Pemanfaatan crude extract enzim ekstraseluler penicillium sp. dalam biosolubilisasi batubara lignit hasil iradiasi gamma dan pengasaman

1 N

A T A A F N A M E

P CRUDEEXTRACTENZIMEKSTRASELULER m

u il li c i n e

P sp .DALAMBIOSOLUBILISAS IBATUBARALIGNITHASIL N

A M A S A G N E P N A D A M M A G I S A I D A R I

A F L U A I R A M H A I D

A I M I K I D U T S M A R G O R P

I G O L O N K E T N A D S N I A S S A T L U K A F

T A Y A D I H F I R A Y S I R E G E N M A L S I S A T I S R E V I N

U ULLAH

A T R A K A J

2 N

A T A A F N A M E

P CRUDEEXTRACTENZIMEKSTRASELULER m

u il li c i n e

P sp .DALAMBIOSOLUBILISAS IBATUBARALIGNITHASIL N

A M A S A G N E P N A D A M M A G I S A I D A R I

i s p ir k S

s n i a S a n a jr a S r a l e G h e l o r e p m e M k u t n U t a r a y S u t a S h a l a S i a g a b e S

u t S m a r g o r

P d iKimia

i g o l o n k e T n a d s n i a S s a tl u k a F

a tr a k a J h a ll u t a y a d i H f ir a y S i r e g e N m a l s I s a ti s r e v i n U

: h e l O

A F L U A I R A M H A I D

4 3 2 3 0 0 6 9 0 6 0 1

A I M I K I D U T S M A R G O R P

I G O L O N K E T N A D S N I A S S A T L U K A F

H A L L U T A Y A D I H F I R A Y S I R E G E N M A L S I S A T I S R E V I N U

A T R A K A J

3 N

A T A A F N A M E

P CRUDEEXTRACTENZIMEKSTRASELULER m

u il li c i n e

P sp .DALAMBIOSOLUBILISAS IBATUBARALIGNITHASIL N

A M A S A G N E P N A D A M M A G I S A I D A R I

i s p ir k S

s n i a S a n a jr a S r a l e G h e l o r e p m e M k u t n U t a r a y S u t a S h a l a S i a g a b e S

a i m i K i d u t S m a r g o r P

o n k e T n a d s n i a S s a tl u k a

F log i

a tr a k a J h a ll u t a y a d i H f ir a y S i r e g e N m a l s I s a ti s r e v i n U

: h e l O

A F L U A I R A M H A I D

4 3 2 3 0 0 6 9 0 6 0 1

i u j u t e y n e

M ,

I g n i b m i b m e

P Pembimbing I I

i S . M , o r o g u S n a w a r

I SandraHermanto ,M.Si 1

0 0 1 2 1 0 0 0 2 8 1 0 1 6 7 9 1 . P I

N NIP .197508102005011005

,i u h a t e g n e M

a i m i K i d u t S m a r g o r P a u t e K

i S . M , r a d n a k u S e d e D . s r D

4 N

A I J U N A H A S E G N E P

“ l u d u jr e b i s p ir k

S PemanfaatanCrudeExrtac tEnzimEksrtaselule rPenicliilum .sp i

s a i d a r I l i s a H t i n g i L a r a b u t a B i s a s il i b u l o s o i B m a l a

d Gamma dan Pengasaman”

n a k a t a y n i d n a d i j u i d h a l e t 4 3 2 3 0 0 6 9 0 6 0 1 M I N a fl U a ir a M h a i D h e l o s il u ti d g n a y

s a ti s r e v i n U i g o l o n k e T n a d s n i a S s a tl u k a F h a y s o q a n u m g n a d i s m a l a d S U L U L

. 1 1 0 2 i e M 1 3 l a g g n a t a d a p a tr a k a J h a ll u t a y a d i H f ir a y S i r e g e N m a l s

I Sk irpsi i n i

h a l e

t dtieirma sebaga isalah satu syara tuntuk memperoleh gela rSajrana Srtata .

a i m i K i d u t S m a r g o r P ) 1 S ( u t a S

,i u j u t e y n e M

Penguj i1 Penguj i2

i S . M , n il r a m u S e d O a

L HliyatuzZahroh ,MP.Kim

NIP .150408693

PembimbingI Pembimbing2

i S . M , o r o g u S n a w a r

I SandraHermanto ,M.Si 1

0 0 1 2 1 0 0 0 2 8 1 0 1 6 7 9 1 . P I

N NIP .197508102005011005 Mengetahu,i

Dekan

i g o l o n k e T n a d s n i a S s a tl u k a

F KetuaProgramStud i a

i m i K

.s i S . M , a r t u P a y a J h a y s n a i p o y S . R

D Drs .DedeSukandar ,M.Si 1

0 0 1 2 1 1 0 0 2 7 1 1 0 8 6 9 1 . P I

5 N

A A T A Y N R E P

R A N E B I N I I S P I R K S A W H A B N A K A T A Y N E M A Y A S I N I N A G N E

D

-S A Y R A K L I S A H R A N E

B ENDIR I YANG BELUM PERNAH DIAJUKAN

I G G N I T N A U R U G R E P A D A P H A I M L I A Y R A K U A T A I S P I R K S I A G A B E S

. N U P A N A M A G A B M E L U A T A

Jaka tra,J un i2011

DIAHMARIAULFA

7

.

4 La Ode Sumariln ,M.S idan Hliyatuz Zahroh ,MP.Kim ,selaku Penguj i I

j u g n e P n a

d i I I pada sidang Munaqosyah yang telah membeirkan

.i n i i s p ir k s n a n u s u y n e p m a l a d n a h a r a g n e p

.

5 Mama ,Mim idanKangUmamyangt elahmembeirkankasihsayang ,do’a ,

.s il u n e p n a p e d a s a m n a d n a p u d i h e k i m e d a ri k r e t k a t g n a y n a n a b r o g n e p n a d

.

6 KaOilk, I ndradan MangAripyangt elahmembantupenuil sdalam segala

.i n i i s p ir k s n a k i a s e l e y n e m t a p a d s il u n e p a g g n i h e s l a h

.

7 Angkatan2006khususnyaDini ,Ami ,Qosim ,SyfiadanMtiha

.

8 Pihak-pihak l ainyang itdak bisasayasebutkan satu persatu,t etap ipenu il s

n a b i g a l il a k e s n a k p a c

u yak t e irmakasih karenadengan bantuansemuanya

n a k t a p a d n e m n a d h a d u m h i b e l n a g n e d n a k i a s e l e s r e t t a p a d h a l a s a m a l a g e s

. k i a b g n a y l i s a h

s il u n e p i g a b t a a f n a m r e b t a p a d i n i i s p ir k s a g o m e s s il u n e p n a p a r a H

li i p a k g n e l e m m a l a d a y n m u m u a c a b m e p a r a p a tr e s a y n s u s u h

k mu pengetahuan

n a g n e d n a g n u b u h r e b g n a

y ”Pemanfaatan Crude Extrac tEnzim Ekstraseluler m

u il li c i n e

P sp .dalam Biosolubiilsas iBatubara Ligni tHasi lIradias iGamma n

a m a s a g n e P n a

d ”Akhi rkata hanya kepadaAllah SWT dipanjatkan do’auntuk b

i d u b a l a g e s s a l a b m e

m aikuntuks emuapihakyangt erkai.t

1 1 0 2 i n u J , a tr a k a J

s il u n e P

8 I

S I R A T F A D

n a m a l a H

R A T N A G N E P A T A

K .............................................................................. iv I

S I R A T F A

D .......................................................................................... iiv i R

A B M A G R A T F A

D ................................................................................ ix L

E B A T R A T F A

D .................................................................................. iix i N

A R I P M A L R A T F A

D .......................................................................... vx i K

A R T S B

A ............................................................................................... vx T

C A R T S B

A ........................................................................................... ix v N

A U L U H A D N E P . I B A

B ......................................................................... 1

g n a k a l e B r a t a L . 1 .

1 ... 1 .

2 .

1 PerumusanMasalah ... 4 s

i s e t o p i H . 3 .

1 ... 4

n a it il e n e P n a u j u T . 5 .

1 ... 5 n

a it il e n e P t a a f n a M . 6 .

1 ... 5 .. .. .. .. .. .. .. .. .. .. .. .. .. .. .. .. .. .. .. .. .. .. .. .. .. .. .. .. .. .. .. .. .. .. .. .. .. .. .. .. .r i k i p r e B a k g n a r e K . 7 .

1 .. 6

. I I B A

B TINJAUANPUSTAKA .............................................................. 7

.. .. .. .. .. .. .. .. .. .. a r a b u t a B . 1 .

2 ... . 7

2.1.1 .PembentukanBatubara ... 7

2.1.2 .Klasiifkas iBatubara... .. 9

2.1.3 .Biosolubiilsas iBatub ara ... 1 2 .

2 .

2 EnzimPendegradas iLignin ... 51

r o t k a F . 3 .

2 -Fakto ryangMempengaruh iBisolubiilsasi ... 91

9

2.3.1.I radiasi ... 02

2.3.2 .Pengasaman... 22 .

4 .

2 Karakteirsas iProdukBiosolubiilsas iBatubara ... 3..2

2.4.1 .Elek rtoforesi sSDS-PAGE ... 32 2.4.2.Spek rtofotomete rUV- sv i ... 52

2.4.3.Spek rtofotometerFourie rTransformI nfraRed(FTIR) ... 92

2.4.4 .Ga sChromatography-Mas sSpectromerty(GC-M S)... 53

N A I T I L E N E P I G O L O D O T E M . I I I B A

B .............................................3 9 n

a it il e n e P t a p m e T n a d u t k a W . 1 .

3 ... 93

n a h a B n a d t a l A . 2 .

3 ... 93 .

3 .

3 Metodolog iPeneilitan ... 04

3.3.1 .PersiapandanSteirilsas iAlat... 04

3.3.2 .PersiapanSerbukBatubara ... 04

3.3.3.I radias iLigni tdenganSina rGamma... 04

3.3.4.PengasamanBatubaradenganAsamNirtat( HNO3) ... 04

3.3.5 .PembuatanMediumSDB( SabouraudDextroseBroth) ... 14

3.3.6 .Produks iCrudeExtrac tEnzimEksrtaselule rPenicliilums ..p. .. 14

3.3.7 .Anailsi sKuanttia sCrudeExtractEnzimEksrtaseluler

Penicliilumsp .denganMetodeLowry ... 42 .... 3.3.8 .KarakteirsitkEnzimEksrtaselule rdenganElekrtoforesis ... 24

3.3.9 .Biosolubiilsas iBatubaradenganCrudeExtrac tEnzim

Eksrtaseluler Penicliilums p... 44

3.3.10 .Anailsi sProdukBiosolubiilsasi ... 44

a .PengukuranpH ... 4....4

b .Anailsi sUV- sv i ... 4..4

0 1

d .Anailsi sFTIR ... 64

3.3.11 .SkemaKejra... 64

N A S A H A B M E P N A D L I S A H . V I B A

B ................................................. 74

. 1 .

4 Karakteirsas iEnzimEksrtaselule rPenicliilumsp .dengan

Elekrtoforesi sSDS-PAGE... 74 .

2 .

4 Nlia ipHMediumBiosolubiilsas iBatubara ... 84

V U r e t e m o t o f o rt k e p S n a g n e d i s a s il i b u l o s o i B l i s a H s i s il a n A . 3 .

4 - sv i ... 05

R I T F n a g n e D i s a s il i b u l o s o i B k u d o r P s i s il a n A l i s a H . 4 .

4 ... 55

C G n a g n e d i s a s il i b u l o s o i B k u d o r P s i s il a n A l i s a H . 5 .

4 - SM ... 58

P M I S E K . V B A

B ULANDANSARAN .................................................. 46

n a l u p m i s e K . 1 .

5 ... 46 n

a r a S . 2 .

5 ... 46

A K A T S U P R A T F A

D .............................................................................. 65 N

A R I P M A

L ............................................................................................ 07

1 1 R

A B M A G R A T F A D

n a m a l a H

Gamba r1.P sr e sPeo mbentuka Bn a atub ra ... 8 .

2 r a b m a

G BatubaraAnrtasi tdanSrtuktu rKimianya... 9 .... .

3 r a b m a

G BatubaraBtiuminu sdanS rtuktu rKimianya ... 01

. 4 r a b m a

G Srtuktu rKimiaBatubaraSubb tiuminus... 11 5

r a b m a

G .Srtuktu rKimiaBatubara ilgnti ... 12 C

n a t a k I n a g n o t o m e P . 6 r a b m a

G α-Cβ Moleku lLignin... 71 k it a m o r A r u t k u rt S i r a d a d i s k o i D n o b r a K n a k u t n e b m e P a m e k S . 7 r a b m a G

LigninolehMnP ... 18 e

s a d i s k o l o n e f m i z n e h e l o i s a d i s k o i s k a e R . 8 r a b m a

G ... 9..1

D 1 s i s e r o f o rt k e l E t a l A t a k g n a r e p e S . 9 r a b m a

G ... 42 .

0 1 r a b m a

G Denaturas iproteinolehSDS ... 52 n

a g n a g g n e R i s a r b i V . 1 1 r a b m a

G ... 1..3

r a b m a

G 12 .Vibras iBengkokan ... 2..3 .

3 1 r a b m a

G DiagramSpekrtofotometerI nframerah ... 4....3 C

G r il A m a r g a i D . 4 1 r a b m a

G - SM ... 83

m a r g e r o f o rt k e l E . 5 1 r a b m a

G CrudeExtrac tEnzimEksrtaselule r

m u il li c i n e

P sp .Dengans tanda rmarke rprotein. ... 74 i s a b u k n I u t k a W n a g n e d n a m a s a e K t a j a r e D a r a t n A n a g n u b u H . 6 1 r a b m a

G .... 94

H p n a k i a n e K n a d n a n u r u n e P i s k a e R l e d o M s i s e t o p i H . 7 1 r a b m a G

padaProse sBiosolubiilsas iilgnti... 05 .

8 1 r a b m a

G HubunganAntaraAbsorbans iλ250nmdenganWaktuI nkubasi ... 2.. 5

2 1

. 9 1 r a b m a

G Reaks iDegradas iLigninolehEnzimLigninPeroksidase... 25 P n M n a d e s a k a L m i z n E h e l o l o n e F a w a y n e S i s a d i s k O i s k a e R . 0 2 r a b m a

G .. 35

. 1 2 r a b m a

G HubunganantaraAbsorbans iλ450nm denganWaktuInkubasi ... 4.. 5

a n e s a tf a N i s a d a r g e D i s k a e R . 2 2 r a b m a

G ... 45 t

i n g i L . ) B ( l o rt n o k t i n g i L . ) A ( . h a r e M a r f n I m u rt k e p S . 3 2 r a b m a G

Hasi lPengasaman( C) .Ligni tHasi lRadiasi... 75

. 4 2 r a b m a

G PersentaseAreaSenyawaHidrokarbonyangSetara

KomponenBensindanSola rHasi lBiosolubiilsas iBatubara

Lignti... 26

3 1 L

E B A T R A T F A D

n a m a l a H

. 1 l e b a

T Enzimeksrtaselule rpendegradas iilgnin ... 6....1 s

u g u G i s n e u k e r F . 2 l e b a

T -Gugu sFungsi... 33 i

s il a n A i s i d n o K . 3 l e b a

T sGC- SM ... 54 a

w a y n e S . 4 l e b a

T -SenyawaProdukBiosolubiilsas iLigni tPadaNlia i

Absorbans iMaksimum... 95

4 1 N

A R I P M A L R A T F A D

n a m a l a H

n a ij u g n e P r e t e m a r a P . 1 n a ri p m a

L ... 70

2 n a ri p m a

L .Komposis iLarutanElekrtoforesis ... 72 n

a ri p m a

L 3 .KurvaStanda rMarker... 74 n

a ri p m a

L 4 .SenyawayangSetaraKomponenSola rdanBensin

Hasi lBiosolubiilsas iBatubaraLignti ... 75 .... n

a ri p m a

L 5 .PersenMassaTersolubiilsas iKomponenSenyawayang

SetaradenganBensindanSolar ... 67

. 6 n a ri p m a

L KromatogramHasi lGC-MSLigni tKonrtol ,Hasi l

Iradias idanPengasaman ... 97

7 1 I

B A B

N A U L U H A D N E P

. 1 .

1 LatarBelakan g

i m u b k a y n i m n a g n a d a

C d anga sd iIndonesiasaati n isemakinmenipi sdan

3 2 a m a l e s n a t a a f n a m e p i g a b a s i s r e

t dan 62 tahun . Batubara yang memiilk i

n a g n a d a

C untuk 146 tahun ke depan akan memegang peranan pen itng setelah

k a y n i

m bum idanga shabi s(Wtioelar ,2009) .Namundemikiandar i59%batubara

. ti n g il s i n e j i r a d u ti a y , h a d n e r s a ti l a u k r e b a i s e n o d n I i

d Kandungan karbon pada

i n k a y , n i a l s i n e j a r a t n a i d h a d n e r g n il a p t i n g

il hanyaberkisa rantara20- %35 berat,

. i g g n it h i b e l a y n ri a n a g n u d n a k u ti a r a t n e m e

s Oleh sebab tiu, pelru dicar isolus i

s i m o n o k e i a li n r e b r a g a a r a b u t a b s a ti l a u k n a k t a k g n i n e m k u t n

u .

g n a y a r a c u t a s h a l a

S telahdliakukanuntukmeningkatkankualtia sbatubara

h a l a d

a dengan metode ifsika, yatiu dengan proses sintesi s ifscher-Tropsch dan

q i L l a o C n w o r

B uefaciton Technology (BCL ) (Natura l Resource s Defense li

c n u o

C ,2007) .Kelemahan metode ifsikayatiu membutuhkan biaya operasiona l a y n s e s o r p , ti m u r p u k u c g n a y i s a l a t s n i n a k u lr e m e m a n e r a k i g g n it p u k u c g n a y

, i g g n it g n a y n a n a k e t n a d r u t a r e p m e t m a l a d n a k u k a li

d setramenghaslikanCO2dua

. ) 7 0 0 2 , C D R N ( a s a i b k a y n i m r a k a b n a h a b i r a d t a p il i l a k

e d o t e m u t a s h a l a

S atlernait f yang bisa dikembangkan adalah secara

u ti a y s i g o l o i

b dengan bantuan mikroorganisme yang disebu t biosolubiilsasi .

t k a b n a d r u m a j n i a rt s h a l m u j e

S er i berfliamen diketahu i mampu be irnteraks i

. r e l u l e s a rt s k e m i z n e s e s o r p i u l a l e m h a d n e r s a ti l a u k a r a b u t a b n a g n e

d Kapangyang

0 2

b u t a b i s a s il i b u l o s i g a b n i e t o r

p ara dan pengukuran kada rprotein eksrtaselula r

. y r w o L e d o t e m n a g n e d

. 2 .

1 PerumusanMasalah

.

1 Bagaimanakah efektfitias riadias i gamma dan pengasaman terhadap

h e l o t i n g il a r a b u t a b i s a s il i b u l o s o i b s e s o r

p crude extrac t enzim

r e l u l e s a rt s k

e kapangPenicliilum ?s p.

.

2 Bagaimanakah pro if lgugu sfungs ibatubara ilgni thasi l riadias igamma

n a m a s a g n e p n a

d sebelumdansetelahprose sbiosolubiilsas idengancrude t

c a rt x

e enzimeksrtaselulerkapangPenicliilum ?s p.

.

3 Apakah prose sbiosolubiilsas ibatubara ilgni thasi l riadias igamma dan

n a m a s a g n e

p dengan menggunakan crude extrac t enzim eksrtaseluler g

n a p a

k Penicliilum sp .mampu menghaslikan produk yang setara dengan ?

r a l o s n a d n i s n e b

. 3 .

1 Hipotesis

.

1 Iradias igamma dan pengasaman berpengaruh terhadap biosolubiilsas i

e l o t i n g il a r a b u t a

b h crude extrac tenzim eksrtaselulerkapang Penicliilum

. p s

.

2 Tejrad i perubahan pro if l batubara ilgni t hasi l riadias i gamma dan

n a m a s a g n e

p sebelum dan setelah prose s biosolubiilsas idengan crude t

c a rt x

e enzimeksrtaselulerkapangPenicliilum .s p

.

3 Biosolubiilsas ibatubara ilgni thasi l riadias igamma dan pengasaman

n a k a n u g g n e m n a g n e

1 2 m

u il li c i n e

P sp .mampu menghaslikan produk yang setara dengan bensin .r

a l o s n a d

n a it il e n e P n a u j u T . 4 . 1

.

1 Mengetahu i efektfitias riadias i gamma dan pengasaman terhadap

i s a s il i b u l o s o i

b batubara ilgni t oleh crude extrac t enzim eksrtaseluler g

n a p a

k Penicliilum .s p

.

2 Mengetahu iperubahan pro if lgugu sfungs ibatubara ilgni thasi l riadias i

a s il i b u l o s o i b s e s o r p h a l e t e s n a d m u l e b e s n a m a s a g n e p n a d a m m a

g s i

n a g n e

d crudeextrac tenzimeksrtaselulerkapangPenicliilum .s p

.

3 Mengetahu iefektfitias riadias igammadan pengasaman terhadap produk

h e l o t i n g il a r a b u t a b i s a s il i b u l o s o i

b crude extrac t enzim eksrtaseluler g

n a p a

k Penicliilum .s p

. 5 .

1 Manfaa tPeneil itan

e n e

P ilitan in i diharapkan dapa t member i informas i dan pengetahuan

r o t k a f g n a t n e

t -fakto ryang mempengaruh ibiosolubiilsas ibatubara ilgni tsehingga

.l a m it p o h i b e l g n a y i s a s il i b u l o s o i b k u d o r p n a k li s a h i d

2 2 .

6 .

1 KerangkaBerpikir

. 7 .

1 Keterbat_ba_us_man_iminyak Atl_de_arn_ya_at_efi_ns _eu_rm_gibe r

i d a r a b u t a b % 9 5 >

s a ti l a u k a i s e n o d n I

h a d n e r

a r a b u t a B

n a t a k g n i n e P

a r a b u t a b s a ti l a u k

e d u r

C extrac t

r e l u l e s a rt s k e m i z n e

g n a p a k t a l o s I

m u il li c i n e

P .sp

a m m a g i s a i d a r I

y G k 0 1 s i s o d

n a m a s a g n e P

O N H n a g n e

d 3

i s a s il i b u l o s o i B

r a b u t a

b a

i s a s il i b u l o s o i B

a r a b u t a

b_{k s olubiilsas i} u

d o r P

i a g a b e s a r a b u t a b

i g r e n e a y a d r e b m u s

6 2

s u n i m u ti b a r a b u t a b n a a n u g g n e P . u b a r e b n a d p a s a r e b g n a y g n i n u k a n r a w r e b

( g n a r a i d a j n e m i s r e v n o k i d k u t n u n a k u j u ti

d coke )yang digunakan dalam i ndusrt i a

b j a .

O

. 3 r a b m a

G Batubara Btiuminu s dan Srtuktu r Kimianya (Fakuossa and .)

9 9 9 1 , r e t h c ir f o H

.

c BatubaraSubbtiuminus

r a s e b e s n o b r a k n a g n u d n a k , k a n u l , m a ti h a n r a w r e b s u n i m u ti b b u s a r a b u t a B

5

3 -45 % dan energ i yang dihaslikan berkisa r antara 16-24 juta Btut/on .

a r a b u t a b n a k g n i d n a b i d h a d n e r h i b e l s u n i m u ti b b u s a r a b u t a b n o b r a k n a g n u d n a K

a n e r a k h i s r e b h i b e l g n a y n a r a k a b m e p n a k li s a h g n e m i p a t e t n a k a , s u n i m u ti b

a g n u d n a

k n suflurnyayangl ebih r endahdibandingkandenganbatubarabtiuminus .

i d a n e r a k i rt s u d n i m a l a d n a k a n u g i d g n ir e s g n a y a r a b u t a b n a k a p u r e m i n i a r a b u t a B

s u n i m u ti b b u s a r a b u t a b n a t a a f n a m e P . h a p m il e m t a g n a s a y n h a l m u j a i s e n o d n I

p a U a g a n e T k ir t s i L t i k g n a b m e P k u t n u r a k a b n a h a b i a g a b e s n a k a n u g i d a m a t u r e t

. ) U T L P (

3 3

i n i m i z n e a k a

m juga mempunya ikemampuan mengoksidas isenyawa fenoilk ,

k il k i s il o p k it a m o r a a w a y n e s n a d k it a m o r a r e t e , a n i m

a (Perez e t al . 2002) .

n a h a s i m e p n a g n e d i a l u m i d P i L h e l o s il a t a k i d g n a y n i n g il r u t k u rt s b u s i s a d i s k O

, li r a n o it a k l a k i d a r n a k li s a h g n e m n a d r o n o d t a rt s b u s k it a m o r a n i c n i c n o rt k e l e u t a s

i s k a e r i a g a b r e b i m a l a g n e m n a i d u m e k g n a

y postenzymaitc (Hammel ,1997) .LiP C

n a t a k i g n o t o m e

m α-Cβmoleku lilgnin( Gamba r6 .)

r a b m a

G 6.PemotonganI katanCα-Cβ Moleku lLignin.

n o i a d a p g n u t n a g r e t P n M h e l o n i a l k il o n e f a w a y n e s n a d n i n g il i s a d i s k O

( s a b e b n

M Gold andA , ilc 1993) .Reaks iawa lMn3+_{dengancincin f enoilk adalah}

s k o n e f l a k i d a r i d a j n e m n o rt k e l e u t a s i s a d i s k o u t a u

s li yang terdapa t dalam

a d e b r e b g n a y r e m o s e

m (Gold and Ailc ,1993) .Secara simutlan ,chelate asam n a k li s a h g n e m n i k g n u m g n a y n i a l l a k i d a r n a d l i s k o r e p i d a j n e m i s a d i s k o i d k i n a g r o

c g n a y a d i s k o r e p u

s enderung bereaks idengan radika lberpusa tkarbon menjad i

m a l a d n a k li s a h i d g n a y n i c n i c n a h a l e b m e p i m a l a g n e m g n a y a d i s k o r e p r e t e k u t n e b

( k it a fi l a r u t k u rt s n a k u t n e b m e

4 3

O C i d a j n e m i n i s u g u g h a l e b m e

m 2danr adika lalfiaitkyangs elanjutnyamengalam i

O C n a k li s a h g n e m n e g i s k o i d n a g n e d i s k a e

r 2 lebih banyak dan bahan organik

t a m r o f m a s a i tr e p e s h a d n e r l u l e k o m t a r e b n a g n e

d (Gamba r7).

. 7 r a b m a

G Skema Pembentukan Karbon Dioksida dar i Srtuktu r Aromaitk P

n M h e l o n i n g i L

e s a k a

L dtiemukan pada kapang ,khamri ,dan bakteir .Enzim in i itdak

H n a k h u t u b m e

m 2O2 tetap i menggunakan moleku loksigen .Lakase mereduks i

H i d a j n e m n e g i s k

o 2O dalam subsrta t fenoilk melalu i reaks i satu elekrton

k i d a r k u t n e b m e

m a lbeba syang dapa tdisamakan dengan radika lkaiton yang

n e t s r e K ( P n M i s k a e r a d a p k u t n e b r e

t e ta.l ,1990 .) Aks ilakase pada aromaitk a

s s u o k a F ( i s k o n e f l a k i d a r n a k u t n e b m e p n a k li s a h g n e m k il o n e

f and Hofirchter ,

9 9 9

1 .)

6 3 I

. 1 . 3 .

2 radiasi

Iradiasi adalah pancaran energ imelalu isuatu mater iatau ruang dalam

r e b m u s i r a d k it e n g a m o rt k e l e g n a b m o l e g u a t a l e k it r a p , s a n a p k u t n e

b riadiasi ,

a d e

s ngkan secara umum riadiasi diaritkan sebaga i pemancaran suatu energ i

l e k it r a p u a t a k it e n g a m o rt k e l

e -paritke l dengan kecepatan itngg i (Darussalam ,

.) 6 9 9

1 Iradiasi merupakan salah satu cara perambatan energ idar isuatu sumbe r

m e m a p n a t a y n n a g n u k g n il e k i g r e n

e butuhkan medium atau bahan penghanta r

. u t n e tr e

t Iradiasi in imemiilk idua sfia tyang khas ,yatiu itdak dapa tdriasakan

s i n e j a p a r e b e b n a d a i s u n a m a r d n i a c n a p h e l o g n u s g n a l a r a c e

s riadiasi dapa t

k a d it g n a y a y n t a fi s a n a m i a g a b e S . n a h a b s i n e j i a g a b r e b s u b m e n e

m dapa tdriasakan

k a d it u a t a a d a n a k u t n e n e m k u t n u a k a m , a i s u n a m a r e d n i a c n a p h e l o i l a k e s a m a s

a y n a d

a riadiasi nukil r dipelrukan suatu alat , yatiu penguku r riadiasi yang

r u k u g n e m n a d i s k e t e d n e m k u t n u n a t a l a r e p n a n u s u s u t a u s n a k a p u r e

m riadiasibaik

,s a ti t n a u

k energi ,ataudosisnya( BATAN ,1995 .)

Iradiasi dapa t dibedakan menjad i 2 macam , yatiu riadiasi pana s dan

i s a i d a

ri pengion . Iradiasi pana s menggunakan frekuens i rendah atau dengan

. h a r e m a r f n i a y n l a s i m , i g g n it g n a b m o l e g g n a j n a

p Iradiasi pengion menggunakan

( a fl a r a n i s a y n l a s i m , i g g n it i s n e u k e r

f α) ,sina rbeta (β) ,dan sina rgamma (γ )

.) 4 9 9 1 , r e g n i n h e L (

Sinargammaadalah riadiasigelombang elekrtomagneitk dengan panjang

h e l o n a k r a c n a p i d g n a y ) m o rt s g n A e d r o m a l a d ( k e d n e p t a g n a s g n a y g n a b m o l e g

fi t k a o i d a r t a fi s r e b g n a y l i b a t s k a d it g n a y m o t a i t n

i . Setelah int i atom

8 3

t a l A . y G k 0 1 n a k a n u g i d g n a y s i s o d i n

i riadiasigammadigunakan adalah riadiato r

A K R I a m m a

g (Iradiasi Kare tAlam )yang dipasang pada tahun 1982 dengan

r e b m u

s riadiasi gammaCo-60 dan volume maksimum bahan yang diriadiasipe r

h a l a i h c t a

b + 1,2m3_{(BATAN ,1995 .)}

n a m a s a g n e P . 2 . 3 . 2

n a k a p u r e m m u m u a r a c e s ) A H m u m u s u m u r n a g n e d i li k a w i d g n ir e s ( m a s A

senyawakimiayang bliadliarutkan dalamai rakan menghaslikan l arutan dengan

H

p lebih keci ldar i7 .Menuru tkonsep Bronsted Lowrymengena iasamdan basa ,

n a t a u m r e b g n a y n e g o r d i h n o i n a k ir e b m e m t a p a d g n a y t a z h a l a d a m a s a u t a u s

H ( n o t o r p u a t a , fi ti s o

p +_{) .D uacontoh dar iasamBronsted Lowry adalahHC ldan}

O N H 3.

O N

H 3peka tmerupakan za tpengoksida sikuat ( Fessenden and Fessenden ,

O N H n a h a b m a n e P . ) 6 8 9

1 3peka takan menyebabkan reaks ioksidas ibag igugus

-a d a p t a p a d r e t g n a y n o t e k n a d l o h o k l a i tr e p e s i s g n u f s u g u

g srtuktu r ilgnti .

s u g u g n a h a b u r e

P -gugu s fungs i tersebu t akan menyebabkan reaks i enzimait s

, i h S ( t a k g n i n e m n i k a m e

s e t al , 2009) . Kemungkinan reaksi-reaks i oksidas i .t

u k ir e b i a g a b e s h a l a d a t u b e s r e t

.

1 Oksidas ialkohol

.

a Alkoho lp irmer



 o

HN



O3 Aldehi d

.

b Alkohols ekunder  oHNO3 Keton

.

c Alkoholt ersier



H

 o

N



O3 Tidakadar eaksi

4 4

n a k a a y a h a c i g r e n e , n a t u r a l i u l a l e m n a k i s i m s n a rt i d a y a h a c g n a b m o l e g g n a j n a p

l a n o i s r o p o r p g n u s g n a l a r a c e s g n a y ) A ( i s n a b r o s b a n a k a m a n i d , )i s b r o s b a i d ( p a r e s i d

l u k e l o m n a u p m a m e k p a d a h r e

t -moleku lza ttelraru tuntuk mengabsorps icahaya

g n a b m o l e g g n a j n a p a d a

p tersebu,t j ugat erhadap konsenrtasil arutan dan panjang

u t a u s e k ) r e t e m o t o f o rt k e p s m a l a d m c 1 a y n a s a i b ( a y n i u l a li d g n a y a y a h a c s a k r e b

i s b r o s b a i d u a t a n a k i s i m s n a rt i d g n a y a y a h a c h a l m u j e s a t n e s r e p a n a m i d t n i o p

n a g n e d r u k u i

d phototube(Lingga ,2002 .) h

a u b e

S spekrtofotomete rmemiilk iilmabagianpenitngyatiu:

.

a Sumbe rcahaya ,untuk UV digunakan l ampu deuteirum (D2O) ,untuk visible

.) c u A ( n o n e x t n e t s g n u t u p m a l n a k a n u g i d

.

b Monokromato radalah suatu ala tyang dapa tmengubah cahaya poilkromaitk

r k o n o m a y a h a c i d a j n e

m omaitk.

.

c Se lpenyerap /wadah pada sampel ,cell dalam spekrtofotomete rdisebu tjuga .t

e v u k n a g n e d

.

d PHotodetector berfungs i untuk mengubah energ i cahaya menjad i energ i .

k ir t s il

.

e Penampi l data ,untuk spek rtofotomete r modern dliengkap i dengan sistem

i s a s ir e t u p m o

k .

7 4

( n a g n a g g n e r i s a r b i v : u ti a

y stretching) dan vibras i bengkokan (bending ) )

6 0 0 2 , a r a k g n a w i G

( .

( n a g n a g e R i s a r b i V .

A Streching)

g n a y n a t a k i g n a j n a p e s s u r e t k a r e g r e b m o t a i n i i s a r b i v m a l a D

, a y n a u d e k a r a t n a k a r a j n a h a b u r e p i d a jr e t n a k a a g g n i h e s a y n n a k g n u b u h g n e m

m a c a m a u d a d a n a g n a g e r i s a r b i V . h a b u r e b k a d it n a t a k i t u d u s n u p u a l a w

) 6 0 0 2 , a r a k g n a w i G

( .

.

1 ReganganSimetir ,uni tsrtuktu rbergerakbersamaandansearahdalamsatu

. r a t a d g n a d i b

.

2 Regangan Asimetir ,uni tsrtuktu rbergerak bersamaan dan itdak searah

r a t a d g n a d i b u t a s m a l a d h i s a m i p a t e

t .Sebagaimanagamba rbeirku:t

r a b m a

G 1 .1 Vibras iRenggangan(Giwangkara ,2006).

( n a k o k g n e B i s a r b i V .

B Bending)

h i b e l g n a y l u k e l o m h a u b e s i r a d n a i g a b n a k a p u r e m m o t a a g it m e t s i s a k i J

g n a y i s a m r o f e d i s a r b i v u a t a n a k o k g n e b i s a r b i v n a k l u b m i n e m t a p a d a k a m , r a s e b

k e l o m u a t a m o t a i s a li s o i h u r a g n e p m e

m u lsecarakeseluruhan .Vibras ibengkokan

s i n e j t a p m e i d a j n e m i g a b r e t i n

i (Giwangkara ,2006).

8 4

.

1 Vibras iGoyangan (Rocking) ,uni tsrtuktu rbergerak mengayun asimert i .

r a t a d g n a d i b m a l a d h i s a m i p a t e t

.

2 Vibras iGunitngan (Scissoring) ,uni tsrtuktu rbergerak mengayun simert i .

r a t a d g n a d i b m a l a d h i s a m n a d

.

3 Vibras iKibasan (Wagging) ,uni tsrtuktu rbergerak mengiba skelua rdar i .

r a t a d g n a d i b

.

4 Vibras iPeilntrian (Twisitng) ,uni tsrtuktu rberputa rmengeililng iikatan i

d a d a r e b n a d k u d n i l u k e l o m n a g n e d n a k g n u b u h g n e m g n a

y dalam bidang

. r a t a d

r a b m a

G 1 .2 Vibras iBengkokan(Giwangkara ,2006).

Panjang gelombang infra merah (IR ) lebih pendek dairpada panjang

a n i s g n a b m o l e

g rtampak maupun ulrta ungu (UV) .Oleh karena tiu, IR itdak

n a k n i a l e m , n o rt k e l e n a k i s i s n a rt n e m u p m a

m hanya menyebabkan moleku l

, a n a y a d n e H ( t a d a p t a z u a t a r i a c t a z a p u r e b t a p a d a s il a n a i d g n a y n a k il p u C . r a t e g r e b

i rt e m o t o f o rt k e p s t a l a a jr e k a r a C . ) 4 9 9

9 4

a l u M : t u k ir e

b -mula sina rinfra merah dliewatkan melalu isampe ldan larutan

n a k g n a li h g n e m k u t n u r o t a m o r k o n o m a d a p n a k t a w e li d n a i d u m e k , g n i d n a b m e p

( n a k n i g n ii d k a d it g n a y r a n i

s strayradiaiton) .Berkasi n ikemudian didispersikan u

a t a a m s ir p i u l a l e

m gratitng .Dengan melewatkannyamelalu islti ,sinart ersebu t a

p n a k s u k o fi d t a p a

d dadetekto ryang akan mengubah berka ssina rmenjad isinya l

h e l o m a k e ri d a y n t u j n a l e s g n a y k ir t s

il recorder (Khopkar ,1984 .) Beberapa nlia i s

u g u g i s n e u k e r

f -gugusf ungs idapa tdiilha tda irt abe l2.

Tabe l2 .Frekuens iGugus-Gugu sFungsi(Hermanto,2008)

s u g u

G Fungsi PanjangGelombang Frekuensi( cm-1₎

O- HAlkoholf/eno l s

a b e b

Asamkarboksliat

Hyangt eirkat

4 7 ,

2 - 92 ,7 0 7 , 3 - 04 ,

2 8 ,

2 - 23 ,1

0 8 5

3 -3650 0 0 5

2 -2700 0 1 2

3 -3550

, r e m ir p a n i m A H N

a d i m a n a d r e d n u k e

s 6 - 5,10 6 ,4 3140-3320

a k l A H

C n a

Alkena

Alkuna

Aromaitk

7 3 ,

3 - 03 ,5 3 2 ,

3 - 23 ,3 3 0 , 3

0 3 , 3 ~

0 5 8

2 -2960 0 1 0

3 -3095 0 0 3 3

0 3 0 3 ~ H

C 2 Bending 6 ,83 1465

H

C 3 Bending 6 - 7,90 7 ,2 1450-1375

a n u k l A C C

Alkena

Aromaitk

2 4 ,

4 - 64 ,7 5 9 ,

5 -6 6, 1 5 2 , 6 ~

0 9 1

2 -2260 0 2 6

1 -1680 5 7 4

1 -1600 d

i h e d l A O = C

Keton

Asam

Este r

Anhid irda

5 7 ,

5 - 15 ,8 9 7 ,

5 - 75 ,9 9 7 ,

5 - 75 ,8 1 7 ,

5 - 65 ,8 2 5 ,

5 - 85 ,6

0 2 7

1 -1740 5 7 6

1 -1725 0 0 7

1 -1725 0 2 7

1 -1750 0 6 7

1 -1181 ti

rt i N N

C 4 - 0,35 5 ,0 2000-3000

O

N 2 Nirto 6 - 7,06 6 ,6 1500-1650

0 5

i rt e m o t o f o rt k e p s n a t a l a r e p t i n u n u p a d

A infra merah meilput i sistem

: t u k ir e b i a g a b e s n a t a l a r e p

.

a Sumbe rIradiasi

i s a i d a r

I inframerahbiasanyadihaslikanolehpemjia rNerns tdanGlobular .

k a p u r e m r a l u b o l G r a ji m e

P an batang siilkon karbida yang dipanas ihingga suhu

0 0 2

1 0_{C ,sehingga memancarkan riadiasi konitnu pada daerah j1-4}

_P

_m

_{.Pemjia r}

g n a y a d i s k o m u ir e tt y n a d m u i n o k ri s i r a d g n u k e c g n a t a b n a k a p u r e m t s n r e N

0 0 5 1 u h u s a g g n i h i s a n a p i

d 0_{Cdenganarus ilstirk.}

.

b Monokromator

t a l a , r a u l e k h a l e c n a d k u s a m h a l e c m e t s i s i r a d i ri d r e t r o t a m o r k o n o M

k u t n u n i m r e c a p a r e b e b n a d , a m s ir p u a t a i s k a r fi d i s i k a p u r e b g n a y i s r e p s i d n e p

.r a n i s s a k r e b n a k s u k o f m e m n a d n a k l u t n a m e m

.

c Detektor

n e m n r e d o m t a l a i r a d r a s e b n a i g a b e

S ggunakan detekto rpanas .Detekto r

r a n i s i s k e t e d n e m k u t n u s a n a

p infra merah yatiu ,termokope ,bolomete rdan se l

n a k l u b m it i d g n a y n a s a n a m e p k e f e n a k r a s a d r e b a jr e k e b i n i r o t k e t e d a g it e K . y a l o G

r a n i

s infra merah. Diagram spekrtofotomete rInfra merah dapa tdiilha t pada

r a b m a

g 1 0d ibawahi n:i

1 r a b m a

G 3. DiagramSpekrtofotometerI nframerah( FessendenandFessenden , )

6 8 9 1

4 5

.

d Interface .Befrungs i untuk mengi irmkan sampe ldar iGC ke MS dengan l

e p m a s n a g n a li h e k n a k l a m i n i m e

m saa tpengi irman.

.

e Sumberi on ( IonSource,)t empatt ejradinyaprosesi onisas idar imoleku lyang n o i k u t n e b r e t n a d n o rt k e l e u t a s n a g n a li h e k n a k a t u b e s r e t l u k e l o m , p a u a p u r e b

n o rt k e l e u t a s p a k g n a n e m l u k e l o m , n i a l s e s o r P . fi ti s o p n a t a u m r e b l u k e l o m

g e n n a t a u m r e

b a it.f

.f Pompavakum (Vacuum Pump) .Pompavakum itngg iuntuk mengurang idan h a d n e r m u k a v a p m o p n a d s i s il a n a t a a s S M a d a p n a n a k e t n a k n a h a tr e p m e m

. S M r a u l a r a d u n a n a k e t i g n a r u g n e m k u t n u

.

g Penganailsi smassa( Mas sAnalyzer) .Susunan ala tuntuk memisahkan i on- ion dengan perbandingan massa terhadap muatan yang berbeda .Penganailsis

t a p a d a tr e s l i c e k g n a y a s s a m h i s il e s n a k a d e b m e m t a p a d s u r a h a s s a m

.i g g n it g n a y n o i s u r a n a k li s a h g n e m

.

h Detektor .Peka terhadap komponen-komponen yang terpisahkan d i dalam

u g n e m a tr e s m o l o

k bah kepekaannya menjad isinya l ilstirk .Kua tlemahnya

i s a rt n e s n o k a d a p n a k u b n a d l e p m a s a s s a m n a ri l a u j a l a d a p g n u t n a g r e b l a y n i s

. g n a j n u n e p s a g l e p m a s

Gambar14 .DiagramAil rGC- SM .

5 5 I

I I B A B

N A I T I L E N E P I G O L O D O T E M

n a it il e n e P t a p m e T n a d u t k a W . 1 . 3

i n i n a it il e n e

P dliaksanakan pada bulan Juil-Oktober 2010 . Peneilitan

n a d p o t o s I i g o l o n k e T i s a k il p A t a s u P i d t a p m e tr e

b Iradia si(PATIR )BadanTenaga

n a t a l e S a tr a k a J t a m u J r a s a P ) N A T A B ( l a n o i s a N r il k u

N danLaborato irumPangan

. a tr a k a J h a ll u t a y a d i H f ir a y S N I U u d a p r e T m u ir o t a r o b a L t a s u P

n a h a B n a d t a l A . 2 . 3

t a l

A -ala tyang digunakan dalam peneilitan ini ,yatiu kamera , riadiato r

m m a

G aI RKA ,spekrtofotomete rGenesys20 ,kuvet ,E lrenmeye,ri nkubator ,oven ,

d e R a rf n I m r o f s n a r T r e i r u o

F (FTIR ) Spectrum One Perkin Elmer , Ga s a

r g o t a m o r h

C p Mas sSpecrtomete r(GC-MS )Shimadzu QP 2010 ,Min iProtein ,

o tt A k r e m s i s e r o f o rt k e l E l e

G p H mete rmerk Hanna i nsrtument ,ke tras l akmus ,

, i s k a e r g n u b a t ,r u k u u b a l , e g u fi rt n e s ,r u k u s a l e g , r u k u t e p i p , s k e tr o

v breake rglas ,s

, r a tr o m , X A E R 5 4 1 2 E T s u ir o tr a S k it il a n a n a g n a b m it , e t a l p t o

h dan sairngan

) h s e m 0 0 1 ( m m 2 , 0 n a r u k u r e b

n a h a

B -bahan yang digunakan dalam peneilitan i ni ,adalah batubara ilgni t

g n a p a k t a l o s i , n a t a l e S a r e t a m u S i r a

d Penicliilum sp .hasi lseleks ioleh Kuraesin m

u i d e m , ) 9 0 0 2

( Sabouraud DextroseBroth ( BSD ) ,ketra sWhatman No.1 ,HNO3

t a k e

p , pele tKB ,r l arutan standa rBovine Serum Albumin (BSA) ,NaOH ,larutan

y r w o

L I ( aN 2CO3 2% dalam NaOH 0,1 N ,KNa tatra t2,7% ,CuSO4 2 %) dan

6 5

y r w o

L II(Fo iln dan aquades 11 ,): reagen elek rtoforesi sSDS PAGE (Lamprian

,)

4 standa rmarke rproteinBioraddanakuade .s

d o t e M . 3 .

3 olog iPeneilitan

il i r e t S n a d n a p a i s r e P . 1 . 3 .

3 sas iAlat

t a l

A -ala t gela s yang digunakan dibersihkan, lalu disterlik an dengan

C º 1 2 1 u h u s a d a p f a l k o t u a n a k a n u g g n e

m pada tekanan 1 atm selama 15 menti .

. % 0 7 l o h o k l a n a k a n u g g n e m n a g n e d n a k li r e t s i d s a n a p n a h a t k a d it g n a y n a t a l a r e P

u t a B k u b r e S n a p a i s r e P . 2 . 3 .

3 bara

s i n e j a g it i r a d i ri d r e t i n i n a it il e n e p m a l a d n a k a n u g i d g n a y t i n g il l e p m a S

a p n a t ti n g il ( h a t n e m t i n g il u ti a y , ti n g

il riadiasidan pengasaman)sebaga ikon rtol ,

l i s a h t i n g

il riadiasi dan ilgni thasi l pengasaman .Ligni t mentah didapa t dar i

i d n a g n a b m a tr e

p SumateraSelatan .Ligni tmentahdihaluskandenganmo tra,rl alu

n a k a n u g g n e m g n ir a s i

d sa irngan dengan ukuran 70 mesh (kurang dar i0,2 mm )

. a r a b u t a b k u b r e s i d a j n e m a g g n i h

3 .

3 3. . IradiasiLigntidenganSinarGamma

Serbuk ilgnti diitmbang sebanyak 5 g selanjutnya dimasukkan ke dalam

k it s a l

p polyetlien dan dtiutup dengan menggunakan sealer . Batubara lalu i

d riadiasidengan dosis 10 kGyselama30 menti id riadiato rIRKA-Pusa tApilkas i

n a d p o t o s I i g o l o n k e

T Iradiasi(PATIR )BATAN.

d a r a b u t a B n a m a s a g n e P . 4 . 3 .

3 enganAsamNtirat( HNO3)

e k a r a b u t a b l e k it r a p n a k h a b m a n e m a r a c n a g n e d n a k u k a li d m a s a n a u k a lr e P

a m a l e s i s a b u k n ii d n a d ) t a rt i n m a s a L m / a r a b u t a b g 2 ( t a rt i n m a s a L /l o m 8 , 0 m a l a d

s e d a u q a n a k a n u g g n e m n a g n e d n a k u k a li d n a i c u c n e P . g n a u r u h u s a d a p m a j 2 1

7 5

i a p m a

s p H flirta tmenjad inertal .Pengukuran pH dengan menggunakan ketra s

. s u m k a

l Paritke lbatubara hasi lpengasaman dikeirngkan dengan oven pada suhu

0

6 o_{C selama 48 jam dan lalu disimpan pada pendingin pada suhu 4}o_{C sampa i}

n a a b o c r e p k u t n u n a k a n u g i d k a d n e

h biosolubiilsas ibatubara.

. 3 .

3 5 .PembuatanMediumSDB( SabouraudDextroseBroth)

Diitmbang30g SDBdalam1Laquades tkemudiandimasukkankedalam

g n i s a m L m 0 5 2 r e y e m n e lr E

3 -masing 100 mL selanjutnya d itutup dengan

1 2 1 t a l k o t u a i d n a d l i o f m u i n u m u l

a o_{Cs elama15meni.t}

. 3 .

3 6 .Produks iCrudeExtrac tEnzimEkstraselulerPenicliilumsp.

t a l o s

I Penicliilums p. yangdriemajakanpadacawanpet ir ,diinkubas ipada l ir e t s s e d a u q a L m 5 k a y n a b e S . a r o p s n a k li s a h g n e m i a p m a s g n a u r u h u s

e b g n a y i rt e p n a w a c m a l a d e k n a k k u s a m i

d irsii nokulums poraPenicliilums .p,l alu a

r o p s m u l u k o n i L m 1 k a y n a b e S . e s o n a u t n a b n a g n e d s a p e li d a r o p

s Penicliilums p.

m u i d e m L m 0 3 i s ir e b g n a y r e y e m n e lr E g n u b a t m a l a d e k n a k k u s a m i

d SBD .

n a i d u m e

K ,sebanyak 2% batubara ilgni tmentah dimasukkan ke dalam medium

t u b e s r e

t karenaPenicliilums . p tumbuhdenganadanyabatubara.Kutlu rdiinkubas i ) m m 5 4 , 0 ( r e tl if n a r b m e m n a g n e d g n ir a s i d r u tl u K . ir a h 7 a m a l e s g n a u r u h u s a d a p

n a t u r a l n a d a fi h n a k h a s i m e m k u t n

u crude exrtac t enzim ekrtaseluler . Lalu u

k a li d a y n t u j n a l e

s kan elekrtoforesi sSDS-PAGE untuk mengetahu ienzim-enzim

.i s a s il i b u l o s o i b m a l a d n a r e p r e b g n a y

8 5 .

3 .

3 7 .Anailsi sKuanttia sCrude Extract Enzim Ekstraseluler Penicliilum .sp .

y r w o L e d o t e M n a g n e d

n a d 1 y r w o L n a t u r a l L m 5 , 2 n a k h a b m a ti d L m 5 , 0 k a y n a b e s l e p m a S

L m 5 2 , 0 n a k h a b m a ti d n a i d u m e K . ti n e m 0 1 a m a l e s g n a u r u h u s a d a p i s a b u k n ii d

. ti n e m 0 3 a m a l e s g n a u r u h u s a d a p i s a b u k n ii d n a d s k e tr o v i d , I I y r w o L n a t u r a l

V U r e t e m o t o f o rt k e p s n a g n e d n a r u k u g n e p n a k u k a li d n a i d u m e

K -vi spadapanjang

a b i d n a d m n 0 5 7 g n a b m o l e

g ndingkan dengan larutan standa r Bovin Serum n

i m u b l

A ( AB ). S Pengukuran kuanttia s crude extrac t enzim eksrtaselule r

m u il li c i n e

P sp dliakukan selama 7 har iuntuk menentukan waktu dimana kada r .

n a k li s a h i d i g g n it r e t n i e t o r p

. 8 . 3 .

3 KarakterisitkEnzimEkstraselulerdenganElektroforesis

n a g n e d s i s e r o f o rt k e l e i u l a l e m n a k u k a li d r e l u l e s a rt s k e m i z n e i s a s ir e t k a r a K

S D S n a k a n u g g n e

m -PAGE .Adapunt ahapankejrayangd liakukanantaral ain:

.

1 Preparasis ampe l

u l a l l e p m a s r e f f u b l µ 0 5 n a k h a b m a ti d n a t a n r e p u s l µ 0 3 k a y n a b e S

u s a d a p n a k s a n a p i

d hu 95 °C selama 10 menti .Kemudian sampe ldisenrtfiu s

.t i n e m 0 1 a m a l e s m p r 0 0 0 6 n a g n e d

.

2 Preparas ige lelekrtoforesis

.

a Separaitnggel(10%)

n a g n e d n a k r u p m a c i d % 0 3 d i m a l y r c A l m 6 k a y n a b e

S separaitng

r e ff u b l e

g (1,5 T irs-HCl ,pH 8,8 )sebanyak 4,5m lkemudian akuabide s ,

l µ 0 5 S D S , l m 5 ,

7 amonium persuflate (APS )0,08 m ldan TEMED .l

m 1 0 , 0

0 6 .

3 .

3 9. Biosolubiilsas iBatubara dengan Crude Extrac tEnzim Ekstraseluler m

u il li c i n e

P sp.

g n i s a m n a k h a b m a ti d L m 0 0 1 r e y e m n e lr E 5 2 n a k p a i s i

D -masing 30 mL

. r e y e m n e lr E m a l a d e k t s e d a u q

a Kemudian d tiambahkan ilgni thasi lpengasaman ,

l i s a h t i n g

il riadiasi10kGy ,dan ilgni tmentah( konrtol )masing-masingkedalam7

n a k h a b m a ti D . g 5 1 , 0 k a y n a b e s r e y e m n e lr

E crude extract enzim eksrtaseluler

. L m 3 k a y n a b e

s Dimasukkan ke dalam shaking i ncubator dengan kecepatan 120

m p

r selama satu j am .Pencupilkan sampe lkutlu rdliakukan padameni tke0 ,10 , ,

0

2 30 ,40 ,50 ,dan 60 .Kemudian dipanaskan menggunakan penanga sai rpada

0 5 u h u

s 0_{C selamabeberapadeitk untuk menghen itkan reaks ienzim .Selanjutnya}

n a d n a p a d n e n a k t a p a d n e m k u t n u 1 . o N n a m t a h W s a tr e k n a g n e d g n ir a s i d

C G s i s il a n a n a k u k a li d n a t a n r e p u s k u t n U . n a t a n r e p u

s -MS dan UV- svi sedangkan

5 5 u h u s a d a p n e v o i d a y n t u j n a l e s n a p a d n

e o_{C kemudian didinginkan untuk}

. R I T F s i s il a n a n a k u k a li d

. 0 1 . 3 .

3 Ana ilsisProdukBiosolubiilsas i

.

a Pengukuranp H n a r u k u g n e

P p H betrujuan untuk mengetahu iperubahan deraja tkeasaman

. l e p m a

s Sampe ldiuku rnlia ip H dengan menggunakan p H meter .Selanjutnya

. a y n n a h a b u r e p k if a r g t a u b i d

.

b Anailsi sUV- sv i

t i n g il a r a b u t a b i s a s il i b u l o s o i b l i s a

H dianailsi sdengan spekrtofotomete r

V

U -vi sdengan panjanggelombang 240 nmdan 540 nm .Blankoberupaai ryang

y n a h g n u d n a g n e

m aparitke lbatubarat anpaenzim.

.

c Anailsi sGC- SM

1 6

.

1 Preparasis ampe l

g n i s a m , 1 : 1 n a g n i d n a b r e p n a g n e d n a k r u p m a c i d t u r a l e p n a d n a t a n r e p u

S

: a n a s k e h : a n e z n e b h a l a d a n a k a n u g i d g n a y t u r a l e P . l m 5 k a y n a b e s g n i s a m

e t n a r u p m a C . 1 : 1 : 3 n a g n i d n a b r e p n a g n e d r e t e l it e i

d rsebu tdimasukkan ke

g n o r o c m a l a

d pisah lalu dikocok sampa ibercampu rkemudian didiamkan

i a k a p i d s a t a e s a f , h a w a b n a d s a t a e s a f k u t n e b r e t i a p m a s t a a s a p a r e b e b

a w a y n e s r a d a k n a k u t n e n e m n a d a w a y n e s s i n e j i s a k if it n e d i g n e m k u t n u

a r a b u t a b i s a s il i b u l o s o i b l i s a

h ilgn ti .

.

2 Anailsis

n a g n e d l i b m a i d ) s a t a n a s i p a l( l e p m a s L m

1 microsyringedandiinjeksikan

C G m a l a d e

k -MS QP .2010 Shimadzu Japan .Kondis ipemisahan yang

h a l a d a l e p m a s s i s il a n a m a l a d n a k a n u g i

d sepetr iterdapa tdalam tabe l2

.i n i t u k ir e b

l e b a

T 3.Kondis iAnailsi sGC- SM .

i s a k if i s e p

S Keterangan

t a l a e p i

T G -C MSQP2010

m o l o

K (RTX-1MS )Restex

m o l o k s i n e

J Nonpolar

m a i d a s a

F 100%Poilmethyls lioxane

k a r e g a s a

F Heilum

n a ri l a l a t o

T 16,2mL/menti

m o l o k n a ri l

A 1,20mL/menti

n a ri l a l o rt n o k e d o

M Kecepatan ilnea r

n a t a p e c e

K ilnear 40,0cm/deitk m

o l o k u h u

S 60,00_C

i s k e j n i u h u

S 250,00_C

u h u

S detector 260,0C i

s k e j n i e d o

M Splti

l a v r e t n

I 0,50deitk

l a w a z /

m 40,00

ri h k a z /

m 600,00

2 6

.

d Anailsi sFTIR

g il i s g n u f s u g u g n a h a b u r e p i u h a t e g n e m k u t n u n a k u k a li d R I T F s i s il a n

A ni t

l o rt n o

k , ilgnti hasi lpengasaman dan ilgni thasi l riadiasi sebelum dan sesudah

h e l o i s a s il i b u l o s s e s o r

p crude extrac tenzim eksrtaselule rkapang Penicliilum .sp n

a u k a lr e p a r p n a g n e d n u p u a m l o rt n o k k i a b , ti n g il a r a b u t a b n a p a d n

e telrebih

t a u b i d u l u h a

d pellet dalam KB rdengan rasio 1 :100 .Selanjutnya dliakukan

g n i n n a c

s padapanjanggelombang4000-500 cm-1_{denganr esolus i4cm}-1 _.

a j r e K a m e k S . 1 1 . 3 . 3

3 6 V

I B A B N A D L I S A

H PEMBAHASAN

. 1 .

4 Karakterisas iEnzim Ekstraseluler Kapang Penicliilum sp .dengan S

D S s i s e r o f o r t k e l

e -PAGE

S D S s i s e r o f o rt k e l e l i s a

H -PAGE memperilhatkan gambaran karakteirsitk

m i z n

e Penicliilum ps . .Elekrtoforesi sdapa tmengetahu ibera tmolekul( BM )enzim .

r e l u l e s a rt s k

e Dar i hasi l anailsi s SDS-PAGE didapatkan Karakteirsitk enzim

m u il li c i n e

P ps . terdri iata s ilgnin peroksidase dengan B M berkisa rantara 38-47 k aD , mangan peroksidase dengan B M berkisa rantara 3 - 08 5 k aD nd a lakase

a r a t n a r a s i k r e b M B n a g n e

d 5 -3 110 kDa (Akhta re tal. ,1997) .Terdeteks ijuga n

i e t o r

p yangbelumdiketahu ikarakteirsitknya( MB =117,9 ; 333, ; 331, ; 126, ; 723, ;

0 , 1

2 dan 1 k a8,8 D ) .Karakteirsitk enzim-enzim eksrtaselule rhasi lSDS-PAGE

1 r a b m a g a d a p t a h il i d t a p a

d 5.

. 5 1 r a b m a

G Elek rtoforegram Crude Extrac t Enzim Eksrtaselule r

m u il li c i n e

P .s p denganStanda rMarke rBiorad

47