15
Siti Rizka Salehah, 2016
PEMISAHAN DAN PEMURNIAN SENYAWA METIL PIPERAT DARI EKSTRAK METANOL TUMBUHAN CABE JAWA (Piper retrofractum Vahl. ) ASAL JAWA BARAT
Universitas Pendidikan Indonesia | repository.upi.edu | perpustakaan.upi.edu
BAB III
METODE PENELITIAN
3.1 Sampel dan Lokasi Penelitian
Sampel yang digunakan dalam penelitian ini adalah buah Cabe Jawa (Piper
Retrofractum Vahl.) yang dikumpulkan dari kebun percobaan Manoko di
Lembang, Jawa Barat. Lokasi penelitian dilakukan di Laboratorium Riset Kimia
Hayati FPMIPA UPI pada tanggal 02 Maret 2016 hingga 16 Juni 2016.
Identifikasi tanaman Cabe Jawa dilakukan dengan cara determinasi di
laboratorium Departemen Biologi FPMIPA UPI.
3.2 Alat dan Bahan Penelitian
Pada penelitian ini digunakan beberapa peralatan, antara lain : alat-alat
gelas, set peralatan destilasi, vacuum rotary evaporator, set perlatan freeze dryer,
set peralatan Kromatografi Vakum Cair dengan ukuran diameter kolom 7 cm, dan
set instrumen NMR yaitu NMR AGILENT 500 MHz (1H NMR) dan 125 MHz
(13C NMR).
Bahan yang digunakan pada penelitian ini yaitu berbagai pelarut organik
seperti metanol, n-heksana, etil asetat, dan aseton dengan grade teknis (yang
selanjutnya di destilasi) dan pro analisis (p.a). Untuk kromatografi digunakan
berbagai jenis silika gel, antara lain silika gel Merck 60 (70-230 mesh) dan plat
KLT silika gel 60 GF254 dengan ketebalan 0.25 mm.
3.3 Prosedur Penelitian
Pada penelitian ini dilakukan beberapa tahapan yaitu preparasi sampel,
ekstraksi sampel, pemisahan dan pemurnian senyawa, dan karakterisasi penentuan
struktur senyawa dengan metode spektroskopi. Adapun bagan alir dari tahapan
penelitian yang dilakukan yaitu pada gambar 3.1 dan uraian dari tahapan yang
dilakukan adalah sebagai berikut
16
Siti Rizka Salehah, 2016
PEMISAHAN DAN PEMURNIAN SENYAWA METIL PIPERAT DARI EKSTRAK METANOL TUMBUHAN CABE JAWA (Piper retrofractum Vahl. ) ASAL JAWA BARAT
Universitas Pendidikan Indonesia | repository.upi.edu | perpustakaan.upi.edu
Gambar 3.1 Bagan Alir Metode Penelitian
3.3.1 Preparasi Sampel
Sampel herba buah cabe jawa diperoleh dalam keadaan sudah kering dari
kebun percobaan Manoko Lembang, Jawa Barat. Sampel herba buah cabe jawa
kemudian ditimbang untuk mengetahui massa awal dari sampel, lalu herba buah
cabe jawa diserbukkan dengan cara ditumbuk dan diblender.
3.3.2 Proses Ekstraksi
Herba buah cabe jawa
Simplisia buah cabe jawa
Ekstrak buah cabe jawa
Senyawa murni
Struktur senyawa
Diserbukkan
Maserasi dengan metanol
Pemisahan dan pemurnian dengan metode KLT dan KVC
17
Siti Rizka Salehah, 2016
PEMISAHAN DAN PEMURNIAN SENYAWA METIL PIPERAT DARI EKSTRAK METANOL TUMBUHAN CABE JAWA (Piper retrofractum Vahl. ) ASAL JAWA BARAT
Universitas Pendidikan Indonesia | repository.upi.edu | perpustakaan.upi.edu
Sampel buah cabe jawa yang telah diserbukkan kemudian diekstraksi
dengan menggunakan pelarut metanol. Ekstraksi yang dilakukan yaitu dengan
teknik ekstraksi padat-cair dengan metode maserasi. Maserasi dilakukan selama
3x24 jam sebanyak 2 kali. Hasil ekstraksi kemudian disaring menggunakan
corong buchner dan ekstrak tersebut diuapkan pelarutnya menggunakan rotary
evaporator dan dipekatkan menggunakan freeze dryer.
3.3.3 Pemisahan dan Pemurnian
Pemisahan dan pemurnian senyawa diawali dengan uji kromatografi lapis
tipis untuk menentukan eluen yang tepat yang akan digunakan pada proses
pemisahan dengan menggunakan kromatografi vakum cair (diameter kolom yang
digunakan berukuran 7 cm).
3.3.4 Karakterisasi Penentuan Struktur Senyawa dengan Teknik
Spektroskopi
Karakterisasi struktur senyawa dilakukan dengan teknik spektroskopi
menggunakan instrumen 1H NMR dan 13C untuk menentukan struktur senyawa
