاطه ىبگسٌؿیًَ

تیبوح ظا اض زَذ یًاز یبّ

ىاضٍبٌف تؿیظ عیض ىبیٌث فًاز تکطق ٍ طٌّ ٍ نلػ ُبگكًاز یه ظاطثا ِؼلبغه يیا مبجًا یبتؾاض ضز ضز طگً ازطف .سًضاز

:یلاه یهاح .زضاسً

:غفاٌه رد ضراؼت زضاسً زَجٍ

.

(8)

4459

References:

1- Reya T, Morrison SJ, Clarke MF, Weissman IL. Stem Cells, Cancer, and Cancer Stem Cells. Nature 2001;

414(6859): 105-11.

2- Wu Q, Wang C, Lu Z, Guo L, Ge Q. Analysis of Serum Genome-Wide Micrornas for Breast Cancer Detection. Clinica Chimica Acta 2012; 413(13-14):

1058-65.

3- Thakur A, Xu H, Wang Y, Bollig A, Biliran H, Liao JD . The Role of X-Linked Genes in Breast Cancer.

Breast Cancer Research and Treatment 2005; 93(2):

135-43.

4- Anderson WF, Chu KC, Chatterjee N, Brawley O, Brinton LA. Tumor Variants by Hormone Receptor Expression in White Patients With Node-Negative Breast Cancer from the Surveillance, Epidemiology, and End Results Database. J Clinical Oncology 2001;

19(1): 18-27.

5- Faber AC, Corcoran RB, Ebi H, Sequist LV, Waltman BA, Chung E, et al. BIM Expression in Treatment Naive Cancers Predicts Responsiveness to Kinase Inhibitors. Cancer Discov 2011; 1(4): 352-65.

6- Shuang T, Shi C, Chang S, Wang M, Bai CH.

Downregulation of miR-17~ 92 Expression Increase Paclitaxel Sensitivity in Human Ovarian Carcinoma SKOV3-TR30 Cells via BIM Instead of PTEN. Int J Mol Sci 2013; 14(2): 3802-16.

7- Nooshinfar E, Bashash D, Mohamadi G, Taghavi A, Shahani M, Hoseini L, Akbari ME. Melatonin and Its Importance in Breast Cancer Prevention and Treatment (A Purposed Review Article). The Iranian Journal of Obstetrics, Gynecology and Infertility 2014; 17(118): 10-21.

8- Ernst E. Heavy Metals in Traditional Indian Remedies. Eur J Clin Pharmacol 2002; 57(12): 891-6.

9- Hao D, Xiao Jie G, Pei Gen X. Medicinal Plants, Chemistry, Biology and Omics. 1th Ed. London;

Woodhead Publishing-Elsevier; 2015.

10- Ngo SN, Williams DB, Head RJ. Rosemary and Cancer Prevention: Preclinical Perspectives. Critical Reviews in Food Science and Nutrition 2011; 51(10):

946-54.

11- Al-otaibi,Waad.Rosemary Oil Nano-Emulsion Potentiates the Apoptotic Effect of Mitomycin C on Cancer Cells in Vitro. Pharmacia 2021; 68: 201-9.

12- Moller AC, Parra C, Said B, Werner E, Flores S, Villena J, et al. Antioxidant and Anti-Proliferative Activity of Essential Oil and Main Components from Leaves of Aloysia polystachya Harvested in Central Chile. Molecules 2021; 26(1): 131.

13- Otaghvar HA, Hosseini M, Tizmaghz A, Shabestanipour G, Noori H. A Review on Metastatic Breast Cancer in Iran. Asian Pacific Journal of Tropical Biomedicine 2015; 5(6): 429-33.

14- Alizadeh Otaghvar H, Hosseini M, Tizmaghz A, Shabestanipour G, Noori H. A Review on Metastatic Breast Cancer in Iran. Asian Pacific Journal of Tropical Biomedicine 2015; 5(6): 429-33.

15- González-Vallinas M, Reglero G, Ramírez de Molina A. Rosemary (Rosmarinus Officinalis L.) Extract as a Potential Complementary Agent in Anticancer Therapy. Nutrition and cancer 2015;

67(8): 1223-31.

16- Petiwala SM, Puthenveetil AG, Johnson J.

Polyphenols from the Mediterranean Herb

(9)

4460

Rosemary (Rosmarinus Officinalis) for Prostate Cancer. Front pharmacol 2013; 4: 29.

17- Ahmadi R, Rahimi S, Ehteshamzad N. The Effect of Hydroalcoholic Ziziphus Spina-Christi Leaf Extract on Viability of Breast Cancer Cell Line (MCF7) and Evaluation of Bax and Bcl2 Genes Expression Level.

Feyz 2017; 21(5): 407-13.

18- Mirzaie A, Piroozmand S, Mousavi Z, RustaiyanA.

Investigation of Chemical Composition of Helichrysum artemisioides Essential Oil, and its Antibacterial and Cytotoxic Effects on Colon Cancer Cell Line and Analysis of Apoptotic Gene

Expression Using PCR Method. Qom Uni Med Sci J 2018; 12(3): 9-18.

19- Park EJ, Park B, Chae IG, Kim D, Kundu J, Kundu JK, Chun K. Carnosic Acid Induces Apoptosis Through Inactivation of Src/STAT3 Signaling Pathway in Human Renal Carcinoma Caki Cells.

Onchology Reports 2016; 35(5): 2723-32.

20- Moore J, Yousef M, Tsiani E. Anticancer Effects of Rosemary (Rosmarinus officinalis L.) Extract and Rosemary Extract Polyphenols. Nutrients 2016; 8:

731-63.

(10)

Journal of Shahid Sadoughi University of Medical Sciences Vol 30 | NO 1 | Apr 2022 4461

Vol 30| NO 1 | Apr 2022 Accepted: 25 Jul 2021

Effect of Rosemary Essential Oil on BIM Apoptotic Gene Expression in MCF 7 Breast Cancer Cell Line

Mozhgan Shakhseniaie¹, Narges Nikoonahad Lotfabadi^*1, Fatemah Haghirossadat²

Original Article

Introduction: Breast cancer is the most common cancer among womenand its treatment is associated with many side effects. Herbal medicine has fewer side effects than chemical drugs, so they are especially important in the treatment of many diseases. Rosemary plant has anti-cancer effects due to its antioxidant properties. The aim of this study was to evaluate the effect of Rosemary essential oil on BIM gene expression in MCF-7 cell line.

Methods: In this experimental study,to evaluate the cellular toxicity of rosemary essential oil, MCF-7 cells were exposed to different concentrations of essential oil for 24, 48 and 72 hours, and their survival was investigated using MTT assay. Then, MCF-7 cells were exposed to essential oil for 24 hours to determine the BIM gene expression using the Real Time PCR technique. Statistical analysis of data was performed using T- Student test and SPSS version 16 software.

Results: The results of the MTT assay show that cell death is dose- and time-dependent. The effect of different amounts of essential oil on the survival rate of cancer cells was statistically significant (p˂0.05) and the lowest survival rate was 19% in 72 hours and with increasing essential oil concentration, cell death also increased.

Real Time PCR results show a significant increase in BIM gene expression after essential oil treatment.

Conclusion: In conclusion, the results of this study demonstrate the cytotoxic effect of rosemary essential oil on breast cancer cells and it can increase the expression of BIM, an apoptotic gene and induce anticancer effects.

Keywords: Rosemary essence, BIM gene, MCF-7 cell, Breast cancer.

Citation: Shakhseniaie M,Nikoonahad Lotfabadi N, Haghirossadat F. Effect of Rosemary Essential Oil on BIM Apoptotic Gene Expression in MCF 7 Breast Cancer Cell Line. J Shahid Sadoughi Uni Med Sci 2022; 30(1): 4452-61.

1Biology Department, Faculty of Sciences, Science and Arts University, Yazd, Iran.

2Department of Advanced Medical Sciences and Technologies, School of Paramedicine, Shahid Sadoughi University of Medical Sciences, Yazd, Iran.

*Corresponding author: Tel: 09133575689, email: [email protected]