Pengaruh Pemberian Kurma Tahnik Terhadap Jumlah Total Leukosit, Persentase Jumlah Monosit dan Limfosit Darah Serta Titer Antibodi Mencit

(1)

UIN SYARIF HIDAYATULLAH JAKARTA

PENGARUH PEMBERIAN KURMA TAHNIK

TERHADAP JUMLAH TOTAL LEUKOSIT,

PERSENTASE JUMLAH MONOSIT DAN LIMFOSIT

DARAH SERTA TITER ANTIBODI MENCIT

SKRIPSI

ASHARI DZIKRO NIM : 108102000076

FAKULTAS KEDOKTERAN DAN ILMU KESEHATAN PROGRAM STUDI FARMASI

(2)

i

UIN SYARIF HIDAYATULLAH JAKARTA

PENGARUH PEMBERIAN KURMA TAHNIK

TERHADAP JUMLAH TOTAL LEUKOSIT,

PERSENTASE JUMLAH MONOSIT DAN LIMFOSIT

DARAH SERTA TITER ANTIBODI MENCIT

SKRIPSI

Diajukan sebagai salah satu syarat memperoleh gelar Sarjana Farmasi

ASHARI DZIKRO NIM : 108102000076

FAKULTAS KEDOKTERAN DAN ILMU KESEHATAN PROGRAM STUDI FARMASI

(3)

ii

Skripsi ini adalah hasil karya sendiri,

dan semua sumber baik yang dikutip maupun dirujuk

telah saya nyatakan dengan benar.

Nama : Ashari Dzikro

NIM : 108102000076

Tanda Tangan :

(4)

iii

PENGARUH PEMBERIAN KURMA TAHNIK

TERHADAP JUMLAH TOTAL LEUKOSIT,

PERSENTASE JUMLAH MONOSIT DAN LIMFOSIT

DARAH SERTA TITER ANTIBODI MENCIT

Nama : Ashari Dzikro NIM : 108102000076 Program Studi : Farmasi Judul Penelitian :

Menyetujui,

Pembimbing pertama, Pembimbing kedua,

Farida Sulistiawati, M.Si., Apt Drh. Rr. Bhintarti S. Hastari, M. Biomed

NIP. 19670105 200604 2 001 NIDN. 0313087204

Mengetahui,

Ketua Program Studi Farmasi

(5)

iv Skripsi ini diajukan oleh :

Nama : Ashari Dzikro NIM : 108102000076 Program Studi : Farmasi

Judul Skripsi : Pengaruh Pemberian Kurma Tahnik Terhadap Jumlah Total Leukosit, Persentase Jumlah Monosit dan Limfosit Darah Serta Titer Antibodi Mencit

Telah berhasil dipertahankan di hadapan Dewan Penguji dan diterima sebagai bagian persyaratan yang diperlukan untuk memperoleh gelar Sarjana Farmasi pada Program Studi Farmasi Fakultas Kedokteran dan Ilmu Kesehatan Universitas Islam Negeri (UIN) Syarif Hidayatullah Jakarta

DEWAN PENGUJI

Pembimbing I : Farida Sulistiawati, M.Si., Apt

Pembimbing II : Drh. Rr. Bhintarti S. Hastari, M. Biomed

Ketua Penguji : Drs. Umar Mansur, M.Sc., Apt ... Anggota Penguji I : Prof. Atiek Soemiati, M.Sc., Apt

Anggota Penguji II : Ofa Suzanti Betha, M.Si., Apt Anggota Penguji III : Sabrina, M.Farm., Apt

Ditetapkan di : Jakarta

Tanggal : 25 Oktober 2012

Mengetahui,

(6)

v Nama : Ashari Dzikro Program Studi : Farmasi

Judul : Pengaruh Pemberian Kurma Tahnik Terhadap Jumlah Total Leukosit, Persentase Jumlah Monosit dan Limfosit Darah Serta Titer Antibodi Mencit

Penelitian ini dilakukan untuk mengetahui bagaimana pengaruh pemberian kurma tahnik terhadap jumlah total leukosit, persentase jumlah monosit dan limfosit darah serta titer antibodi mencit. Mencit galur DDY jenis kelamin jantan dengan berat rata – rata 20 – 25 gr berjumlah 18 ekor dibagi menjadi tiga kelompok, masing – masing kelompok terdiri dari enam mencit. Kelompok I adalah kontrol negatif (hanya diberi makan dan minum biasa), kelompok II adalah kontrol positif (diberi vaksin thypoid), dan kelompok III adalah kelompok perlakuan (diberi kurma tahnik). Periode perlakuan berlangsung selama dua minggu. Pengambilan darah mencit melalui ekor dilakukan pada hari ke-0 (sebelum perlakuan), hari ke-2, hari ke-8, dan hari ke-15. Perhitungan jumlah total leukosit, persentase monosit, dan persentase limfosit dilakukan pada masing – masing waktu pengambilan darah. Mencit diinduksi dengan sel darah merah domba (SDMD) pada hari ke-15, kemudian pada hari ke-22 dilakukan pengukuran titer antibodi dengan metode hemaglutinasi. Pada hari ke-23, semua mencit dari ketiga kelompok diinfeksi bakteri Salmonella tyhpi secara intraperitoneal dengan dosis 105 CFU/mL, kemudian dilakukan pengamatan persentase survival rate pada masing – masing kelompok selama satu minggu setelah infeksi diberikan. Semua data dianalisis secara statistik menggunakan perangkat lunak SPSS 20.0 for Windows. Data jumlah total leukosit, persentase jumlah monosit, dan persentase limfosit darah mencit dianalisis dengan metode uji two-way repeated measure ANOVA dilanjutkan dengan metode One – Way

ANOVA (diteruskan dengan uji BNT), data titer hemaglutinasi antibodi mencit dianalisis dengan metode uji one – way ANOVA dilanjutkan dengan Post Hoc Test (Tukey test dan Bonferroni test), dan data hasil pengamatan persentase

survival rate dianalisis dengan metode Kaplan – Meier.

Hasil analisa data menunjukkan bahwa pemberian kurma tahnik selama dua minggu meningkatkan jumlah total leukosit mencit. Pemberian kurma tahnik selama satu hari, satu minggu, dan dua minggu meningkatkan persentase limfosit mencit, namun menurunkan persentase monosit mencit. Titer antibodi mencit kelompok pemberian kurma tahnik selama dua minggu tidak berbeda signifikan dengan titer antibodi mencit kelompok kontrol negatif dan mencit kelompok kontrol positif. Persentase survival rate mencit kelompok kontrol negatif, kelompok kontrol positif, dan kelompok pemberian kurma tahnik tidak menunjukkan perbedaan yang signifikan selama 7 hari periode infeksi bakteri

Salmonella thypi.

(7)

vi Name : Ashari Dzikro Program Study : Pharmacy

Title : The Effect of Tahnik With Dates on The Total Number of Leukocytes, The Percentage of Blood Monocytes and Lymphocytes As Well As Antibody Titer In Mice

This study was conducted to determine the effect of tahnik with dates on the total number of leukocytes, the percentage of blood monocytes and lymphocytes as well as antibody titers in mice. A total 18 of DDY strain mice with 20-25 grams weight were divided into three groups, each group consisted of six mice. Group I is a negative control (just plain fed and watered), group II is the positive control (given typhoid vaccine), and the third group was the treatment group (tahnik with dates). The period of treatment lasted for two weeks. Blood collection was performed from the mice’s tail on day 0 (before treatment), day 2, day 8, and day 15. Calculation of the total number of leukocytes, the percentage of monocytes, and the percentage of lymphocytes performed each time blood was taken. Mice was induced by sheep red blood cells (SRBC) on day 15, and then on day 22 antibody titer was measured by the haemagglutination assay method. On day 23, all three groups of mice were infected with Salmonella tyhpi

intraperitoneally at a dose of 105 CFU/mL, then the percentage of survival rate was observed on each group for one week. All data were statistically analyzed using SPSS 20.0 software for Windows. The number of total leukocytes, the percentage of monocytes, and the percentage of blood lymphocytes of mice were analyzed using two-way repeated measure ANOVA followed by one-way ANOVA (followed by LSD test), the data of antibody titer by hemagglutination assay method was analyzed using one - way ANOVA followed by Post Hoc Test (Tukey test and Bonferroni test), and the data of survival rate percentage was analyzed using Kaplan – Meier method.

The results showed that the administration of tahnik with dates during two weeks increasing the total number of leukocytes in mice. Giving tahnik with dates for one day, one week, and two weeks increasing the percentage of lymphocytes, but reducing the percentage of monocytes in mice. The antibody titer of mice that tahnik with dates was given for two weeks didn’t differ significantly with antibody titer of mice negative control group and positive control group. The survival rate percentage of mice negative control group, positive control group, and the group that tahnik with dates was given showed no significant difference during the seven days period of Salmonella typhi bacterial infection.

(8)

vii

Puji dan syukur saya panjatkan kehadirat Allah SWT, atas segala limpahan nikmat, rahmat, dan karunia yang telah diberikan kepada saya, beserta petunjuk dariNya yang selalu hadir mulai dari setiap bangun dari tidur sehingga penulis dapat menyelesaikan skripsi dengan judul Pengaruh Pemberian Kurma Tahnik Terhadap Jumlah Total Leukosit, Persentase Jumlah Monosit dan Limfosit Darah

Serta Titer Antibodi Mencit. Shalawat serta salam semoga tersampaikan kepada

junjungan seluruh umat Islam, Uswatun Hasanah hingga akhir zaman, Nabi

Muhammad Shallallahu 'alaihi Wa salam, beserta keluarganya, para sahabat, dan pengikutnya yang senantiasa menjalankan amalan – amalan Rasulullah SAW.

Skripsi ini disusun untuk memenuhi salah satu syarat untuk memperoleh gelar Sarjana Farmasi (S.Far) pada Program Studi Farmasi Fakultas Kedokteran dan Ilmu Kesehatan Universitas Islam Negeri Syarif Hidayatullah Jakarta.

Keberhasilan dalam penyelesaian skripsi ini tidak lepas dari bantuan bantuan serta dukungan orang – orang yang telah banyak berjasa. Pada kesempatan ini penulis ingin menyampaikan ucapan terima kasih dan pernghargaan yang sebesar – besarnya kepada :

1. Bapak Prof. Dr. (hc) dr. M.K Tadjudin Sp.And, selaku Dekan Fakultas Kedokteran dan Ilmu Kesehatan UIN Syarif Hidayatullah Jakarta.

2. Bapak Drs. Umar Mansur, M.Sc., Apt, selaku Ketua Program studi Farmasi FKIK UIN Syarif Hidayatullah Jakarta.

3. Ibu Farida Sulistiawati M.Si, Apt, selaku pembimbing I yang telah memberikan banyak waktu, semangat, ilmu, dan bimbingan selama penulisan skripsi ini.

4. Ibu Drh. Rr. Bhintarti S. Hastari, M. Biomed, selaku pembimbing II yang telah banyak memberikan saran, ide, dan masukan yang berharga.

(9)

viii

7. Kakak eris, selaku laboran laboratorium PBB Farmasi FKIK yang telah sabar karena sering direpotkan dan telah banyak membantu selama penelitian. 8. Kakak Lisna, kakak Niken, kakak Tiwi, mba Rani, kakak Yopi, dan om

Rahmadi yang telah membantu selama penelitian.

9. Kakak Pia yang telah membantu penulis dalam hal surat menyurat dan urusan akademik.

10. Putri Rahmawati yang telah banyak membantu dan memberi dukungan sebelum sidang skripsi.

11. Ikhsan Budiarto yang telah membantu mengurus mencit pada awal penelitian di laboratorium.

12. Intan Fauziah yang telah banyak memberi informasi tempat membeli bahan – bahan keperluan penelitian.

13. Teman – teman farmasi angkatan 2008 baik kelas A maupun kelas B yang sama – sama berjuang menyelesaikan penelitian.

14. Pihak – pihak lain yang tidak dapat disebutkan satu – persatu yang telah membantu dan mendukung penulis selama penelitian.

Penulis menyadari bahwa skripsi ini jauh dari sempurna, namun penulis berharap semoga hasil penelitian ini dapat memberikan manfaat yang sebesar – besarnya bagi masyarakat luas khususnya umat Islam.

Jakarta, 17 Oktober 2012

(10)

ix

Sebagai sivitas akademik Universitas Islam Negeri (UIN) Syarif Hidayatullah Jakarta, saya yang bertanda tangan di bawah ini :

Nama : Ashari Dzikro NIM : 108102000076 Program Studi : Farmasi

Fakultas : Kedokteran dan Ilmu Kesehatan Jenis Karya : Skripsi

Demi perkembangan ilmu pengetahuan, saya menyetujui skripsi/karya ilmiah saya, dengan judul :

PENGARUH PEMBERIAN KURMA TAHNIK TERHADAP JUMLAH

TOTAL LEUKOSIT, PERSENTASE JUMLAH MONOSIT DAN

LIMFOSIT DARAH SERTA TITER ANTIBODI MENCIT

Untuk dipublikasikan atau ditampilkan di internet atau media lain yaitu Digital Library Perpustakaan Universitas Islam Negeri (UIN) Syarif Hidayatullah Jakarta untuk kepentingan akademik sebatas sesuai dengan Undang – Undang Hak Cipta.

Demikian pernyataan persetujuan publikasi karya ilmiah ini saya buat dengan sebenarnya.

Dibuat di : Jakarta

Pada Tanggal : 10 Desember 2012

Yang menyatakan,

(11)

x

HALAMAN JUDUL ... i

HALAMAN PERNYATAAN ORISINALITAS ... ii

HALAMAN PERSETUJUAN PEMBIMBING ... iii

HALAMAN PENGESAHAN ... iv

ABSTRAK ... v

ABSTRACT ... vi

KATA PENGANTAR ... vii

HALAMAN PERSETUJUAN PUBLIKASI KARYA ILMIAH ... ix

DAFTAR ISI ... x

1.4 Tujuan Penelitian ... 4

1.5 Manfaat Penelitian ... 4

BAB II TINJAUAN PUSTAKA ... 6

2.1 Kurma ... 6

2.1.1 Taksonomi Kurma ... 6

2.1.2 Tahap Pertumbuhan dan Perkembangan Buah Kurma ... 8

2.1.3 Kandungan dan Manfaat Kurma ... 9

2.2 Mencit ... 12

2.3 Sistem Imun ... 13

2.3.1 Imunitas ... 13

2.3.2 Antigen dan Antibodi ... 14

2.3.3 Leukosit ... 16

2.3.4 Monosit ... 18

2.3.5 Limfosit ... 18

2.3.6 Imunisasi ... 19

2.3.7 Metode Hemaglutinasi Untuk Deteksi Antibodi pada Serum ... 20

BAB III KERANGKA KONSEP ... 22

BAB IV METODOLOGI PENELITIAN ... 23

4.1 Tempat dan Waktu Penelitian ... 23

4.2 Subjek Penelitian ... 23

4.2.1 Populasi ... 23

(12)

xi

4.4 Alur Penelitian ... 25

4.5 Prosedur Kerja ... 26

4.5.1 Persiapan Hewan Coba ... 26

4.5.2 Dosis dan Perlakukan Uji Respon Imun Mencit ... 26

4.5.3 Perhitungan Dosis ... 27

4.5.4 Pembuatan dan Pemberian Sampel Kurma Tahnik ... 31

4.5.5 Pengambilan Darah Mencit ... 31

4.5.6 Perhitungan Jumlah Total Leukosit ... 31

4.5.7 Perhitungan Persentase Monosit dan Limfosit Darah ... 32

4.5.8 Pengukuran Titer Antibodi ... 33

4.5.9 Uji Tantang ... 35

4.6 Analisa Data ... 36

BAB V HASIL DAN PEMBAHASAN ... 38

5.1 Hasil ... 38

5.1.1 Hasil dan Analisa Data Jumlah Total Leukosit Mencit... 38

5.1.2 Hasil dan Analisa Data Persentase Monosit Mencit ... 42

5.1.3 Hasil dan Analisa Data Persentase Limfosit Mencit ... 46

5.1.4 Hasil dan Analisa Data Titer Antibodi Mencit ... 51

5.1.5 Hasil dan Analisa Data Persentase Survival Rate Mencit .... 52

5.2 Pembahasan ... 56

5.2.1 Pembuatan dan Pemberian Kurma Tahnik ... 56

5.2.2 Efektivitas Pemberian Kurma Tahnik Terhadap Jumlah Total Leukosit Mencit ... 58

5.2.3 Efektivitas Pemberian Kurma Tahnik Terhadap Persentase Monosit Mencit ... 61

5.2.4 Efektivitas Pemberian Kurma Tahnik Terhadap Persentase Limfosit Mencit ... 63

5.2.5 Efektivitas Pemberian Kurma Tahnik Terhadap Titer Antibodi Mencit ... 65

5.2.6 Efektivitas Pemberian Kurma Tahnik Terhadap Persentase Survival Rate Mencit yang Diinfeksi Bakteri Salmonella thypi ... 66

BAB VI KESIMPULAN DAN SARAN ... 68

6.1 Kesimpulan ... 68

6.2 Saran ... 69

(13)

xii

2.1 Buah Kurma ... 6

2.2 Beberapa jenis buah kurma yang terkenal ... 7

4.1 Kurma Ajwa yang digunakan dalam penelitian ... 24

4.2 Alur Penelitian ... 25

5.1 Grafik rata- rata jumlah total leukosit selama periode perlakuan .. 39

5.2 Grafik rata- rata persentase monosit selama periode perlakuan ... 43

5.3 Grafik rata- rata persentase limfosit selama periode perlakuan ... 47

5.4 Grafik rata – rata titer antibodi mencit setelah dua minggu periode perlakuan ... 51

5.5 Grafik % Survival Rate Mencit Selama Periode Infeksi Salmonella typhi ... 53

5.6 Kurva Kaplan – Meier persentase survival rate mencit selama periode infeksi Salmonella typhi ... 54

7.2 Grafik perubahan jumlah total leukosit pada periode perlakuan selama satu hari ... 80

7.3 Grafik perubahan jumlah total leukosit pada periode perlakuan selama satu minggu ... 81

7.4 Grafik perubahan jumlah total leukosit pada periode perlakuan selama dua minggu ... 82

7.6 Grafik perubahan persentase monosit pada periode perlakuan selama satu hari ... 87

7.10 Grafik perubahan persentase limfosit pada periode perlakuan selama satu hari ... 95

7.11 Grafik perubahan persentase limfosit pada periode perlakuan selama satu minggu ... 97

7.12 Grafik perubahan persentase limfosit pada periode perlakuan selama dua minggu ... 98

7.13 Grafik Rata – Rata Titer Antibodi Mencit Setelah Dua Minggu Periode Perlakuan ... 100

7.14 Kurva Kaplan – Meier Persentase Survival Rate Mencit Selama Periode Infeksi Salmonella typhi ... 103

7.15 Haemaglutination Antibody (HA) Kelompok I ... 104

7.16 Haemaglutination Antibody (HA) Kelompok II ... 104

7.17 Haemaglutination Antibody (HA) Kelompok III ... 105

(14)

xiii

2.1 Kandungan senyawa (gr /100 gr dry flesh) dari 11 jenis buah

kurma yang berbeda ... 9

2.2 Kandungan vitamin buah kurma ... 9

2.3 Kandungan mineral kurma ... 10

2.4 Kandungan asam amino (mg/100 gr dry) kurma ... 10

2.5 Perbedaan secara umum sistem imun non-spesifik & sistem imun spesifik ... 14

2.6 Kelas dan sifat imunoglobulin ... 16

4.1 Dosis dan perlakukan uji respon imun mencit ... 26

4.2 Indeks rata – rata berat badan & tinggi badan balita sesuai dengan usianya ... 28

5.1 Hasil hitung total leukosit mencit (sel/µL) ... 38

5.2 Rata - rata jumlah total leukosit mencit (sel/µ l) selama periode perlakuan ... 38

5.3 Hasil analisa data jumlah total leukosit mencit dengan metode uji two-way repeated measure ANOVA ... 39

5.4 Hasil analisa data jumlah total leukosit mencit dengan metode uji one – way ANOVA yang dilanjutkan uji BNT pada masing – masing periode perlakuan ... 40

5.5 Hasil hitung persentase monosit mencit (%) ... 42

5.6 Rata - rata persentase monosit mencit selama periode perlakuan .. 42

5.7 Hasil analisa data persentase monosit mencit dengan metode uji two-way repeated measure ANOVA ... 43

5.8 Hasil analisa data persentase monosit mencit dengan metode uji one – way ANOVA yang dilanjutkan uji BNT pada masing – masing periode perlakuan ... 44

5.9 Hasil hitung persentase limfosit mencit (%) ... 46

5.10 Rata - rata persentase limfosit mencit selama periode perlakuan .. 47

5.11 Hasil analisa data persentase limfosit mencit dengan metode uji two-way repeated measure ANOVA ... 47

5.12 Hasil analisa data persentase limfosit mencit dengan metode uji one – way ANOVA yang dilanjutkan uji BNT pada masing – masing periode perlakuan ... 48

5.13 Titer antibodi mencit setelah dua minggu periode perlakuan ... 51

5.14 Persentase survival rate mencit selama satu minggu periode infeksi bakteri Salmonella typhi ... 52

5.15 Nilai rata – rata (mean) dan nilai tengah (median) survival time mencit ... 53

5.16 Level signifikansi persentase survival rate mencit antar kelompok perlakuan ... 54

(15)

xiv

1. Hasil analisa data jumlah total leukosit mencit dengan metode uji two-way repeated measure ANOVA ... 76 2. Hasil analisa data jumlah total leukosit mencit dengan metode uji one –

way ANOVA yang dilanjutkan uji BNT pada masing – masing periode perlakuan ... 78 3. Hasil analisa data persentase monosit mencit dengan metode uji two-way

repeated measure ANOVA ... 83 4. Hasil analisa data persentase monosit mencit dengan metode uji one –

way ANOVA yang dilanjutkan uji BNT pada masing – masing periode perlakuan ... 85 5. Hasil analisa data persentase limfosit mencit dengan metode uji two-way

repeated measure ANOVA ... 91 6. Hasil analisa data persentase limfosit mencit dengan metode uji one –

way ANOVA yang dilanjutkan uji BNT pada masing – masing periode perlakuan ... 93 7. Hasil analisis titer antibodi mencit dengan metode one – way ANOVA,

dilanjutkan dengan post hoc test (tukey test dan bonferroni test) .. 99 8. Hasil analisis persentase survival rate dengan metode kaplan –

meier ... 101 9. Hasil pengukuran titer antibodi dengan metode haemaglutination

antibody (HA) setelah dua minggu periode perlakuan ... 104

(16)

1

BAB I

PENDAHULUAN

1.1 Latar Belakang

Konsep kesehatan Thibun Nabawi telah dikenal dalam Islam sebagai metode pengobatan Rasulullah SAW yang senantiasa berjalan atas dasar wahyu. Rasulullah SAW telah mengajarkan kepada umat Islam sebuah tata cara pemeliharaan kesehatan sejak dari lahir yang bersumber dari Allah SWT, Dzat Yang Maha Memberi Kesehatan. Salah satu cara yang diajarkan Rasulullah adalah Tahnik. Tahnik merupakan suatu cara pemeliharaan kesehatan secara fisik yang diperkenalkan Rasulullah SAW dengan memberikan kurma yang telah dikunyah atau dihaluskan pada langit – langit mulut bayi sambil mendoakannya. Beberapa hadits yang berkaitan dengan tahnik :

 Diriwayatkan oleh al-Bukhari dan Muslim dari hadits Abu Burdah dari Abu Musa, dia berkata :

-

ل ص

ه

ل ع

مل س

-

م

“Pernah dikaruniakan kepadaku seorang anak laki-laki, lalu aku membawanya ke hadapan Nabi Shallallahu ‘alaihi wa sallam, maka

beliau memberinya nama Ibrahim dan mentahniknya dengan sebuah

kurma.” (HR. Bukhari Muslim)

(17)

Dari Asma binti Abi Bakar Ash-Shiddiq ketika ia sedang mengandung Abdullah bin Az-Zubair di Makkah, ia berkata, “Aku keluar dalam keadaan hamil menuju kota Madinah. Dalam perjalanan aku singggah

di Quba dan di sana aku melahirkan. Kemudian aku mendatangi

Rasulullah Shallallahu ‘alaihi wa sallam dan meletakkan anakku di

pangkuan beliau. Beliau meminta kurma lalu mengunyahnya dan

meludahkannya ke mulut bayi itu, maka itulah makanan yang pertama

kali masuk ke kerongkongannya (si bayi) melalui Rasulullah

Shallallahu ‘alaihi wa sallam. Setelah itu beliau mentahniknya dan

mendo’akan barakah baginya. Lalu Allah memberikan barakah

kepadanya (bayi tersebut).” (HR. Bukhari Muslim)

Sesungguhnya perbuatan Rasulullah SAW mentahnik bayi yang baru lahir memiliki hikmah yang agung. Enzim pencernaan yang terdapat pada kurma tahnik akan membantu pengubahan kandungan senyawa – senyawa dalam kurma sehingga dapat lebih mudah dicerna dan diabsorbsi oleh tubuh bayi yang sistem pencernaannya belum terbentuk dengan sempurna (Mustofa dan Prabandari, 2010).

(18)

etanol buah kurma yang diberikan selama 7 hari kepada mencit juga dapat menstimulasi sistem imun humoral mencit tersebut secara signifikan dilihat dari hasil perhitungan titer Haemagglutinating Antibody (HA) dan

plaque-forming cell (PFC) yang digunakan sebagai parameter (Puri et al., 2000).

Kurma juga diketahui memiliki berbagai khasiat lain diantaranya adalah dapat menurunkan kadar gula pada penderita hiperglikemia karena memiliki kandungan flavonoid yang poten (Abo-El-Soaud et al., 2004), efek antimikroba terhadap gram positif maupun gram negatif (Perveen et al., 2012), aktivitas anti-inflamasi & anti-proliferatif (Elberry et al.,

2011), aktivitas antioksidan (Khanavi et al., 2009), aktivitas hepatoprotektor (Abdu, 2011), dan memiliki efek antifungi terhadap jamur patogen (Bokhari dan Kahkashan, 2012).

(19)

1.2 Perumusan Masalah

1) Apakah pemberian kurma tahnik mampu meningkatkan jumlah total leukosit, persentase jumlah monosit dan limfosit darah serta titer antibodi mencit.

2) Waktu pemberian kurma tahnik yang dapat memberikan peningkatan respon imun terbaik berdasarkan parameter - parameter tersebut pada mencit.

1.3 Hipotesis

Pemberian kurma tahnik mampu meningkatkan jumlah total leukosit, persentase jumlah monosit dan limfosit darah serta titer antibodi mencit.

1.4 Tujuan Penelitian

Mengetahui aktivitas imunostimulan kurma tahnik terhadap peningkatan titer antibodi, jumlah total leukosit, persentase jumlah monosit dan limfosit darah mencit serta mengetahui efektifitas waktu pemberian kurma tahnik yang dapat memberikan peningkatan respon imun terbaik berdasarkan parameter - parameter tersebut pada mencit.

1.5 Manfaat Penelitian

(20)

(21)

6

BAB II

TINJAUAN PUSTAKA

2.1 Kurma

2.1.1 Taksonomi Kurma

Kurma (Phoenix dactylifera) atau dalam bahasa Arab biasa disebut

tamar adalah buah manis dengan kandungan gula lebih dari 50% yang merupakan kebutuhan utama dan menjadi salah satu sektor ekonomi penting di Timur Tengah (Franz Augstburger et al., 2002). Kurma merupakan salah satu makanan tertua di dunia selama lebih dari 6000 tahun dan semua bagian dari kurma diketahui bermanfaat tidak hanya secara ekonomi, tetapi juga untuk kesehatan (mengatasi berbagai penyakit) dan mengatasi kelaparan karena kurma memiliki kandungan karbohidrat, mineral, serat, vitamin, asam lemak, asam amino, dan protein yang tinggi (Al – Shahib dan Marshall, 2003). Berikut ini adalah klasifikasi dari kurma (Alebidi, 2008) :

Kingdom : Plantae

Division : Magnoliophyta Class : Liliopsida Order : Arecales Family : Arecaceae Genus : Phoenix Species : P. dactylifera

Binomial Name : Phoenix dactylifera L.

(22)

Pohon kurma dapat mencapai tinggi 15 – 25 meter, batang pohonnya terbuat dari serat selulosa yang kuat dan dapat dimanfaatkan untuk membuat kayu lapis (Al – Shahib dan Marshall, 2003). Saat ini, kurma dibudidayakan di banyak negara di dunia seperti Amerika Serikat (California, Arizona, Texas), Meksiko, Brazil, Argentina, Afrika Selatan, Australia, Namibia, namun untuk produksi terbesar tetap berada di daerah Arab dan timur tengah (Franz Augstburger et al., 2002). Ada lebih dari 2000 varietas kurma segar di dunia dengan masa panen setiap 8 bulan (Al

– Shahib dan Marshall, 2003).

(23)

2.1.2 Tahap Pertumbuhan dan Perkembangan Buah Kurma

Perkembangan buah kurma terdiri dari 4 tahap (Al – Shahib dan Marshall, 2003). Sebelum tahap pertama dimulai, pada 4 – 5 minggu

pertama buah kurma disebut “altalaa” dimana buah kurma berwarna hijau.

 Tahap pertama : stadium Kimri

Ditandai dengan terjadinya 2 fase. Fase pertama, buah kurma mengalami peningkatan ukuran dan berat secara bersamaan, serta meningkatnya kandungan gula, asam, dan kelembaban. Fase kedua, ditandai dengan mulai berkurangnya peningkatan ukuran dan berat buah, berkurangnya tingkat akumulasi kadar gula, sedikit berkurangnya keasaman, dan kadar kelembaban yang lebih tinggi dibandingkan fase pertama. Pada tahap Kimri, rata – rata panjang buah adalah 27,5 mm, diameter 17,8 mm, berat 5,8 gr, serta mengandung 5,6% protein, 0,5% lemak, dan 3,7% abu (Al – Shahib dan Marshall, 2003).

 Tahap kedua : stadium Khalal

Ditandai dengan berubahnya warna dari hijau menjadi antara kuning atau merah tergantung jenis kurma. Rata – rata panjang buah bertambah menjadi 32,5 mm dengan diameter juga bertambah menjadi 21 mm. Persentase protein, lemak, dan abu berkurang menjadi 2,7%, 0,3%, dan 2,8%, sementara berat rata – rata bertambah menjadi 8,7% (Al – Shahib dan Marshall, 2003).

 Tahap ketiga : stadium Rutab

(24)

 Tahap keempat : stadium Tamr

2.1.3 Kandungan dan Manfaat Kurma

Buah kurma memiliki kadar yang tinggi dari karbohidrat (total 44 – 88%), lemak (0,2 – 0,5%), 15 jenis garam & mineral, vitamin, protein (2,3

– 5,6%), serat (6,4 – 11,5%) (Al – Shahib dan Marshall, 2003).

Tabel 2.1 Kandungan Senyawa (gr /100 gr Kurma Kering) dari 11 Jenis Buah Kurma yang Berbeda (Borchani et al., 2010)

Varietas

Tabel 2.2 Kandungan Vitamin Kurma (Al – Shahib dan Marshall, 2003) Vitamin Kandungan (mg/100 gr kurma kering)

(25)

Tabel 2.3 Kandungan Mineral Kurma (Al – Shahib dan Marshall, 2003) Mineral Kandungan (mg/100 gr kurma kering)

Boron 3,3 – 5,6

Tabel 2.4 Kandungan Asam Amino Kurma (Al – Shahib dan Marshall, 2003)

Asam Amino Kandungan (mg/100 gr kurma kering)

Alanin 8 – 342

Leusin dan Isoleusin 254

Lisin 3 – 282

Kurma merupakan salah satu tanaman yang disebutkan dalam kitab

suci Al Qur’an dengan total penyebutan sebanyak 15 kali, diantaranya

(26)

Shuaraa ayat 148, Ar Rahman ayat 11 & 68. Sementara itu, terdapat 4 buah hadist Rasullullah SAW yang menyebutkan kurma memiliki manfaat dalam bidang kesehatan.

Kurma merupakan sumber energi yang sangat baik karena memiliki kandungan gula yang tinggi, maka tidak heran jika di daerah Arab dan Timur Tengah kurma menjadi kebutuhan konsumsi sehari – hari yang tidak pernah dilewatkan. Kandungan gula yang tinggi pada kurma mungkin menjadi pantangan bagi para penderita hiperglikemia, tetapi ternyata, dari hasil sebuah penelitian, kurma memilki khasiat untuk menurunkan kadar gula pada penderita hiperglikemia karena memiliki kandungan flavonoid yang poten (Abo-El-Soaud et al., 2004). Dalam penelitian yang lain, kurma juga diketahui memiliki efek antimikroba terhadap gram positif maupun gram negatif (Perveen et al., 2012), aktivitas anti-inflamasi & anti-proliferatif (Elberry et al., 2011), aktivitas antioksidan (Khanavi et al., 2009), aktivitas hepatoprotektor (Abdu, 2011), dan memiliki efek antifungi terhadap jamur patogen (Bokhari dan Kahkashan, 2012).

(27)

Ekstrak etanol buah kurma yang diberikan selama 7 hari kepada mencit juga dapat menstimulasi sistem imun humoral mencit tersebut secara signifikan dilihat dari hasil perhitungan titer Haemagglutinating Antibody

(HA) dan plaque-forming cell (PFC) yang digunakan sebagai parameter (Puri et al., 2000).

2.2 Mencit (Mus musculus)

(28)

2.3 Sistem Imun

2.3.1 Imunitas

Secara historis, kata immunity berasal dari kata latin immunitas

yang artinya perlindungan dari tuntutan hukum yang diberikan kepada senator romawi selama masa jabatan mereka. Immunity / kekebalan berarti perlindungan dari penyakit, khususnya penyakit menular. Sel – sel dan molekul – molekul yang bertanggung jawab terhadap imunitas ini disebut dengan sistem imun, sementara bagaimana sel dan molekul tersebut bekerja sama secara kolektif dalam merespon masuknya zat – zat asing disebut dengan respon imun. Imunologi adalah ilmu yang mempelajari respon imun dalam arti luas serta peristiwa seluler dan molekuler yang terjadi setelah masuknya mikroba dan zat asing lainnya yang menimbulkan respon imun tersebut.

Sistem imun dapat dibagi menjadi sistem imun

(29)

Tabel 2.5 Perbedaan secara umum sistem imun non-spesifik & sistem imun spesifik (Abbas et al., 2012)

Innate (non-spesifik) Adaptive (spesifik)

Spesifitas

Molekul yang terkait dengan mikroba tertentu dan molekul yang dihasilkan dari sel inang yang rusak

Mikrobial dan non-mikrobial antigen

Diversitas

(keragaman) Jumlah reseptor terbatas

Reseptor sangat bervariasi & jumlahnya banyak, terbentuk dari rekombinasi genetik dari gen reseptor

Memori Tidak ada

- Limfosit pada epitel

- Antibodi yang disekresikan pada permukaan epitel

Protein darah Komplemen dan yang lainnya Antibodi

Sel Fagosit (makrofag, neutrofil), sel

NK Limfosit

2.3.2 Antigen dan Antibodi

(30)

mampu menstimulasi respon imun ini disebut dengan immunogen (Abbas

et al., 2012).

Antibodi adalah protein tersirkulasi yang diproduksi oleh sel B di sumsum tulang belakang sebagai respon terhadap rangsangan imunogen (Abbas et al., 2012 ; Baratawidjaja dan Iris Renggaris, 2009). Antibodi mampu mengenali antigen yang berasal hampir dari setiap molekul biologis, termasuk metabolit sekunder sederhana, gula, lipid, autacoid, dan hormon, serta makromolekul seperti karbohidrat, fosfolipid, asam nukleat, dan protein. Hal ini berbanding terbalik dengan sel T yang lebih utama mengenali peptida (Abbas et al., 2012).

Baratawidjaja dan Iris Renggaris (2009) menjelaskan bahwa ketika darah dibiarkan membeku maka akan meninggalkan serum yang mengandung berbagai bahan larut tanpa sel. Bahan tersebut mengandung molekul antibodi yang disebut globulin yang sekarang dikenal sebagai

(31)

Tabel 2.6 Kelas dan sifat imunoglobulin (Abbas et al., 2012 ; Baratawidjaja

IgD Umumnya ditemukan pada

permukaan limfosit - Reseptor sel B

(32)

rata-rata 4.500 – 11.000 setiap mikroliter darah. Dilihat dengan mikroskop cahaya, sel darah putih mempunyai granula spesifik (granulosit) yang dalam keadaan hidup berupa tetesan setengah cair, mempunyai bentuk inti yang bervariasi, dan sitoplasmanya homogen (Abbas et al., 2012 ; Effendi, 2003).

Leukosit terbagi atas dua kelompok, yaitu leukosit granulosit polimorfonukleus (sel yang mengandung granula dan mempunyai banyak bentuk nukleus) dan agranulosit mononukleus (sel tanpa granula dan satu nukleus). Jenis leukosit granulosit yaitu neutrofil, basofil dan eosinofil, sedangkan jenis leukosit agranulosit yaitu limfosit dan monosit (Sherwood, 2001). Masing – masing jenis leukosit tersebut memiliki fungsi yang beragam terkait dengan imunitas non-spesifik maupun imunitas spesifik sehingga membuat leukosit memiliki peranan yang sangat penting bagi pertahanan tubuh terhadap antigen dan infeksi.

Jumlah leukosit yang terlalu tinggi dalam darah disebut dengan

leukocytosis, sedangkan jika jumlahnya terlalu rendah disebut dengan

(33)

2.3.4 Monosit

Monosit secara klasik didefinisikan sebagai sel sirkulasi darah yang membentuk sekitar 10% dari leukosit perifer pada manusia dan sekitar 4% dari leukosit pada tikus. Monosit darah mulai berkembang di sumsum tulang, kemudian dilepaskan ke sirkulasi perifer sebagai sel utuh. Waktu paruh monosit di sirkulasi perifer diperkirakan sekitar tiga hari pada manusia dan satu hari pada tikus (Yona dan Jung, 2009). Abbas et al.

(2012) menyatakan bahwa jumlah monosit dalam darah orang dewasa adalah 0 – 800 per µL darah, dan monosit yang berada dalam sirkulasi merupakan sel yang belum lengkap berdiferensiasi, monosit ini akan masuk ke dalam jaringan (biasanya karena terjadi pajanan antigen), kemudian akan mengalami pematangan dan menjadi makrofag sehingga monosit sering disebut sebagai prekursor makrofag.

Jumlah monosit yang lebih tinggi dari normal disebut dengan

monocytosis. Monositosis dapat terjadi karena berbagai kondisi seperti inflamasi, stres, atau penyakit autoimun. Jumlah monosit yang rendah disebut monocytopenia. Monositopenia merupakan suatu bentuk dari leukopenia (Vieira, 2011).

2.3.5 Limfosit

(34)

Renggaris, 2009). Abbas et al. (2012) menyatakan bahwa jumlah total limfosit pada orang dewasa yang sehat adalah sekitar 5 × 1011 (2% ada dalam darah, 10% di sumsum tulang, 15% dalam jaringan limfoid mukosa saluran pencernaan dan pernafasan, dan 65% di organ limfoid terutama kelenjar getah bening dan limpa). Sel limfosit merupakan sel yang berperan utama dalam sistem imun spesifik, sel T pada imunitas seluler, dan sel B pada imunitas humoral.

Tingginya jumlah limfosit dari nilai normal biasanya dapat menjadi indikasi seseorang terkena infeksi antigen yang patogen, sedangkan jumlah limfosit yang lebih rendah dari nilai normal (lymphocytopenia) dapat disebabkan karena beberapa hal seperti stres, malnutrisi, atau invasi virus seperti HIV, lymphocytopenia dapat menyebabkan kemampuan tubuh untuk mengenali dan menyerang antigen patogen menjadi menurun (Vieira, 2011).

2.3.6 lmunisasi

(35)

infeksi kuman yang dapat merangsang respon imun dan sel memori. Imuniasi buatan terdiri dari imunisasi buatan aktif dan imunisasi buatan pasif. Imunisasi buatan aktif berarti mendapatkan kekebalan dengan cara diberikan vaksin hidup / dilemahkan / dimatikan, sedangkan imunisasi buatan pasif terjadi bila seseorang menerima antibodi / produk sel dari orang lain yang telah mendapatkan imunisasi aktif (Baratawidjaja dan Iris Renggaris, 2009).

Imunisasi bertujuan untuk memberikan imunitas yang efektif dengan menciptakan ambang mekanisme efektor imun yang sesuai dan adekuat, beserta populasi sel memori yang dapat berkembang cepat pada kontak baru dengan antigen dan memberikan proteksi terhadap infeksi (Baratawidjaja dan Iris Renggaris, 2009).

2.3.7 Metode Hemaglutinasi Untuk Deteksi Antibodi pada Serum

Haemagglutination Antibody (HA) merupakan suatu metode yang digunakan untuk menemukan antibodi atas dasar aglutinasi sel darah merah (Baratawidjaja dan Iris Renggaris, 2009). Sebagai antigen dalam metode HA pada mencit dapat digunakan sel darah merah domba (SDMD) karena mudah diperoleh dan dapat diukur, bersifat cukup stabil, lisis dari SDMD dapat dilihat, dan dapat dibuat dengan mudah (Achyat et al., 2007).

(36)

(37)

22 virus / bakteri yang terdapat

dalam cairan tubuh

Antigen berupa virus / bakteri dieliminasi dari dalam tubuh,

sel memori terbentuk

Tidak terjadi infeksi berlanjut

(38)

23

BAB IV

METODOLOGI PENELITIAN

4.1 Tempat dan Waktu Penelitian

Penelitian ini dilaksanakan di Laboratorium Animal House FKIK UIN Syarif Hidayatullah Jakarta, laboratorium Bioavaibility & Bioequivalency (PBB) UIN Syarif Hidayatullah Jakarta, laboratorium

Drug Research & Development (PDR) UIN Syarif Hidayatullah Jakarta, dan laboratorium Microbiology & Medicinal Chemistry (MBC) UIN Syarif Hidayatullah Jakarta pada bulan Juli sampai September 2012.

4.2 Subjek Penelitian

4.2.1 Populasi

Hewan uji dalam penelitian ini adalah mencit (Mus musculus) galur DDY jenis kelamin jantan dengan berat rata – rata antara 20 – 25 gram yang terbagi dalam 3 kelompok, yaitu kelompok kontrol negatif, kelompok kontrol positif, dan kelompok perlakuan. Masing – masing kelompok terdiri dari 6 mencit.

4.2.2 Sampel

(39)

dengan kualitas terbaik yang hanya dapat tumbuh di kota madinah, dan merupakan kurma kesukaan Rasulullah SAW.

Gambar 4.1 Kurma Ajwa yang digunakan dalam penelitian (Dokumentasi Pribadi,

26-06-2012)

4.3 Alat dan Bahan

4.3.1 Alat

Kandang & tempat pakan mencit, timbangan digital (gram dan miligram), dispenser & spuit, beaker glass, gelas ukur, ose, cotton bud

modifikasi, gunting bedah, pipet leukosit, microplate 96 wells, eppendorf tube, eppendorf tube 13 mL, vacutainer tube EDTA, Incubator Bath,

(40)

Hari

Mencit galur DDY jenis kelamin jantan dengan berat rata – rata 20

– 25 gr berjumlah 18 ekor (Institut Pertanian Bogor), pakan mencit,

akuades, kurma ajwa (Thamra), vaksin typhoid (GlaxoSmithKline), bakteri

Salmonella typhi (Mikrobiologi UI), K2HPO4, KH2PO4, NaCl, darah domba (Mikrobiologi UI), asam asetat glasial, larutan gentian violet,

pewarna giemza, buffer fosfat pH 6,8 – 7,2.

Titer antibodi Diinfeksi dengan Salmonella typhi

% Survival rate

(41)

4.5 Prosedur Kerja Masing – masing kandang berisi 6 mencit dan diberi label kelompok 1, 2, dan 3 pada masing – masing kandang. Di dalam kandang, mencit diberi makan berupa pellet secara terkontrol dan minum aquadest yang diberikan secara ad libitum. Setiap hari mencit ditimbang untuk mengontrol berat badan mencit tetap pada range 20 – 25 gr. Kandang serta tempat makan dan minum dibersihkan, dan alas sekam diganti sedikitnya dua kali seminggu (Smith, 1988).

4.5.2 Dosis dan Perlakukan Uji Respon Imun Mencit

Tabel 4.1 Dosis dan Perlakukan Uji Respon Imun Mencit

(42)

4.5.3 Perhitungan Dosis

a) Dosis kurma tahnik

Jumlah sampel kurma tahnik yang diberikan kepada kelompok perlakuan didasarkan kepada hadits Rasulullah SAW. Berdasarkan hadits tersebut, dosis kurma untuk tahnik seorang anak yang baru lahir / bayi adalah sebanyak 1 butir kurma (berat rata – rata untuk 1 butir kurma ajwa tanpa biji adalah 7 gr). Dosis tahnik untuk bayi berdasarkan hadits Rasulullah SAW tersebut akan dikonversikan ke dalam dosis mencit menggunakan rumus Crawford – Terry Rourke (perbandingan luas permukaan tubuh) sebagai berikut :

Db =

x Dm

Keterangan :

Db = dosis bayi (gr) Dm = dosis mencit (gr)

LPTb = luas permukaan tubuh bayi (m2)

LPTm = luas permukaan tubuh mencit 20 gr (m2)

(43)

Tabel 4.2 Indeks rata – rata berat badan & tinggi badan balita sesuai dengan usianya (Direktorat Gizi, Departemen Kesehatan Republik

Indonesia)

Umur Berat (kg) Tinggi (cm)

Standar 80% Standar Standar 80% Standar

(44)

dengan Moesteller Formula untuk mendapatkan nilai luas permukaan tubuh bayi (LPTb) sebagai berikut :

LPTb =

√

=

√

= 0,218 m2

Luas permukaan tubuh bayi baru lahir (LPTb) yang didapatkan adalah 0,218 m2. Luas permukaan tubuh mencit yang memiliki berat 20 gr (LPTm) adalah 0,007 m2 (Reagan-Shaw et al., 2007).

Db =

x Dm

7 = x Dm 7 = 31,14 x Dm Dm = 0,225 gr

Keterangan :

Db = dosis bayi (gr) Dm = dosis mencit (gr)

LPTb = luas permukaan tubuh bayi (m2)

LPTm = luas permukaan tubuh mencit 20 gr (m2)

(45)

b) Dosis Vaksin Typhoid

Dosis vaksin typhoid adalah 0,5 mL bagi anak umur dua tahun ke atas dan dewasa. Konversi dosis vaksin dari orang dewasa ke mencit dilakukan dengan menggunakan rumus Crawford – Terry Rourke

(perbandingan luas permukaan tubuh) dengan terlebih dahulu mengetahui luas permukaan tubuh orang dewasa (LPTd) dan luas permukaan tubuh mencit (LPTm).

Luas permukaan tubuh orang dewasa (LPTd) dengan berat rata – rata 60 kg adalah 1,6 m2 dan luas permukaan tubuh mencit yang memiliki berat 20 gr (LPTm) adalah 0,007 m2 (Reagan-Shaw et al., 2007). Konversi dosis adalah sebagai berikut :

Dd =

x Dm

0,5 =

x Dm 0,5 = 228,57 x Dm Dm = 0,00219 mL

Keterangan :

Dd = dosis orang dewasa (mL) Dm = dosis mencit (mL)

LPTd = luas permukaan tubuh orang dewasa (m2) LPTm = luas permukaan tubuh mencit 20 gr (m2)

(46)

4.5.4 Pembuatan dan Pemberian Sampel Kurma Tahnik

Pembuatan sampel kurma tahnik didasarkan pada hadits Rasulullah SAW. Pertama – tama sebutir kurma tanpa biji dikunyah dalam mulut sampai halus, kemudian hasil kunyahan dimuntahkan ke dalam beaker glass dan ditimbang sesuai dosis. Kurma tahnik dioleskan perlahan – lahan ke langit – langit mulut mencit menggunakan cotton bud hasil modifikasi yang ujungnya dilapisi plastik tipis yang tidak menyerap cairan.

4.5.5 Pengambilan Darah Mencit

Pengambilan darah mencit dilakukan melalui ekor dengan cara memotong ujung ekor mencit sepanjang 1 cm. Darah yang keluar segera dihisap menggunakan mikropipet dan ditampung dalam vacutainer tube

yang telah mengandung EDTA hingga terkumpul sebanyak minimal 0,1 mL. Pengambilan darah selanjutnya dilakukan dengan cara memotong bekas ekor yang telah terpotong sebelumnya sepanjang 2 – 3 mm untuk mencegah trauma pada mencit (Hoff, 2000). Darah dalam vacutainer tube

digunakan untuk perhitungan jumlah total leukosit serta persentase monosit dan limfosit darah.

4.5.6 Perhitungan Jumlah Total Leukosit

Leukosit dihitung menggunakan alat hemositometer dengan

pengenceran 1:20. Larutan pengencer berupa larutan Turk (1 mL asam

asetat glasial, 1 mL larutan gentian violet, add 100 mL akuades) yang

(47)

memperoleh pengenceran 1:20, darah dihisap ke dalam pipet leukosit

sampai batas 0,5 lalu diisi dengan larutan pengencer sampai tanda 11. Dua

sampai tiga tetes pertama larutan dibuang, kemudian satu tetes diteteskan

pada kamar hitung dan dibiarkan menetap selama 3 menit. Sediaan

kemudian diperiksa dengan mikroskop perbesaran 40x. Penghitungan dilakukan terhadap leukosit yang terdapat dalam persegi 1,2,3,4 atau kamar hitung hemocytometer. Sel yang menempel di garis pemisah sebelah kiri dan di garis atas kotak persegi ikut dihitung, sel yang

menempel di kedua sisi kotak lain tidak ikut dihitung (Anandika, 2011 ;

Triana dan Nurhidayat, 2006 ; Kulisic et al., 2006). Jumlah leukosit

dihitung per mm3 dengan rumus sebagai berikut :

Jumlah total leukosit per mm3 =

=

= 50 N

Keterangan :

N = Jumlah total leukosit dari 4 kamar hitung

4.5.7 Perhitungan Persentase Monosit dan Limfosit Darah

(48)

fosfat pH 6,8 – 7,2). Selanjutnya preparat dicuci dengan aquades dan dibiarkan mengering. Setelah kering preparat diperiksa dibawah mikroskop dengan perbesaran 100x dengan dibubuhi minyak emersi pada permukaan sediaan apus tersebut. Pertama – tama dihitung sampai 100 sel leukosit, kemudian dari 100 sel leukosit tadi dihitung jumlah monosit dan limfosit, lalu ditentukan persentase monosit dan limfosit dari total 100 leukosit tersebut dengan rumus sebagai berikut (Handajani dan Ruben, 2009) :

4.5.8 Pengukuran Titer Antibodi

a) Pembuatan Larutan PBS pH 7,2

K2HPO4 ditimbang sebanyak 9,35 gr, KH2PO4 sebanyak 3,45 gr, dan NaCl sebanyak 4,5 gr. Semua bahan dilarutkan dalam 1000 mL akuades, kemudian diukur pH larutan hingga mencapai 7,2 (Achyat et al., 2008).

b) Pembuatan Suspensi Sel Darah Merah Domba (SDMD)

(49)

disentrifugasi kembali dengan kecepatan 3000 rpm selama 10 menit, lalu supernatan dibuang. Pencucian dilakukan sebanyak 3 – 4 kali hingga diperoleh larutan yang benar – benar jernih pada supernatannya. Pada pencucian terakhir semua supernatan dibuang. SDMD yang terdapat dalam tabung merupakan suspensi SDMD 100% (Achyat et al., 2008).

c) Pengumpulan Serum dari Darah Mencit

Darah mencit diambil melalui ekor dengan cara memotong ujung ekor mencit. Darah yang keluar segera dihisap menggunakan mikropipet dan ditampung dalam tabung eppendorf kosong hingga terkumpul sebanyak minimal 0,1 mL. Darah yang terdapat dalam tabung eppendorf didiamkan pada suhu kamar selama 1 – 2 jam, kemudian disentrifugasi dengan kecepatan 5000 rpm selama 10 menit, supernatan (serum) lalu diisolasi menggunakan alat suntik steril (Sasmito et al., 2006). Serum disimpan pada suhu -200C sampai saat digunakan untuk perhitungan titer antibodi dengan metode hemaglutinasi.

d) Pengukuran Titer Antibodi dengan Metode Hemaglutinasi

(Achyat et al., 2007 ; Vaghasiya et al., 2010)

1) Melakukan dekomplementasi / inaktivasi serum pada suhu 560 C selama 30 menit untuk mencegah lisis sel darah merah domba (SDMD) yang dapat mengaburkan reaksi hemaglutinasi.

2) Mikroplate diberi label pada sumur – sumurnya dengan nomor 1

(50)

3) 50 µL PBS ditambahkan ke dalam sumur nomor 2 – 12, sedangkan sumur nomor satu dibiarkan kosong.

4) 100 µL serum yang telah diinaktivasi ditambahkan ke dalam sumur nomor satu.

5) 50 µL serum dari sumur nomor satu diambil, lalu ditambahkan ke dalam sumur nomor dua, kemudian dihomogenkan.

6) 50 µL serum dari sumur nomor dua diambil, lalu ditambahkan ke ke dalam sumur nomor tiga, kemudian dihomogenkan. Begitu seterusnya sampai sumur nomor 12 sehingga didapatkan 12 seri pengenceran dengan kelipatan dua, yaitu 1:1, 1:2, 1:4, 1:8, 1:16, 1:32, 1:64, 1:128, 1: 256, 1:512, 1:1024, dan 1:2048.

7) 1% SDMD sebanyak 50 µL ditambahkan ke dalam semua sumur nomor 1 – 12, kemudian dihomogenkan, lalu disimpan pada suhu kamar selama dua jam.

8) Nilai titer antibodi ditentukan dari pengenceran tertinggi yang masih memperlihatkan terjadinya hemaglutinasi. Angka hasil pembacaan titer yang berupa deret ukur dikonversikan ke dalam deret hitung dengan rumus sebagai berikut :

4.5.9 Uji Tantang

Pada hari ke-23 penelitian, semua mencit pada masing – masing kelompok diinfeksi dengan bakteri Salmonella typhi secara intraperitoneal dengan dosis 105 CFU/mL (Besung, 2011), kemudian dilakukan

2

(51)

pengamatan persentase survival rate pada masing – masing kelompok selama satu minggu setelah infeksi diberikan.

Pembuatan dan pemberian bakteri Salmonella typhi dengan dosis 105 CFU/mL adalah sebagai berikut : stok kultur bakteri Salmonella typhi

yang telah diremajakan sebelumnya diambil dengan menggunakan ose steril, kemudian disuspensikan ke dalam tabung yang berisi 10 mL larutan NaCl 0,9% sampai diperoleh suspensi dengan konsentrasi bakteri 109 CFU/mL yang memiliki nilai absorban 0,164. Pengukuran nilai absorban menggunakan spektrofotometer dengan panjang gelombang 600 nm, nilai

absorban 0,164 mempunyai kerapatan sel bakteri sekitar 109 CFU/mL

(Harni et al., 2007). Dari suspensi tersebut dipipet sebanyak 1 mL dan dimasukkan ke dalam labu takar 10 mL, kemudian ditambah NaCl 0,9% sampai garis tanda, konsentrasi suspensi bakteri menjadi 108 CFU/mL. Sebanyak 1 mL dari suspensi bakteri 108 CFU/mL diambil dengan spuit, kemudian ditambah NaCl 0,9% sampai garis tanda, konsentrasi suspensi bakteri menjadi 107 CFU/mL. Begitu seterusnya hingga didapatkan konsentrasi suspensi bakteri 105 CFU/mL.

Persentase survival rate mencit dinilai berdasarkan lamanya mencit bertahan hidup dalam masing – masing kelompok (Sawitri, 2008) selama 7 hari.

4.6 Analisa Data

(52)

perangkat lunak SPSS 20 for Windows dengan metode uji two-way repeated measure ANOVA untuk mengetahui apakah terdapat kelompok yang mengalami perubahan rata – rata hasil hitung jumlah total leukosit, persentase jumlah monosit dan limfosit darah secara signifikan dibandingkan kelompok lain selama periode perlakuan, kemudian dilanjutkan dengan metode One – Way ANOVA (diteruskan dengan uji BNT) terhadap data perubahan rata – rata hasil hitung tersebut pada periode perlakuan selama satu hari, satu minggu, dan dua minggu untuk mengetahui kelompok mana yang mengalami perubahan jumlah total leukosit pada masing – masing periode perlakuan.

Data titer hemaglutinasi antibodi mencit dianalisis dengan metode uji one – way ANOVA menggunakan perangkat lunak SPSS 20 for Windows untuk mengetahui apakah terdapat perbedaan yang signifikan / jelas antara rata – rata titer semua kelompok data, kemudian dilanjutkan dengan Post Hoc Test (Tukey test dan Bonferroni test) untuk mengetahui apakah terdapat perbedaan yang nyata / signifikan antara masing – masing kelompok data tersebut.

(53)

38

BAB V

HASIL DAN PEMBAHASAN

5.1 Hasil

5.1.1 Hasil dan Analisa Data Jumlah Total Leukosit Mencit

Tabel 5.1 Hasil Hitung Total Leukosit Mencit (sel/µL)

Kelompok Ulangan Hari Ke-0 Hari Ke-2 Hari Ke-8 Hari Ke-15

 Kelompok I : kontrol negatif (hanya diberi makan dan minum)

 Kelompok II : kontrol positif (pemberian vaksin typhoid)

 Kelompok III : pemberian kurma tahnik

(54)

Keterangan :

Gambar 5.1 Grafik Rata- Rata Jumlah Total Leukosit Selama Periode Perlakuan

Tabel 5.3 Hasil Analisa Data Jumlah Total Leukosit Mencit dengan Metode Uji Two-Way Repeated Measure ANOVA

Metode Uji Sum of Square

Tipe III df Mean Square f Signifikansi

Asumsi Bulat 64450538,19 6 10741756,37 6,472 0

Greenhouse-Geisser 64450538,19 3,717 17340704,84 6,472 0,001 Huynh-Feldt 64450538,19 4,786 13465388,62 6,472 0

Lower-bound 64450538,19 2 32225269,1 6,472 0,009

* Hasil Analisa Dapat Dilihat Selengkapnya Pada Lampiran 1

Hasil analisa data jumlah total leukosit mencit dengan two – way repeated measure ANOVA menunjukkan hasil yang signifikan pada semua metode tafsirannya (p < 0,05) yang berarti bahwa ada pengaruh

Hari Ke-0 Hari Ke-2 Hari Ke-8 Hari Ke-15

(55)

yang signifikan antara perlakuan (kelompok) dengan perubahan jumlah total leukosit yang terjadi selama periode perlakuan, atau secara sederhana dapat diartikan bahwa terdapat kelompok yang mengalami perubahan jumlah total leukosit secara signifikan selama periode perlakuan.

Hasil analisa dengan two – way repeated measure ANOVA hanya menunjukkan secara umum bahwa terdapat kelompok yang mengalami perubahan jumlah total leukosit secara signifikan dibandingkan kelompok lain selama periode perlakuan, namun tidak dapat menunjukkan kelompok mana yang mengalami perubahan tersebut. Analisa dilanjutkan dengan metode One – Way ANOVA (diteruskan dengan uji BNT) terhadap data perubahan jumlah total leukosit pada periode perlakuan selama satu hari, satu minggu, dan dua minggu untuk mengetahui kelompok mana yang mengalami perubahan jumlah total leukosit pada masing – masing periode perlakuan tersebut.

Tabel 5.4 Hasil Analisa Data Jumlah Total Leukosit Mencit dengan Metode Uji One – Way ANOVA yang Dilanjutkan Uji BNT pada Masing

– Masing Periode Perlakuan

Periode

(56)

 Notasi BNT yang Berbeda Dalam Satu Baris Periode Perlakuan (Contoh : a,b atau a,c atau b,c) Menunjukkan Perbedaan Nyata / Signifikan (p < 0,05)

 Kelompok I Dijadikan Sebagai Pembanding Karena Tidak Mengalami Perubahan (Mean Relatif Konstan Selama Periode Perlakuan)

 Hasil Analisa Dapat Dilihat Selengkapnya Pada Lampiran 2

Hasil analisa data pada tabel 5.4 menunjukkan bahwa pada periode perlakuan selama satu hari dan dua minggu terdapat kelompok yang mengalami perubahan jumlah total leukosit secara signifikan dibandingkan kelompok lain pada periode yang sama (signifikansi ANOVA < 0,05). Tidak terdapat kelompok yang mengalami perubahan jumlah total leukosit secara signifikan pada periode perlakuan selama satu minggu (p > 0,05) sehingga uji BNT tidak dilanjutkan pada periode ini. Pada periode perlakuan selama satu hari, perubahan jumlah total leukosit kelompok II (kontrol positif) berbeda signifikan dengan perubahan jumlah total leukosit kelompok I (kontrol negatif) dan kelompok III (pemberian kurma tahnik) (p < 0,05). Perubahan jumlah total leukosit pada kelompok II ini adalah berupa peningkatan jumlah total leukosit dengan mean difference sebesar 2275 dan 2121 masing - masing terhadap kelompok I dan kelompok III.

Jumlah total leukosit kelompok III mengalami perubahan yang berbeda signifikan dengan perubahan jumlah total leukosit kelompok I dan kelompok II setelah dua minggu periode perlakuan (p < 0,05). Perubahan jumlah total leukosit yang terjadi pada kelompok III ini adalah berupa peningkatan jumlah total leukosit dengan mean difference sebesar 2271 dan 2075 masing - masing terhadap kelompok I dan kelompok II.

(57)

signifikan dibandingkan kelompok I dan kelompok III setelah satu hari perlakuan, sedangkan kelompok III (pemberian kurma tahnik) mengalami peningkatan jumlah total leukosit yang berbeda signifikan dibandingkan kelompok I dan kelompok II setelah dua minggu perlakuan.

5.1.2 Hasil dan Analisa Data Persentase Monosit Mencit

Tabel 5.5 Hasil Hitung Persentase Monosit Mencit (%)

Kelompok Ulangan Hari Ke-0 Hari Ke-2 Hari Ke-8 Hari Ke-15

Tabel 5.6 Rata - Rata Persentase Monosit Mencit Selama Periode Perlakuan (Mean ± SD)

Kelompok Hari Ke-0 Hari Ke-2 Hari Ke-8 Hari Ke-15 I 1,42 ± 0,492 1,33 ± 0,516 1,17 ± 0,516 1,17 ± 0,983

II 6,17 ± 2,317 2 ± 1,14 2,08 ± 1,281 1,17 ± 0,753

(58)

Keterangan :

Gambar 5.2 Grafik Rata- Rata Persentase Monosit Selama Periode Perlakuan

Tabel 5.7 Hasil Analisa Data Persentase Monosit Mencit dengan Metode Uji Two-Way Repeated Measure ANOVA

Metode Uji Sum of Square

Hasil analisa data persentase monosit mencit dengan two – way repeated measure ANOVA menunjukkan hasil yang signifikan pada semua metode tafsirannya (p < 0,05) yang berarti bahwa ada pengaruh yang signifikan antara perlakuan (kelompok) dengan perubahan persentase

0

(59)

monosit yang terjadi selama periode perlakuan, atau dapat ditafsirkan bahwa terdapat kelompok yang mengalami perubahan persentase monosit secara signifikan selama periode perlakuan.

Analisa dilanjutkan dengan metode One – Way ANOVA (diteruskan dengan uji BNT) terhadap data perubahan persentase monosit pada periode perlakuan selama satu hari, satu minggu, dan dua minggu untuk mengetahui kelompok mana yang mengalami perubahan persentase monosit pada masing – masing periode perlakuan tersebut.

Tabel 5.8 Hasil Analisa Data Persentase Monosit Mencit dengan Metode Uji One – Way ANOVA yang Dilanjutkan Uji BNT pada Masing –

 Notasi BNT yang Sama Dalam Satu Baris Periode Perlakuan (Contoh : a,a atau b,b atau c,c) Menunjukkan Tidak Ada Perbedaan Nyata / Signifikan (p > 0,05)

 Kelompok I Dijadikan Sebagai Pembanding Karena Tidak Mengalami Perubahan (Mean Relatif Konstan Selama Periode Perlakuan)

(60)

kelompok yang mengalami perubahan persentase monosit secara signifikan dibandingkan kelompok lain pada periode yang sama (ANOVA’S p value < 0,05).

Pada periode perlakuan selama satu hari, perubahan persentase monosit kelompok II (kontrol positif) dan kelompok III (pemberian kurma tahnik) masing – masing berbeda signifikan dibandingkan dengan perubahan persentase monosit kelompok I (kontrol negatif). Perubahan persentase monosit yang terjadi pada kelompok II dan kelompok III ini adalah berupa penurunan persentase monosit dengan masing – masing

mean difference sebesar -4,08 dan -2,67 terhadap kelompok I.

Pada periode perlakuan selama satu minggu, kelompok II mengalami perubahan persentase monosit yang berbeda signifikan dibandingkan dengan perubahan persentase monosit kelompok I (p < 0,05). Perubahan persentase monosit pada kelompok II ini adalah berupa penurunan persentase monosit dengan mean difference sebesar -3,83 terhadap kelompok I. Kelompok III tidak mengalami perubahan persentase monosit yang berbeda signifikan dibandingkan dengan perubahan persentase monosit kelompok I dan kelompok II pada periode perlakuan selama satu minggu (p > 0,05).

(61)

masing – masing mean difference sebesar -4,75 dan -3,00 terhadap kelompok I.

Dari hasil ini dapat disimpulkan bahwa kelompok II (kontrol positif) mengalami penurunan persentase monosit yang berbeda signifikan dibandingkan kelompok I setelah satu hari perlakuan, satu minggu perlakuan, dan dua minggu perlakuan, sedangkan kelompok III (pemberian kurma tahnik) mengalami penurunan persentase monosit yang berbeda signifikan dibandingkan kelompok I setelah satu hari dan dua minggu perlakuan. Kelompok III tidak mengalami perubahan persentase monosit yang berbeda signifikan dibandingkan kelompok I dan kelompok II pada periode perlakuan selama satu minggu.

5.1.3 Hasil dan Analisa Data Persentase Limfosit Mencit

Tabel 5.9 Hasil Hitung Persentase Limfosit Mencit (%)

Kelompok Ulangan Hari Ke-0 Hari Ke-2 Hari Ke-8 Hari Ke-15

(62)

Tabel 5.10 Rata - Rata Persentase Limfosit Mencit Selama Periode Perlakuan (Mean ± SD)

Gambar 5.3 Grafik Rata- Rata Persentase Limfosit Selama Periode Perlakuan

Tabel 5.11 Hasil Analisa Data Persentase Limfosit Mencit dengan Metode Uji Two-Way Repeated Measure ANOVA

Metode Uji Sum of Square Tipe III df

Mean

Square f Signifikansi

Asumsi Bulat 1027,493 6 171,249 30,022 0

Greenhouse-Geisser 1027,493 3,183 322,801 30,022 0

Huynh-Feldt 1027,493 3,975 258,507 30,022 0

Lower-bound 1027,493 2 513,747 30,022 0

0

(63)

Hasil analisa data persentase limfosit mencit dengan two – way repeated measure ANOVA menunjukkan hasil yang signifikan pada semua metode tafsirannya (p < 0,05) yang berarti bahwa ada pengaruh yang signifikan antara perlakuan (kelompok) dengan perubahan persentase limfosit yang terjadi selama periode perlakuan, atau dapat ditafsirkan bahwa terdapat kelompok yang mengalami perubahan persentase limfosit secara signifikan selama periode perlakuan.

Analisa dilanjutkan dengan metode One – Way ANOVA (diteruskan dengan uji BNT) terhadap data perubahan persentase limfosit pada periode perlakuan selama satu hari, satu minggu, dan dua minggu untuk mengetahui kelompok mana yang mengalami perubahan persentase limfosit pada masing – masing periode perlakuan tersebut.

Tabel 5.12 Hasil Analisa Data Persentase Limfosit Mencit dengan Metode Uji One – Way ANOVA yang Dilanjutkan Uji BNT pada Masing –

 Notasi BNT yang Sama Dalam Satu Baris Periode Perlakuan (Contoh : a,a atau b,b atau c,c) Menunjukkan Tidak Ada Perbedaan Nyata / Signifikan (p > 0,05)

(64)

Hasil analisa data pada tabel 5.12 menunjukkan bahwa pada semua periode perlakuan (satu hari, satu minggu, dan dua minggu) terdapat kelompok yang mengalami perubahan persentase limfosit secara signifikan dibandingkan kelompok lain pada periode yang sama (ANOVA’S p value < 0,05).

Pada periode perlakuan selama satu hari, perubahan persentase limfosit kelompok II (kontrol positif) berbeda signifikan dibandingkan dengan perubahan persentase monosit kelompok I (kontrol negatif). Perubahan persentase monosit yang terjadi pada kelompok II ini adalah berupa peningkatan persentase limfosit dengan mean difference sebesar 10,75 terhadap kelompok I. Perubahan persentase limfosit kelompok III (pemberian kurma tahnik) berbeda signifikan dibandingkan dengan perubahan persentase monosit kelompok I dan kelompok II. Perubahan persentase monosit yang terjadi pada kelompok III ini adalah berupa peningkatan persentase limfosit dengan mean difference masing – masing sebesar 18,42 dan 7,67 terhadap kelompok I dan kelompok II.

(65)

perubahan persentase monosit kelompok I dan kelompok II. Perubahan persentase monosit yang terjadi pada kelompok III ini adalah berupa peningkatan persentase limfosit dengan mean difference masing – masing sebesar 20,25 dan 10,67 terhadap kelompok I dan kelompok II.

Setelah dua minggu periode perlakuan, persentase limfosit kelompok II mengalami perubahan yang berbeda signifikan dibandingkan dengan perubahan persentase monosit kelompok I. Perubahan persentase monosit yang terjadi pada kelompok II ini adalah berupa peningkatan persentase limfosit dengan mean difference sebesar 12,42 terhadap kelompok I. Perubahan persentase limfosit kelompok III berbeda signifikan dibandingkan dengan perubahan persentase monosit kelompok I dan kelompok II. Perubahan persentase monosit yang terjadi pada kelompok III ini adalah berupa peningkatan persentase limfosit dengan

mean difference masing – masing sebesar 23,75 dan 11,33 terhadap kelompok I dan kelompok II.

(66)

5.1.4 Hasil dan Analisa Data Titer Antibodi Mencit

Tabel 5.13 Titer Antibodi Mencit Setelah Dua Minggu Periode Perlakuan

Ulangan Kelompok

Gambar 5.4 Grafik Rata – Rata Titer Antibodi Mencit Setelah Dua Minggu Periode Perlakuan

Metode analisis yang digunakan adalah one – way ANOVA untuk mengetahui apakah terdapat perbedaan yang signifikan / jelas antara rata – rata titer semua kelompok data, kemudian dilanjutkan dengan uji Post Hoc