دﺎﺠﻳا ﻞﻣاﻮﻋ ﻲﻟﻮﻜﻟﻮﻣ ﺖﻳﻮﻫ ﻦﻴﻴﻌﺗ يﺪﻠﺟ زﻮﻴﻧﺎﻤﺸﻴﻟ هﺪﻨﻨﻛ
رد نﺎﺘﺳﺮﻬﺷ ﺪﻨﺟﺮﻴﺑ
نﺎﻴﻣﺮﻛ يﺪﻬﻣ ﺪﻤﺤﻣ ،1
ﺪﺠﺑ ﻲﻗورﺎﻓ ﻖﻳﺪﺻ ﻲﺘﻤﻫ ﺎﻨﻴﻣ ،2
ﻮﺠﺗدﺎﻌﺳ ﺎﺿﺮﻴﻠﻋ ﺪﻴﺳ ،3
ﻲﺗاﺮﺑ ﻲﻠﻌﺸﻳورد ،4 5
هﺪﻴﻜﭼ
ﻪﻨﻴﻣز فﺪﻫ و ﻚﻟﺎﺳ ﺎﻳ يﺪﻠﺟ زﻮﻴﻧﺎﻤﺸﻴﻟ:
، ناﺮﻳا زا ﻲﻔﻠﺘﺨﻣ ﻖﻃﺎﻨﻣ رد آ
ﺖﺳا ﻚﻴﻣﺪﻧ .
ا يرﺎﻤﻴﺑ ﻦﻳ
، ﺑ ﻪﺘﺷﺬﮔ نﺎﻴﻟﺎﺳ رد ﻪ
ﻚﺗ ترﻮﺻ ﺮﻴﮔ
هﺪﺷ هﺪﻳد ﺪﻨﺟﺮﻴﺑ رد ،ﺖﺳا
ﺑ ﺎﻣا ﻪ ﻲﻣ ﺮﻈﻧ ﻞﺒﻗ لﺎﺳ ﺞﻨﭘ دوﺪﺣ زا ﺪﺳر
، ﺪﺷﺎﺑ هﺪﻣآ ﺪﻳﺪﭘ ﻪﻘﻄﻨﻣ رد نآ زا راﺪﻳﺎﭘ ﻲﻧﻮﻧﺎﻛ .
ﺮﺿﺎﺣ ﻪﻌﻟﺎﻄﻣ
، ياﺮﺑ
ﻞﮕﻧا ﻪﻧﻮﮔ ﻦﻴﻴﻌﺗ ﺮﻬﺷ ﻦﻛﺎﺳ نارﺎﻤﻴﺑ يﺪﻠﺟ تﺎﻌﻳﺎﺿ رد ﺎﻴﻧﺎﻤﺸﻴﻟ يﺎﻫ
نﺎﺘﺳ ﺪﻨﺟﺮﻴﺑ ﺖﺳا هﺪﺷ مﺎﺠﻧا .
ر شو ﻖﻴﻘﺤﺗ ﻲﻌﻄﻘﻣ ﻪﻌﻟﺎﻄﻣ ﻦﻳا رد:
، ﻪﻧﻮﻤﻧ يﺎﻫ ﻲﻃ ﻚﻟﺎﺳ ﻪﺑ كﻮﻜﺸﻣ نارﺎﻤﻴﺑ يﺪﻠﺟ تﺎﻌﻳﺎﺿ 5
ﻪﺘﺷﺬﮔ لﺎﺳ
، ﺮﺑاﺮﺑ ﺎﺑ 80 ﻪﻧﻮﻤﻧ ﻪﻛ
ﺮﻬﺷ ﺖﺷاﺪﻬﺑ ﺰﻛﺮﻣ رد نﺎﺘﺳ
دﻮﺑ دﻮﺟﻮﻣ ﺪﻨﺟﺮﻴﺑ ﺖﻓﺮﮔ راﺮﻗ ﻪﻌﻟﺎﻄﻣ درﻮﻣ ،
. زا ﺮﻴﻐﺘﻣ ﺶﺨﺑ ﺎﻴﻧﺎﻤﺸﻴﻟ ﻞﮕﻧا ﻲﺘﺳﻼﭘﻮﺘﻨﻴﻛDNA
(KDNA)
ﺶﺨﺑ ﺰﻴﻧ و زاITS1
ﻣوزﻮﺒﻳرDNA
ﻞﮕﻧا ﻦﻳا ﻲ ﺎﻫ
، شور ﻂﺳﻮﺗ شور زا و ﺪﻳدﺮﮔ ﺮﻴﺜﻜﺗPCR
PCR-RFLP
، تﻻﻮﺼﺤﻣ يور ﺮﺑ
ITS1 ﺶﺨﺑ ياﺮﺑ ﻞﮕﻧا ﺖﻳﻮﻫ ﻦﻴﻴﻌﺗ ﺪﺷ هدﺎﻔﺘﺳا ﺎﻫ
.
ﻪﺘﻓﺎﻳ ﺎﻫ ﻲﻣﺎﻤﺗ: ﻪﻧﻮﻤﻧ يﺎﻫ ﻲﭘﻮﻜﺳوﺮﻜﻴﻣ ﺖﺒﺜﻣ ﺺﻴﺨﺸﺗ ﺎﺑ
، شور ﻂﺳﻮﺗ
PCR-RFLP
ﻪﻌﻄﻗ يور ﺮﺑ زاITS1
ﻲﻣزوزﻮﺒﻳرDNA
ﺪﻧﺪﻳدﺮﮔ ﻪﻧﻮﮔ ﻦﻴﻴﻌﺗ
، شور ﺎﻣا
KDNA PCR
ﺖﺴﻧاﻮﺗ
، ﺎﻬﻨﺗ 46 ﺪﻳﺎﻤﻧ ﻪﻧﻮﮔ ﻦﻴﻴﻌﺗ ار ﻪﻧﻮﻤﻧ .
عﻮﻤﺠﻣ رد
، 8 رﺎﻤﻴﺑ
%) 10 (
، ﻪﺑ ﻼﺘﺒﻣ
ﺎﻴﻧﺎﻤﺸﻴﻟ و روژﺎﻣ 72 ﺮﻔﻧ
%) 90 (
، ﺪﻧﺪﺷ هداد ﺺﻴﺨﺸﺗ ﺎﻜﻴﭘوﺮﺗﺎﻴﻧﺎﻤﺸﻴﻟ ﻪﺑ هدﻮﻟآ .
ﻪﺠﻴﺘﻧ يﺮﻴﮔ شور: PCR-RFLP
ﻪﻌﻄﻗ
،ITS1
ﻴﺳﺎﺴﺣ ياراد و هدﻮﺑ ﻞﻣﺎﻛ ﺖ
ياﺮﺑ ﻊﻳﺮﺳ ﻪﻧﻮﮔ ﻦﻴﻴﻌﺗ و زﻮﻴﻧﺎﻤﺸﻴﻟ ﺺﻴﺨﺸﺗ ﻞﮕﻧا
يﺎﻫ
ﻲﻣ ﻪﻴﺻﻮﺗ يرﺎﻤﻴﺑ ﻞﻣﺎﻋ
دﻮﺷ .
ﺎﺘﻧ سﺎﺳا ﺮﺑ ﻳ
ﺞ اﻳ ﻦ ﻘﺤﺗ ﻴ ﻖ ﺑ مﺮﻓ ود ﺮﻫ ﻴ
رﺎﻤ ي ﻚﻟﺎﺳ ﻳ ﻨﻌ
ACLﻲ ) ﻧﺎﺴﻧا نﺰﺨﻣ ﺎﺑ ﻲ
( ﺷﺎﻧ ﻲ ﻟ زا ﻴ ﻧﺎﻤﺸ ﻴﺎ ﭘوﺮﺗ ﻴ ﺎﻜ
ZCL و ) اراد ي نزﺎﺨﻣ
رﻮﻧﺎﺟ ي ( ﻟ زا ﺞﺘﻨﻣ ﻴ ﻧﺎﻤﺸ ﻴﺎ ﺑ رد روژﺎﻣ ﻴ ﺪﻨﺟﺮ ﺖﺳا دﻮﺟﻮﻣ .
هژاو يﺪﻴﻠﻛ يﺎﻫ ﺎﻴﻧﺎﻤﺸﻴﻟ ،ﺎﻜﻴﭘوﺮﺗﺎﻴﻧﺎﻤﺸﻴﻟ:
،روژﺎﻣ ،ﺪﻨﺟﺮﻴﺑ ،PCR
ﻪﻧﻮﻤﻧ يﺎﻫ يﺪﻠﺟ ﻪﻌﻳﺎﺿ
ﺪﻨﺟﺮﻴﺑ ﻲﻜﺷﺰﭘ مﻮﻠﻋ هﺎﮕﺸﻧاد ﻲﻤﻠﻋ ﻪﻠﺠﻣ .
1392
؛ 20 ) 2 :(
183 - 190 .
ﺖﻓﺎﻳرد : 23 / 12 / 1391 شﺮﻳﺬﭘ : 12 / 04 / 1392
ﻞﮕﻧا رﺎﻳدﺎﺘﺳا ،لوﺆﺴﻣ هﺪﻨﺴﻳﻮﻧ١
،ﺪﻨﺟﺮﻴﺑ ﻲﻜﺷﺰﭘ مﻮﻠﻋ هﺎﮕﺸﻧاد ،ﻲﻜﺷﺰﭘ هﺪﻜﺸﻧاد ،ﺖﻴﺗﺎﭙﻫ تﺎﻘﻴﻘﺤﺗ ﺰﻛﺮﻣ ،ﻲﺳﺎﻨﺷ
،ﺪﻨﺟﺮﻴﺑ ناﺮﻳا .
ﻲﺘﺴﭘ سردآ : ﺪﻨﺟﺮﻴﺑ - ﻏ نﺎﺑﺎﻴﺧ يرﺎﻔ - ﺪﻨﺟﺮﻴﺑ ﻲﻜﺷﺰﭘ مﻮﻠﻋ هﺎﮕﺸﻧاد -
ﻲﻜﺷﺰﭘ هﺪﻜﺸﻧاد
ﻦﻔﻠﺗ : 4433004 - 0561 ﺮﺑﺎﻤﻧ : 4433004 - 0561 ﻲﻜﻴﻧوﺮﺘﻜﻟا ﺖﺴﭘ [email protected] :
،ﺪﻨﺟﺮﻴﺑ ﻲﻜﺷﺰﭘ مﻮﻠﻋ هﺎﮕﺸﻧاد ،ﺪﻨﺟﺮﻴﺑ نﺎﺘﺳﺮﻬﺷ ﺖﺷاﺪﻬﺑ ﺰﻛﺮﻣ ،ﻲﻣﻮﻤﻋ ياﺮﺘﻛد2
،ﺪﻨﺟﺮﻴﺑ ناﺮﻳا .
،ﻲﻜﺷﺰﭘ هﺪﻜﺸﻧاد ،ﻲﻤﻴﺷﻮﻴﺑ رﺎﻳدﺎﺘﺳا3
،ﺪﻨﺟﺮﻴﺑ ﻲﻜﺷﺰﭘ مﻮﻠﻋ هﺎﮕﺸﻧاد
،ﺪﻨﺟﺮﻴﺑ ناﺮﻳا .
ﻲﺑﺮﻣ4
يرﺎﺘﺳﺮﭘ
،ﺪﻨﺟﺮﻴﺑ ﻲﻜﺷﺰﭘ مﻮﻠﻋ هﺎﮕﺸﻧاد ،ﻲﻳﺎﻣﺎﻣ و يرﺎﺘﺳﺮﭘ هﺪﻜﺸﻧاد ،
،ﺪﻨﺟﺮﻴﺑ اﺮﻳا ن .
،ﺪﻨﺟﺮﻴﺑ ﻲﻜﺷﺰﭘ مﻮﻠﻋ هﺎﮕﺸﻧاد ،ﺪﻨﺟﺮﻴﺑ نﺎﺘﺳﺮﻬﺷ ﺖﺷاﺪﻬﺑ ﺰﻛﺮﻣ ،هﺎﮕﺸﻳﺎﻣزآ سﺎﻨﺷرﺎﻛ5
،ﺪﻨﺟﺮﻴﺑ ناﺮﻳا .
ﻪﻣﺪﻘﻣ زﻮﻴﻧﺎﻤﺸﻴﻟ
، يراﻮﺨﻧﻮﺧ ﺮﺛا رد ﻪﻛ ﺖﺳا ﻲﻧﻮﻔﻋ يرﺎﻤﻴﺑ ﻚﻳ
ﻪﺸﭘ ﻲﻛﺎﺧ رد ﺎﻴﻣوﺰﺗﻮﻟ و ﻢﻳﺪﻗ يﺎﻴﻧد رد سﻮﻣﻮﺗﻮﺒﻠﻓ ﺲﻨﺟ يﺎﻫ
ﺪﺟ يﺎﻴﻧد ﺪﻳ
، ﻲﻣ ﻞﻘﺘﻨﻣ نﺎﺴﻧا ﻪﺑ دﻮﺷ
.
زا ﻲﻜﻳ ناﺮﻳا 10
دراﻮﻣ ﻦﻳﺮﺘﺸﻴﺑ ﻪﻛ ﺖﺳا نﺎﻬﺟ رد رﻮﺸﻛ
ﻲﻣ شراﺰﮔ نآ رد يﺪﻠﺟ زﻮﻴﻧﺎﻤﺸﻴﻟ يرﺎﻤﻴﺑ ددﺮﮔ
) 1 .(
يرﺎﻤﻴﺑ زﻮﻧﻮﺋز مﺮﻓ دﺎﺠﻳا ﻲﻠﺻا ﻞﻣﺎﻋ (ZCL)
ناﺮﻳا رد
،
ﻞﮕﻧا ﺎﻴﻧﺎﻤﺸﻴﻟ روژﺎﻣ (Leishmania major) ياراد ﻪﻛ هدﻮﺑ
ﺪﻌﺘﻣ نزﺎﺨﻣ ﺑ يرﻮﻧﺎﺟ د
ﻪ هﮋﻳو ﺖﺳا نﺎﮔﺪﻧﻮﺟ عاﻮﻧا )
2 (
؛ زا
ﺎﻜﻴﭘوﺮﺗ ﺎﻴﻧﺎﻤﺸﻴﻟ ﺮﮕﻳد فﺮﻃ (L. tropica)
، ﻪﻧﻮﮔ ﻪﻛ ﺖﺳا يا
يرﺎﻤﻴﺑ ﻲﻧﺎﺴﻧا نﺰﺨﻣ ﺎﺑ مﺮﻓ هﺪﻤﻋ ﻞﻣﺎﻋ (ACL )
و ناﺮﻳا رد
رﻮﺸﻛ زا يرﺎﻴﺴﺑ ﺖﺳا ﺮﮕﻳد يﺎﻫ
. ﻣ ﻪﺘﺒﻟا زﻮﻴﻧﺎﻤﺸﻴﻟ زا يدراﻮ
دﺎﺠﻳا ﻲﺋﺎﺸﺣا ﺑ هﺪﺷ
ﻪ ﻞﮕﻧا ود ﻦﻳا ﻪﻠﻴﺳو
، شراﺰﮔ ناﺮﻳا زا
هﺪﻳدﺮﮔ ﺪﻧا ) 3
، 4 (
؛ ﻞﺑﺎﻘﻣ رد
، ﺎﻴﻧﺎﻤﺸﻴﻟ ﻲﻠﺻا ﻞﻣﺎﻋ ﻪﻛ مﻮﺘﻧﺎﻔﻨﻳا
ﻲﻣ بﻮﺴﺤﻣ ناﺮﻳا رد ﻲﺋﺎﺸﺣا زﻮﻴﻧﺎﻤﺸﻴﻟ زا يرﺎﻴﺴﺑ رد ،دﻮﺷ
ﻲﻳﺎﭘورا يﺎﻫرﻮﺸﻛ
، ﺎﻬﻨﺗ
، و هدروآ ﺪﻳﺪﭘ ار يﺪﻠﺟ زﻮﻴﻧﺎﻤﺸﻴﻟ مﺮﻓ
هﺪﻳدﺮﮔ شراﺰﮔ ﻢﻫ ناﺮﻳا رد نآ زا ﻲﺷﺎﻧ ﻚﻟﺎﺳ زا يدراﻮﻣ ﺖﺳا ) 5 .(
ﻞﮕﻧا ﺖﻳﻮﻫ ﻦﻴﻴﻌﺗ ﺖﻴﻤﻫا ﻟ دﺎﺠﻳا ﻞﻣﺎﻋ يﺎﻫ
و زﻮﻴﻧﺎﻤﺸﻴ
ﺗﺄ دراد يرﺎﻤﻴﺑ نﺎﻣرد و لﺮﺘﻨﻛ ،يﺮﻴﮕﺸﻴﭘ رد ﻪﻛ يﺮﻴﺛ
، ﺐﺒﺳ
هﺪﻳدﺮﮔ ﺖﺳا شور ﻪﻛ ﻲﻔﻠﺘﺨﻣ يﺎﻫ
ياﺮﺑ ﻦﻳا ﻪﻧﻮﮔ ﺰﻳﺎﻤﺗ
ﻞﮕﻧا دﻮﺷ ﻪﺘﻓﺮﮔ رﺎﻛ ﻪﺑ ﺎﻫ
، ﻪﻠﻤﺟ زا : ﻖﻳرﺰﺗ ،ﻞﮕﻧا ﺖﺸﻛ شور
شور و ﻢﻳﺰﻧآوﺰﻳا شور ،ﻲﻫﺎﮕﺸﻳﺎﻣزآ ناﻮﻴﺣ ﻪﺑ ﻲﻟﻮﻜﻟﻮﻣ يﺎﻫ
) 6 .(
يدﺮﺑرﺎﻛ ﻪﻠﻤﺟ زا شور ﻦﻳﺮﺗ
ﻣ يﺎﻫ ﻲﻟﻮﻜﻟﻮ
، PCR شور
ﻴﺳﺎﺴﺣ ياراد ﻪﻛ ﺖﺳا
ﻴﺻﺎﺼﺘﺧا و ﺖ ﻲﻣ ﻪﺟﻮﺗ ﻞﺑﺎﻗ ﺖ
ﺪﺷﺎﺑ
) 7 .(
ﻚﻴﻨﻜﺗ ﻦﻳا زا هدﺎﻔﺘﺳا ﺎﺑ
، ﻲﻣ زا هدﺎﻔﺘﺳا ﺎﺑ ﻲﺘﺣ ناﻮﺗ
ﻪﻧﻮﻤﻧ يﺎﻫ ﮓﻧر يﺰﻴﻣآ ،ﻚﻟﺎﺳ ﻪﺑ ﻼﺘﺒﻣ نارﺎﻤﻴﺑ يﺎﺴﻤﻴﮔ ﺎﺑ هﺪﺷ
ﻞﮕﻧا ﻪﻧﻮﮔ دﻮﻤﻧ ﻦﻴﻴﻌﺗ ار يرﺎﻤﻴﺑ ﻞﻣﺎﻋ يﺎﻫ
. ﻪﻧﻮﻤﻧ ﻦﻳا يﺎﻫ
داﺮﻓا زا ﻢﻴﻘﺘﺴﻣ ﺮﻴﻤﺳا يﺪﻠﺟ زﻮﻴﻧﺎﻤﺸﻴﻟ ﻪﺑ كﻮﻜﺸﻣ
، ﻪﺑ
و هﺪﻳدﺮﮔ ﻪﻴﻬﺗ ﺖﻟﻮﻬﺳ ياﺮﺑ
ﺶﻳﺎﻣزآ
،PCR لﺎﺳ ﺎﺗ يﺎﻫ
دﻮﺑ ﺪﻨﻫاﻮﺧ هدﺎﻔﺘﺳا ﻞﺑﺎﻗ يدﺎﻤﺘﻣ )
8 .(
رد ار دﺮﺑرﺎﻛ ﻦﻳﺮﺘﺸﻴﺑ ﻪﻛ ﺎﻴﻧﺎﻤﺸﻴﻟ ﻞﮕﻧا زا ﻲﻣﻮﻧژ ﻪﻌﻄﻗ ود ﻞﻣﺎﺷ ﺪﻧراد ﻲﻟﻮﻜﻟﻮﻣ تﺎﻌﻟﺎﻄﻣ
DNA : و ﻞﮕﻧا ﻲﺘﺳﻼﭘﻮﺘﻨﻴﻛ
ITS ﺶﺨﺑ DNA زا
ﺖﺳا نآ ﻲﻣزوزﻮﺒﻳر )
9 DNA .(
ﻲﺘﺳﻼﭘﻮﺘﻨﻴﻛ اراد ﺎﺑ ،
ندﻮﺑ ناراﺰﻫ DNA ﻪﺨﺴﻧ
يﻮﻘﻠﺣ
(minicircles) ﺶﺨﺑ ود ﻞﻣﺎﺷ ﻚﻳ ﺮﻫ ﻪﻛ
conserve و
variable ﻲﺑﻮﺧ فﺪﻫ ،ﺖﺳا
ياﺮﺑ ﻲﻟﻮﻜﻟﻮﻣ تﺎﻌﻟﺎﻄﻣ
ﻲﻣ ﻪﻧﻮﮔ ﻦﻴﻴﻌﺗ و ﻲﺼﻴﺨﺸﺗ ﺪﺷﺎﺑ
؛ ﺶﺨﺑ ،ﺮﮕﻳد يﻮﺳ زا
1ITS
ﺑ ﻪ ﻲﭙﻛ ﻪﻄﺳاو ﻲﻟاﻮﺗ و ﻞﮕﻧا مﻮﻧژ رد نآ دﺪﻌﺘﻣ يﺎﻫ
يﺎﻫ
يراﺮﻜﺗ
، ﺑرﺎﻛ ﻲﻧاواﺮﻓ دﺮ ياﺮﺑ
دراد ﻲﻣﻮﻧﻮﺴﻛﺎﺗ .
ﻪﺘﺷﺬﮔ نﺎﻴﻟﺎﺳ رد
، ﺑ ﻚﻟﺎﺳ يرﺎﻤﻴﺑ ﻪ
ﻚﺗ ترﻮﺻ رد ﺮﻴﮔ
ﻮﺼﺗ و هﺪﺷ هﺪﻫﺎﺸﻣ ﺪﻨﺟﺮﻴﺑ زا ﻲﻘﻃﺎﻨﻣ هدﻮﺑ ﻦﻳا ﺮﺑ ر
ﺖﺳا ﻪﻛ
يرﺎﻤﻴﺑ
، ﺑ ﻪ ﻲﺗادراو ترﻮﺻ
، ﻖﻃﺎﻨﻣ ﻪﺑ ناﺮﻓﺎﺴﻣ رد ﺎﻬﻨﺗ
ﻲﻣ هﺪﻳد ﺰﻴﺧﺎﻴﻧﺎﻤﺸﻴﻟ دﻮﺷ
. ﻪﺘﻓﺎﻳ ﺎﻣا ﺮﻴﺧا نﺎﻴﻟﺎﺳ يﺎﻫ
، زا ﻲﻛﺎﺣ
ﻲﻧﻮﻧﺎﻛ رﻮﻬﻇ دراﻮﻣ ﻪﻟﺎﺳ ﺮﻫ و هدﻮﺑ ﺪﻨﺟﺮﻴﺑ رد يرﺎﻤﻴﺑ زا راﺪﻳﺎﭘ
ﺪﻌﺘﻣ ﻲﻣ شراﺰﮔ ﺪﻨﺟﺮﻴﺑ ﺮﻬﺷ ﻲﻣﻮﺑ ﻦﻴﻨﻛﺎﺳ رد نآ زا يد ددﺮﮔ
.
ﻲﻃ ﺪﻨﺟﺮﻴﺑ رد ﻚﻟﺎﺳ يرﺎﻤﻴﺑ زوﺮﺑ ناﺰﻴﻣ 5
ﻪﺘﺷﺬﮔ لﺎﺳ
،
شراﺰﮔ ﺖﺒﺜﻣ دراﻮﻣ ﻪﺑ ﻪﺟﻮﺗ ﺎﺑ ﺖﺷاﺪﻬﺑ ﺰﻛﺮﻣ ﻂﺳﻮﺗ هﺪﺷ
ﺪﻨﺟﺮﻴﺑ نﺎﺘﺳﺮﻬﺷ
، 212 ﺖﺳا هدﻮﺑ ﺮﻔﻧ .
ﺮﺿﺎﺣ ﻪﻌﻟﺎﻄﻣ زا فﺪﻫ
،
ﺗ ﻞﮕﻧا ﻪﻧﻮﮔ ﻦﻴﻴﻌ ﻲﻃ ﻪﻛ ﺎﻴﻧﺎﻤﺸﻴﻟ يﺎﻫ
5 ﺐﺒﺳ ﺮﻴﺧا لﺎﺳ
هﺪﺷ ﺪﻨﺟﺮﻴﺑ ﺮﻬﺷ ﻦﻴﻨﻛﺎﺳ رد ﻚﻟﺎﺳ يرﺎﻤﻴﺑ ﺪﻧا
، زا هدﺎﻔﺘﺳا ﺎﺑ
شور ﺖﺳا هدﻮﺑ ﻲﻟﻮﻜﻟﻮﻣ يﺎﻫ .
شور ﻖﻴﻘﺤﺗ
ﻪﻧﻮﻤﻧ ﺎﻫ ﻪﻌﻟﺎﻄﻣ ﻦﻳا رد
،
ﻴﻠﻛ ﻪ ﻪﻧﻮﻤﻧ يﺎﻫ ﻪﻴﻬﺗ ﻢﻴﻘﺘﺴﻣ زا هﺪﺷ
رد ﻪﻛ يﺪﻠﺟ زﻮﻴﻧﺎﻤﺸﻴﻟ ﻪﺑ كﻮﻜﺸﻣ داﺮﻓا يﺪﻠﺟ تﺎﻌﻳﺎﺿ ﻪﻠﺻﺎﻓ لﺎﺳ يﺎﻫ 1387 ﻲﻟا 1391
، ﺖﺷاﺪﻬﺑ ﺰﻛﺮﻣ ﻪﺑ
ﻲﭘﻮﻜﺳوﺮﻜﻴﻣ ﻲﺳرﺮﺑ ﻪﺠﻴﺘﻧ و هدﺮﻛ ﻪﻌﺟاﺮﻣ ﺪﻨﺟﺮﻴﺑ نﺎﺘﺳﺮﻬﺷ ،دﻮﺑ هﺪﺷ ﺮﻛذ ﺖﺒﺜﻣ ﺎﻬﻧآ رد
ﺮﺑاﺮﺑ عﻮﻤﺠﻣ ﺎﺑ
120
،ﻪﻧﻮﻤﻧ درﻮﻣ
ﺪﻨﺘﻓﺮﮔ راﺮﻗ ﻲﺳرﺮﺑ .
تﺎﻋﻼﻃا نارﺎﻤﻴﺑ
، ﺮﺑ سﺎﺳا مﺮﻓ ﻲﺳرﺮﺑ
يداﺮﻔﻧا يرﺎﻤﻴﺑ
ﻪﻛ رد ﺰﻛﺮﻣ ﺖﺷاﺪﻬﺑ ياﺮﺑ
مﺎﻤﺗ نارﺎﻤﻴﺑ
ﻴﻤﻜﺗ ﻞ هﺪﺷ دﻮﺑ
، جاﺮﺨﺘﺳا ﺪﻳدﺮﮔ
.
1Internal Transcribed Spacer
ﺑ ﺎﻬﻧآ تﺎﺼﺨﺸﻣ ﻪﻛ ﻲﻧارﺎﻤﻴﺑ ﻪ
دﻮﺑ هﺪﻳدﺮﮕﻧ ﺖﺒﺛ ﻲﺘﺳرد
، زا
ﺪﻧﺪﺷ فﺬﺣ ﻪﻌﻟﺎﻄﻣ .
يﺰﻴﻣآ ﮓﻧر يﺎﻫﺮﻴﻤﺳا هﺪﺷ
، ﻂﺳﻮﺗ
رد نﺎﻤﺸﻴﻟ ﻢﺴﺟ دﻮﺟو و ﺪﻳدﺮﮔ هﺪﻫﺎﺸﻣ يرﻮﻧ پﻮﻜﺳوﺮﻜﻴﻣ ﺖﻓﺮﮔ راﺮﻗ ﻲﺳرﺮﺑ درﻮﻣ ﺎﻬﻧآ .
رد عﻮﻤﺠﻣ
، 80 ﻢﻴﻘﺘﺴﻣ ﺮﻴﻤﺳا
ﮓﻧر ﺎﺑ ﻣ ﺺﻴﺨﺸﺗ و ﺎﺴﻤﻴﮔ يﺰﻴﻣآ
،ﺖﺒﺜﻣ ﻲﭘﻮﻜﺳوﺮﻜﻴ 30
داﺮﻓا ﻪﺑ طﻮﺑﺮﻣ ﻲﭘﻮﻜﺳوﺮﻜﻴﻣ ﺺﻴﺨﺸﺗ ﺮﻈﻧ زا ﻲﻔﻨﻣ ﺮﻴﻤﺳا و ﻚﻟﺎﺳ ﻪﺑ كﻮﻜﺸﻣ 10
ّﻠﻌﺘﻣ ﺮﻴﻤﺳا يرﺎﻤﻴﺑ ﺮﻳﺎﺳ ﻪﺑ ﻖ
يﺎﻫ
ﺪﻨﺘﻓﺮﮔ راﺮﻗ ﻪﻌﻟﺎﻄﻣ درﻮﻣ ،ﻚﻟﺎﺳ زا ﺮﻴﻏ يﺪﻠﺟ .
جاﺮﺨﺘﺳا DNA
ﺮﻫ ﺢﻄﺳ اﺪﺘﺑا ﻪﻧﻮﻤﻧ
، هﺪﻴﺷاﺮﺗ اﺰﺠﻣ ﻲﺣاﺮﺟ ﻪﻐﻴﺗ ﻂﺳﻮﺗ
ﻞﻳﺮﺘﺳا ﻂﻳاﺮﺷ ﺖﺤﺗ و ﺪﺷ
، ﺮﻜﻴﻣ ﻪﺑ ﺪﻳدﺮﮔ ﻞﻘﺘﻨﻣ بﻮﻴﺗو .
جاﺮﺨﺘﺳا ﻪﻧﻮﻤﻧ ﻦﻳا زا DNA
ﺎﻫ
، جاﺮﺨﺘﺳا ﺖﻴﻛ زا هدﺎﻔﺘﺳا ﺎﺑ
ﻲﻧﻮﺘﺳ شور ﻪﺑ DNA AccuPrep® Genomic DNA )
Extraction Kit, Bioneer, South Korea) (
ﻖﺒﻃ
ﺪﻳدﺮﮔ مﺎﺠﻧا ﺖﻴﻛ رد جرﺪﻨﻣ ﻞﻤﻌﻟارﻮﺘﺳد ؛
اﺪﺘﺑا ﻪﻛ ﺐﻴﺗﺮﺗ ﻦﻳﺪﺑ
بﻮﻴﺗوﺮﻜﻴﻣ ﺮﻫ ﻪﺑ
، 200 ﻢﻀﻫ ﺮﻓﺎﺑ ﺮﺘﻴﻟوﺮﻜﻴﻣ ﻨﻛ
يوﺎﺣ هﺪﻨ
زﺎﻨﻴﺌﺗوﺮﭘ هدوﺰﻓاK
ﺪﻳدﺮﮔ يﺎﻣد رد و 60
ﻲﺘﻧﺎﺳ ﻪﺟرد راﺮﻗ داﺮﮔ
ﺪﻧﺪﺷ هداد
؛ Binding buffer ﺲﭙﺳ
زا ﺲﭘ و ﺪﺷ هدوﺰﻓا
ﻪﻓﺎﺿا و ﻻﺎﺑ رود ﺎﺑ ژﻮﻔﻳﺮﺘﻧﺎﺳ ،ﮓﻨﻴﺘﭙﻴﭘ و لﻮﻧﺎﭘوﺮﭘوﺰﻳا ندﻮﻤﻧ
ﻪﻟﻮﻟ تﺎﻳﻮﺘﺤﻣ بﻮﻴﺗ ﻪﺑ ﺎﻫ
ﺪﻨﺘﻓﺎﻳ لﺎﻘﺘﻧا ﻲﻧﻮﺘﺳ ﺮﺘﻠﻴﻓ ﺪﺟاو يﺎﻫ .
ﺑ ﻮﺸﺘﺴﺷ رﺎﺑ ود زا ﺲﭘ ﺎﺑ ژﻮﻔﻳﺮﺘﻧﺎﺳ و ﻲﺻﺎﺼﺘﺧا يﺎﻫﺮﻓﺎﺑ ﺎ
نﻮﺘﺳ ،ﻻﺎﺑ رود بﻮﻴﺗوﺮﻜﻴﻣ ﻪﺑ ﺎﻫ
و ﺪﻳدﺮﮔ ﻞﻘﺘﻨﻣ ﻞﻳﺮﺘﺳا يﺎﻫ
ندوﺰﻓا ﺎﺑ 200
ﺮﻓﺎﺑ ﺮﺘﻴﻟوﺮﻜﻴﻣ ﻞﺣ وTE
DNA نﺪﺷ ﻪﻧﻮﻤﻧ ﺎﻫ
رد ژﻮﻔﻳﺮﺘﻧﺎﺳ ﻚﻤﻛ ﻪﺑ ﻲﻳﺎﻬﻧ لﻮﻠﺤﻣ ،ﺮﻓﺎﺑ ﻦﻳا رد بﻮﻴﺗوﺮﻜﻴﻣ ﻊﻤﺟ ﺎﻫ
ﺑ و ﺪﻳدﺮﮔ يروآ ﻪ
لﻮﻠﺤﻣ ناﻮﻨﻋ رد DNA
ﻳدﺮﮔ هدﺎﻔﺘﺳا PCR ﺪ
. لﻮﻠﺤﻣ DNA يﺎﻫ
هدﺎﻔﺘﺳا زا ﺲﭘ
، رد
يﺎﻣد 20 - ﻲﺘﻧﺎﺳ ﻪﺟرد ﺪﻧﺪﺷ يراﺪﻬﮕﻧ داﺮﮔ
.
شور يﺎﻫ وPCR PCR-RFLP
1
لﻮﻠﺤﻣ ﺑ DNA
ﻪ ﺖﺳد هﺪﻣآ
، ياﺮﺑ ﺪﻨﻳآﺮﻓ ود PCR
ﺪﺷ هدﺎﻔﺘﺳا .
اﺪﺘﺑا ﻲﺻﺎﺼﺘﺧا PCR
، يﺎﻫﺮﻤﻳاﺮﭘ زا هدﺎﻔﺘﺳا ﺎﺑ
1Restriction Fragment Length Polymorphism
LINR4 LIN17 و
زا ﺮﻴﻐﺘﻣ ﺖﻤﺴﻗ ﻪﻛ minicircle
يﺎﻫ
ﺘﺳﻼﭘﻮﺘﻨﻴﻛ DNA ﻲﻣ ﺮﻴﺜﻜﺗ ار ﺎﻴﻧﺎﻤﺸﻴﻟ ﻲ
ﺪﻳدﺮﮔ مﺎﺠﻧا ،ﺪﻨﻫد
) 8 .(
ﻪﻌﻄﻗ ﻦﻳا لﻮﻃ
، و دﻮﺑ توﺎﻔﺘﻣ ﺎﻴﻧﺎﻤﺸﻴﻟ ﻒﻠﺘﺨﻣ عاﻮﻧا رد
ﺪﻧﺎﺑ ﺖﻛﺮﺣ لﻮﻃ ﻪﺑ ﻪﺟﻮﺗ ﺎﺑ
،
ﻲﻃ زورﺎﮔآ لژ ﺮﺑ زرﻮﻓوﺮﺘﻜﻟا
ﺪﻳدﺮﮔ ﻲﻳﺎﺳﺎﻨﺷ ﻪﻟوﺰﻳا ﺮﻫ ﻪﺑ طﻮﺑﺮﻣ يﺎﻴﻧﺎﻤﺸﻴﻟ ﻪﻧﻮﮔ .
لﻮﻃ
دوﺪﺣ رد ﺎﻜﻴﭘوﺮﺗ ﺎﻴﻧﺎﻤﺸﻴﻟ درﻮﻣ رد ﻪﻌﻄﻗ ﻦﻳا 750
ﺎﺑ ﺖﻔﺟ و ز
روژﺎﻣ ﺎﻴﻧﺎﻤﺸﻴﻟ رد 680
ﺖﺳا زﺎﺑ ﺖﻔﺟ .
شور رد مودPCR
، يﺎﻫﺮﻤﻳاﺮﭘ زا هدﺎﻔﺘﺳا ﺎﺑ L5.8S
و
LITSR
، زا ﻲﺸﺨﺑ ﻲﻣوزﻮﺒﻳر DNA
ﺰﻴﻧ و5.8S
ّﻞﻛ ﻪﻌﻄﻗ
ﻞﮕﻧا رد ﻲﻣزوزﻮﺒﻳرITS1 ﺮﻴﺜﻜﺗ ،ﻲﺳرﺮﺑ درﻮﻣ يﺎﻴﻧﺎﻤﺸﻴﻟ يﺎﻫ
ﺪﻨﺘﻓﺎﻳ ) 11 .(
ﺎﻴﻧﺎﻤﺸﻴﻟ ﻒﻠﺘﺨﻣ عاﻮﻧا رد ﻪﻌﻄﻗ ﻦﻳا لﻮﻃ
، رد
300bp دوﺪﺣ ﺖﺳا
. ﻦﻳا رد
،ﻂﻳاﺮﺷ ياﺮﺑ عاﻮﻧا ﻚﻴﻜﻔﺗ
ﺎﻴﻧﺎﻤﺸﻴﻟ ﻒﻠﺘﺨﻣ
، ﻚﻴﻨﻜﺗ زا PCR-RFLP
ﻢﻳﺰﻧآ هدﺎﻔﺘﺳا ﺎﺑ
BsuRI (Fermentas, Lithuania)
زا يﺮﻣوﺰﻴﺷوﺰﻳا ﻪﻛ
هﺪﻨﻨﻛدوﺪﺤﻣ ﻢﻳﺰﻧآ HaeIII
ﺪﻳدﺮﮔ هدﺎﻔﺘﺳا ،ﺖﺳا )
12 .(
يﻮﮕﻟا
DNA ﻢﻀﻫ ﻢﻳﺰﻧآ ﻦﻳا ﻂﺳﻮﺗ
، ﺎﻴﻧﺎﻤﺸﻴﻟ ﻒﻠﺘﺨﻣ عاﻮﻧا درﻮﻣ رد
ﻧﺎﻤﺸﻴﻟ ﻪﻠﻤﺟ زا ﺮﺑ و دﻮﺑ توﺎﻔﺘﻣ ﺎﻜﻴﭘوﺮﺗ ﺎﻴﻧﺎﻤﺸﻴﻟ و روژﺎﻣ ﺎﻴ
زورﺎﮔآ لژ يور ﺮﺑ لﻮﺼﺤﻣ زرﻮﻓوﺮﺘﻜﻟا سﺎﺳا
، ﻒﻠﺘﺨﻣ عاﻮﻧا
ﺪﻧﺪﺷ يزﺎﺳاﺪﺟ ﻞﮕﻧا .
PCR ياﺮﺑ ﻪﻧﻮﻤﻧ ﺎﻫ
، هﺎﮕﺘﺳد زا Eppendorf Thermal
Cycler (Mastercycler EP Gradient S, Germany)
ﻪﻧﻮﻤﻧ ﻲﻘﻓا زرﻮﻓوﺮﺘﻜﻟا ياﺮﺑ و ﺎﻫ
زا ﺘﻜﻟا لژ هﺎﮕﺘﺳد ﺲﻳزرﻮﻓوﺮ
ﺖﻛﺮﺷ ﺖﺧﺎﺳ Biometra
نﺎﻤﻟآ ﺪﺷ هدﺎﻔﺘﺳا .
ﻪﻟوﺰﻳا يﺎﻫ
ﺑ دراﺪﻧﺎﺘﺳا رﺎﻜ
ﻪﺘﻓر ياﺮﺑ ﻪﻧﻮﻤﻧ يﺎﻫﺪﻧﺎﺑ ﻪﺴﻳﺎﻘﻣ PCR يﺎﻫ
هﺪﺷ
ﻞﻣﺎﺷ MHOM/SU/71/K27 :
دراﺪﻧﺎﺘﺳا ﻪﻟوﺰﻳا
و ﺎﻜﻴﭘوﺮﺗﺎﻴﻧﺎﻤﺸﻴﻟ MHOM/SU/73/5ASKH
ﻪﻟوﺰﻳا
ﺎﻴﻧﺎﻤﺸﻴﻟ دراﺪﻧﺎﺘﺳا ﺪﻧدﻮﺑ روژﺎﻣ
. هدﺎﻔﺘﺳا درﻮﻣ ﺮﻛرﺎﻣ ياﺮﺑ
ﻮﻓوﺮﺘﻜﻟا ﻲﻘﻓا زر
Mid Range DNA Ladder (100bp-3kb)
ﺖﻛﺮﺷ ﺖﺧﺎﺳ Jena Bioscience
دﻮﺑ نﺎﻤﻟآ .
DNA Sequencing
ياﺮﺑ ﺗﺄ ﻪﻧﻮﮔ ﺺﻴﺨﺸﺗ ﺪﻴﻳ ﻪﻧﻮﻤﻧ زا يداﺪﻌﺗ ،يا
يﺎﻫ
يﺎﻫﺮﻤﻳاﺮﭘ ﻂﺳﻮﺗ ﻪﺘﻓﺎﻳﺮﻴﺜﻜﺗ L5.8S
LITSR و ﺑ
ﻪ ترﻮﺻ
ﺮﻤﻳاﺮﭘ ود ﻦﻴﻤﻫ ﻂﺳﻮﺗ و ﻪﻓﺮﻃود
، ﻲﻧﺎﭙﻤﻛ ﻂﺳﻮﺗ Bioneer
ﻴﻌﺗ ﻲﺑﻮﻨﺟ هﺮﻛ رﻮﺸﻛ ﺪﻧﺪﻳدﺮﮔ ﻲﻟاﻮﺗ ﻦﻴ
. ﺞﻳﺎﺘﻧ sequencing
مﺮﻧ ﻂﺳﻮﺗ يﺎﻫراﺰﻓا
v.1.7.4 ChromasPro
Bioedit و
7.0.9 ﻲﺳرﺮﺑ ﺪﺷ و ﻢﻫ ﻲﻔﻳدر ﻲﻟاﻮﺗ درﻮﻣ رد ﻪﻓﺮﻃود يﺎﻫ
ﺪﻳدﺮﮔ مﺎﺠﻧا .
ﺑ ﺞﻳﺎﺘﻧ ﻪ ﺖﺳد هﺪﻣآ
، ﻚﻧﺎﺑ رد دﻮﺟﻮﻣ تﺎﻋﻼﻃا ﺎﺑ
NCBI ﻲﻧژ ﺪﻧﺪﻳدﺮﮔ ﺖﺒﺛ و ﻪﺴﻳﺎﻘﻣ .
ﻞﻴﻠﺤﺗ و ﻪﻳﺰﺠﺗ ﺑ تﺎﻋﻼﻃا
ﻪ ﺖﺳد زا هﺪﻣآ هﺪﻧوﺮﭘ ﻲﺳرﺮﺑ
ﻪﻧﻮﮔ ﻦﻴﻴﻌﺗ ﺞﻳﺎﺘﻧ و نارﺎﻤﻴﺑ يا
، ﺳا ﺎﺑ زا هدﺎﻔﺘ مﺮﻧ راﺰﻓا SPSS
) ﺶﻳاﺮﻳو 13 ( و ﺎﺑ نﻮﻣزآ و ﻲﻔﻴﺻﻮﺗ رﺎﻣآ زا هدﺎﻔﺘﺳا يرﺎﻣآ يﺎﻫ
يﺎﻛ ﺢﻄﺳ رد ﺮﺸﻴﻓ ﻖﻴﻗد ﺖﺴﺗ و ﺮﺋﻮﻜﺳا 05
/ 0 α= ﺰﻴﻟﺎﻧآ
ﺪﻳدﺮﮔ .
ﻪﺘﻓﺎﻳ ﺎﻫ PCR شور ﻲﺻﺎﺼﺘﺧا ياﺮﺑ
ﻪﻌﻄﻗ ﺮﻴﺜﻜﺗ ITS1
ﻞﮕﻧا ﺎﻴﻧﺎﻤﺸﻴﻟ يﺎﻫ
، د مﺎﻤﺗ درﻮﻣ ر 80
ﺖﺒﺜﻣ ﻪﻧﻮﻤﻧ
ﻲﭘﻮﻜﺳوﺮﻜﻴﻣ
%) 100 ( ﺰﻴﻧ و 13 زا ﻪﻧﻮﻤﻧ 30
زا ﻲﻔﻨﻣ ﻪﻧﻮﻤﻧ
ﻲﭘﻮﻜﺳوﺮﻜﻴﻣ ﺺﻴﺨﺸﺗ ﺮﻈﻧ
%) 3 / 43 (
، دﺎﺠﻳا ﻲﺻﺎﺼﺘﺧا ﺪﻧﺎﺑ
رد و دﻮﻤﻧ ﻪﻧﻮﻤﻧ
يﺎﻫ يرﺎﻤﻴﺑ ﺮﻳﺎﺳ ﻪﺑ طﻮﺑﺮﻣ يﺪﻠﺟ يﺎﻫ
،
دﺮﻜﻧ دﺎﺠﻳا يﺪﻧﺎﺑ .
ﺮﺛا ﺎﺑ ﻢﻳﺰﻧآ نداد BsuRI
يور ﺮﺑ
شور ﻦﻳا زا ﻞﺻﺎﺣ تﻻﻮﺼﺤﻣ وPCR
يﺪﻧﺎﺑ يﻮﮕﻟا ﻪﺴﻳﺎﻘﻣ
دﺎﺠﻳا ،ﺎﻴﻧﺎﻤﺸﻴﻟ ﻒﻠﺘﺨﻣ عاﻮﻧا ﻪﺑ طﻮﺑﺮﻣ يﺎﻫدراﺪﻧﺎﺘﺳا ﺎﺑ هﺪﺷ
ﻪﻧﻮﮔ هدﻮﻟآ يﺎﻫ ﺪﻧﺪﻳدﺮﮔ ﺺﺨﺸﻣ نارﺎﻤﻴﺑ رد ﻞﮕﻧا هﺪﻨﻨﻛ
) ﺮﻳﻮﺼﺗ 1 .(
شور ﺎﻣا هﺪﻨﻫدﺮﻴﺜﻜﺗ PCR
ﻞﮕﻧا KDNA ﺎﻫ
،
درﻮﻣ رد ﺎﻬﻨﺗ 46
ﻪﻧﻮﻤﻧ
، زورﺎﮔآ لژ ﺮﺑ زرﻮﻓوﺮﺘﻜﻟا زا ﺲﭘ
، ﺪﻧﺎﺑ
دﺮﻛ دﺎﺠﻳا ﻲﺻﺎﺼﺘﺧا
%) 5 / 57 ( دﻮﺑ ﺎﻬﻧآ ﻪﻧﻮﮔ ﻦﻴﻴﻌﺗ ﻪﺑ ردﺎﻗ و
) ﺮﻳﻮﺼﺗ 2 .(
عﻮﻤﺠﻣ زا 80
،ﻲﺳرﺮﺑ درﻮﻣ ﺖﺒﺜﻣ ﻲﭘﻮﻜﺳوﺮﻜﻴﻣ ﻪﻧﻮﻤﻧ 8
رﺎﻤﻴﺑ
، ﻼﺘﺒﻣ ﺎﻴﻧﺎﻤﺸﻴﻟ ﻪﺑ ﺪﺷ هداد ﺺﻴﺨﺸﺗ روژﺎﻣ
ﺪﻧ
%) 10 ( و 72
ﻼﺘﺒﻣ ﺎﻜﻴﭘوﺮﺗﺎﻴﻧﺎﻤﺸﻴﻟ ﻪﺑ ﺮﮕﻳد رﺎﻤﻴﺑ ﺪﻧدﻮﺑ
%) 90 .(
ﻪﻧﻮﮔ ﺎﺑ نارﺎﻤﻴﺑ رد هﺪﺷدﺎﺠﻳا ﻲﻜﻴﻨﻴﻠﻛ ضراﻮﻋ ﻪﺴﻳﺎﻘﻣ رد ﻞﮕﻧا يرﺎﻤﻴﺑ ﻞﻣﺎﻋ )
لوﺪﺟ 1 ( ﻲﻨﻌﻣ توﺎﻔﺗ ، ﻪﻧﻮﮔ ود ﻦﻴﺑ يراد
ﻞﮕﻧا ؛ﺪﻳدﺮﮕﻧ هﺪﻫﺎﺸﻣ ﻪﺑ ﻪﻌﺟاﺮﻣ نﺎﻣز ﻪﺴﻳﺎﻘﻣ ،ﺮﮕﻳد يﻮﺳ زا
ﻪﺑ ﻼﺘﺒﻣ نارﺎﻤﻴﺑ رد ﻪﻌﻳﺎﺿ رﻮﻬﻇ ﻪﻘﺑﺎﺳ ﺎﺑ ﻚﺷﺰﭘ روژﺎﻣﺎﻴﻧﺎﻤﺸﻴﻟ
،
ﻴﻠﻛ ﻪﻛ داد نﺎﺸﻧ نارﺎﻤﻴﺑ ﻦﻳا ﻪ
، هدوﺪﺤﻣ رد
هﺎﻣ ﺮﻬﻣ ﺎﺗ دادﺮﻣ يﺎﻫ
، ﻪﺸﭘ شﺰﮔ درﻮﻣ ﻪﺑ هدﻮﻟآ ﻲﻛﺎﺧ
ﻞﮕﻧا
ﻪﺘﻓﺮﮔ راﺮﻗ ﺪﻧا
؛ ﻲﻟﺎﺣ رد ﻪﺑ ﻼﺘﺒﻣ داﺮﻓا درﻮﻣ رد ﻪﻛ
ﺎﻜﻴﭘوﺮﺗﺎﻴﻧﺎﻤﺸﻴﻟ
، هﺎﻣ مﺎﻤﺗ رد هدﻮﻟآ ﻪﺸﭘ شﺰﮔ قﺎﻔﺗا لﺎﺳ يﺎﻫ
ﺖﺳا هدﺎﺘﻓا .
ﺞﻳﺎﺘﻧ DNA Sequencing ﻪﻌﻄﻗ
ﻪﺑ طﻮﺑﺮﻣ ITS1 20
ﺤﺻ ،رﺎﻤﻴﺑ شور ﻂﺳﻮﺗ ﻪﻧﻮﮔ ﻦﻴﻴﻌﺗ ﺖ
PCR-RFLP طﻮﺑﺮﻣ
ﺗ ار تﺎﻌﻄﻗ ﻦﻳا ﻪﺑ ﺄ
دﻮﻤﻧ ﺪﻴﻳ . ﻴﺗﻮﺌﻠﻛﻮﻧ ﻲﻟاﻮﺗ تﺎﻌﻄﻗ ﻦﻳا يﺪ
، رد
ﻲﻧژ ﻚﻧﺎﺑ ﻲﻳﺎﺳﺎﻨﺷ يﺎﻫﺪﻛ ﺎﺑ ﺎﻜﻳﺮﻣآ NCBI
KC505421
KC505440 ﻲﻟا ﺖﺳا ﻲﺳﺮﺘﺳد ﻞﺑﺎﻗ و هﺪﻳدﺮﮔ ﺖﺒﺛ
.
ﺮﻳﻮﺼﺗ 1 - ﺶﺨﺑ ﻲﻤﻳﺰﻧآ ﻢﻀﻫ تﻻﻮﺼﺤﻣ ﺲﻳزرﻮﻓوﺮﺘﻜﻟا زا ITS1
ﻞﮕﻧا ﻲﻣوزﻮﺒﻳر DNA
ﻢﻳﺰﻧآ ﻂﺳﻮﺗ ﺎﻴﻧﺎﻤﺸﻴﻟ يﺎﻫ
HaeIII
لژ يور ﺮﺑ
زورﺎﮔآ ﻒﻳدر. 1 ﺎﺗ 6 ﻪﻧﻮﻤﻧ تﺎﻌﻳﺎﺿ يﺎﻫ نارﺎﻤﻴﺑ يﺪﻠﺟ
. ﻒﻳدر 7 و 8 ﺑ ﻪ ﺐﻴﺗﺮﺗ
روژﺎﻣﺎﻴﻧﺎﻤﺸﻴﻟ و ﺎﻜﻴﭘوﺮﺗﺎﻴﻧﺎﻤﺸﻴﻟ دراﺪﻧﺎﺘﺳا ﻪﻟوﺰﻳا .
ﻒﻳدر ﻲﻧزو ﺮﻛرﺎﻣ M DNA
(100-3000bp) Jena Bioscienceﺖﻛﺮﺷ
نﺎﻤﻟآ .
ﺮﻳﻮﺼﺗ 2 - تﻻﻮﺼﺤﻣ ﺲﻳزرﻮﻓوﺮﺘﻜﻟا ﺮﻴﻐﺘﻣ ﺶﺨﺑ PCR
KDNA
ﻞﮕﻧا زورﺎﮔآ لژ يور ﺮﺑ ﺎﻴﻧﺎﻤﺸﻴﻟ يﺎﻫ ﻒﻳدر .
1 ﺎﺗ 6 ﻪﻧﻮﻤﻧ ﺎﺿ يﺎﻫ تﺎﻌﻳ
نارﺎﻤﻴﺑ يﺪﻠﺟ .
ﻒﻳدر 7 و 8 ﺑ ﻪ اﺪﻧﺎﺘﺳا ﻪﻟوﺰﻳا ﺐﻴﺗﺮﺗ و ﺎﻜﻴﭘوﺮﺗﺎﻴﻧﺎﻤﺸﻴﻟ در
ﺎﻴﻧﺎﻤﺸﻴﻟ روژﺎﻣ .
M ﻒﻳدر ﻲﻧزو ﺮﻛرﺎﻣ
DNA (100-3000bp) Jena ﺖﻛﺮﺷ
Bioscience
نﺎﻤﻟآ
لوﺪﺟ 1 - نارﺎﻤﻴﺑ زا هﺪﻣآ ﺖﺳﺪﺑ ﻲﻜﻴﻨﻴﻠﻛ تﺎﻋﻼﻃا ﻪﺑ ﻪﺟﻮﺗ ﺎﺑ يرﺎﻤﻴﺑ ﻞﻣﺎﻋ ﻒﻠﺘﺨﻣ يﺎﻫ ﻪﻧﻮﮔ ﻲﺒﺴﻧ و ﻖﻠﻄﻣ ﻲﻧاواﺮﻓ
ﻧ ﺮﻴﻐﺘﻣ مﺎ هوﺮﮔ ﺮﻳز
روژﺎﻣﺎﻴﻧﺎﻤﺸﻴﻟ ) ﺪﺻرد ( ﻲﻧاواﺮﻓ ﺎﻜﻴﭘوﺮﺗﺎﻴﻧﺎﻤﺸﻴﻟ
) ﺪﺻرد ( ﻲﻧاواﺮﻓ ﻲﻨﻌﻣ ﺢﻄﺳ يراد
نﻮﻣزآ
ﺮﺸﻴﻓ ﻖﻴﻗد
ﻴﺴﻨﺟ ﺖ دﺮﻣ
نز )
50 ( 4
) 50 ( 4 )
8 / 46 ( 29
) 2 / 53 ( 33 1
ﺖﻧﻮﻜﺳ ﻞﺤﻣ ﺮﻬﺷ
ﺎﺘﺳور )
75 ( 6
) 25 ( 2 )
8 / 70 ( 51
) 2 / 29 ( 21 1
يﺪﻠﺟ ﻪﻌﻳﺎﺿ داﺪﻌﺗ 2
- 1
≥3 )
50 ( 4
) 50 ( 4 )
6 / 80 ( 58
) 4 / 19 ( 14 07
/ 0
ﻪﻌﻳﺎﺿ ﻞﺤﻣ
ندﺮﮔ و ترﻮﺻ
ﺎﭘ و ﺖﺳد
ود ﺮﻫ )
5 / 12 ( 1
) 5 / 87 ( 7
- )
4 / 26 ( 19
) 7 / 66 ( 48
) 9 / 6 ( 5 81
/ 0
رود لﻮﻃ زوﺮﺑ ه ﻪﻌﻳﺎﺿ ) هﺎﻣ ( 2
- 1
6 - 3
>6 )
5 / 62 ( 5
) 25 ( 2
) 5 / 12 ( 1 )
5 / 37 ( 27
) 2 / 47 ( 34
) 3 / 15 ( 11 41
/ 0
ﺚﺤﺑ ﻞﮕﻧا ﺖﻳﻮﻫ ﻦﻴﻴﻌﺗ فﺪﻫ ﺎﺑ ﺮﺿﺎﺣ ﻪﻌﻟﺎﻄﻣ ﻫ
دﺎﺠﻳا ﻞﻣﺎﻋ يﺎ
زﻮﻴﻧﺎﻤﺸﻴﻟ ﺮﻬﺷ رد يﺪﻠﺟ
نﺎﺘﺳ مﺎﺠﻧا ﺪﻨﺟﺮﻴﺑ ﺪﻳدﺮﮔ
.
دﺮﺑرﺎﻛ PCR-RFLP شور
ﻪﻌﻄﻗ زا هدﺎﻔﺘﺳا ﺎﺑ زا ITS1
ﻞﮕﻧا ﻲﻣوزﻮﺒﻳر DNA
، ﻲﻣﺎﻤﺗ رد ﻞﮕﻧا ﻪﻧﻮﮔ ﻦﻴﻴﻌﺗ ﻪﺑ ردﺎﻗ
ﻪﻧﻮﻤﻧ دﻮﺑ ﻲﻫﺎﮕﺸﻳﺎﻣزآ يﺎﻫ و
ﺰﻴﻧ رد 13 زا ﻪﻧﻮﻤﻧ 30
ﺮﻴﻤﺳا
ﮔ ﺰﻴﻧ زﻮﻴﻧﺎﻤﺸﻴﻟ ﻪﺑ كﻮﻜﺸﻣ داﺮﻓا ﻲﭘﻮﻜﺳوﺮﻜﻴﻣ ﻞﮕﻧا ﻪﻧﻮ
يﺎﻫ
دﻮﻤﻧ ﺺﺨﺸﻣ ار يرﺎﻤﻴﺑ ﻞﻣﺎﻋ .
لﺎﺳ رد 2007 Kumar ، شور ﻦﻳا دﺮﺑرﺎﻛ ﺎﺑ نارﺎﻜﻤﻫ و
ﺪﻧدﻮﺑ ﻪﺘﺴﻧاﻮﺗ
، 75 / 82
% ﻞﮕﻧا ﻪﻧﻮﻤﻧ رد دﻮﺟﻮﻣ يﺎﻫ يﺎﻫ
ﺪﻨﻳﺎﻤﻧ ﻪﻧﻮﮔ ﻦﻴﻴﻌﺗ ار نارﺎﻤﻴﺑ ﻲﻜﻴﻨﻴﻠﻛ )
13 ( ﻦﻳا زا هدﺎﻔﺘﺳا ﺎﻣا ؛
ﻂﺳﻮﺗ شور El-Beshbishy
نارﺎﻜﻤﻫ و
، ﻪﻧﻮﮔ ﻦﻴﻴﻌﺗ رد
ﻞﮕﻧا ﺟ يﺎﻫ اﺪ زا هﺪﺷ تﺎﻌﻳﺎﺿ
ﻼﺘﺒﻣ نارﺎﻤﻴﺑ يﺪﻠﺟ ﻪﺑ
نﺎﺘﺴﺑﺮﻋ رد يﺪﻠﺟ زﻮﻴﻧﺎﻤﺸﻴﻟ
، ﺎﻬﻨﺗ 1 / 70
% ﻣ ﺖﺳا ﻪﺘﺴﻧاﻮﺗ ﺆ
ّﺛ ﺮ
ﺪﺷﺎﺑ ) 14 .(
ﻦﻴﺑ فﻼﺘﺧا ﺮﺿﺎﺣ ﻖﻴﻘﺤﺗ ﺞﻳﺎﺘﻧ
ﺮﻛذ تﺎﻌﻟﺎﻄﻣ ﺎﺑ هﺪﺷ
،
ﻲﻣ ﻪﻧﻮﻤﻧ ﻦﻴﺑ توﺎﻔﺗ زا ﻲﺷﺎﻧ ﺪﻧاﻮﺗ هﻮﺤﻧ ،ﻲﻜﻴﻨﻴﻠﻛ يﺎﻫ
جاﺮﺨﺘﺳا مﺎﺠﻧا ﻂﻳاﺮﺷ وDNA
ﺪﺷﺎﺑPCR .
لﺎﺣ ﻦﻴﻋ رد
، رد عﻮﻤﺠﻣ زا ﺮﺿﺎﺣ ﻖﻴﻘﺤﺗ 30
ﻪﻧﻮﻤﻧ ﺶﻳﺎﻣزآ رد ﻪﻛ يﺪﻠﺟ زﻮﻴﻧﺎﻤﺸﻴﻟ ﻪﺑ كﻮﻜﺸﻣ داﺮﻓا ﻪﺑ طﻮﺑﺮﻣ
ﺎﻬﻧآ ﻲﭘﻮﻜﺳوﺮﻜﻴﻣ ﻢﻴﻘﺘﺴﻣ
، ،دﻮﺑ هﺪﺸﻧ هداد ﺺﻴﺨﺸﺗ ﻲﻠﮕﻧا
13 ﻪﻧﻮﻤﻧ
%) 3 / 43 ( شور ﻂﺳﻮﺗ PCR-RFLP
ﺮﻛذ هﺪﺷ
ﺪﺷ ﺖﺒﺜﻣ ﺪﻧﺪﻳدﺮﮔ ﻪﻧﻮﮔ ﻦﻴﻴﻌﺗ و
. لﺎﺳ رد ﻲﻬﺑﺎﺸﻣ ﻖﻴﻘﺤﺗ رد
2006 Al-Jawabreh ﻂﺳﻮﺗ
ﻜﻤﻫ و داﺮﻓا يور ﺮﺑ نارﺎ
شور ،ﻦﻴﻄﺴﻠﻓ ﻞﻘﺘﺴﻣ رﻮﺸﻛ رد يﺪﻠﺟ زﻮﻴﻧﺎﻤﺸﻴﻟ ﻪﺑ كﻮﻜﺸﻣ ﺮﻛذ PCR هﺪﺷ
، درﻮﻣ رد 82
% ﻪﻧﻮﻤﻧ ﻲﻔﻨﻣ يﺎﻫ
، ﻪﺑ ردﺎﻗ
ﺖﺳا هدﻮﺑ ﺎﻴﻧﺎﻤﺸﻴﻟ ﻞﮕﻧا ﺺﻴﺨﺸﺗ )
15 .(
ﺰﻴﻧ ﻪﺘﻜﻧ ﻦﻳا ﺮﻛذ
مﺎﺠﻧا ﻒﻠﺘﺨﻣ تﺎﻌﻟﺎﻄﻣ رد ﻪﻛ ﺖﺳا يروﺮﺿ
ﻴﺳﺎﺴﺣ ،ﻪﺘﻓﺮﮔ ﺖ
درﻮﻣ رد ﻲﭘﻮﻜﺳوﺮﻜﻴﻣ ﻢﻴﻘﺘﺴﻣ هﺪﻫﺎﺸﻣ شور ﻪﻧﻮﻤﻧ
يﺎﻫ
ﻲﻜﻴﻨﻴﻠﻛ ﻒﻠﺘﺨﻣ
، ﻦﻴﺑ 42
% ﺎﺗ 76
% ﺖﺳا هﺪﻳدﺮﮔ ﺮﻛذ )
16
،
17 ( ﻦﻴﺑ ﻦﻳا رد ﻪﻛ
، ﻪﻧﻮﻤﻧ يﺎﻫ ﻪﻴﻬﺗ يﺪﻠﺟ تﺎﻌﻳﺎﺿ زا هﺪﺷ
نارﺎﻤﻴﺑ
،
ﻴﺳﺎﺴﺣ ﻦﻳﺮﺘﻤﻛ ﺪﻧراد ار ﺖ
. ﻦﻳا ﺖﻠﻋ ﻦﻴﻘﻘﺤﻣ ﻲﺧﺮﺑ
ﻦﮕﻤﻫﺎﻧ ﻲﮔﺪﻨﻛاﺮﭘ ار ﺮﻣا تﻮﮕﻴﺘﺳﺎﻣا
ﻞﮕﻧا يﺎﻫ ﻪﻧﻮﻤﻧ رد
يﺎﻫ
ﻲﻣ ﻲﺘﺳﻮﭘ ﻲﻣ ﺚﻋﺎﺑ ﻪﻛ ﺪﻨﻧاد
ﻣ رد دﻮﺷ دﺪﻌﺘﻣ دراﻮ
ﻞﮕﻧا ،
دﻮﺸﻧ شراﺰﮔ )
15 .(
ﻲﻣ ﺰﻴﻧ ار يﺮﮕﻳد ﻞﻳﻻد درﻮﻣ رد ناﻮﺗ
و ﻲﭘﻮﻜﺳوﺮﻜﻴﻣ هﺪﻫﺎﺸﻣ ﻪﺠﻴﺘﻧ توﺎﻔﺗ زا ،دﺮﻤﺷﺮﺑ PCR
ﻪﻠﻤﺟ : ﮓﻧر بﻮﺧ يﺰﻴﻣآ
نﺪﺸﻧ ﻪﻧﻮﻤﻧ ﻊﻳﺎﺷ ﺰﻴﻧ و ﺎﻫ ناﺰﻴﻣ ندﻮﺑ
دﻮﺧ رﺎﻤﻴﺑ رد ﻲﻧﺎﻣرد درﻮﻣ رد ﻪﻛ يﺪﻠﺟ تﺎﻌﻳﺎﺿ ﻪﺑ ﻼﺘﺒﻣ نا
ﺎﻣرد ﻦﻳا ،زﻮﻴﻧﺎﻤﺸﻴﻟ ﻪﺑ نﺎﻳﻼﺘﺒﻣ ن
ﺮﻴﻏ يﺎﻫ ﻲﺻﺎﺼﺘﺧا
، ﻲﻣ ﺪﻧاﻮﺗ
ﺐﺒﺳ ﻲﺷﻼﺘﻣ نﺪﺷ ﻐﺗ و ﻴﻴ ﺮ ﻞﻜﺷ نداد ا و هﺪﺷ ﺖﻓﺎﺑ رد ﻞﮕﻧ
ﻚﻳژﻮﻟﻮﻓرﻮﻣ ﺺﻴﺨﺸﺗ دزﺎﺳ ﻪﺟاﻮﻣ لﺎﻜﺷا ﺎﺑ ار نآ
.
رﺎﻜﺑ يﺎﻫﺮﻤﻳاﺮﭘ زا هدﺎﻔﺘﺳا ﺎﺑ ﻪﻛ يﺮﮕﻳد تﺎﻌﻟﺎﻄﻣ رد ﻪﺘﻓﺮﮔ
ﻴﺳﺎﺴﺣ ﺰﻴﻧ ﺪﺷ مﺎﺠﻧا ﻖﻴﻘﺤﺗ ﻦﻳا رد هﺪﺷ شور ﻦﻳا ﺖ
،PCR ﺖﺳا هﺪﻳدﺮﮔ دروآﺮﺑ ﻲﭘﻮﻜﺳوﺮﻜﻴﻣ شور زا ﺮﺘﺸﻴﺑ )
18 ،
19 .(
ﺮﺿﺎﺣ ﻖﻴﻘﺤﺗ رد
، ﻢﻫ ﻪﺑ ﻪﺟﻮﺗ ﺎﺑ ﺞﻳﺎﺘﻧ ﻲﻧاﻮﺧ
DNA
sequencing PCR-RFLP ﺎﺑ
يﺪﻧﺎﺑ يﻮﮕﻟا دﺎﺠﻳا ﺰﻴﻧ و
ﻪﻧﻮﻤﻧ مﺎﻤﺗ درﻮﻣ رد ﺎﻴﻧﺎﻤﺸﻴﻟ ﻪﺑ طﻮﺑﺮﻣ ﺑ ،ﺎﻫ
ﻪ ﻲﻣ ﺮﻈﻧ ﻪﻛ ﺪﺳر
مﺎﺠﻧا PCR هﺪﺷ
، ﺖﺒﺜﻣ ﺦﺳﺎﭘ لﺎﻤﺘﺣا و هدﺮﻛ ﻞﻤﻋ ﻲﺻﺎﺼﺘﺧا
ﻛ ﻲﻣ ﻢﻛ رﺎﻴﺴﺑ نآ رد بذﺎ ﺪﺷﺎﺑ
. شور ﻪﭼﺮﮔ مﺎﺠﻧا PCR
هﺪﺷ
درﻮﻣ رد
،KDNA
ﻴﺳﺎﺴﺣ ﺑ ﺖ ﻪ شور ﻪﺑ ﺖﺒﺴﻧ يﺮﺘﻤﻛ ﺐﺗاﺮﻣ
ﻚﺗ ﻪﺑ ﻪﺟﻮﺗ ﺎﺑ ﺎﻣا ،ﺖﺷاد ﺮﮕﻳدPCR ﻪﻠﺣﺮﻣ
يا ﺖﻟﻮﻬﺳ و ندﻮﺑ
دﺮﺑرﺎﻛ
، ﻲﻣ ﺪﻧاﻮﺗ ياﺮﺑ ﻞﮕﻧا ﻊﻳﺮﺳ ﻪﻧﻮﮔ ﻦﻴﻴﻌﺗ ﺎﻴﻧﺎﻤﺸﻴﻟ يﺎﻫ
ﺑ ﻪ دور رﺎﻛ . ﻪﻤﻫ ﻲﺳرﺮﺑ ﻴﮔ
دﺎﺠﻳا ﻞﻣاﻮﻋ يﺮ رﺎﻤﻴﺑ
ﻪﻘﻄﻨﻣ رد ي
، نﺎﺸﻧ
ﻲﻣ رد ﻞﮕﻧا ﻪﺑ ﻲﮔدﻮﻟآ ﻲﺒﻳﺮﻘﺗ نﺎﻣز ﻪﻛ ﺪﻫد ﻼﺘﺒﻣ نارﺎﻤﻴﺑ
ﻪﺑ
ﺎﻴﻧﺎﻤﺸﻴﻟ روژﺎﻣ
، هﺎﻣ ﻪﺑ دوﺪﺤﻣ ﺮﻬﻣ ﺎﺗ دادﺮﻣ يﺎﻫ
؛ ﻲﻨﻌﻳ ﻂﺳاوا
هرود ﺎﺑ ﮓﻨﻫﺎﻤﻫ ًﻻﺎﻤﺘﺣا ﻪﻛ ﺖﺳا ﺰﻴﻳﺎﭘ ﻞﻳاوا ﺎﺗ نﺎﺘﺴﺑﺎﺗ ﻲﻣ ﻪﻘﻄﻨﻣ رد يرﺎﻤﻴﺑ نﺰﺨﻣ نﺎﮔﺪﻧﻮﺟ ﻲﻧاواﺮﻓ ﺪﺷﺎﺑ
؛
ﻲﻟﺎﺣ رد رﺎﻤﻴﺑ درﻮﻣ رد ﻪﻛ ﻼﺘﺒﻣ نا
ﺎﻴﻧﺎﻤﺸﻴﻟ ﻪﺑ ﺎﻜﻴﭘوﺮﺗ
، ﺮﺘﺸﻴﺑ رد
هﺎﻣ ﻲﻣ هﺪﻫﺎﺸﻣ يرﺎﻤﻴﺑ لﺎﻘﺘﻧا لﺎﺳ يﺎﻫ ددﺮﮔ
. ،ﺞﻳﺎﺘﻧ ﻦﻳا
ﺪﻴﻳﺄﺗ ﻊﻗاو رد هﺪﻨﻨﻛ
يرﺎﻤﻴﺑ زﻮﻧﻮﺋز ﻪﺧﺮﭼ روژﺎﻣﺎﻴﻧﺎﻤﺸﻴﻟ زا ﻲﺷﺎﻧ
ﺘﻧآ مﺮﻓ ﺰﻴﻧ و ﺎﻴﻧﺎﻤﺸﻴﻟ زا ﻲﺷﺎﻧ ﻚﻟﺎﺳ ﻚﻴﺗﻮﻧﻮﭘوﺮ
رد ﺎﻜﻴﭘوﺮﺗ
ﻲﻣ ﻪﻘﻄﻨﻣ ﺪﻨﺷﺎﺑ
؛ ﻦﻴﻨﭽﻤﻫ وﺎﻔﺗ هﺪﻫﺎﺸﻣ مﺪﻋ ﻪﺑ ﻪﺟﻮﺗ ﺎﺑ
ت
ﻲﻨﻌﻣ و ﺮﻬﺷ رد ﻞﮕﻧا ﻪﻧﻮﮔ ود ﻪﺑ ﻲﮔدﻮﻟآ ﺪﺻرد ﺮﻈﻧ زا راد
ﺑ ،ﺎﺘﺳور ﻪ ﻲﻣ ﺮﻈﻧ ياﺮﺑ مزﻻ ﻂﻳاﺮﺷ ﺪﺳر ﺰﻴﻧ و زﻮﻧﻮﺋز ﻪﺧﺮﭼ
دراد دﻮﺟو ﻪﻘﻄﻨﻣ ود ﺮﻫ رد يرﺎﻤﻴﺑ ﻲﻧﺎﺴﻧا .
ﻪﺠﻴﺘﻧ يﺮﻴﮔ
شور زا هدﺎﻔﺘﺳا PCR يﺎﻫ
، ﻞﮕﻧا ﺖﻳﻮﻫ ﻦﻴﻴﻌﺗ رد يﺎﻫ
ﺖﻴﻘﻓﻮﻣ ﻖﻴﻘﺤﺗ ﻦﻳا رد يﺪﻠﺟ زﻮﻴﻧﺎﻤﺸﻴﻟ ﻞﻣﺎﻋ ﻮﺑ ﺰﻴﻣآ
ﺎﺑ و هد
دﺮﺑرﺎﻛ ﻪﻧﻮﻤﻧ يﺎﻫ ﻪﻴﻬﺗ ﻲﺷور ،ﻪﺘﺷﺬﮔ لﺎﺳ ﺪﻨﭼ ﻲﻃ هﺪﺷ
ﻲﻣ دروآﺮﺑ ﻲﻠﻤﻋ ددﺮﮔ
. ﻖﻴﻘﺤﺗ ﻪﺠﻴﺘﻧ دﻮﺟﻮﻣ زا ﻲﻛﺎﺣ ،
ﺮﻫ ندﻮﺑ
ﻪﻘﻄﻨﻣ رد ﻚﻴﺗﻮﻧﻮﺋز و ﻚﻴﺗﻮﻧﻮﭘوﺮﺘﻧآ يﺪﻠﺟ زﻮﻴﻧﺎﻤﺸﻴﻟ مﺮﻓ ود ﺪﻨﺟﺮﻴﺑ ﻲﻣ
؛ﺪﺷﺎﺑ ﺖﺳا مزﻻ اﺬﻟ ياﺮﺑ
ﻪﺸﭘ نﻮﻓ ﻦﻴﻴﻌﺗ ﻲﻛﺎﺧ
يﺎﻫ
حﺮﻃ و يرﻮﻧﺎﺟ نﺰﺨﻣ نﺎﻧﺎﺑﺰﻴﻣ ،ﻞﻗﺎﻧ ﺖﺳﺎﻴﺳ يﺰﻳر
يﺎﻫ
يرﺎﻤﻴﺑ زا يﺮﻴﮕﺸﻴﭘ و لﺮﺘﻨﻛ
، ترﻮﺻ يﺮﺘﺸﻴﺑ تﺎﻌﻟﺎﻄﻣ ﮔ
دﺮﻴ .
ﺮﻜﺸﺗ و ﺮﻳﺪﻘﺗ
ﻪﻟﺎﻘﻣ ﻦﻳا ﻞﺻﺎﺣ
ﺖﻧوﺎﻌﻣ بﻮﺼﻣ ﻲﺗﺎﻘﻴﻘﺤﺗ حﺮﻃ
ﻨﻓ و تﺎﻘﻴﻘﺤﺗ ﺎ
ﺪﻛ ﺎﺑ ﺪﻨﺟﺮﻴﺑ ﻲﻜﺷﺰﭘ مﻮﻠﻋ هﺎﮕﺸﻧاد يرو 683
ﺖﺳا . ﻦﻳﺪﺑ ﺴﻣ يرﺎﻜﻤﻫ زا ﻪﻠﻴﺳو ﺆ
ﺖﺷاﺪﻬﺑ ﺰﻛﺮﻣ مﺮﺘﺤﻣ ﻦﻴﻟو
ﺘﺤﻣ ﺖﻧوﺎﻌﻣ و ﺪﻨﺟﺮﻴﺑ نﺎﺘﺳﺮﻬﺷ ﻨﻓ و تﺎﻘﻴﻘﺤﺗ مﺮ
يروﺎ
نﺎﺑرز ﺮﺘﻛد يﺎﻗآ بﺎﻨﺟ هﺎﮕﺸﻧاد
، ﻢﻳراد ار ﺮﻜﺸﺗ لﺎﻤﻛ .
ﻊﺑﺎﻨﻣ :
1- Alvar J, Vélez ID, Bern C, Herrero M, Desjeux P, Cano J, et al. Leishmaniasis worldwide and global estimates of its incidence. PLoS One. 2012; 7(5): e35671.
2- Mirzaei A, Rouhani S, Taherkhani H, Farahmand M, Kazemi B, Hedayati M, et al. Isolation and detection of Leishmania species among naturally infected Rhombomis opimus, a reservoir host of zoonotic cutaneous leishmaniasis in Turkemen Sahara, North East of Iran. Exp Parasitol. 2011; 129(4): 375-80
3- Alborzi A, Pouladfar GR, Fakhar M, Motazedian MH, Hatam GR, Kadivar MR. Isolation of Leishmania tropica from a patient with visceral leishmaniasis and disseminated cutaneous leishmaniasis, southern Iran. Am J Trop Med Hyg.
2008; 79(3): 435-7.
4- Karamian M, Motazedian MH, Mehrabani D, Gholami K. Leishmania major infection in a patient with visceral leishmaniasis: treatment with Amphotericin B. Parasitol Res. 2007; 101(5): 1431-4.
5- Hatam GR, Hosseini SM, Ardehali S. Dermotropic isolates of Leishmania infantum in Iran. Trans R Soc Trop Med Hyg. 1997; 91(4): 440.
6- Goto H, Lindoso JA. Current diagnosis and treatment of cutaneous and mucocutaneous leishmaniasis. Expert Rev Anti Infect Ther. 2010: 8(4): 419-33.
7- Schönian G, Kuhls K, Mauricio IL. Molecular approaches for a better understanding of the epidemiology and population genetics of Leishmania. Parasitology. 2011; 138(4): 405-25.
8- Motazedian H, Karamian M, Noyes HA, Ardehali S. DNA extraction and amplification of leishmania from archived, Giemsa-stained slides, for the diagnosis of cutaneous Leishmaniasis by PCR. Ann Trop Med Parasitol. 2002; 96(1): 31- 4.
9- Rocha MN, Margonari C, Presot IM, Soares RP. Evaluation of 4 polymerase chain reaction protocols for cultured Leishmania spp. typing. Diagn Microbiol Infect Dis. 2010; 68(4): 401-9.
10- Karamian M, Motazedian MH, Fakhar M, Pakshir K, Jowkar F, Rezanezhad H. Atypical presentation of Old-World cutaneous leishmaniasis, diagnosis and species identification by PCR. J Eur Acad Dermatol Venereol. 2008; 22(8): 958- 62.
11- el Tai NO, Osman OF, el Fari M, Presber W, Schönian G. Genetic heterogeneity of ribosomal internal transcribed spacer in clinical samples of Leishmania donovani spotted on filter paper as revealed by single-strand conformation polymorphisms and sequencing. Trans R Soc Trop Med Hyg. 2000; 94(5): 575-9.
12- Schönian G, Nasereddin A, Dinse N, Schweynoch C, Schallig HD, Presber W, et al. PCR diagnosis and characterization of Leishmania in local and imported clinical samples. Diagn Microbiol Infect Dis. 2003; 47(1): 349- 358.
13- Kumar R, Bumb RA, Ansari NA, Mehta RD, Salotra P. Cutaneous leishmaniasis caused by Leishmania tropica in Bikaner, India: parasite identification and characterization using molecular and immunologic tools. Am J Trop Med Hyg. 2007; 76(5): 896-901.
14 El-Beshbishy HA, Al-Ali KH, El-Badry AA. Molecular characterization of cutaneous leishmaniasis in Al-Madinah Al-Munawarah province, western Saudi Arabia. Int J Infect Dis. 2013; 17(5): e334-8.
15- Al-Jawabreh A, Schoenian G, Hamarsheh O, Presber W. Clinical diagnosis of cutaneous leishmaniasis: a comparison study between standardized graded direct microscopy and ITS1-PCR of Giemsa-stained smears. Acta Trop.
2006; 99(1): 55-61.
16- Aviles H, Belli A, Armijos R, Monroy FP, Harris E. PCR detection and identification of Leishmania parasites in clinical specimens in Ecuador: a comparison with classical diagnostic methods. J Parasitol. 1999; 85(2):181-7.
17- Andresen K, Gaafar A, El-Hassan AM, Ismail A, Dafalla M, Theander TG, et al. Evaluation of the polymerase chain reaction in the diagnosis of cutaneous leishmaniasis due to Leishmania major: a comparison with direct microscopy of smears and sections from lesions. Trans R Soc Trop Med Hyg. 1996;90(2): 133-5.
18- Bensoussan E, Nasereddin A, Jonas F, Schnur LF, Jaffe CL. Comparison of PCR assays for diagnosis of cutaneous leishmaniasis. J Clin Microbiol. 2006; 44(4): 1435-9.
19- Dweik A, Schönian G, Mosleh IM, Karanis P. Evaluation of PCR-RFLP (based on ITS-1 and HaeIII) for the detection of Leishmania species, using Greek canine isolates and Jordanian clinical material. Ann Trop Med Parasitol.
2007; 101(5): 399-407.
Abstract Original Article
Molecular identification of cutaneous leishmaniasis agents in Birjand, Iran
4, , Seyed Alireza Sadatjoo a Hemmati3
, Min , Mohammad Sedigh Faroghi Bojd2
Mehdi Karamian1
Darvish Ali Barati5
Background and Aim: Cutaneous leishmaniasis (CL) is an endemic disease in different areas of Iran.
During past years, the disease was sporadic in Birjand. But, it seems that during recent five years a stable focal leishmaniasis has been developed in the area.
The present study was designed to determine the species of Leishmania parasites in cutaneous lesions of patients residing in the city of Birjand.
Materials and Methods: In this cross-sectional study, 80 samples of microscopically-positive slides of cutaneous lesions, belonging to suspected CL patients during the past five years, were examined. The variable kinetoplastic regions of the DNA of leishmania and ribosomal Internal Transcribed Subunit 1 (ITS1) of the parasite were multiplied by means of PCR procedure .Then, All PCR products of ITS1 were digested with HaeIII for species identification.
Results: PCR-RFLP profile of ITS1 rDNA was able to identify species of leishmania in all 80 microscopically-positive (100%) slides and 13 out of 30 (43.3%) microscopically-negative ones. But only 46 samples (57.5%) were identified by means of KDNA PCR. Among the the all subjects, 8 patients (10%) had leishmania major and 72 (90%)had been infected with leishmania tropica.
Conclusion: PCR-RFLP of ITS1 rDNA of leishmania is recommended to diagnose infection with CL agents, because of its high sensitivity.
Key Words: Leishmania tropica, Leishmania major, PCR, Birjand, Cutaneous lesion slides
Journal of Birjand University of Medical Sciences. 2013; 20 (2): 183-190.
Received: March 13, 2013 Accepted: July 3, 2013
1 Corresponding author, assistant professor of parasitology, Hepatitis Research Center ,Faculty of Medicine, Birjand University of Medical Sciences, Birjand, Iran [email protected]
2 M.D. The city health center of Birjand, Birjand University of Medical Sciences, Birjand, Iran.
3 Assistant professor of Biochemistry, faculty of medicine, Birjand University of Medical Sciences, Birjand, Iran.
4 Academic member of Faculty of Nursing and Midwifery, Birjand University of Medical Sciences, Birjand, Iran.
5 B.S. in Laboratory Sciences, The city health center of Birjand, Birjand University of Medical Sciences, Birjand, Iran.
