دزی یقودص دیهش یکشزپ مولع هاگشناد یشهوژپ یملع هلجم

(1)

ِلجه يولع يطٍّضپ

ُاگطًاد مَلع يكضشپ ديْض يقٍدص شي د Sciences

Medical of University Sadoughi

Shahid of Journal

ُرٍد 4 2

،

ُراوض 22

، دٌفسا 5 231

7 1 20 Mar - Feb 12, No.

24, Vol.

:ِحفص 162 - 962 152

- 952 Pages:

هدننکزتنس نژ یبایدر آ سانور روذب رد لونلاوین نیسکوت

هب هدول

چراق زا هدافتسا اب مویرازوف یاه

PCR

داضً يٌيسح يسحه ديس

، 2

يکشيت یدباع يفطصه

*

يٌيسح ُداس ليعوسا اضزيلع ديس ،2

زگراک ِوطاف ،3

،4

يقداص لاوک يجاتراوخ

5

:ُديكچ

ِهدقه

:

ٚس ٟٓٔ یػاسص رلاٛلحٔ صا یىی عب٘

زػا ظػٛس زػا ٗىٕٔ ٝو ذسبل

یٌ٘ٛبٌ٘ٛ یبٞ

ّٕٝخصا ذسبل یساصٛف یبٞ

ٝو ْٛ

ٗیؼوٛسٛىیبٔ ذیِٛس ُیؼ٘بشد ،ذ٘ساد اس یىّٟٔ یبٞ

آ كیمحس ٗیا صا فذٞ .دٛؿ ٜدِٛ

ییبػبٙؿ

ٛىیبٔ

ٗیؼوٛس یبٞ

ٗیؼسٛىیشس یذیِٛس

ظػٛس ذسبل یبٞ

ؽٚس صا ٜدبفشػا بث عب٘ٚس سٚزث ٜاشٕٞ ْٛیساصٛف یبٞ

ییبیٕیؿٛیث ٚ یِٛىِٛٔ

زػا .

:يسرزب شٍر

یثشدس ٝؼِبغٔ ٗیا سد عب٘ٚس زـو فّشخٔ كعبٙٔ صا

دسا رد

كفبث ٚ ٖبو

ٕٝ٘ٛ٘ عب٘ٚس سٚزث صا یسادشث

آ ُٕػ ٝث .ذٔ

صا غد ٚ زـو قِبخ

صبػ ی

ٌٝ٘ٛ

ظیحٔ سد ْٛیساصٛف یچسبل یبٞ

زـو یبٞ

،یكبلشخا ذسبل یثبیدس

ؼ٘بشد یاساد یبٞ

ی ذیِٛس ُ

َِٛٙاٛی٘ ّٕٝخ صا ٗیؼسٛىیشس ٗیؼوٛسٛىیبٔ

( آ كیشع صا )NIV ٖط یكبلشخا یبٞشٌصبغ

Tri13 بث ا

ٜشید٘ص ؾٙواٚ ؽٚس صا ٜدبفشػ یا

ّد ی اشٕ

ص ( )PCR .ذؿ ْبد٘ا ٗیؼوٛسٛىیبٔ ذیِٛس ُیؼ٘بشد ذییبس زٟخ

سدNIV

ٌٝ٘ٛ

صا ْٛیساصٛف یبٞ

لابث ییاسبو بث غیبٔ یفاشٌٛسبٔٚشو

( .ذؿ ٜدبفشػا )HPLC

جياتً

ییبػبٙؿ ٚ یصبػاذخ عب٘ٚس سٚزث صا ْٛیساصٛف ٌٝ٘ٛ حٙد یػسشث ٗیا سد :

ذ٘ذؿ

،

ٝو صا ٗیا ٗیث

ٌٝ٘ٛ

یبٞ

F.poae

ٚ F.

equiseti اٛس

َِٛٙاٛی٘ ٗیؼوٛسٛىیبٔ ذیِٛس ییب٘

ذ٘دٛث اساد اس

ٖط دٛخٚ . Tri13

سد

ٚد

ٌٝ٘ٛ

F. poae F.equisetiٚ

یثبیدس ذؿ ٝو

ٌٝ٘ٛ ٗیا بٞ

ٝث

ٖاٛٙػ خیس

ٜذٙٙوذیِٛس یبٞ

.ذ٘ذؿ ٝشخبٙؿNIV صا ُكبح حیبش٘

ضی٘ HPLC ٝو داد ٖبـ٘

ٌٝ٘ٛ ٚد دسٛٔ ْٛیساصٛف

ٗیؼوٛسٛىیبٔ ذیِٛس ُیؼ٘بشد ،یػسشث .ذ٘ساد اسNIV

ِجيتً

:یزيگ

ٖط Tri13 ٌٝ٘ٛ ٚد سد F. poae

ٚ F.equiseti ؾم٘

شثؤٔ

ی دساد َِٛٙاٛی٘ ٗیؼسٛىیشس ذیِٛس سد ازِ .

بث صا ٜدبفشػا

ؽٚس یٔPCR

ذسبل ٖاٛس فّشخٔ رلاٛلحٔ سد اس ٗیؼوٛسٛىیبٔ ذیِٛس ُیؼ٘بشد یاساد یبٞ

شػ ی غ شس .دشو ییبػبٙؿ ٚ یثبیدس

یديلک یاّ ُصاٍ

:

َِٛٙاٛی٘ ،ْٛیساصٛف ،سٚزث ،عب٘ٚس

-1 نبتسلگ یکضشپ مًلع ٌبگطواد ییًجطواد تبقیقحت ٍتیمک ،یکضشپ یًجطواد

3،2 ، 5 - نبتسا یعیبط عببىم ي یسريبطک شسًمآ ي تبقیقحت شکزم یکضشپ ٌبیگ تبقیقحت صخب دشی

یسريبطک جیيزت ي شسًمآ ،تبقیقحت نبمسبس ،

4 - یقيذص ذیهض یکضشپ مًلع ٌبگطواد ،ًٌکزبا نبمرد ي تضاذهب ٍکبض یمًمع کضشپ دشی

(*

:هفلت ؛)لًئسم ٌذىسیًو 90123742691

یکیويزتکلا تسپ ، [email protected] :

:تفبیرد خیربت 13

/ 90 / 1204 :شزیذپ خیربت

39 / 90 / 1205

(2)

داضً يٌيسح يسحه ديس ىاراكوّ ٍ

953

:ِهدقه عب٘ٚس

ْب٘ بث یّٕػ Rubiatinctorum یٞبیٌ

زػا صا

ٜشیس

ٝػبیثٚس

ٝو

ٝـیس صا

ٖآ یدبیص دشثسبو یصشٍ٘س غیبٙك سد

زـو .دساد

ٗیا ششـیث بیػآ ٚ بدٚسا سد ٜبیٌ

َٕٛؼٔ

ٜدٛث سد ٚ

ٖبٔص

ٓیذل

ٖاشیا سد كعبٙٔ سد

ٚسا ،ضیشجس

ٝیٔ

ناسا ، عسبف ، ٚ

زـو دضی یٔ

ٜذؿ زػا

َبح سد . زـو شضبح

ٖآ سبو ٚ بٟٙس

ٖبشػشٟؿ سد بٞ

ی كفبث

ٖبودسا ٚ

ٖبشػا سد حیاس دضی

ٚ ٜدٛث

حغػ زـو شیص

ٖآ شثاشث 680 سبشىٞ

زػا ( 1 .)

صا یدذؼشٔ ُٔاٛػ یسبٕیث ّٕٝخ

سد یچسبل یبٞ

ٜدِٛآ اس َٛلحٔ ٗیا زؿادشث ٚ زؿاد ،زؿبو ٗیح یٔ

زیفیو صا َٛلحٔ دشىّٕػ ؾٞبو شث ٜٚلاػ ٝو ذٙٙو یٔ ضی٘ یذیِٛس ً٘س ( ذٙٞبو

2 ذسبل ٗیا صا یسبیؼث .) صا بٞ

ٝو ٜدٛث سزث بث ٜاشٕٞ ْٛیّؼیٙد ٚ عّٛیطشذػآ ،ْٛیساصٛف ّٕٝخ شث ٜٚلاػ بٔ ،ٜبیٌ ٖدشو ٜدِٛآ

ٗیؼوٛسٛىی یبٞ

یوب٘شغخ

یٔ ذیِٛس

ٝو ذٙٙو یٔ شضٔ ْاد ٚ ٖبؼ٘ا یشٔلاػ یاشث

ذٙؿبث

( 3 .) ذسبل یبٞ

صا یىی ْٛیساصٛف

ٖاٚاشف شس ی

ٗ ذسبل ییبٞ

ثا ٖبٞبیٌ ُٔبىس ٚ ذؿس یع ٝو ذٙشؼٞ

ٚ ةشخٔ راش

ٖاشجخ زدب٘

ی ش ی ٝث اس

ٖآ بٞ

دساٚ

ٔ ی ذ٘صبػ ذسبل ٗیا . بٞ

زیِٛثبشٔ

ىّٟٔ یٛ٘بث یبٞ

ْبٙث ی

ٗیؼسٛىیشس ذیِٛس اس بٞ

یٔ

ذٙٙو ( 3

، 4 )

ٝث .

ٗیؼوٛس فشلٔ ُیِد

ٗیؼسٛىیشس یبٞ

،

بٞصٛىیؼوٛسٛىیبٔ

یٔ خس رب٘اٛیح ٚ ٖبؼ٘ا سد ذیذؿ ی ٚ ذٞد

لاػ صا ئ ٓ

ٖآ بٞ

یٔ

ٝث ٖاٛس یث

یٍشفشٌ ٚ عٟٛس ،ییبٟشؿا

ٝچیٞبٔ

دشو ٜسبؿا بٞ

( 1 ) د ٗیٙچٕٞ . ،ذیذؿ دساٛٔ س

عشػ

ٖب یؿساٌٛ یبٞ

ٛس ٗیا فشلٔ شثا سد ضی٘

ٗیؼو بٞ

زػا ٜذؿ ؽساضٌ

( 2 )

ٛىیشس .

ٗیؼس علاو ٚد ٝث بٞ

ٚ A B

یٔ ٓیؼمس علاو سد ٝو ذ٘ٛؿ

ٗیؼوٛس B یچسبل یبٞ

علاو ٝث زجؼ٘ یوب٘شغخ ٚ ٟٓٔ

٘ساد ساشل A ٝث ٝو ذ

ٗیؼوٛسٛىیبٔ ٗیا صا هیشٞ

بٞ

خیس ، ضی٘ ییبیٕیؿ یبٞ

یٔ

ٗیؼسٛىیشس .ذٙیٌٛ

علاو یبٞ

سد ٛشو ٜٚشٌ یاساد B

ٗثشو زیؼلٛٔ

8

ٗیؼسٛىیشس ٝمّح یٔ

ٗیا ٝث ٚ ذٙؿبث ُیِد

ٜٚشٌ ْبٙث 8

-

ٗیؼسٛىیشسٛشو بٞ

( Keto trichothecens )

ضی٘

فٚشؼٔ

ذ٘ا ( 4

، 5

ٗیؼسٛىیشس صا .) عٛ٘ یبٞ

یٔ B ٝث ٖاٛس

( َِٛٙاٛی٘

NIV: Nivaleno

َِٛٙاٛی٘ یؼوا ید ،)

( DON: Deoxynivalenol یّیشػا ربمشـٔ ٚ )

ٖآ بٞ

ذٙ٘بٔ

4 - ( َِٛٙاٛی٘ ُیشػا 4-AcNIV: 4-Acetyl

Deoxy nivalenol

،) 3 - َِٛٙاٛی٘ یؼوا ید ُیشػا (3-(

AcDON ٚ

15 - یؼوا ید ُیشػا ( َِٛٙاٛی٘

15-AcDON )

( دشو ٜسبؿا 6

.)

ٖط بٞ

ی ضشٙػ َٛئؼٔ ی٘ط ٝؿٛخ صا یفّشخٔ

ٛىیشس

ٗیؼس ذسبل سد بٞ

یٔ ْٛیساصٛف یبٞ

صا .ذٙؿبث

ٟٓٔ

شس ی

ٗ

ٖط

ٗیؼسٛىیشس ٜذٙٙوضشٙػ یبٞ

یٔ یبٞ

ٖط ٝث ٖاٛس یبٞ

Tri13 ٚ دشو ٜسبؿاTri7 اضؼث ؾم٘ ٝو

ی عٛ٘ ٗیا ذیِٛس سد ی

ٗیؼوٛس یثبیدس ٝو ذ٘ساد بٞ

ٖط ٗیا یٔ بٞ

قیخـس سد ذ٘اٛس

ذسبل غیشػ هٕو ٗیؼوٛسٛىیبٔ ٜذٙٙوذیِٛس یبٞ

ی٘بیبؿ

ذیبٕٙث ( 7 .)

یػسشث زیٕػ َِٛٙاٛی٘ ٗیؼسٛىیشس ٝو زػا ٜداد ٖبـ٘ بٞ

دساد ْاد ٚ ٖبؼ٘ا یاشث یششـیث

ِبحسد ی

ٝو ید ٗیؼسٛىیشس

زػا یٕػ ششـیث ٜبیٌ یاشث َِٛٙاٛی٘ یؼوا (

5 زفشـید .)

هیٙىس یبٞ

ٗیؼسٛىیشس ضیِب٘آ ٚ یثبیدس یِٛىِٛٔ

ذٙ٘بٔ ییبٞ

ٚ DON ٗیٙچٕٞ ٚ فّشخٔ یػاسص رلاٛلحٔ سد NIV

ٜدشو ُیٟؼس اس سٛیع ٚ ْاد ٝیزغس یاشث یذیِٛس رلاٛلحٔ

زػا ( 4 ) یىی . ؽٚس صا یٔ ٝو یِٛىِٛٔ یبٞ

ٗییؼس ٝث ٖاٛس

خیس ییبیٕیؿ یبٞ

دشثسبو ،زخادشد

ٜشید٘ص ؾٙواٚ

یا

ّد صاشٕی ( PCR: Polymerase chain reaction )

شث یٙشجٔ

ٖط یكبلشخا یبٞشٌصبغآ یحاشع ٜذٙٙوضشٙػ یبٞ

ٗیؼوٛس

ٗیؼسٛىیشس ّٕٝخ صا( یچسبل یبٞ

)بٞ

زػا سد ٓٞ ٝو

یٔ ٗیؼوٛسٛىیبٔ یثبیدس ٝث ٗىٕٔ ٖبٔص ٗیششٕو ٚ دصادشد

ٝٙیضٞ ٓٞ

ؽٚس ٝث زجؼ٘ یششٕو یبٞ

ذٙ٘بٔ یشٙػ یبٞ

ؽٚس بٞ

ی یفاشٌٛسبٔٚشو دساد

( 5 ) . ٚ یثبیدس زٟخ ٗییؼس

شیدبمٔ

ٗیؼوٛسٛىیبٔ

صا بٞ

ؽٚس یفاشٌٛسبٔٚشو یبٞ

ّٕٝخ صا

( نصب٘ ٝیلا یفاشٌٛسبٔٚشو غیبٔ صبٌ یفاشٌٛسبٔٚشو ،)TLC

( لابث ییاسبو بث غیبٔ یفاشٌٛسبٔٚشو بی ٚ )GLC (

)HPLC ،

ٗیؼوٛسٛىیبٔ قیخـس زٟخ فّشخٔ یبٞ

ٜدبفشػا یٔ

دٛؿ .

(3)

954

طاًٍر رٍذب رد لٌَلاَيً ييسکَت ُدٌٌکشتٌس ىص يبايدر

…

ىس ٗیا هیٙ

بٞ

صا بؼح ػ ی ییلابث سبیؼث ز ذ٘سادسٛخشث

یِٚ

بث

ا

ٗی دٛخٚ

تجػ ،ٖدٛث شث ٖبٔص ٚ یفشلٔ داٛٔ یلابث ٝٙیضٞ

ث سد بس زػا ٜذؿ ؽٚس ٗیا صا ٜدبفشػا دساٛٔ صا یضؼ

بٞ

ددشٌ دٚذحٔ

( 5 ).

آ صا یص ربؼِبغٔ ٝو بد٘

یدب

ٔص سد

ٝٙی دٛخٚ

یچسبل یبٞ

ٝشفشٍ٘ رسٛك عب٘ٚس سٚزث ٜاشٕٞ

ٝث كیمحس ٗیا ازِ ،زػا یثبیدس ٚ ییبػبٙؿ سٛظٙٔ

ل ظػٛس یذیِٛس یبٞ

ذسب

ْٛیساصٛف یبٞ

ّٕٝخ صا

ٗیؼسٛىیشس ؽٚس صا ٜدبفشػا بث بٞ

ییبیٕیؿٛیث ٚ یِٛىِٛٔ یبٞ

.زفشٌ رسٛك يسرزب شٍر

سد یثشدس ٝؼِبغٔ ٗیا ،

یػاسص َبػ یع 92

- 1391 صا

ٙٔ سد عب٘ٚس سٚزث دضی ٖبشػا سد عب٘ٚس زـو ٟٓٔ كعب

صا

خ ٖبودسا ّٕٝ

ٕٝ٘ٛ٘

سادشث ی آ ُٕػ ٝث ٚ ذٔ

ٕٝ٘ٛ٘

ٜدِٛآ یبٞ

زوبد ُخاد ٝث زلٚ عشػا سد ٚ ٜذؿ یسٚآ غٕخ ُیششػا یبٞ

زیشّوٛذیٞ بث سٚزث ٜبٍـیبٔصآ سد .ذیدشٌ ُمشٙٔ ٜبٍـیبٔصآ ٓیذػ 5 / 0 ذكسد ٝمیلد ٝػ رذٔ ٝث

٘ٛفػذض ی یحغػ

ٝجسشٔ ٚد سٚزث ،ٓیذػ زیشّوٛذیٞ سد ٖداد ساشل صا ذؼث .ذ٘ذؿ هـخ یفبك زغبو بث غذػ ٚ ٜذؿ ٛـشؼؿ شغمٔ ةآ ُخاد صا ذؼث .ذ٘ذیدشٌ

٘ٛفػذض ی ،یحغػ

ٖآ بٞ

زـو ظیحٔ ُخاد

ػ ی ت

ٔص ی

ٙ ی ( سبٌآ صٚششؼود PDA: Potato Dextrose

)Agar یبٔد سد ٝشفٞ هی رذٔ یاشث ٚ ذ٘ذؿ ٜداد ساشل 25

سد ٝخ ش٘بػ ی داشٌ

.ذ٘ذیدشٌ ٖٛیػبثٛى٘ا

ٌٝ٘ٛ

ٛیساصٛف یبٞ

ٚ ٜذیدشٌ قِبخ ٖدشو سٛذػا هس ظػٛشٔ

بٞسٛذػا هس

زـو ظیحٔسد یبٞ

سبٌآ ةآ ،PDA (

WA: Water Agar )

ٚ بٌآ هخیٔ يشث س

( CLA: Carnation Leaf Agar سد )

یبٔد 25 ٝخسد ش٘بػ ی داشٌ

ُىیػ سد صٚس ٜد رذٔ ٝث 12

یىیسبس زػبػ .ذ٘ذؿ ٖٛیػبثٛى٘ا ییبٙؿٚس–

ْصلا شور ٝث زػا

زـو ظیحٔ یٔبٕس ٝو یساذیشخ نشٔ زوشؿ صا بٞ

ذیدشٌ

ذ٘

. ذسبل ٖدشو سٛذػا هس زٟخ ،ْٛیساصٛف یبٞ

ٝؼغل صا یا

ذسبل سادسٛذػا زـو ظیحٔ

ْٛیساصٛف سد اس

ِِٝٛ

ؾیبٔصآ یٛشحٔ

9

ٔ ی

ّ ی ِ ی شش بث ٚ ٝشخیس ُیششػا شغمٔ ةآ

ٓٞ ٝث ٖدص

هی غذػ .ذیدشٌ ٝیٟس سٛذػا ٖٛیؼ٘بذػٛػ ٖآ

ٔ ی

ّ ی ِ ی شش صا

ٝث اس ٖٛیؼ٘بذػٛػ ٗیا 9

ٔ ی

ّ ی ِ ی شش سد ُیششػا شغمٔ ةآ

ُخاد

ِِٝٛ

صا ذؼث ٚ ٜدشو ٝفبضا شٍید ؾیبٔصآ

ٕٞ ٝث ٚ ٖدض

ْلا هی یٚس اس ٖٛیؼ٘بذػٛػ صا ٜشغل هی ،ٖدشو زخاٛٙىی ا ٓواشس ٚ ذؿ یػسشث یسٛ٘ حٛىػٚشىیٔ بث ٚ ٝشؿازٌ

سد سٛذػ

ٖٛیؼ٘بذػٛػ زػد ٝث

ذیدشٌ ٜذٞبـٔ ٜذٔآ .

صا غد

ٟس ی

ٝ

ٖٛیؼ٘بذػٛػ ،

ٝث اس ٖآ صا ٜشغل ذٙچ یششد حغػ

یبٞ

یٚبح

سبٌآ ـ ةآ زـو ظیحٔ

2 %

ُمشٙٔ

ؾخد یششد حغػ سد ٚ

ذیدشٌ

ٚ یششد غذػ یبٔد سد بٞ

25 ٝخسد ش٘بػ ی داشٌ

.ذ٘ذؿ یساذٍٟ٘

ا ذؼث ص 24 یششد زػبػ قٛف یبٞ

بث

حٛىػٚشىیٔ

ذ٘ذؿ یػسشث ٚ

ظیاشؿ سد ٜدص ٝ٘اٛخ یبٞسٛذػا

یششد ٝث ُیششػا زـو ظیحٔ یٚبح یبٞ

ُمشٙٔ PDA

.ذ٘ذؿ زیبٟ٘ سد

ٌٝ٘ٛ

شع صا ی ك ربیكٛلخ

یذیٙو یطِٛٛفشٔ

ٚ بٞ

ٌٝٙشد ُىؿ شجشؼٔ یبٞذیّو ظػٛس بٞ

ییبػبٙؿ ذ٘ذیدشٌ

( 8 ).

ْٛیّؼیٔ ذیِٛس سٛظٙٔ ٝث ذسبل ٜٛج٘ا یبٞ

جاشخشػا یاشث بٞ

غیبٔ زـو ظیحٔ صا DNA (

PDB: Potato Dextrose

Broth سٛظٙٔ ٗیا ٝث .ذؿ ٜدبفشػا )

ذسبل بٞ

رذٔ ٝث

غیبٔ زـو ظیحٔ یٚس شث ٝشفٞ هی زـو PDB

ٜداد

ْٛیّؼیٔ ُیششػا حِٛ صا ٜدبفشػا بث غذػ ٚ ذ٘ذؿ بٞ

غٕخ سٚآ ی

ٜذؿ جاشخشػا ٚ هیٙىس صا ٜدبفشػا بث DNA

( CTAB: CetylTrimethylAmmonium Bromide )

( زفشٌ ْبد٘ا 9

.)

س بث

ٗیؼوٛس ٝث سٚزث ٖذؿ ٜدِٛآ ٝث ٝخٛ

ٗیؼسٛىیشس یبٞ

َِٛٙاٛی٘ ّٕٝخ صا (

،)NIV

ٌٝ٘ٛ

یبٞ

F. equiesti

ٚ F.poae

ٝث

ٖاٛٙػ

ٌٝ٘ٛ

كا یبٞ

زٟخ ٗیؼسٛىیشس ٜذٙٙوذیِٛس یّ

خیس ٗییؼس یبٞ

ٖط یثبیدس صا ٜدبفشػا بث ییبیٕیؿ یبٞ

Tri13

.ذ٘ذیدشٌ ةبخش٘ا ؾٙواٚ

ٓدح سد PCR

25

ٔ ی

ٚشى ِ ی شش ( شّىیبػٛٔشس صا ٜدبفشػا بث ٚ Ependrof,

Germany ذؿ ْبد٘ا )

َٚذخ(

1 .) یػسشث ٗیا سد

شٌصبغآ زفخ Tri13F/Tri13R

خیس ٗییؼس یاشث یبٞ

(4)

955

ییبیٕیؿ ٗیث سد NIV

ٌٝ٘ٛ

یبٞ

ْٛیساصٛف

ٜدبفشػا دسٛٔ

زفشٌ ساشل (

7 سد شٌصبغآ زفخ ٗیا .)

ٌٝ٘ٛ

ربؼغل ذیِٛس NIV 415

یصبث زفخ یٔ

َٚذخ( ذٙو 2

.)

شٌصبغآ یسساشح ٝٔب٘شث /R

Tri13F یاشث

ؾٙواٚ ْبد٘ا PCR

ّٝحشٔ هی :ُٔبؿ 5

ٝمیلد یبٔد سد یا 94°C

صبغآ یاشث

ؾٙواٚ

غذػ ٚ PCR 30 ٝػ ُٔبؿ ٝخشچ شٞ ٝو ٝخشچ یبٔد سد یصبػ زؿشػاٚ ّٝحشٔ

94°C یاشث 30

ٝی٘بث ، ّٝحشٔ

یبٔد سد َبلسا 57°C

یاشث 30 یبٔد سد ظؼث ّٝحشٔ ٚ ٝی٘بث

72°C یاشث 60 ّٝحشٔ هی ٖبیبد سد .زفشٌ ْبد٘ا ٝی٘بث

یبٔد سد ییبٟ٘ ؽششؼٌ

72°C یاشث 5 ٝشفشٌ شظ٘ سد ٝمیلد

ذؿ . رلاٛلحٔ غذػ َط یٚس شث ٝ٘بٌاذخ سٛع ٝثPCR

2 / 1

.ذ٘ذؿ صسٛفٚششىِا صسبٌآ ذكسد

َٚذخ 1 :

ٔ ی

ٖاض

ٜشید٘ص ؾٙواٛىی ْبد٘ا یاشث صبی٘ دسٛٔ داٛٔ

یا

ّد ی صاشٕ

( μL ٓدح 25 )

يياًْ تظلغ )Stock (ِياپ داَه تظلغ PCR صٌکاٍ یاشجا

- - شیغمس سبث ٚد شغمٔ ةآ

1X 10X ٓیضیٙٔذیشّو سلاٛٔیّیٔ15 بثPCR شفبث 2

/

0 mM 10 mM dNTP

4 /

0 μM 20 μM Forwardشٌصبغآ

4 /

0 μM 20 μM Reverse شٌصبغآ

75 /

0 unit 5 unit/μL Taq DNA polymerase

25 ng/μL 25 ng/μL Template DNA

َٚذخ 2 : شٌصبغآ یِاٛس Tri13F/Tri13R

( زگساغآ primer ) ( ِعطق ُسادًا )bp

( يلاَت sequence )

Tri13F Tri13R 415

TACGTGAAACATTGTTGGC GGTGTCCCAGGATCTGCG

رلاٛلحٔ

ٝث PCR سٛع َط یٚس شث ٝ٘بٌاذخ 2

/ 1 ذكسد

ً٘س .ذ٘ذؿ صسٛفٚششىِا صسبٌآ رلاٛلحٔ یضیٔآ

بث PCR

زفشٌ رسٛك ذیبٔٚشث ْٛیذیسا غذػ ٚ

غىػ زحس یسادشث

سٛ٘

( ناد َط ٜبٍشػد سد UV Bio-RAD, USA

ْبد٘ا )

.ذؿ سد یذیِٛس ٗیؼسٛىیشس عٛ٘ ٗییؼس یاشث

ٌٝ٘ٛ

شظ٘ دسٛٔ

طبجسسا ٚ

ٖآ بٞ

ٖط بث یبٞ

ثىس ی

ٜذؿش Tri13 ؽٚس بث ،

،PCR صا 12 ذسبل

ٝث

ٖاٛٙػ صا ٜذٙیبٕ٘

ٌٝ٘ٛ

یبٞ

F. equiesti

ٚ F. poae

ضیِب٘آ

ٜبٍشػد صا ٜدبفشػا بث ٗیؼوٛس ْبد٘ا HPLC

.زفشٌ

سد ٗیؼوٛس ضیِب٘آ یاشث

ٌٝ٘ٛ

اذشثا ،یػسشث دسٛٔ یبٞ

50

ٚ ذؿ ٜذ٘بؼیخ زػبػ ٚد رذٔ ٝث ح٘شث نٛشّؿ ْشٌ

غذػ

30 یّیٔ

ّٝكبف ٝث ٚ ٝفبضا ٖآ ٝث شغمٔ ةآ ششیِ

24 زػبػ

رذٔ ٝث سبث شٞ ٚ سبث ٚد 20

ٝث غذػ .ذیدشٌ ٚلاوٛسا ٝمیلد

فشل ذٙچ ِٗسا شٞ

5 ذسبل ٜصٚس ؾؿ زـو صا یششٕیّیٔ

ِٗسا ٚ ذؿ ُمشٙٔ

سٛسبثٛى٘ا سد ٝشفٞ ؾؿ رذٔ ٝث بٞ

25

ٝخسد ش٘بػ ی داشٌ

رذٔ ٗیا صا غد .ذ٘ذؿ یساذٍٟ٘

(5)

956

…

نٛشّؿ یبٔد سد ٜدِٛآ یبٞ

70 ٝخسد ش٘بػ ی داشٌ

رذٔ ٝث

24 ح٘شث غذػ ٚ ذ٘ذؿ هـخ زػبػ ٜذؿ ةبیػآ ٜدِٛآ یبٞ

ساشل ٜدبفشػا دسٛٔ ٗیؼوٛس جاشخشػا سٛظٙٔ ٝث ّٝكبح سدٛد ٚ زفشٌ

( 10 ) . ٕٝ٘ٛ٘ شٞ صا اذشثا ،ٜسبلػ جاشخشػا یاشث 10

سدٛد ْشٌ

غذػ .ذؿ ٗیصٛس ٜذؿ ةبیػآ 100

یّیٔ

َلاح ششیِ

ُیششی٘ٛشػا( جاشخشػا 84

%

ٕ٘ٛ٘ ٝث )

ٝ یاشث .ذؿ ٝفبضا بٞ

ٕٝ٘ٛ٘ بث جاشخشػا َلاح طلاشخا رذٔ ٝث بٞ

3 صا ٝمیلد

ٗیا صا غد .ذیدشٌ ٜدبفشػا لابث زػشػ بث سذّٙث ٜبٍشػد یِٕٛؼٔ یفبك زغبو صا ٜسبلػ ٖدشو فبك یاشث ،طلاشخا ساذمٔ ٚ ذؿ ٜدبفشػا 8

یّیٔ

ٜذؿ فبك ٜسبلػ ٗیا صا ششیِ

ٖٛشػ بث قیخّس یاشث SPE: Solid Phase extraction

clean- up ذؿ ٝشؿادشث

.

ٜدبٔآ اذشثا ٖٛشػ یصبػ

FSPENIV زجثٔ سبـف دبدیا بث

غذػ .زفشٌ ْبد٘ا ٖٛشػ ششٟث ٖذؿ ٜدشـف یاشث 5

یّیٔ

فبك ٜسبلػ صا ششیِ

ٖٛشػ صا ٜذؿ (SPE

2 - 1 سد ٜشغل

بی ٝی٘بث 3 - 2 یّیٔ

)ٝمیلد سد ششیِ

ٜداد سٛجػ .ذؿ

ٝث ضحٔ

ٖٛشػ ،ٜسبلػ زٕؼل ٗیشخآ دٚسٚ

بث SPE 2

یّیٔ

ُیششی٘ٛشػا صا ششیِ

84

% غذػ ٚ ذؿ ٜداد ٛـشؼؿ

غٕخ ةٛیس ُخاد سد ٜذؿ قیّخس ٜسبلػ .ذیدشٌ یسٚآ

َبیٚ

یبٔد سد بٞ

40ºC .ذ٘ذؿ هـخ )ةٛعشٔ/هـخ(

ةٛیس ٖدشو هـخ صا غد ،بٞ

500 یّیٔ

صبف َلاح ششیِ

( نشحشٔ

H2o: MeOH= 90.5:9.5 )

ةٛیس ٝث ٝفبضا بٞ

.ذ٘ذؿ طّٛخٔ یثٛخ ٝث غىسسٚ ٜبٍشػد بث غذػ ٚ ذیدشٌ

ٜسبلػ ْٚضِ رسٛك سد ّٝحشٔ ٗیا صا ذؼث زغبو بث بٞ

یفبك

45 / 0 یبٟ٘ سد ٚ ذ٘ذیدشٌ فبك ششٔٚشىیٔ

ز 25

ٔ ی

ٚشى

ِی شش صا

قیخّس ٜسبلػ ٗیا ٜبٍشػد ٝث ٜذؿ

ذیدشٌ كیسضس HPLC

( 11 ).

ٜسبلػ سد ٗیؼسٛىیشس سٛضح ٗییؼس یاشث ٜبٍشػد صا بٞ

( Water ) ٖٛشػ بث HPLC

َٛع( C18 15 شغل ،ششٕیش٘بػ راسر

5 / 4

َٛ٘بشٔ نشحشٔ صبف ٚ )ششٔٚشىیٔ

- ( ةآ 5 ٝث 95 ،)

ٖبیشخ زػشػ ml/min

5 / 0 سد .ذؿ ٜدبفشػا قبسا یبٔد سد ٚ

ةبیدس فٛلخ ٗیا U.V.

جٛٔ َٛع بث 220

دسٛٔ ششٔٛ٘ب٘

ظػٛس ٕٝ٘ٛ٘ شٞ ٜذؿ جاشخشػا ٜسبلػ صا .زفشٌ ساشل ٜدبفشػا فٛلخٔ ً٘شػ بث كیسضس حِٛ

،HPLC 25

ٔ ی

ٚشى

ِی شش

حیبش٘ ٚ ذیدشٌ كیسضس زػد ٝث

ٝث طٛثشٔ ربػلاعا ٚ ٜذٔآ

یٙحٙٔ شیص حغػ زجث هی شٞ یسبٌذ٘بٔ ٖبٔص ٚ ٕٝ٘ٛ٘ یبٞ

ٗیؼسٛىیشس عٛ٘ .ذؿ یبٞ

یٙحٙٔ ٝث ٝخٛس بث NIV یبٞ

زظّغ بث( هی شٞ دساذ٘بشػا 25ppm

شٞ یسبٌذ٘بٔ ٖبٔص ٚ )

.ذیدشٌ قخـٔ دساذ٘بشػا

ِتفاي اّ

ُٔبؿ ْٛیساصٛف ٌٝ٘ٛ حٙد یػسشث ٗیا سد F.solani

، F.oxysporum ،

F. poae

، F. semitectum

ٚ F.

equiseti

٘ٚس سٚزث صا یصبػاذخ عب

ٗیا صا .ذ٘ذؿ ییبػبٙؿ ٚ

ٗیث

، بٟٙس

ٌٝ٘ٛ

یبٞ

F. poae ٚ

F.equiseti ییب٘اٛس

ذیِٛس

بث یِٛىِٛٔ یثبیدس یاشث ٝو ذٙشؿاد اس َِٛٙاٛی٘ ٗیؼسٛىیشس صا ٜدبفشػا یكبلشخا یبٞشٌصبغآ

.ذ٘ذؿ ةبخش٘ا

شٌصبغآ زفخ یػسشث ٗیا سد Tri13F/Tri13R

یاشث

خیس یثبیدس ییبیٕیؿ یبٞ

ٖط یثبیدس ٗیٙچٕٞ ٚ NIV

Tri13

ٌٝ٘ٛ ٗیث سد یبٞ

F. poae ٚ

F. equiseti ا

ٜدبفشػ

ؾٙواٚ حیبش٘ .ذؿ خیس ٝو داد ٖبـ٘ شٌصبغآ ٗیا بث PCR

ییبیٕیؿ NIV

سد

ٌٝ٘ٛ

.دساد دٛخٚ یػسشث دسٛٔ یبٞ

َٛلحٔ

سد PCR

ٌٝ٘ٛ

خیس ٜذٙٙوذیِٛس یبٞ

یبٞ

ییبیٕیؿ یبٞذ٘بث ،NIV

415

ُىؿ( دٛث یصبث زفخ 1

.)

صا 33 ُٔبؿ( یچسبل ٌٝ٘ٛ ٚد ٗیا ٜذٙیبٕ٘

21

ٌٝ٘ٛ

F. equiseti ٚ

12

ٌٝ٘ٛ

F. poae )

ػسشث ی

ٜذؿ زفخ ٗیا بث

یٍٕٞ ،شٌصبغآ

ٝث

ٖاٛٙػ

ٌٝ٘ٛ

ٝشخبٙؿNIV

یٔ ٖبـ٘ حیبش٘ ٗیا .ذ٘ذؿ سد ٗیؼسٛىیشس تِبغ خیس ٝوذٞد

زیؼٕخ ٗیث

ٌٝ٘ٛ

یبٞ

F. poae ٚ

F.equiseti خیس ،

ییبیٕیؿ زػاNIV

.

(6)

957

ُىؿ 1 : ذ٘بث 415 صا ُكبح یصبث زفخ شٌصبغآ زفخ صا ٜدبفشػا بثPCR

Tri13F/Tri13R

ٝیاذخ سد F.poae یبٞ

F. equisetiٚ .

ٝیاذخ یاساد یبٞ

ذ٘بث 415 یصبث زفخ

ٝث

ٖاٛٙػ

ٝیاذخ ییبیٕیؿ خیس ٜذٙٙوذیِٛس یبٞ

یٔ NIV

،ذٙؿبث شٍ٘بـ٘ :M 100bp

( َط 2 / 1 .)ذكسد

ییب٘اٛس ذییأس یاشث

ٌٝ٘ٛ

یػسشث ٚ ٗیؼسٛىیشس ذیِٛس سد بٞ

سٛضح ٗیث طبجسسا Tri13 ٖط

ؽٚس صا ٗیؼسٛىیشس ذیِٛس ٚ

.ذؿ ٜدبفشػا HPLC 12

ٜذٙیبٕ٘

یچسبل صا

ٚد

ٌٝ٘ٛ

F. poae ٚ

F. equiseti یثبیصسا سٛظٙٔ ٝث

ذیِٛس ُیؼ٘بشد

.ذ٘ذؿ ةبخش٘ا ٗیؼسٛىیشس حیبش٘

زػد ٝث صا ٜذٔآ

HPLC

ییبیٕیؿ خیس ٝو داد ٖبـ٘

ٜسبلػ سد NIV یػسشث یبٞ

.دساد دٛخٚ ٜذؿ جٚا ٝغم٘ ٜذٞبـٔ یاشث یسبٌذ٘بٔ ٖبٔص

دساذ٘بشػا یٙحٙٔ

،NIV 40 / 5 ( ذؿ زجث ٝمیلد سادٕٛ٘

1 .)

سد

ٌٝ٘ٛ

،یػسشث دسٛٔ ْٛیساصٛف یبٞ

ٖبٔص بث َِٛٙاٛی٘ ٗیؼوٛس یسبٌذ٘بٔ

49 / 5 ذؿ یثبیدس ٝمیلد (

سادٕٛ٘

2 .) حیبش٘

زػد ٝث

ٜسبلػ صا ٜذٔآ ٗیؼسٛىیشس ذیِٛس ییب٘اٛس ٜذؿ جاشخشػا یبٞ

( ٌٝ٘ٛ ٚد شٞ سد اس )NIV F. poae

ٚ F. equiseti ذییأس

دشو خیس یثبیدس بث حیبش٘ ٗیا غلاٚ سد ٚ ییبیٕیؿ یبٞ

ٖط یثبیدس صا ٜدبفشػا بث ٗیؼسٛىیشس Tri13

.زؿاد زمثبغٔ ،

یٔ زثبث حیبش٘ ٗیا ٗیاشثبٙث

ٖط ٝو ذٙو

ٌٝ٘ٛ سد سٛوزٔ یبٞ

-

خیس ذیِٛس سد یٕٟٔ ؾم٘ یػسشث دسٛٔ یبٞ

ییبیٕیؿ یبٞ

.ذ٘سادNIV

سادٕٛ٘

1 : یٙحٙٔ

دساذ٘بشػا ٖبٔص ،NIV

یسبٌذ٘بٔ

40 / 5

ٝمیلد ( ٖٛشػ صا سٛجػ ٖبٔص 15

،ٝمیلد

ٖبیشخ ml/min 5

/ 0 )

(7)

958

…

سادٕٛ٘

2 : ٗیؼوٛس یٙحٙٔ

ٌٝ٘ٛ ٚد سد ٜذؿ یثبیدسNIV F. poae

F. equiseti ٚ یسبٌذ٘بٔ ٖبٔص ،

49 / 5 ٖٛشػ صا سٛجػ ٖبٔص( ٝمیلد 15

،ٝمیلد

ٖبیشخ ml/min 5

/ 0 )

ثحب ذسبل ٗیا دٛخٚ

ب٘ٚس سٚزث سد ْٛیساصٛف یبٞ

ییب٘اٛس ٝو ع

ٗیؼوٛسٛىیبٔ ذیِٛس یٔ ذ٘ساد اس ٗیؼسٛىیشس یبٞ

٘اٛس

ٙ ذ

ٝث سٛع

ٚ ٓیمشؼٔ

غ ی مشؼٔش ی

ٓ داٛٔ زؿاذٟث ٚ یشٔلاػ یٚس شث

سازٍث شثا ییازغ

٘ یىی .ذ زیِٛثبشٔ صا سد ٟٓٔ یذیِٛس یبٞ

ذسبل ،ْٛیساصٛف یبٞ

ٛىیبٔ

ٗیؼوٛس یٔ بٞ

صا یسبیؼث .ذٙؿبث

ٌٝ٘ٛ

ذیِٛس ْٛیساصٛف یبٞ

ٛىیبٔ

ٗیؼوٛس یوب٘شغخ یبٞ

یٔ

ییازغ ٝخشچ دساٚ یػاسص رلاٛلحٔ كیشع صا ٝو ذٙٙو یٔ ْاد ٚ ٖبؼ٘ا ذ٘دشٌ

( 12

ٌٝ٘ٛ .) F.solani ٗیا سد ٝو

ا ضی٘ یػسشث ص

س سٚزث

ٚ ذیدشٌ یصبػاذخ عب٘

ٝث

ٖاٛٙػ ٖطٛسبد

ی٘بؼ٘ا

ٔ ةٛؼحٔ ضی٘

ی

ٌٝ٘ٛ ٗیٙچ دٛخٚ ٗیاشثبٙث ٚ دٛؿ یا

س سٚزث ٜاشٕٞ

ٚ یٔ عب٘

شغخ هی ذ٘اٛس

ٜٛمِبث زٔلاػ یاشث

( ذؿبث ْاد ٚ ٖبؼ٘ا 2

، 8 .)

ٖط صا ُكبح یبٞذ٘بث ذیِٛس Tri13

ٗیممحٔ حیبش٘ بث

ٖبـ٘ ی٘ط ٝؼغل ٗیا شیثىس زؿاد زمثبغٔ شٍید ٜذٙٞد

سٛضح

ٖط Tri13 ٓیض٘آ ٖدشوذو یىیش٘ط ییب٘اٛسٚ

calonectrin-4-

oxygenase

ٝیاذخ ْبٕس سد بٞ

زػا ( 7 .)

ٖط ٜذٙٙوضشٙػ یبٞ

ٗیؼسٛىیشس ( بٞ

ُلاذح( ی٘ط ششػلاو بی ٝؿٛخ هی سد )Tri 10

ٜذؿ ضوشٕشٔ )ٖط

ٖط :ُٔبؿ ٝو ذ٘ا ٗیادٛىیشس صبششٙػ یبٞ

( صب٘ظیؼوا ،)Tri5 ( P450

،Tri4 Tri11

ُیشػا ،) صاشفؼ٘اشس

( Tri13

،

ٝخؼ٘ یبٞسٛشوبف ،)Tri7 ( یسادشث

،Tri6 Tri10 ،)

( ٗیؼوٛسسبـش٘ا خٕد Tri12

ٝشخبٙؿب٘ یضشف ٗیئسٚشد ٚد ٚ )

( ،Tri8 یٔ )Tri9

ذٙؿبث ( 13 )

ٖط شٍید . صاشفؼ٘اشس ُیشػا یبٞ

ذٙ٘بٔ

Tri101

ٝؿٛخ ٗیا سد .ذٙشؼٞ ٝشػٛیدب٘ رسٛك ٝث ی٘ط

ٗیؼسٛىیشس

ٜذیچید شیؼٔ هی سد بٞ

یا ُٔبؿ ٝو

ضشٙػ ،زػا ٖٛیػبىیفیششػا ٚ ٖٛیػاشٔٚضیا ،ٖٛیػب٘ظیؼوا یٔ

.ذ٘ٛؿ عبػا شث

ٓیؼمس ییبیٕیؿ ٜٚشٌ یذٙث

ییٛىؼػ

ٗیؼسٛىیشس ،ٗدشس ٜذؿ كشـٔ زّىػا هی یاساد بٞ

ربفؼفٚشید ُیض٘سبف صا یٔ

ضشٙػٛیث شیؼٔ سد .ذٙؿبث

ٗیؼسٛىیشس ٗیِٚا بٞ

غػاٚ ذح ی

ساشل ییبػبٙؿ دسٛٔ ٝو

،زػا ٝشفشٌ

ٗیادٛىیشس زػا

ٖذؿ صبغآ سد یٕٟٔ ؾم٘ ٝو

ٗیؼسٛىیشس ضشٙػ شیؼٔ

دساد بٞ

( 7 ) زػا ٝخٛس ُثبل .

ٖط ظػٛس ٗیادٛىیشس ضشٙػ Tri5

ٔ ی ددشٌ

عٚشؿ تجػ ٚ

ٗیا سد ٗیؼسٛىیشس ذیِٛس ٝخشچ ذسبل

بٞ

ٔ ی ددشٌ

. ٖط Tri13

َٛئؼٔ ٗیؼسٛىیشس ضشٙػٛیث ششػلاو صا

ُیذجس DON ٝث

زػا NIV ؾم٘ ٚ ؼس یی

ٗ

ٜذٙٙو ا ی سد صبغآ ذیِٛس DON-

(8)

959

دساد NIV ( 13 .)

ٗثشو ٝث اس ٖظیؼوا ،ٓیض٘آ ٗیا -

4 سد

( ٗیششىِ٘ٛبو سبشخبػ یٔ ٝفبضا )CAL

یاشث ذٙیآشف ٗیا ٚ ذٙو

یٕػ رسٛك ضشٙػٛیث یذؼث ُحاشٔ سد رلاٛلحٔ ٖذؿ شس

یٔ

دشیٌ

( 6 .) یػسشث ٗیا سد

ٌٝ٘ٛ

یٍٕٞ ٜذؿ یصبػاذخ ْٛیساصٛف یبٞ

راشثا ٝو ذٙشؼٞ اساد اس ٗیؼوٛسٛىیبٔ ذیِٛس ُیؼ٘بشد ٚ عب٘ٚس سد ً٘س زیفیو ٚ ذیِٛس ،ٜبیٌ ذؿس یٚس شث یثشخٔ

ٗیث ٗیا سد .ذ٘ساد ْاد ٚ ٖبؼ٘ا یشٔلاػ

ٌٝ٘ٛ

بٞ

ی F. Poae

ٚ

F. equiseti ّٕٝخ صبٙیؼسٛىیشس ٗیؼوٛسٛىیبٔ ذیِٛس ییب٘اٛس

( َِٛٙاٛی٘

)NIV ذٙشؼٞ اساد اس (

5 ٗیٙچٕٞ ٝؼِبغٔ ٗیا سد .)

س یِٛىِٛٔ ؽٚس ذییبس یاشث

ٖط یثبید ٜذٙٙوضشٙػ یبٞ

لاِٛٙاٛی٘

یفاشٌٛسبٔٚشو ییبیٕیؿٛیث ؽٚس ص ٜدبفشػا HPLC

دٛخٚ ٗیجٔ ٝو ذیدشٌ

سٚزث سد َِٛٙاٛی٘ ٗیؼوٛسٛىیبٔ

.دٛث عب٘ٚس

ٖٛٙوبس

ٗیؼوٛس عٛ٘ ٗیا

ًاسشىٔ بٞ

رلاغ سد

ًبكٛلخٔ

ٖاشیا فّشخٔ كعبٙٔ سد ْذٌٙ

ؽساضٌ

ٜذؿ ؽساضٌ .ذ٘ا بٞ

آ صا یوبح

ٝو زػا ٖ خیس

ّٕٝخ صا یفّشخٔ ییبیٕیؿ یبٞ

،NIV صا َِٛٙاٛی٘ یؼوا ید یّیشػا ربمشـٔ ٚ DON

ّٕٝخ 3-AcDON ٚ

15-AcDON

ْذٌٙ سد َبٕؿ یبٞ

ذ٘ساد دٛخٚ سٛـو (

14

، 15 ) ٖبٔصبػ سبٔآ كجع . ٚ سبثساٛخ

ذحشٔ ُّٔ یصسٚبـو (

دٚذح ٝ٘لابػ )FAO 25

ذكسد

یؼوٛسٛىیبٔ ظػٛس ٖبٟخ یػاسص رلاٛلحٔ

ٗ فّشخٔ یبٞ

یٔ ٜدِٛآ یچسبل ذ٘ٛؿ

( 16 یؼسٛىیشس .)

ٗ یسبٕیث سد بٞ

ییاص ذسبل

ٖبٞبیٌ سد ْٛیساصٛف یبٞ

ذ٘شثؤٔ

یشیٌّٛخ بث ٗیٙچٕٞ ٚ

َّٛػ سد ٗیئسٚشد ضشٙػ صا یشٔلاػ یاشث یىیسٛیسبوٛی یبٞ

رب٘اٛیح ٚ ٖبؼ٘ا یٔ شضٔ

ذٙؿبث ( 3

، 5،6 رسذل ؾٞبو .)

ٝ٘اٛخ

َٛ٘اشٌ تیشخس ،ٝ٘اد ٗیئسٚشد ؾٞبو ،سزث ی٘ص یبٞ

ٗیؼوٛسٛىیبٔ ُیِد ٝث ٝ٘اد زیفیو سد شیثأس ٚ ٝشػبـ٘

یبٞ

ذسبل ظػٛس ٜذؿ ذیِٛس ( زػا ٜذؿ ؽساضٌ ْٛیساصٛف یبٞ

17 .)

ٗیؼوٛس ٗیا ٝو زػا ٝخٛس ُثبل

ٝ٘اد سد بٞ

یبٞ

ٜذؿسبج٘ا

َبػ بٞ

یٔ یلبث ساذیبد رسٛك ٝث ( ذٙ٘بٔ

15

، 18 ) ؛ ٗیاشثبٙث

بٙؿ یذیِٛس ٗیؼوٛس ٚ ُٔاٛػ ٗیا ییبػ

ٖآ بٞ

یٔ

هٕو ذ٘اٛس

اد ٚ ٖبؼ٘ا یشٔلاػ ٝث ی٘بیبؿ

ٜدسٚاشف ذیِٛس ٚ ْ صا یسبػ یبٞ

ذٙو یچسبل ْٕٛػ (

19،20،21 یػسشث ٗیا سد ٗیٙچٕٞ .)

ٌٝ٘ٛ

ٝو ذیدشٌ یصبػاذخ ْٛیساصٛف صا یفّشخٔ یبٞ

ٖآ بٞ

ضی٘

ث ازِ ذ٘ساد اس ٗیؼوٛسٛىیبٔ ذیِٛس ُیؼ٘بشد یسبؼِبغٔ ذیب

ٗیؼوٛس دٛخٚ ٜسبثسد

ٌٝ٘ٛ شٍید یبٞ

سد ْٛیساصٛف یبٞ

سٚزث

.دشیٌ رسٛك عب٘ٚس تً

ِجي یزيگ

یِٚا ٗیا ذسبل صا ؽساضٌ ٗ یبٞ

ِٛس ی

ٜذٙٙوذ ٗیؼسٛىیشس

عب٘ٚس سٚزث ٜاشٕٞ

زػا َِٛٙاٛی٘ ٗیؼوٛس دٛخٚ ٝث ٝخٛس بث .

عب٘ٚس سٚزث سد ٚ ٖبؼ٘ا یاشث ٗیؼوٛس عٛ٘ ٗیا ٖدٛث یٕػ ٚ

َششٙو زٟخ ٝ٘اشیٍـید ربٔاذلا ذیبث ،ْاد اٛػ ٗیا

یچسبل ُٔ

ٗیؼوٛس ؾٞبو ٝدیش٘ سد ٚ

ٔ سد یذیِٛس یبٞ

فّشخٔ كعبٙ

.دشیٌ رسٛك عب٘ٚس زـو

References

1- Department of Planning and Economy of Ministry of Agriculture. Agriculture statistics of Yazd. Tehran: The Publications Office of Statistics and Information Technology; 2004.p.186

2- Namjouyan M, Shojaee H, Rezaee A. The final report of review and study of compare madder seed production and root madder and determine the best time for their harvesting in different climatic conditions of Fars state. Scientific and industrial research organization of Iran. Industrial Research Institute of Fars 1999.

3- Charmley LL, Trenholm HL, Prelusky DA and Rosenberg A. Economic losses and decontamination. Natural Toxicology 1995; 3:199-203.

(9)

960

…

4- Kimura M, Tokai T, Takahashi-Ando N. Molecular genetic studies of Fusarium trichothecene biosynthesis;

pathways, genes and evolution. Bioscience, Biotechnology and Biochemistry 2007; 71: 2102-2123.

5- Lee T, Han YK, Kim KH, Yun SH, Lee YW. Tri13and Tri7determine deoxynivalenol-and nivalenol-producing chemotypes of Gibberellazeae. Applied andEnvironmental Microbiology 2002; 68: 2148-2154.

6- Brown DW, McCormick SP, Alexander NJ, Proctor RH, Desjardins AE. Genetic andbiochemical approach to study trichothecene diversity in Fusariumsporotrichioides and Fusariumgraminearum. Fungal Genetics and Biology 2001 32(2): 121-133.

7- Chandler EA, Simpson DR, Thomsett MA, Nicholson P. Development of PCR assays to Tri7and Tri13trichothecene biosynthetic genes and characterisation of chemotypes of Fusariumgraminearum, Fusariumculmorum and Fusariumcerealis. Physiological and Molecular Plant Pathology. 2003; 62: 355-367.

8- Nelson P.E, Toussoun T.A, Marasa W.F.O. Fusarium Species: An IllustratedManual for Identification.

University Park, P.A, Pennsylvania State University Press 1983.

9- Nicholson P, Rezanoor HN, Simpson DR, Joyce D. Differentiation and quantification of the cereal eyespot fungi TapesiayallundaeandTapesiaacuformisusing a PCR assay. Plant Pathology. 1997; 46: 842-856.

10-Jennings P, Coates M E, Walsh K, TurnerJA, Nicholson P. Determination ofdeoxynivalenol-and nivalenol- producingchemotypes ofFusariumgraminearum isolated from wheat crops in England andWales. Plant Pathology 2004; 53: 643-652.

11-MacDonaldJ, ChanD, BreretonP, Damant A, Wood R. Determination of Deoxynivalenol in Cereals and Cereal Products by Immunoaffinity Column Chromatography with Liquid Chromatography. Journal of AOAC International 2005; 88(4):1197-1204.

12-Waalwijk C, Kastelein P, Vries I, Kerényi Z, Lee T, Hesselink T, et al. Major changes in Fusarium spp. in wheat in the Netherlands. European Journal of Plant Pathology 2003; 109: 743-754.

13-Brown DW, McCormick SP, Alexander NJ, Proctor RH, Desjardins AE. Inactivation of acytochrome p-450 is a determinant of trichothecene diversity in Fusarium species. Fungal Genetics and Biology 2002; 36: 224-233.

14-Abedi-Tizaki M, Sabbagh SK. Detection of 3-Acetyldeoxynivalenol, 15- Acetyldeoxynivalenol and Nivalenol- Chemotypes of Fusariumgraminearum of Iran using specific PCR assays. Plant Knowledge Journal 2013a; 2(1): 38- 42.

15-Abedi-Tizaki M, Sabbagh SK, Mazaheri –Naeini M, Sepehrikia S. Chemotyping of Fusariumgraminearum using Tri13 trichothecene biosynthetic gene. Journal of Crop Protection. 2013b; 2(4): 487-500.

16-Eudes F, Comeau A, Rioux S, Collin J. Phytotoxicité de huitmycotoxinesassociées à lafusariose de l’épi chez le blé. Canadian Journal of Plant Pathology 2000; 22: 286-292.

(10)

961

17-Parry DW, Jenkinson P, MacLeod L. Fusariumear blight (scab) in small grain cereals-areview. Plant Pathology 1995; 44: 207-238.

18-Mirocha CJ, Abbas HK, Windels CE, Xie W. Variation in deoxynivalenol, 15-acetyldeoxynivalenol, 3- acetyldeoxynivalenol and zearalenone production by Fusariumgraminearumisolates. Applied and Environmental Microbiology 1989; 55: 1315-1316.

19-Ryu J, Ohtsubo K, Izumiyama N, Nakamura K, TanakaT, Yamamura H, et al. The acute and chronic toxicities of nivalenol in mice. Fundamental and Applied Toxicology 1988; 11: 38-47.

20-Jurado M, Vazquez C, Patino B , Gonzalez-Jaen MT. PCR detection assays for the trichothecene-producing species Fusariumgraminearum, Fusariumculmorum, Fusariumpoae,FusariumequisetiandFusariumsporotrichioides. Systematic and Applied Microbiology 2005; 28: 562–568.

21-Desjardins AE, Manadhar HK, Plattner R.D, Maragos CM, Shrestha K,McCormick SP . Occurrence of Fusariumspecies and mycotoxins in Nepalesemaize and wheat and the effect of traditional processing methods on mycotoxin levels. Journal of Agricultural and Food Chemistry 2000; 48: 1377-1383.

(11)

962

…

Detection of nivalenol synthesis gene in madder seeds infected by Fusarium species by Polymerase Chain Reaction (PCR)

Seyyed Mohsen Hosseininejad¹, Mustafa Abedi-Tizaki^2*, Seyyed Alireza EsmailzadehHosseini², Fatemeh Kargar³, Kamal Sadeghi-Khomartaji²

1 Student Research Committee, Golestan University of Medical Sciences, Golestan, Iran.

2 Plant Protection Research Department, Yazd Agricultural and Natural Resources Research and Education Center, AREEO, Yazd, Iran.

3 General Practitioner, Abarkuh Health Network, ShahidSadoughi University of Medical Sciences, Yazd, Iran.

Received: 3 Dec 2015 Accepted: 10 Dec 2016

Abstract

Introduction: The madder is one of the most important crops. This product maybe infected by Fusarium species that produces potentially fatal mycotoxins. The purpose of this current research was to identify trichothecene mycotoxins produced by Fusarium fungi associated with madder seeds using molecular and biochemical methods.

Methods: From different regions of Ardekan and Bafgh, sampling from madder seeds was done. Culture and purification of Fusarium isolates were taken place in specific media. Detection of fungi with the ability to produce trichothecenes mycotoxins such as nivalenol (NIV) through gene-specific primers for Tri13 by the polymerase chain reaction method (PCR) was performed. To confirm the NIV production potential, high performance liquid chromatography (HPLC) was applied.

Results:In this study, five Fusarium species were identified from madder seeds. The results showed that among Fusarium species isolated from madder seeds, from which F. poae and F. equiseti had the ability to produce NIV. The gene involved in NIV synthesis, Tri13, was detected in two species, F. poae and F. equiseti, so that all these isolates were identified as NIV producing type. The HPLC performance showed that all studied Fusarium species had the potential to produce NIV mycotoxin.

Conclusion: Tri13 gene, in F. poae and F. equiseti, has a crucial role in trichothecene production. Thus, the PCR method can be used in various detections of mycotoxin-producing fungi, which have the potential mycotoxin production.

Keywords: Madder, Seeds, Fusarium, Mycotoxin

This paper should be cited as:

HosseininejadSM,Abedi-Tizaki M, EsmailzadehHosseiniSA, Kargar F, Sadeghi-KhomartajiK.Detection of nivalenol synthesis gene in madder seeds infected by Fusarium species by PCR J ShahidSadoughiUniv Med Sci 2017; 24(12):952-962

*Corresponding author: Tel:09132743601, email:[email protected]