BAB I
PENDAHULUAN
1.1. Tujuan Percobaan Praktikum
Pemisahan senyawa dengan metoda High Performance Liquid Chromatography (HPLC).
1.2. Prinsip Kerja
HPLC menggunakkan kolom yang mengandung partikel-partikel kecil-kecil dari fase tetap dan kkarena luas permukaan yang lebih besar dari fase tetap maka sampel dalamHPLC terpisah dengan sangat baik dengan efisiensi yang tinggi. Mekanisme pemisahan yang berbeda dengan cepat dilakukan mengikatkan gugus-gugus kimia yang berbeda pada permukaan partikel silika yang disebut dengan fase terikat. Secara teoritis HPLC itu identik dengan Liquid Solid Chromatography. Liquid Chromatography dan ion Exchange Chromatography.
1.3. Landasan Teori
1.3.1. Separation and Characterization of The Vanillin Coumpound from Soda Lignin
Pendahuluan
Para guineensis Elaesis atau yang biasa dikenal sebagai kelapa sawit diperkenalkan untuk berbagai bagian daerah tropis untuk buah minyak memproduksi. Diperkirakan 2,28 juta ha tanah yang sedang ditanami dengan pohon kelapa sawit di Malaysia.
Selain memproduksi sawit minyak, industri kelapa sawit juga menghasilkan sejumlah besar residu lingo selulosa seperti
sebagai batang, daun dan tandan kosong (TKS). TKS telah diakui sebagai berpotensi menjadi bahan baku alternatif untuk industri kertas dan pulp [2, 3, 4]. Tujuan dari proyek ini adalah untuk mengidentifikasi cara yang lebih efisien mengelola pembuangan lingo selulosa residu dan pada saat yang sama mengubah residu menjadi produk yang bermanfaat seperti lignin.
Sumber utama lignin di Malaysia adalah dari luar negeri dimana awalnya diekstrak dari pohon pinus dan akasia sebagai produk sampingan dari kayu dan industri pulp.
Namun, metode ini kurang efektif karena mata uang asing hilang dalam mengimpor produk asing . Ada kebutuhan untuk mencari alternatif sumber lignin yang dapat berasal dari bahan limbah dan pada saat yang sama membantu melestarikan harta alami untuk masa depan generasi.
Salah satu sumber tersebut adalah kelapa sawit tandan buah kosong (TKS). ini adalah karena jumlah besar TKS dikumpulkan setiap hari lebih dari kelapa sawit 300 pabrik pengolahan yang tersebar di seluruh Malaysia.
Lignin merupakan bahan amorf polifenol yang timbul dari suatu enzim yang dimediasi dehydrogenates polimerisasi monomer tiga fenilpropanoid utama, yaitu coniferyl, sinapyl dan p-coumaryl alkohol. Elemen struktur lignin terkait oleh ikatan karbon-karbon dan eter untuk membentuk tri-dimensi jaringan yang terkait dengan hemiselulosa polisakarida di dalam dinding sel .
Lignin biasanya tidak larut dalam semua pelarut dan hanya dapat mengalami degradasi oleh proses pulping fisik atau kimia di hightemperature dan tekanan tinggi. Reaksi delignifikasi melibatkan pembelahan non-fenolik PO-4 linkage, fenolik a-0-PO-4 keterkaitan dan melepaskan dari yang terkait dengan polisakarida [8, 9].Karena kompleksitas tinggi makromolekul lignin,
lignin perlu untuk diuraikan melalui proses oksidasi untuk monomer, yang memiliki berat molekul lebih rendah sebelum mereka dianalisis.
Oksidasi nitrobenzena digunakan sebagai metode untuk memecah lignin ke monomer sebelum mengidentifikasi mereka menggunakan kromatografi cair kinerja tinggi (KCKT) analisis.
Sebuah penelitian sebelumnya [10] melaporkan bahwa 8 komponen oleh ligninter degradasi.Mereka adalah vanillin , syringaldehyde, 4-hydroxybenzaldehyde, asam syringic, 4 hydroxybenzoic asam, asam vanilat, asam p-coumaric dan asam ferulat.
Diantara 8 senyawa, vanilin ditemukan menjadi komponen utama of soda lignin. Vanili, sebuah komponen utama vanili, banyak digunakan sebagai bahan dalam rasa makanan, dalam farmasi dan sebagai wewangian di parfum dan bau-masking produk .
Dalam studi ini persentase hadir vanillin dalam sampel lignin soda akan ditentukan. Selanjutnya, senyawa vanilin akan dipisahkan dari soda lignin melalui kristalisasi teknik.
Bahan
Kelapa sawit tandan buah kosong (TKS) bahan baku dalam penelitian ini telah diberikan oleh Sabutek (M) Sdn. Bhd, Teluk Intan, Malaysia, sebuah perusahaan lokal yang mengkhususkan diri dalam daur ulang TKS.
Cairan hitam TKS itu dipasok oleh Fakultas Teknologi Industri, Universiti Sains Malaysia (USM). Penelitian ini dilakukan dari Mei 2005 sampai Maret 2006 di Sekolah Ilmu Kimia, Universiti Sains Malaysia (USM).
nitrobenzena oksidasi Oksidasi nitrobenzena dilakukan dengan menambahkan 50 mg lignin sodakering menjadi campuran 7 ml 2M NaOH dan 4 mL nitrobenzena dalam autoklaf baja 15 mL.
Kemudian, otoklaf dipanaskan sampai 165 ° C selama 3 jam dalam penangas minyak termostat dipanaskan. Setelah otoklaf didinginkan sampai suhu kamar, campuran tersebut kemudian ditransfer ke cair-cair ekstraktor untuk ekstraksi kontinyu dengan kloroform (5 x20 ml)· untuk menghapus setiap produk reduksi nitrobenzena nitrobenzena dan berlebih.oksidasi campuran kemudian diasamkan dengan HCl pekat sampai pH 3-4 dan selanjutnya diekstraksi dengan kloroform (5 x 15 mL).
Pelarut dari larutan kloroform kedua kemudian diangkat dengan menggunakan rotary evaporator pada suhu 40 ° C di bawah tekanan dikurangi agar memperoleh nitrobenzena oksidasi campuran. Campuran tersebut kemudian dilarutkan ke dalam dicloromethane dan yang disusun sampai dengan 10 mL. Campuran ini kemudian digunakan sebagailarutan stok untuk kinerja tinggi kromatografi cair (HPLC) analisis [6].
Nitrobenzena Para · campuran oksidasi dianalisa dengan menggunakan metode HPLC. 0.2 mL larutan stok yang dipipet ke dalam labu volumetrik 25 mL asetonitril dan air (1:2 v / v) ditambahkan untuk itu. Sekitar 20 ~ L dari larutan sampel adalahinjectedinto berikutnya HPLC sistem (Shimatzu) dilengkapi dengan kolom ikatan CIS Hypersil (partikelsize5J.11,25 mm x 4,6 mm Ld.) Untuk secara kuantitatif menentukan komponen vanilin sementara yang lain komponen ditentukan secara kualitatif. Asetonitril-air (1:8) yang mengandungasetat 1% asam digunakan sebagai eluen dengan laju alir 2 mL / menit. Eluen ini kemudiandipantau dengan detektor (ultraviolet) UV pada 280 om .
Kristalisasi Proses
Produk oksidasi nitrobenzena digunakan dalam proses ini. Campuran adalah dilarutkan dalam aseton dan disusun sampai dengan 10 mL. Selanjutnya,campuran tersebut dipanaskan sampai 60 ° C untuk 10 menit menggunakan hot plate. Endapan kemudian disaring dan dicuci dengan menggunakan aseton. Kemudian, endapan dianalisis menggunakan Transformasi Fourier infra merah
(FT-IR), inti magnetik resonansi (IH-NMR) dan kromatografi cair kinerja tinggi (KCKT).
Persentase vanillin
Komponen oflignin diperoleh tercantum dalam Tabel 1 dan diberi label menurut abjad pada Gambar 1. Solusi standar untuk setiap komponen yang diharapkan untuk hadir dalam lignin disuntikkan ke dalam 3 konsentrasi yang berbeda, 10 ppm, 100 ppm dan 1000ppm. Ini dilakukan untuk memastikan bahwa solusi untuk setiap komponen yang samapada konsentrasi yang berbeda memiliki waktu retensi yang sama. Dari kromatogram HPLC, 6 komponen yang terdeteksi dalam lignin soda.
Mereka adalah vanilin, syringaldehyde, hydroxybenzaldehyde, 4hydroxybenzoic asam, asam vanilat dan asam syringic. Dari analisis kami menemukan bahwa konsentrasi vanilin dalam 50 mg lignin adalah 0,8032 ppm atau setara dengan1,6 bahkan meskipun hanya ada persentase yang rendah yang hadir vanilin dalam lignin, itu adalah cukup sebagai penelitian menggunakan sampel lignin dari limbah industri, yaitu lindi hitam. Selain itu, penelitian ini bertujuan untuk menghasilkan produk baru dari item yang umumnyadiperlakukan sebagai limbah. Pemisahan proses melalui teknik kristalisasi digunakan untuk memisahkan vanili dari komponen lain yang ada di lignin. Endapan yang diperoleh dari proses ini merilis bau mirip dari jenis yang sama untuk vanilin. Analisis dilakukan untuk menentukan apakah endapan yang diperoleh adalah vanilin. Ini melibatkan penggunaan infra merah (IR) analisis spektrometri untuk menentukan kelompok fungsional hadir dalam mengendap.
Pendekatan ini dipilih sebagai pelet endapan mudah dibentuk dan tidak hancur ketika IR analisis dilakukan di atasnya. Puncak terbentuk dari IR analisis juga lebih mudah untuk ditelusuri dan diamati. Karakterisasi · fungsional untuk sampel endapan ini dilakukan pada 4000-400 cm-! rentang frekuensi.
Spektrum IR jelas menunjukkan karakterisasi fungsi utama beberapa kelompok dalam struktur vanilin. Sebuah spektrum IR khas sampel endapan dari proses kristalisasi ditunjukkan pada Gambar 2. Band yang kuat dan luas pada 3471,25 cm-I adalah karakteristik dari kelompok OH atau senyawa fenolik.
Sebuah bagian dari ini, C-H peregangan cincin aromatik berada di band cm'l 3230,12. Namun, frekuensitidak menunjukkan puncak yang sangat jelas. Band di 1636,19 cm'l sesuai dengan yang karbonil yang kelompok (C == O). Band Peregangan di 1399.83cm, 1 dan 1338,6 em ') merupakan karakteristik OFC-H getaran pada gugus metil. Sedangkan getaran untuk C == C pada cincin aromatik berada pada 692,77 cm'l pita [14]. Gambar 3 menggambarkan struktur vanilin(4-hidroksi-3methoxybenzaldehyde).
Dengan demikian, spektrum dari produk endapan dari kristalisasi diidentifikasi sebagai vanilin sebagai kelompok fungsi utama dari struktur adalahvanilin terungkap melalui analisis IR.
Endapan kemudian dianalisis menggunakan kromatografi cair kinerja tinggi (KCKT) untuk menegaskan kembali hasil sebagai dicirikan oleh analisis IR.
Endapan adalah dikumpulkan dan dilarutkan dalam larutan aseton dengan air (1:2 v/v) bertindak sebagai pelarut sebelum analisis dilakukan.
Akhirnya, 1,0 ppm sampel pekat disuntikkan ke sebuah mesin HPLC. Kromatogram menunjukkan puncak pada waktu retensi <Rt) yang hampir sama dengan waktu retensi standar vanilin dengan konsentrasi yang sama. Gambar 4 menyajikan kromatogram HPLC dari sampel vanilin dan standar vanilin.
Spektrum FT-IH-NMR diperoleh dari operasi Broker Avance 300 di modus FT pada 400 MHz dalam kondisi jumlah proton dipisahkan. Spektrum itu direkam pada 40° C dari 200 mg sampel vanilin dilarutkan dalam 1 mL CDChsetelah 3.000scan. Sebuah ° 90 pulsa membalik sudut,seorang 26,6 lebar JLS pulsa danwaktu akuisisi 1.74s dipekerjakan. Tidak ada perbedaan yang signifikan dalam struktur vanilin diendapkan dari proses kristalisasi dan vanilin standar berdasarkan LH NMRanalisis(Gambar 5).
Tidak lengkap pembubaran sampel karena mungkin dari tinggi tak terduga sinyal / noise ratio. Puncak menunjukkan bahwa pergeseran kimia untuk kedua vanillins sangat serupa.
1.3.2. Kromatografi
Kromatografi berasal dari kata chroma (warna) dan graphein (penulisan), Merupakan suatu teknik pemisahan fisika yang memanfaatkan perbedaan yang kecil dari sifat-sifat fisika komponen yang akan dipisahkan. Teknik kromatografi telah dikembangkan dan telah digunakan untuk memisahkan dan mengkuanntifikasi bernagai macam komponen yang kompleks, baik komponen organic maupun komponen anorgsnik. Kromatografi adalah teknik pemisahan fisika suatu campuran zat-zat kimia yang berdasarkan pada perbedaan perpindahan masing-masing komponen campuran yang terpisah pada fase diam yang dipengaruhi pergerakan fase yang bergerak. Beberapa sifat fisika umum dari molekul yang dipakai sebagai asas tteknik pemisahan kromatografi adalah:
1. Kecenderungan molekul untuk teradsorbsi oleh partikel-partikel padatan yang halus.
2. Kecenderungan molekul untuk melarut pada fase cair. 3. Kecenderungan molekul untuk teratsirikan.
1.3.3. Jenis-jenis Kromatografi
Kromatografi dapat dibedakan atas berbagai macam tergantung pada pengelompokannya. Berdasarkan pada mekanisme pemisahannya, kromatografi dibedakan menjadi:
1. Partisipasi Kromatografi 2. Adsorbsi Kromatografi 3. Ion Exchanger Kromatografi 4. Gel kromatografi
Berdasarkan alat yang diigunakan, kromatografi dibedakan menjadi: 1. Kromatografi kertas
2. Kromatogari Lapis tipis yang keduanya sering disebut dengan kromatoggrafi planar
3. Colom Kromatografi
1.3.4. HPLC
HPLC secara mendasar merupakan perkembangan tingkat tinggi dari kromatografi kolom. Selain dari pelarut yang menetes melalui kolom dibawah grafitasi,didukung melalui tekanan tinggi sampai dengan 400 atm. Ini membuatnya lebih cepat. HPLC memperbolehkan penggunaan partikel yang berukuran sangat kecil untuk material terpadatkan dalam kolom yang mana akan memberi luas permukaan yang lebih besar berinteraksi antara fase diam dan molekul-molekul yang melintasinya. Hal ini memungkinkan pemisahan yang lebih baik dari komponen-komponen dalam campuran. Perkembangan yang lebih luas melalui kromatografi kolom mempertimbangkan metode pendeteksian yang dapat digunakan. Metode-metode ini sangat otomatis dan sangat peka.
Kolom dan pelarut.
Membingungkan, ada dua perbedaan dalam HPLC, yang mana tergantung pada polaritas relatif dari pelarut dan fase diam.
Fase normal HPLC
Ini secara esensial sama dengan apa yang sudah anda baca tentang kromatografi lapis tipis atau kromatografi kolom. Meskipun disebut sebagai dengan partikel silika yang sangat kecil dan pelarut non polar misalnya heksan. Sebuah kolom sederhana memiliki diameter internal 4.6 mm (dan mungkin kurang dari nilai ini) dengan panjang 150 sampai 250 mm.Senyawa-senyawa polar dalam campuran melalui kolom akan melekat lebih lama pada silika yang polar dibanding degan senyawa-senyawa non polar. Oleh karena itu, senyawa yang non polar kemudian akan lebih cepat melewati kolom
Fase balik HPLC.
Dalam kasus ini, ukuran kolom sama, tetapi silika dimodifikasi menjadi non polar melalui pelekatan rantai-rantai hidrokarbon panjang pada permukaannya secara sederhana baik berupa atom karbon 8 atau 18. Sebagai contoh, pelarut polar digunakan berupa campuran air dan alkohol seperti metanol.
Dalam kasus ini, akan terdapat atraksi yang kuat antara pelarut polar dan molekul polar dalam campuran yang melalui kolom. Atraksi yang terjadi tidak akan sekuat atraksi antara rantai-rantai hidrokarbon yang berlekatan pada silika (fase diam) dan molekul-molekul polar dalam larutan. Oleh karena itu, molekul-molekul polar dalam campuran akan menghabiskan waktunya untuk bergerak bersama dengan pelarut.Senyawa-senyawa non polar dalam campuran akan cenderung membentuk atraksi dengan gugus hidrokarbon karena adanya dispersi gaya van der Waals. Senyawa-senyawa ini juga akan kurang larut dalam pelarut karena membutuhkan pemutusan ikatan hydrogen sebagaimana halnya senyawa-senyawa tersebut berada dalam molekul-molekul air atau metanol misalnya. Oleh karenanya, senyawa-senyawa ini akan menghabiskan waktu dalam larutan dan akan bergerak lambat dalam kolom.Ini berarti bahwa molekul-molekul polar akan bergerak lebih
cepat melalui kolom.Fase balik HPLC adalah bentuk yang biasa digunakan dalam HPLC.
Diagram alir HPLC
Injeksi sampel.
Injeksi sample seluruhnya otomatis dan anda tidak akan mengharapkan bagaimana mengetahui apa yang terjadi pada tingkat dasar. Karena proses ini meliputi tekanan, tidak sama halnya dengan kromatografi gas.
Waktu retensi.
Waktu yang dibutuhkan oleh senyawa untuk bergerak melalui kolom menuju detektor disebut sebagai waktu retensi. Waktu retensi diukur berdasarkan waktu dimana sampel diinjeksikan sampai sampel menunjukkan ketinggian puncak yang maksimum dari senyawa itu. Senyawa-senyawa yang berbeda memiliki waktu retensi yang berbeda. Untuk beberapa senyawa, waktu retensi akan sangat bervariasi dan bergantung pada: tekanan yang digunakan (karena itu akan berpengaruh pada laju alir dari pelarut). kondisi dari fase diam (tidak hanya terbuat dari material apa, tetapi juga pada ukuran partikel), komposisi yang tepat dari pelarut, temperatur pada kolom.
Itu berarti bahwa kondisi harus dikontrol secara hati-hati, jika anda menggunakan waktu retensi sebagai sarana untuk mengidentifikasi senyawa-senyawa.
Detektor.
Ada beberapa cara untuk mendeteksi substansi yang telah melewati kolom. Metode umum yang mudah dipakai untuk menjelaskan yaitu penggunaan serapan ultra-violet.Banyak senyawa-senyawa organik menyerap sinar UV dari beberapa panjang gelombang. Jika anda menyinarkan sinar UV pada larutan yang keluar melalui kolom dan sebuah detektor pada sisi yang berlawanan, anda akan mendapatkan pembacaan langsung berapa besar sinar yang diserap.
Jumlah cahaya yang diserap akan bergantung pada jumlah senyawa tertentu yang melewati melalui berkas pada waktu itu. Anda akan heran mengapa pelarut yang digunakan tidak mengabsorbsi sinar UV. Pelarut menyerapnya! Tetapi berbeda, senyawa-senyawa akan menyerap dengan sangat kuat bagian-bagian yang berbeda dari specktrum UV. Misalnya, metanol, menyerap pada panjang gelombang dibawah 205 nm dan air pada gelombang dibawah 190 nm. Jika anda menggunakan campuran metanol-air sebagai pelarut, anda sebaiknya menggunakan panjang gelombang yang lebih besar dari 205 nm untuk mencegah pembacaan yang salah dari pelarut.
Output akan direkam sebagai rangkaian puncak-puncak, dimana masing-masing puncak mewakili satu senyawa dalam campuran yang melalui detektor dan menerap sinar UV. Sepanjang anda mengontrol kondisi kolom, anda dapat menggunakan waktu retensi untuk membantu mengidentifikasi senyawa yang diperoleh, tentunya, anda (atau orang lain) sudah mengukur senyawa-senyawa murninya dari berbagai senyawa pada kondisi yang sama. Anda juga dapat menggunakan puncak sebagai jalan untuk mengukur kuanti?tas dari senyawa yang dihasilkan. Mari beranggapan bahwa tertarik dalam senyawa tertentu, X. Jika anda menginjeksi suatu larutan yang mengandung senyawa murni X yang telah diketahui jumlahnya pada instrumen, anda tidak hanya dapat merekam waktu retensi dari senyawa tersebut, tetapi anda juga dapat menghubungkan jumlah dari senyawa X dengan puncak dari senyawa yang dihasilkan.
Area yang berada dibawah puncak sebanding dengan jumlah X yang melalui detektor, dan area ini dapat dihitung secara otomatis melalui layar komputer. Area dihitung sebagai bagian yang berwarna hijau dalam gambar (sangat sederhana). High-performance liquid chromatography ( HPLC) adalah suatu format kolom chromatography yang sering digunakan di ilmu kimia organik dan biokimia. HPLC digunakan untuk memisahkan komponen dari suatu campuran menggunakan berbagai interaksi kimia antara unsur yang sedang dianalisa dan chromatography column. RP-HPLC bekerja dengan prinsip hydrophobic interaksi yang diakibatkan oleh kakas tolak antara suatu bahan pelarut non-polar, analyte non-polar, dan fase
keseimbangan non-polar.
HPLC, yang dalam bahasa Indonesia berarti ‘Kromatografi Cair Kinerja Tinggi’ memiliki fasa gerak cair dan fasa diam cair amupun padat. Laju aliran fasa gerak pada HPLC ini dipercepat dengan pompa bertekanan tinggi. Sebelum 1970′s, hanya sedikit chromatographic yang di pakai oleh masyarakat umum, hanya tersedia untuk ilmuwan laboratorium. Selama 1970, kebanyakan separasi kimia dilaksanakan menggunakan berbagai teknik mencakup open-column chromatography, kertas chromatography, dan thin-layer chromatography. Bagaimanapun, kromatografi ini tidak cukup untuk hitungan resolusi dan campuran
antara campuran yang serupa. Selama waktu ini, cairan tekanan chromatography mulai untuk digunakan untuk mengurangi flowthrough waktu, kemudian mengurangi pemurnian jam campuran yang sedang terisolasi oleh kolom chromatogaphy. Bagaimanapun, laju alir tidaklah konstant, dan pertanyaan apakah menjadi lebih baik untuk mempunyai tekanan tetap atau laju alir tetap diperdebatkan.
Sekarang ini, orang mempunyai pilihan dalam mempertimbangkan jenis kolom untuk pemisahan campuran, seperti halnya berbagai detektor untuk menghubungkan dengan HPLC dalam rangka mendapatkan analisa optimal (menyangkut) campuran itu. Kita berharap tinjauan ulang ini akan menyediakan suatu acuan semua tingkat HPLC para pemakai yang akan mampu menemukan jawab cepat mengenai permasalahan permasalahan HPLC. Walaupun HPLC secara luas dianggap sebagai suatu teknik utama untuk biotechnological, biomedical, dan riset biokimia seperti halnya untuk industri yang berkenaan dengan farmasi, bidang ini saat ini berisikan hanya sekitar 50% Hplc Users. Sekarang Ini HPLC digunakan oleh berbagai bidang yang mencakup kosmetik, energi, makanan, dan industri. . Kromatografi Cair Kinerja Tinggi (KCKT) atau High Pressure Liquid Chromatography (HPLC) merupakan salah satu metode kimia dan fisikokimia. KCKT termasuk metode analisis terbaru yaitu suatu teknik kromatografi dengan fasa gerak cairan dan fasa diam cairan atau padat. Banyak kelebihan metode ini jika dibandingkan dengan metode lainnya. Kelebihan itu antara lain:
• mampu memisahkan molekul-molekul dari suatu campuran • mudah melaksanakannya
• kecepatan analisis dan kepekaan yang tinggi
•dapat dihindari terjadinya dekomposisi / kerusakan bahan yang dianalisis • Resolusi yang baik
• dapat digunakan bermacam-macam detektor • Kolom dapat digunakan kembali
BAB II
PROSEDUR KERJA
2.1. Alat dan Bahan
a. Alat yang digunakan
Seperangkat alat Hight Liquid Performance Chromatography yang dilengkapi: - Wadah fase gerak
- Pompa - Unit injeksi - Kolom - Detektor - Corong buchner - pump reset
b. Bahan yang digunakan
- Campuran CH3-Buffer KH2PO4 0,005 M, pH 4,8 perbandingan 12:88
2.2. Prosedur Kerja
Cara pembuatan fase gerak yaitu :
- Fase gerak dicampur (campuran CH3-Buffer KH2PO4 0,005 M, pH 4,8
- Disaring dengan Buchner filter.
- Digasing dengan ultrasonik cleaner untuk menghilangkan gas pada fase gerak.
Set semua alat
- Kecepatan aliran pada 0 ml permenit - Tekanan pada 0 kgf/cm2.
- Diset UV-Visible spektrofotometry detector pada panjang gelombang 254 nm.
- Dipakai lamp D2.
- Ditekan tombol absorbansi dan reson standart (kepekaan absorbabsi 0,02 ) - Dihubungkan sisitem dengan arus listrik.
- Power detector UV-Visible spektrofotometry ke posisi ON. - Power recorder ke posisi ON.
- Drain valve diputar ke kiri.
- Pada ujung pipa pembuangan dipasang disposable syringe. - Flow rate diatur pada 5 ml/menit.
- Pump pada posisi ON sambil diisap dengan disposible syringe untuk mempece pat keluarnya udara dari pada cairan pembawa.
- Setelah 10 ml pump dimatikan.
- Dispossible syringe dilepaskan dari ujung pipa. - Ujung pipa dimasukkan ke dalam erlenmeyer.
- Pump ke posisi ON lagi untuk memastikan udara tidak ada lagi dalam pipa aliran.
- Lalu pimp diset ke OFF.
- Katup pembuangan ditutup (diputar ke arah kanan). - Lalu flow rate dinaikkan ke 1 ml/menit.
- Hidupkan pump, tekanan akan naik sampai kira-kira 1 X 100 kgf/cm2,
cairan carrier mengalir injector
- Analisa dilakukan pada flow rate 2 ml/menit Mencheck stabil tidaknya alat
- Diturun kan posisi pen. - Posisi drive ke ON. Injeksi Fase Gerak
- Ditekan tombol ZERO. - Ditekan tombol MARK.
- Untuk injeksi, injektor diputar ke posisi LOAD.
- Dimasukkan fase gerak ke dalam injektor ke posisi inject. - Dihidupkan chart drive.
Injeksi Serum
- Ditekan tombol ZERO. - Ditekan tombol MARK.
- Injektor diputar ke posisi LOAD.
- Dimasukkan serum ke dalam injektor dengan syringe. - Injektor diputar ke posisi inject.
- Dihidupkan chart drive. Mematikan Alat
- Recorder ke posisi OFF.
- UV-Visible spektrophotometry ke posisi OFF. - RID ke posisi OFF.
- Pump ke posisi OFF.
- Flow rate diturunkan 1 ml/menit.
- Pump dihidupkan lagi kemudian diatur ke OFF lagi. - Flow rate diturunkan perlahan-lahan hingga 0 ml/menit. - Lalu kolom dicuci dengan CH3OH.
BAB III
GAMBAR RANGKAIAN
3.1. Gambar Peralatan
Seperangkat alat Hight Liquid Performance Chromatography (HPLC).
3.3. Keterangan Gambar Rangkaian
1. Wadah fase gerak 2. Pompa
3. Unit injeksi 4. Kolom
BAB IV
DATA PENGAMATAN
Tabel Analisis Obat-obatan
Kadar Paracetamol No Konsentrasi std Paracetamol (ppm) % Intensitas Area X Y 1 1 758 2 2 1540 3 3 2270 4 4 3035 5 5 3775 Kadar Sampel No Berat sampel (gr) Nama sampel Intensity Area 1 0.5 Bodrex 3136 2 0.5 Mixagrip 1930 3 0.5 Panadol 4445 4 0.5 Poldanmig 4510
BAB V
PENGOLAHAN DATA
No Konsentrasi std Paracetamol X % Intensitas Area Y XY X2 Y2 1 1 758 758 1 574564 2 2 1540 3080 4 2371600 3 3 2270 6810 9 5152900 4 4 3035 12140 16 9211225 5 5 3775 18875 25 14250625 Σ 15 11378 41663 55 31560914 a. Kurva Kalibrasi
b.1. Koefisien korelasi dan determinasi
X
=
3=
=
=
752,9
= a + bX
Ȳ
a =
Ȳ
– b X=
2275,6 – 752,9(3)
=
16,9
Maka dari hasil perhitungan yang diperoleh didapat persamaan regresi Y = a + bX menjadi Y = 16,9 + 752,9X.
b.2. Koefisien korelasi dan determinasi
R =
=
=
R
= 0,9999
R
2=
0,9998
Y = a + bX
X =
Untuk BodrexX =
=
4,14 ppm Untuk MixagripX =
= 2,54 ppm
Untuk PanadolX =
= 5,88 ppm
Untuk PoldanmigX =
= 5,97 ppm
b.4. Konsentrasi Paracetamol (% )%
=
x 100 %
Untuk Bodrex%
=
x 100 %
= 0,828 %
Untuk Mixagrip%
=
x 100 %
= 0,508 %
Untuk Panadol%
=
x 100 %
= 1,176 %
Untuk Poldanmig%
=
x 100 %
= 1,194 %
BAB VI
KESIMPULAN DAN SARAN
Dari data percobaan spektofotometer HPLC yang telah dilakukan dapat diambil kesimpulan bahwa :
1. Dari hasil perhitungan Koefisien Korelasi Konsentration -vs- Emisi diketahui bahwa hubungan antar variable kuat yaitu semakin besar konsentrasi unsure dalam larutan maka semakin banyak sinar yang diabsorbsi oleh unsure tersebut. Dimana didapat harga R = 0,9999 dan R2 = 0,9998
2. Hasil perhitngan persamaan regresi linier sederhana dimana Y = a + bX adalah Y = 16,9 + 752,9X.
3. Semakin besar luas permukaan sampel maka kensentrasinya semakin besar pula sreta emisinya semakin besar.
4. Konsentrasi paracetamol dalam sampel yang paling tinggi adalah pada obat Poldanmig yaitu sebesar 5,97 ppm.
5. Semakin besar luas area sampel maka semakin besar pula konsentrasinya.
6.2. Saran
Dalam melakukan praktikum,harus lebih teliti dan hati-hati agar diperoleh hasil yang maksimal.
Ir.Adil Barus. 2012. Chemistry Diktat Kimia Analisa Instrument. PTKI. Medan
Juna, Sihombing. 2012. Penuntun Praktikum Kimia Analisa Instrument. PTKI. Medan
Mastuti, Retno. 2010. Identifikasi Pigmen Betasianin Pada Beberapa Jenis
