Penetapan Kadar Ciprofloxacin Dalam Sediaan Kaplet Dengan Nama Dagang Dan Generik Secara Kromatografi Cair Kinerja Tinggi

(1)

Fahma Sari : Penetapan Kadar Ciprofloxacin Dalam Sediaan Kaplet Dengan Nama Dagang Dan Generik Secara Kromatografi Cair Kinerja Tinggi, 2009.

PENETAPAN KADAR CIPROFLOXACIN DALAM SEDIAAN KAPLET DENGAN NAMA DAGANG DAN GENERIK SECARA

KROMATOGRAFI CAIR KINERJA TINGGI

SKRIPSI

OLEH: FAHMA SARI NIM: 071524022

PROGRAM EKSTENSI SARJANA FAKULTAS FARMASI

UNIVERSITAS SUMATERA UTARA MEDAN

(2)

KATA PENGANTAR

Puji dan syukur kepada ALLAH SWT yang senantiasa memberikan rahmat dan kasih karunia-Nya sehingga penulis dapat meyelesaikan praktikum

biofarmasi dan penulisan Skripsi ini.

Melalui tulisan ini penulis mengucapkan terima kasih yang sebesar-besarnya kepada:

1. Prof.Dr.Effendy De Lux PutraSU.,Apt selaku pembimbing I yang telah

membimbing saya dari awal penelitian hingga selesainya skripsi ini.

2. Drs.Muchlisyam,Msi.,Apt selaku pembimbing II yang telah membimbing saya

dari awal penelitian hingga selesainya skripsi ini.

3. Prof.Dr.Sumadio Hadisahputra,Apt selaku dekan Fakultas Farmasi USU, yang

telah memberikan saya kesempatan untuk melakukan penelitian ini.

4. M.Akhir dan fatimah selaku orang tua saya yang selalu memberikan kasih

sayang dan semangat buat saya dalam menyelesaikan skripsi ini.

5. Rekan-rekan mahasiswa jurusan Farmasi khususnya stambuk 2007 yang tidak

dapat disebutkan satu per satu atas bantuan dan kerjasama yang baik sehingga

dapat menyelesaikan praktikum dan penulisan laporan ini.

Akhirnya penulis berharap semoga Skripsi ini dapat menjadi sumbangan

yang berarti bagi ilmu pengetahuan pada umumnya dan ilmu farmasi pada khususnya.

Medan, Agustus 2009

(3)

Penetapan kadar Ciprofloxacin dalam sediaan kaplet dengan nama dagang dan generik secara Kromatografi Cair Kinerja Tinggi

Abstrak

Ciprofloxacin adalah antibiotik yang berasal dari golongan Fluoroquinolon. Ciprofloxacin diindikasikan untuk pengobatan infeksi saluran kemih yang disebabkan oleh kuman - kuman yang multi resisten dan Pseudomonas Auroginosa. Kadarnya dapat ditentukan secara Kromatografi Cair

Kinerja Tinggi.

Dalam penelitian ini dilakukan penetapan kadar Ciprofloxacin dalam sediaan kaplet dengan nama dagang dan generik secara Kromatografi Cair Kinerja Tinggi ( KCKT ) metode fase balik menggunakan kolom VP-ODS ( 4,6 mm x 25 cm ), fase gerak yang digunakan campuran larutan asam fosfat 0,025 M : Acetonitril ( 80:20 ), laju alir 1,5 ml/menit dan pengukuran dilakukan pada panjang gelombang 278 nm.

Hasil uji identifikasi yang dilakukan terhadap Ciprofloxacin HCl BPFI, kaplet Ciprofloxacin dengan nama dagang dan generik diperoleh puncak dengan waktu tambat rata-rata 2,9 menit.

Luas puncak dengan konsentrasi, pada berbagai konsentrasi dengan koefisien korelasi (r) = 0,9993 dan dari hasil perhitungan diperoleh persamaan regresi Y = 76080,88 X + 2385291,75.

Hasil penelitian diperoleh kadar Ciprofloxacin sebenarnya berdasarkan luas puncak dari sediaan kaplet dangan nama dagang produksi Industri Farmasi : 104,51 ± 1,37% ( PT. Indofarma ), 104,03 ± 0,52% ( PT. Novell ), 104,02 ± 0,33% ( Sanbe ), dan dengan dagang Floxigra 95,11 ± 0,02% ( PT. Grahafarma ), Floxifar 103,09 ± 1,12% ( PT. Ifars ), Lapiflok 105,25 ± 0,73% ( PT. Lapi ), Viflox 107,12 ± 0,89% ( PT. Tropicana Mas Pharmaceutical ).

Kadar yang diperoleh dari hasil percobaan untuk sediaan kaplet yang ditentukan berdasarkan pengukuran luas puncak keseluruhannya memenuhi persyaratan kadar yang tertera dalam USP 30.

(4)

The determine of Ciprofloxacin grade in caplet with brand and generic name by High Performance Liquid Chromatography.

Abstract

Ciprofloxacin is an antibiotic of fluoroquinolon group. Ciprofloxacin is indicated to cure track infection caused by bacterials, that multi resisten and Pseudomonas Auroginosa, the grade could be determined by high performance

liquid chromatography.

This research is done determine grade of Ciprofloxacin in caplet with brand and generic name by high performance liquid chromatography, ( KCKT ) with reverse phase method use column VP-DOS ( 4,6 mm x 25 cm ) mobile phase is used mix phosfat acid 0,025 M : Acetonitril ( 80:20 ) , Flow rate 1,5 ml/menit

and measuring is done at ; 278 nm.

The result of identification test is done for Ciprofloxacin HCl BPFI caplet Ciprofloxacin with brand and generic name is gotton peak with retention time average 2,9 minutes.

Peak area with concentration at several concentration with coorelation coefision (r) = 0,9993 and the result of account is gotten regression aquation Y= 76080,88 X + 2385291,75.

The result of research is gotten truly Ciprofloxacin grade base on peak are or caplet with generic pharmacy Industrial production : 104,51 ± 1,37% (PT. Indofarma), 104,03 ± 0,52% ( PT. Novel ), 104,02 ± 0,33% (PT. Sanbe ), and with brand name Floxigra 95,11 ± 0,02% ( PT. Graha farma ), Floxifar 103,09 ± 1,12% ( PT. Ifars ), Lapiflox 105,25 ± 0,739% ( PT. Lapi ) piflox 107,12 ± 0,89% ( PT. Tropica Mas Pharmaceutical ).

The grade is gotten of practical result for tablet that determinedbased on measuring all peak area is suitable in USP 30 condition.

(5)

DAFTAR ISI

Halaman

JUDUL ... i

LEMBAR PENGESAHAN ... ii

ABSTRAK ... iii

ABSTRACT ... iv

DAFTAR ISI ... v

DAFTAR TABEL ... vii

DAFTAR GAMBAR ... viii

DAFTAR LAMPIRAN ... xi

BAB I PENDAHULUAN ... 1

1.1 Latar Belakang ... 1

1.2 Perumusan Masalah ... 3

1.3 Hipotesis ... 3

1.4 Tujuan ... 3

1.5 Manfaat ... 4

BAB II METODOLOGI PENELITIAN ... 5

2.1 Waktu dan Tempat Penelitian ... 5

2.2 Alat - alat ... 5

2.3 Bahan - bahan... 5

2.4 Pengambilan Sampel dan Pengolahan Sampel ... 5

2.6 Pola Penelitian ... 6

2.5.1 Pembuatan Fase Gerak Asam Posfat 0,25 M : Acetonitrril ... 6

(6)

2.5.3 Penentuan Garis Alas ... 6

2.5.4 Penentuan Kualitatif... 6

2.5.5 Penentuan Kuantitatif ... 7

2.5.5.1 Pembuatan Larutan Induk Baku Ciprofloxacin HCl BPFI ... 7

2.5.5.2 Pembuatan Kurva Kalibrasi Ciprofloxacin HCl BPFI ... 7

2.5.5.3 Penetapan Kadar Sampel ... 7

2.5.5.4 Penentuan Limit Of Detection (LOD) dan Limit Of Quantitation (LOQ) ... 8

2.5.5.5 Analisa Statistik ... 8

BAB III HASIL DAN PEMBAHASAN ... 10

BAB IV KESIMPULAN DAN SARAN... 16

4.1 Kesimpulan ... 16

4.2 Saran ... 16

DAFTAR PUSTAKA ... 17

(7)

DAFTAR TABEL

Halaman

Tabel 1 Nilai Qkritis pada Taraf Kepercayaan 99% ... 9

Tabel 2 Hasil Pengolahan Data dari Sediaan Tablet Ciprofloxacin ... 14

Tabel 3 Data Kadar Ciprofloxacin dalam Sediaan Tablet dengan Nama

(8)

DAFTAR GAMBAR

Halaman

Gambar 1 Kromatogram dari Larutan Ciprofloxacin HCl BPFI

pada Konsentrasi 200 mcg/ml yang dianalisa secara KCKT pada 278 nm, kolom VP – ODS (4,6 mm x 25 cm),

Fase Gerak Larutan Asam Posfat pH 3 dan Acetonitril (80:20), Laju Alir 1,5 ml/menit ... 11

Gambar 2 Kurva Kalibrasi Ciprofloxacin HCl BPFI

(9)

DAFTAR LAMPIRAN

Lampiran 1 Gambar Alat KCKT dan Syringe 100 µ l ... 18

Lampiran 2 Gambar Alat ultrasonoc cleaner dan penyaring ... 19

Lampiran 3 Kromatogram dari Larutan Ciprofloxacin HCl BPFI Konsentrasi 200 mcg/ml, Fase Gerak

Asam Posfat : Acetonitril (87:13) ... 20

Lampiran 4 Kromatogram dari Larutan Ciprofloxacin HCl BPFI Konsentrasi 200 mcg/ml, Fase Gerak

Asam Posfat : Acetonitril (80:20) ... 21

Lampiran 5 Kromatogram dari Larutan Ciprofloxacin HCl BPFI

Konsentrasi 50 mcg/ml ... 22

Lampiran 6 Kromatogram dari Larutan Ciprofloxacin HCl BPFI

Lampiran 9 Perhitungan Persamaan Regresi dari Kurva Kalibrasi Ciprofloxacin HCl BPFI yang Diperoleh seccara KCKT

pada 278 nm ... 24

(10)

dan Limit Of Quantitation (LOQ) Ciprofloxacin ... 26

Lampiran 11 Kromatogram dari Larutan Tablet Ciprofloxacin

(PT Indofarma) ... 27

Lampiran 12 Analisa Data Statistik untuk Mencari Kadar Sebenarnya dari Penyuntikan Larutan Ciprofloxacin (PT Indofarma)

secara KCKT ... 30

Lampiran 13 Kromatogram dari Larutan Tablet Ciprofloxacin (PT Novell) 31

Lampiran 14 Analisa Data Statistik untuk Mencari Kadar Sebenarnya dari Penyuntikan Larutan Ciprofloxacin (PT Novell)

secara KCKT ... 34

Lampiran 15 Kromatogram dari Larutan Tablet Ciprofloxacin (PT Sanbe) . 35 Lampiran 16 Analisa Data Statistik untuk Mencari Kadar Sebenarnya

dari Penyuntikan Larutan Ciprofloxacin (PT Sanbe)

secara KCKT ... 38

Lampiran 17 Kromatogram dari Larutan Tablet Floxigra

(PT Graha Farma) ... 39

Lampiran 18 Analisa Data Statistik untuk Mencari Kadar Sebenarnya dari Penyuntikan Larutan Floxigra (PT Graha Farma)

secara KCKT ... 42

Lampiran 19 Kromatogram dari Larutan Tablet Floxifar (PT Ifars)... 43

Lampiran 20 Analisa Data Statistik untuk Mencari Kadar Sebenarnya dari Penyuntikan Larutan Floxifar (PT Ifar)

(11)

Lampiran 21 Kromatogram dari Larutan Tablet Lapiflok (PT Lapi) ... 47

Lampiran 22 Analisa Data Statistik untuk Mencari Kadar Sebenarnya dari Penyuntikan Larutan Floxifar (PT Lapi)

secara KCKT ... 50

Lampiran 23 Kromatogram dari Larutan Tablet Viflox

(PT Tropika Mas Parmaceutikal) ... 51

Lampiran 24 Analisa Data Statistik untuk Mencari Kadar Sebenarnya dari Penyuntikan Larutan Viflox

(PT Tropika Mas Parmaceutical ) ... 54 secara KCKT

Lampiran 25 Contoh Perhitungan Penimbangan Sampel... 55

Lampiran 26 Contoh Perhitungan Mencari Kadar Ciprofloxacin... 56

(12)

BAB I PENDAHULUAN

I.1. Latar Belakang

Antibiotik adalah zat-zat kimia yang dihasilkan oleh fungi dan bakteri yang memiliki khasiat mematikan atau menghambat pertumbuhan kuman,

sedangkan toksisitasnya bagi manusia relatif kecil.

Menurut USP 30 (2007) kaplet Ciprofloxacin ditentukan secara

Kromatografi Cair Kinerja Tinggi menggunakan kolom VP-ODS (4,6mm x 25cm) Dengan fase gerak campuran asam fosfat dan asetonitril (87:13) volume penyuntikan 10 µ l dan deteksi dilakukan pada panjang gelombang 278 nm.

Masih adanya anggapan masyarakat yang cenderung menilai kualitas obat dengan melihat harganya, dimana mereka beranggapan bahwa obat yang mahal

lebih baik kualitasnya dibandingkan obat yang murah harganya.

Untuk mengatasi hal tersebut, Departemen kesehatan telah menetapkan peningkatan penggunaan obat generik yang didukung dengan peraturan mentri

kesehatan NO. 085/Menkes/Per/I/1989, tanggal 28 januari 1989 tentang kewajiban menulis resep dan atau menggunakan obat generik di fasilitas

pelayanan kesehatan pemerintah. (Depkes, 1989)

Kromatografi cair kinerja tinggi merupakan sistem pemisahan dengan kecepatan dan efisiensi yang tinggi karena didukung oleh kemajuan dalam

(13)

maupun kuantitatif, baik dalam komponen tunggal maupun campuran. (Ditjen

POM, 1995 )

Persyaratan kadar untuk sediaan kaplet Ciprofloxacin menurut USP 30

yaitu mengandung Ciprofloxacin tidak kurang dari 90,0 % dan tidak kebih dari 110,0% dari jumlah yang tertera pada etiket.

Berdasarkan hal tersebut diatas, peneliti tertarik menggunakan metode

KCKT menggunakan kolom shimpack VP-ODS (4,6mm x 25cm),dengan memodifikasi fase gerak asam fosfat dan asetonitril, untuk menetapkan kadar

Ciprofloxacin dalam sediaan kaplet dengan nama dagang dan generik yang beredar dipasaran dan membandingkan hasil yang diperoleh dengan persyaratan yang tercantum dalam USP 30.

1.2 Perumusan Masalah

1. Apakah penetapan kadar kaplet Ciprofloxacin dapat dilakukan secara

kromatografi cair kinerja tinggi (KCKT), menggunakan kolom VP-ODS (4,6 mm x 25 cm) dan dengan memodifikasi fase gerak campuran larutan asam fosfat dan acetonitril

2. Apakah kadar kaplet Ciprofloxacin dengan nama dagang dan generik

memenuhi persyaratan yang ditetapkan USP 30.

1.3 Hipotesis

1. Diduga penetapan kadar kaplet Ciprofloxacin dapat dilakukan secara

kromatografi cair kinerja tinggi (KCKT) dengan memodifikasi fase gerak.

2. Diduga kadar Ciprofloxacin dalam sediaan kaplet memenuhi persyaratan

(14)

1.4 Tujuan Penelitian

1. Melakukan penetapan kadar kaplet Ciprofloxacin secara kromatografi cair kinerja tinggi (KCKT) menggunakan kolom VP-ODS (4,6 mm x 25 cm)

dan dengan memodifikasi fase gerak campuran larutan asam fosfat dan acetonitril.

2. Melakukan pengujian hasil yang diperoleh dengan persyaratan kadar yang

ditetapkan USP 30.

1.5 Manfaat Penelitian

1. Pengembangan ilmu bahwa penetapan kadar Ciprofloxacin dalam sediaan

kaplet dapat juga dilakukan dengan kromatografi cair kinerja tinggi (KCKT) menggunakan kolom VP-ODS (4,6 mm x 25 cm).

(15)

BAB II

TINJAUAN PUSTAKA

2.1 Ciprofloxacin 2.1.1 Sifat Fisikokimia Rumus struktur :

Nama Kimia : 1- cyclopropyl-6 fluoro1,4 dihydro- 4- oxo-7- (1- piperazin yl)-3- quinoline carboxylic acid

Rumus Molekul : C17H18FN3O3

Berat Molekul : 331,346

Pemerian : serbuk dengan kekuningan hingga bewarna kuning

Kelarutan : mempunyai kelarutan dalamair pada suhu 25 0 C.Pka obat 6 dan 8,8

2.1.2 Farmakokinetik A. Absorpsi

Ciprofloxacin oral diserap dengan baik melalui saluran cerna.

Bioavailabilitas absolut adalah sekitar 70%, tanpa kehilangan yang bermakna dari metabolisme fase pertama. Berikut ini adalah konsentrasi serum maksimal dan area di bawah kurva (area under the curve, AUC) dari Ciprofloxacin yang

(16)

Tabel . Konsentrasi serum maksimum dan area di bawah kurva dari Ciprofoxacin

Dosis (mg)

Konsentrasi serum maksimal (ug/mL)

Area di bawah kurva (mg.hr/mL)

250 1.2 4.8

500 2.4 11.6

750 4.3 20.2

1000 5.4 30.0

Konsentrasi serum maksimal dicapai 1 sampai 2 jam setelah dosis oral. Konsentrasi rata-rata 12 jam setelah dosis 250, 500 dan 750 mg adalah 0,1; 0,2 dan 0,4 mg/mL.

B. Distribusi

Ikatan siprofloxacin terhadap protein serum adalah 20-40% sehingga tidak

cukup untuk menyebabkan interaksi ikatan protein yang bermakna dengan obat lain.

Setelah administrasi oral, Ciprofloxacin didistribusikan ke seluruh tubuh.

Konsentrasi jaringan seringkali melebihi konsentrasi serum, terutama di jaringan genital, termasuk prostat. Ciprofloxacin ditemukan dalam bentuk aktif di saliva,

sekret nasal dan bronkus, mukosa sinus, sputum cairan gelembung kulit, limfe, cairan peritoneal, empedu dan jaringan prostat. Ciprofloxacin juga dideteksi di paru-paru, kulit, jaringan lemak, otot, kartilago dan tulang. Obat ini berdifusi ke

(17)

konsentrasi serum puncak Ciprofloxacin juga ditemukan pada konsentrasi rendah

di aqueous humor dan vitreus humor.

C. Metabolisme

Empat metabolit Ciprofloxacin yang memiliki aktivitas antimikrobial yang lebih rendah dari Ciprofloxacin bentuk asli telah diidentifikasi di urin manusia sebesar 15% dari dosis oral.

D. Ekskresi

Waktu paruh eliminasi serum pada subjek dengan fungsi ginjal normal

adalah sekitar 4 jam. Sebesar 40-50% dari dosis yang diminum akan diekskresikan melalui urin dalam bentuk awal sebagai obat yang belum diubah. Ekskresi Ciprofloxacin melalui urin akan lengkap setelah 24 jam . Dalam urin

semua fluorokuinolon mencapai kadar yang melampaui konsentrasi hambat minimal (KHM) untuk kebanyakan kuman patogen selama minimal 12 jam.

Klirens ginjal dari Ciprofloxacin, yaitu sekitar 300 mL/menit, melebihi laju filtrasi glomerulus yang sebesar 120 mL/menit. Oleh karena itu, sekresi tubular aktif memainkan peran penting dalam eliminasi obat ini. Pemberian Ciprofloxacin

bersama probenesid berakibat pada penurunan 50% klirens renal Ciprofloxacin dan peningkatan 50% pada konsentrasi sistemik.

E. Efek Samping

Seperti obat lain ciprofloxacin juga dapat menimbulkan efek samping, Bila overdosis akan beresiko menimbulkan efek toksik dan sebaiknya dosis terapi yang

diberikan diturunkan atau dihentikan,tanda-tanda overdosis yang paling sering terlihat antara lain adalah pucat,masalah urinasi dan dalam penggunaan obat ini

(18)

seperti tanda-tanda yang terlihat seperti reaksi alergi,Sulit untuk bernafas,Pucat

pada bibir dan wajah, Diare dan pengeluaran urin berlebihan

,Halusinasi,depresi,kadang terdapat nyeri yang didapti pada berbagai tempat yang

berbeda. Pada efek samping yang lebih serius akan didapati gejala sebagai berikut antara lain insomnia, nyeri otot, Pandangan yang berkunang-kunang, Sangat sensitif terhadap sinar matahari, diare berat, nyeri perut dan anafilaksis (shok).

F. Bentuk Sediaan

Menurut USP 30 (2007) Ciprofloxacin dapat ditetapkan kadarnya secara

Kromatografi Cair Kinerja Tinggi. Selain itu menurut Clarke’s Ciprofloxacin dapat ditentukan kadarnya dengan Spektrofotometri.

2.1.3 Kegunaan

Ciprofloxacin merupakan antibiotik yang sering disebut atau digolongkan sebagai fluoroquinolones, ciprofloxacin bekerja dengan melawan bakteri yang ada

pada tubuh yaitu dengan menghentikan multiplikasi bakteri dengan cara menghambat reproduksi dan perbaikan materi genetik atau DNA. Pengobatan Ciprofloxacin digunakan dengan berbagai tipe sesuai dengan jenis bakteri yang

berbeda-beda.

2.2 Kromatografi

Kromatografi adalah suatu terminologi umum yang digunakan untuk bermacam- macam teknik pemisahan yang didasarkan atas partisi cuplikan diantara suatu fase gerak yang bisa berupa gas ataupun cairan, dan fase diam yang

(19)

Kromatografi dapat dibedakan atas berbagai macam tergantung pada

pengelompokannya. Berdasarkan pada mekanisme pemisahannya, kromatografi dibedakan menjadi :

a) Kromatografi adsorbsi b) Kromatografi partisi

c) Kromatografi pasangan ion

d) Kromatografi penukar ion

e) Kromatografi eksklusi ukuran, dan

f) Kromatografi afinitas A. Penggunaan Kromatografi

1. Pemakaian untuk tujuan kualitatif mengungkapkan ada atau tidak adanya

senyawa tertentu dalam cuplikan

2. Pemakaian untuk tujuan kuantitatif menunjukkan banyaknya masing-masing

komponen campuran

3. Pemakaian untuk tujuan preparatif untuk memperoleh komponen campuran

dalam jumlah memadai dalam keadaan murni. (Gritter, dkk., 1991)

Profil puncak dan pelebaran puncak

Selama pemisahan kromatografi, solut individual akan membentuk profil

konsentrasi yang simetris atau dikenal juga dengan profil Gaussian dalam arah aliran fase gerak. Profil dikenal juga dengan punak atau pita, secara perlahan - lahan akan melebar dan sering juga membentuk profil yang asimetrik karena solut

(20)

Puncak asimetris

Profil konsentrasi solut yang bermigrasi akan simetris jika rasio distribusi solut (D) konstan selama dikisaran konsentrasi keseluruhan puncak,

sebagaimana ditunjukkan oleh isoterm sorpsi yang linear yang merupakan plot konsentrasi solut dalam fase diam (Cs) terhadap konsentrasi solut dalam fase gerak(Cm). Meskipun demikian, kurva isot erm akan berubah menjadi 2 jenis

puncak asimetris yakni membentuk puncak yang berekor (tailing) dan adanya puncak pendahulu (fronting) jika ada perubahan rasio distribusi solut yang lebih

(21)

Untuk kromatografi yang melibatkan kolom, kuantifikasi dapat

dilakukan dengan luas puncak atau tinggi puncak. Tinggi puncak atau luas puncak berbanding langsung dengan banyaknya solut yang dikromatografi, jika dilakukan

pada kisaran detektor yang linier.

1. Metode tinggi puncak

Metode yang paling sederhana untuk pengukuran kuantitatif adalah

dengan tinggi puncak. Tinggi puncak diukur sebagai jarak dari garis dasar ke puncak maksimum seperti puncak 1, 2, dan 3 pada gambar 3. Penyimpangan garis

dasar diimbangi dengan interpolasi garis dasar antara awal dan akhir puncak.

Gambar 1. Pengukuran tinggi puncak

Metode tinggi puncak hanya digunakan jika perubahan tinggi puncak linier dengan konsentrasi analit. Kesalahan akan terjadi jika metode ini digunakan pada puncak yang mengalami penyimpangan (asimetris) atau jika kolom

mengalami kelebihan muatan.

2. Metode luas puncak

Prosedur penentuan luas puncak serupa dengan tinggi puncak. Suatu teknik untuk mengukur luas puncak adalah dengan mengukur luas puncak sebagai hasil kali tinggi puncak dan lebar pada setengah tinggi (W1/2). Teknik ini hanya

dapat digunakan untuk kromatografi yang simetris atau yang mempunyai bentuk serupa (Johnson, 1991).

(22)

Integrator digital mengukur luas puncak dan mengubahnya dalam bentuk angka

(Rohman, 2007).

Baik tinggi puncak maupun luasnya dapat dihubungkan dengan

konsentrasi. Tinggi puncak mudah diukur, akan tetapi sangat dipengaruhi perubahan waktu retensi yang disebabkan oleh variasi suhu dan komposisi pelarut. Oleh karena itu, luas puncak dianggap merupakan parameter yang lebih

akurat untuk pengukuran kuantitatif (Ditjen POM, 1995).

2.3 Kromatografi Cair Kinerja Tinggi (KCKT)

Kromatografi cair kinerja tinggi (KCKT) merupakan sistem pemisahan dengan kecepatan dan efisiensi yang tinggi. Hal ini karena didukung oleh kemajuan dalam teknologi kolom, sistem pompa tekanan tinggi, dan detektor yang

sangat sensitif dan beragam. KCKT mampu menganalisa berbagai cuplikan secara kualitatif maupun kuantitatif, baik dalam komponen tunggal maupun campuran

(Ditjen POM, 1995).

KCKT merupakan teknik pemisahan yang diterima secara luas untuk analisis dan pemurnian senyawa tertentu dalam suatu sampel pada sejumlah

bidang antara lain; farmasi, lingkungan dan industri-industri makanan.

Kegunaan umum KCKT adalah untuk pemisahan sejumlah senyawa

organik, anorganik, maupun senyawa biologis, analisis ketidakmurnian (impurities) dan analisis senyawa-senyawa yang tidak mudah menguap (nonvolatil). KCKT paling sering digunakan untuk: menetapkan kadar

senyawa-senyawa tertentu seperti asam-asam amino, asam-asam nukleat dan protein-protein dalam cairan fisiologis, menentukan kadar senyawa-senyawa aktif obat

(23)

Kelebihan KCKT antara lain:

−Mampu memisahkan molekul-molekul dari suatu campuran

−Resolusinya baik

−Mudah melaksanakannya

−Kecepatan analisis dan kepekaannya tinggi

−Dapat dihindari terjadinya dekomposisi/kerusakan bahan yang dianalisis

−Dapat digunakan bermacam-macam detektor

−Kolom dapat digunakan kembali

−Mudah melakukan rekoveri cuplikan

−Tekniknya tidak begitu tergantung pada keahlian operator dan

reprodusibilitasnya lebih baik

−Instrumennya memungkinan untuk bekerja secara automatis dan kuantitatif

−Waktu analisis umumnya singkat

−Kromatografi cair preparatif memungkinkan dalam skala besar −Ideal untuk molekul besar dan ion.

Keterbatasan metode KCKT adalah untuk identifikasi senyawa, kecuali

jika KCKT dihubungkan dengan spektrometer massa (MS). Keterbatasan lainnya adalah jika sampelnya sangat kompleks, maka resolusi yang baik sulit diperoleh (Munson, 1991).

2.3.1 Cara Kerja KCKT

Kromatografi merupakan teknik yang mana solut atau zat-zat terlarut

(24)

penggabungan secara tepat dari berbagai macam kondisi operasional seperti jenis

kolom, fase gerak, panjang dan diameter kolom, kecepatan alir fase gerak, suhu kolom, dan ukuran sampel (Rohman, 2007).

2.3.2 Komponen KCKT

Gambar 2. Bagan alat KCKT pompa

injektor

kolom

oven

detektor

Wadah

(25)

2.3.2.1 Wadah Fase Gerak

Wadah fase gerak harus bersih dan lembam (inert). Wadah pelarut kosong ataupun labu laboratorium dapat digunakan sebagai wadah fase gerak. Wadah ini

biasanya dapat meampung fase gerak antara 1 sampai 2 liter pelarut.Fase gerak sebelum digunakan harus dilakukan degassing(penghilangan gas) yang ada pada fase gerak, sebab adanya gas akan berkumpul dengan komponen lain terutama

dipompa dan detektor sehingga akan mengacaukan analisis. (Rohman, 2007)

2.3.2.2 Pompa

Pompa yang cocok digunakan untuk KCKT adalah pompa yang mempunyai syarat sebagaimana syarat wadah pelarut yakni pompa harus inert terhadap fase gerak. Bahan yang umum dipakai untuk pompa adalah gelas, baja

tahan karat, Teflon, dan batu nilam. Pompa yang dgunakan sebaiknya mampu memberikan tekanan sampai 5000 psi dan mampu mengalirkan fase gerak dengan

kecepatan alir 3 ml/ menit. 2.3.2.3 Injektor

Cuplikan harus dimasukkan kedalam pangkal kolom (kepala kolom),

diusahakan agas sesedikit mungkin terjadi gangguan pada kemasan kolom. Ada tiga jenis dasar injektor, yaitu:

a. Hentikan aliran/stop flow: aliran dihentikan, injeksi dilakukan pada kinerja atmosfir, sistem tertutup, dan aliran dilanjutkan lagi. Teknik ini bisa digunakan karena difusi di dalam aliran kecil dan resolusi tidak dipengaruhi.

b. Septum: injektor-injektor langsung ke aliran fase gerak umumnya sama

dengan yang digunakan pada kromatografi gas. Injektor ini dapat digunakan

(26)

semua pelarut-pelarut kromatografi cair. Disamping itu, partikel kecil dari

septum yang terkoyak (akibat jarum injektor) dapat menyebabkan penyumbatan.

c. Katup putaran (loop valve): ditunjukkan secara skematik dalam Gambar 5,

tipe injektor ini umumnya digunakan untuk menginjeksi volume lebih besar daripada 10 µ l dan sekarang digunakan dengan cara otomatis (dengan adaptor

khusus, volume-volume lebih kecil dapat diinjeksikan secara manual). Pada posisi LOAD, sampel loop (cuplikan dalam putaran) diisi pada tekanan

atmosfir. Bila katup difungsikan, maka cuplikan di dalam putaran akan bergerak ke dalam kolom.

Gambar 3. Tipe injektor katup putaran 2.3.2.4 Kolom

Kolom adalah jantung kromatografi. Berhasil atau gagalnya suatu analisis tergantung pada pemilihan kolom dan kondisi percobaan yang sesuai. Kolom dapat dibagi menjadi dua kelompok:

1. Kolom analitik: diameter khas adalah 2-6 mm. Panjang kolom tergantung

pada jenis kemasan. Untuk kemasan pelikel biasanya panjang kolom 50-100

(27)

2. Kolom preparatif: umumnya memiliki diameter 6 mm atau lebih besar dan

panjang kolom 25-100 cm.

Kolom umumnya dibuat dari stainless steel dan biasanya dioperasikan

pada temperatur kamar, tetapi bisa juga digunakan temperatur lebih tinggi, terutama untuk kromatografi penukar ion dan kromatografi eksklusi. Kemasan kolom tergantung pada mode KCKT yang digunakan.

2.3.2.5 Detektor

Suatu detektor dibutuhkan untuk mendeteksi adanya komponen cuplikan

dalam aliran yang keluar dari kolom. Detektor-detektor yang baik memiliki sensitifitas yang tinggi, gangguan (noise) yang rendah, kisar respons linier yang luas, dan memberi tanggapan/respon untuk semua tipe senyawa. Suatu kepekaan

yang rendah terhadap aliran dan fluktuasi temperatur sangat diinginkan, tetapi tidak selalu dapat diperoleh.

Detektor yang paling banyak digunakan dalam kromatografi cair modern kecepatan tinggi adalah detektor spektrofotometer UV 254 nm. Bermacam-macam detektor dengan variasi panjang gelombang UV-Vis sekarang menjadi populer

karena mereka dapat digunakan untuk mendeteksi senyawa-senyawa dalam rentang yang luas. Detektor indeks refraksi juga secara luas digunakan, terutama

dalam kromatografi eksklusi, tetapi umumnya kurang sensitif dari pada detektor spektrofotometer UV. Detektor lainnya, antara lain: detektor fluometer, detektor ionisasi nyala, detektor elektrokimia dan lain-lain juga telah digunakan.

2.3.2.6 Pengolahan Data

Komponen yang terelusi mengalir ke detektor dan dicatat sebagai

(28)

Gambar 4. Kromatogram

Guna kromatogram: 1. Kualitatif

Waktu retensi selalu konstan dalam setiap kondisi kromatografi yang sama dapat digunakan untuk identifikasi.

2. Kuantitatif

Luas puncak proporsional dengan jumlah sampel yang diinjeksikan dan

dapat digunakan untuk menghitung konsentrasi.

3. Kromatogram dapat digunakan untuk mengevaluasi efisiensi pemisahan

dan kinerja kolom (kapasitas ‘k’, selektifitas ‘α’, jumlah pelat teoritis

‘N’, jarak setara dengan pelat teoritis ‘HETP’ dan resolusi ‘R’).

2.3.2.7 Fase Gerak

Fase gerak atau eluen biasanya terdiri atas campuran pelarut yang dapat

bercampur yang secara keseluruhan berperan dalam daya elusi dan resolusi. Daya elusi dan resolusi ini ditentukan oleh polaritas keseluruhan pelarut, polaritas fase diam, dan sifat komponen-komponen sampel (Johnson & Stevenson, 1991).

Dalam kromatografi cair komposisi pelarut atau fase gerak adalah satu variabel yang mempengaruhi pemisahan. Terdapat keragaman yang luas dari fase

(29)

gerak yang digunakan dalam semua mode KCKT, tetapi ada beberapa sifat-sifat

yang diinginkan yang mana umumnya harus dipenuhi oleh semua fase gerak.

Fase gerak harus:

• Murni; tidak ada pencemar/kontaminan

• Tidak bereaksi dengan pengemas

• Sesuai dengan detektor

• Melarutkan cuplikan

• Mempunyai viskositas rendah

• Mudah rekoveri cuplikan, bila diinginkan

• Tersedia diperdagangan dengan harga yang pantas

Umumnya, pelarut-pelarut dibuang setelah digunakan karena prosedur

pemurnian kembali membosankan dan mahal. Dari semua persyaratan di atas, 4 persyaratan pertama adalah yang paling penting.

Gelembung udara (degassing) yang ada harus dihilangkan dari pelarut, karena udara yang terlarut keluar melewati detektor dapat menghasilkan banyak noise sehingga data tidak dapat digunakan (Putra, 2007).

Elusi Gradien dan Isokratik

Elusi pada KCKT dapat dibagi menjadi dua sistem yaitu:

1. Sistem elusi isokratik. Pada sistem ini, elusi dilakukan dengan satu macam atau lebih fase gerak dengan perbandingan tetap (komposisi fase gerak tetap selama elusi).

2. Sistem elusi gradien. Pada sistem ini, elusi dilakukan dengan campuran fase gerak yang perbandingannya berubah-ubah dalam waktu tertentu (komposisi

(30)

Elusi gradien didefinisikan sebagai penambahan kekuatan fase gerak

selama suatu analisis kromatografi berlangsung. Digunakan untuk meningkatkan resolusi campuran yang kompleks terutama jika sampel mempunyai kisaran

polaritas yang luas. Pengaruh yang menguntungkan dari elusi gradien adalah memperpendek waktu analisis senyawa-senyawa yang secara kuat ditahan di dalam kolom (Putra, 2007).

Tipe kromatografi

a. Kromatografi fase normal

Kromatografi fase normal (fase diam lebih polar daripada fase gerak), kemampuan elusi meningkat dengan meningkatnya polaritas pelarut. Fase gerak ini biasanya tidak polar. Dietil eter, benzen, hidrokarbon lurus seperti

pentana, heksana, heptana maupun iso-oktana sering digunakan. Halida alifatis seperti dikloro metana, dikloroetana, butilklorida dan kloroform juga

digunakan. Umumnya gas terlarut tidak menimbulkan masalah pada fase normal. Tekanan rendah diperlukan untuk menjaga kecepatan aliran yang memadai, karena pelarut ini kebanyakan kurang kental (Munson, 1991).

Fase diam yang digunakan dapat dilihat pada gambar dibawah ini:

(31)

b. Kromatografi fase terbalik

Kromatografi fase terbalik (fase diam kurang polar daripada fase gerak), kemampuan elusi menurun dengan meningkatnya polaritas pelarut.

Kandungan utama fase gerak fase terbalik adalah air. Pelarut yang dapat campur dengan air seperti metanol, etanol, asetonitril, dioksan, tetrahirofuran dan dimetilformamida ditambahkan untuk mengatur kepolaran fase gerak.

Dapat ditambahkan pula asam, basa, dapar dan/atau surfaktan. Mutu air harus tinggi baik air destilasi maupun awamineral.

Fase diam yang digunakan dapat dilihat pada gambar dibawah ini :

Gambar 6. Jenis-jenis fase diam untuk tipe kromatografi fase terbalik Adsorpsi solut oleh fase diam atau adsorben sangat tergantung pada:

1. Struktur kimia solut atau adanya gugus aktif tertentu yang berinteraksi dengan adsorben.

2. Ukuran partikel adsorben. Semakin kecil ukuran partikel adsorben, maka luas permukaannya semakin luas sehingga interaksinya dengan solut juga semakin luas.

3. Kelarutan solut dalam fase gerak. Solut yang makin mudah larut dalam fase

(32)

BAB III

METODOLOGI PENELITIAN

3.1 Waktu dan tempat penelitian

Penelitian dilakukan dilaboratorium kimia farmasi kuantitatif Fakultas Farmasi Universitas Sumatera Utara Medan pada bulan juni tahun 2009.

3.2 Alat-alat

Alat-alat yang digunakan adalah satu unit alat KCKT (Shimadzu) yang

terdiri dari vacum desagger(06 U – 20 As), pompa( LC – 20 AD), UV/Vis detector (dilengkapi dengan komputer dan printer) , kolom Shimpac VPODS (4,6 mm x 30 cm), wadah fase gerak, penyuntik µ l (100µ l), membran filter 0,45 µm,

dan 0,2µ m, neraca listrik dan alat gelas lainnya. 3.3 Bahan-bahan

Bahan – bahan yang digunakan adalah asam posfat p.a (Merck) , asetonitril p.a (Merck) , aquabidestilata (PT. Ikapharmindo Putramas), trietylamin p.a (Merk), Ciprofloxacin (Badan POM RI), kaplet Ciprofloxacin (PT.

Indofarma), Ciprofloxacin (PT. Novell), Ciprofloxacin (PT. Sanbe), Floxigra (PT. Graha Farma), Floxifar (PT. Ifar), Lapiflok (PT. Lapi) Viflox (PT. Tropica

Mas Pharmaceutical). 3.4 Pengambilan Sampel

Pengambilan sampel dilakukan secara purposif yaitu tanpa

membandingkan satu tempat dengan tempat yang lain karena tempat pengambilan sampel dianggap homogen. Dari hasil sampling diperoleh kaplet

(33)

Sanbe), Floxigra (PT. Graha Farma), Floxifar (PT. Ifars), Lapiflok (PT. Lapi),

Viflox (PT. Tropica Mas Pharmaceutical).

3.5 Pola penelitian

3.5.1 Pembuatan fase gerak Asam Posfat 0,025 M : Acetonitril

Tambahkan 0,85 ml asam posfat 85 % kedalam labu 500 ml, kemudian ditambahkan 450 ml aquabidestilata dan diatur pH hingga 3,0 dengan

penambahan trietylamin lalu di cukupkan hingga garis tanda. dibuat campuran asam posfat : acetonitril (80:20).

3.5.2 Penyiapan alat Kromatografi Cair Kinerja Tinggi

Masing - masing unit diatur, menggunakan kolom shimpac VP-ODS (4,6 mm x 25 cm). Sensitivitas 0,01 AUFS dan pengukuran menggunakan

detektor UV/Vis pada panjang gelombang 278 nm. Pada pompa dipilih mode aliran tetap dengan laju aliran 1,5 ml/menit.

3.5.3 Penentuan garis alas

Setelah diperoleh kondisi seperti 2.5.2 maka pompa dijalankan, Fase gerak dibiarkan mengalir selama 30 menit diperoleh garis alas yang cukup lurus

yang menandakan sistem tersebut telah stabil.

3.5.4 Penentuan kualitatif

Ciprofloxacin HCl BPFI dan Ciprofloxacin dalam sedian kaplet dengan nama dagang dan generik dengan konsentrasi 0,2 mg/ml masing-masing disuntikka n ke sistem KCKT dengan volume penyuntikan 20 µ l. Puncak yang

ditunjukkan diperhatikan dan dicatat waktu tambatnya kemudian waktu tambat masing-masing kaplet dibandingkan dengan waktu tambat Ciprofloxacin HCl

(34)

3.5.5 Penentuan kuantitatif

3.5.5 .1 Pembuatan larutan induk baku Ciprofloxacin HCl BPFI

Ditimbang Seksama sejumlah 10,0 mg Ciprofloxacin HCl BPFI,

dimasukkan kedalam labu tentukur 50 ml, dilarutkan dan diencerkan dengan aquabidestilata hingga garis tanda sehingga diperoleh larutan dengan konsentrasi 200 mcg/ml, disaring. Filtratnya digunakan sebagai larutan induk.

3.5.5.2 Pembuatan Kurva Kalibrasi Ciprofloxacin HCl BPFI

Dipipet larutan induk baku Ciprofloxacin sebanyak 0,5; 1; 2; 2,5 ml,

masing-masing dimasukkan kedalam labu tentukur 10 ml, diencerkan dengan aquabidestilata hingga garis tanda sehingga diperoleh konsentrasi 50, 100, 200, 250 mcg/ml, kemudian masing-masing konsentrasi diinjeksikan sebanyak 6 kali

ke sistem KCKT dengan volume penyuntikan 20 µ l. diukur pada panjang gelombang 278 nm dengan laju alir 1,5 ml/menit, lalu dicatat luas dan tinggi

puncaknya yang ditunjukkan pada kromatogram dan dibuat kurva kalibrasi serta dihitung persamaan garis regresinya.

3.5.5.3 Penetapan kadar sampel

Ditimbang 5 kaplet untuk masing – masing jenis kaplet, kemudian digerus sejumlah serbuk dan ditimbang seksama sejumlah kaplet setara dengan lebih

kurang 50 mg Ciprofloxacin, masukkan kedalam labu tentukur 50 ml, dilarutkan dan diencerkan dengan aquabidestilata hingga garis tanda sehingga diperoleh larutan dengan konsentrasi 1000 mcg/ml, kocok selama 15 menit dan disaring,

filtar pertama dibuang dan filtrat selanjutnya ditampung. Filtrat yang jernih digunakan sebagai larutan uji. Kemudian dari larutan ini dipipet 2 ml dan

(35)

hingga garis tanda sehingga diperoleh larutan dengan konsentrasi 200 mcg/ml.

Diinjeksikan 6 kali ke sistem KCKT dideteksi pada panjang gelombang 278 nm, laju alir 1,5 ml/menit kemudian dihitung kadarnya.

3.5.5.4 Penentuan Limit of Detection (LOD) dan Limit of Quantitation (LOQ) Batas deteksi atau Limit of Detection (LOD) adalah jumlah terkecil analit dalam sampel yang dapat dideteksi. Batas kuantitasi atau Limit of Quantitation

(LOQ) merupakan kuantitas terkecil analit dalam sampel.

Batas deteksi dapat dihitung berdasarkan pada Standar Deviasi (SD) dari

kurva antara respon dan kemiringan (slope) dengan rumus :

SD = 1 ) ( 2 _ − −

∑

n X X LOD = slope SD x 3

Sedangkan untuk penentuan batas kuantitasi dapat digunakan rumus :

LOQ = slope SD x 10 (Harmita, 2004)

3.5.5.5 Analisis Statistik Penolakan Hasil Pengamatan

Kadar Ciprofloxacin sebenarnya dalam sampel dapat diketahui dengan

menggunakan uji Q test. Cara untuk melakukan analisis terhadap data yang menyimpang adalah dengan Dixon’s Q-test yang dirumuskan sebagai berikut:

(36)

Jika nilai Qhitung lebih kecil dari nilai Qkritis maka hipotesis nol diterima

berarti tidak ada perbedaan antara nilai yang dicurigai dengan nilai-nilai yang lain (Rohman, 2007).

[image:36.595.114.441.244.562.2]

Hasil pengujian atau nilai Q yang diperoleh ditinjau terhadap daftar harga Q pada Tabel 1, apabila Q>Q0,99 maka data tersebut ditolak.

Tabel 1. Nilai Qkritis pada Taraf Kepercayaan 99%

Banyak data Nilai Qkritis

4 0,926

5 0,821

6 0,740

7 0,680

8 0,634

(37)

BAB IV

HASIL DAN PEMBAHASAN

Menurut USP 30 (2007) penetapan kadar Ciprofloxacin dalam sediaan kaplet dilakukan secara KCKT menggunakan kolom VP-ODS (Oktadesil silan 4,6 mm x 25 cm), fase gerak larutan asam fosfat pH 3 dan asetonitril (87:13). laju alir

1,5 ml/menit, volume penyuntikan 20 µl dan deteksi pada panjang gelombang 278

nm sehingga diperoleh kromatogram tunggal dari Ciprofloxacin.

Hasil orientasi identifikasi BPFI Ciprofloxacin pada konsentrasi 200

mcg/ml diperoleh waktu tambat 11,17 menit, dengan menggunakan fase gerak asam fosfat pH 3 dan acetonitril (87:13), oleh karena waktu tambatnya lebih besar

dari 10 menit maka peneliti melakukan modifikasi fase gerak untuk memperoleh waktu tambat yang optimum, dan dari hasil orientasi berikutnya diperoleh perbandingan fase gerak asam fosfat dan asetonitril (80:20) dengan waktu retensi

2,96 menit.

Pada kondisi yang sama untuk sampel Kaplet diperoleh waktu tambat

rata-rata sebagai berikut: kaplet Ciprofloxacin (PT. Indofarma) mempunyai waktu tambat rata-rata 2,96 menit, kaplet Ciprofloxacin (PT. Novell) mempunyai waktu tambat rata-rata 2,95 menit, kaplet Ciprofloxacin (PT. Sanbe) mempunyai waktu

tambat rata-rata 2,86 menit, kaplet Floxifar mempunyai waktu tambat rata-rata 2,96 menit, kaplet Floxigra mempunyai waktu tambat rata-rata 2,97 menit, kaplet

(38)

Adanya perbedaan waktu tambat pada kromatogram yang dihasilkan

karena perbedaan waktu penyuntikan analit sehingga kondisi analisis tidak sama. Hal ini disebabkan pula karena adanya penyimpanan analit yang akan diinjeksikan

dalam waktu yang cukup lama.

Waktu tambat dapat dipakai untuk mengidentifikasi suatu senyawa dengan cara membandingkannya dengan waktu tambat senyawa yang dikenal. Agar

perbandingan tersebut sahih, kondisi analitik yang dipakai untuk memperoleh waktu tambat, yaitu suhu, laju alir, beban kolom, dapar dan sebagainya harus

sama serta perbedaan waktu pengoperasian diusahakan mungkin (Rohman, 2007). Menurut Adnan (1997), untuk menghasilkan waktu retensi yang diharapkan maka aliran pelarut diharapkan dapat konstan. Hal ini dapat tercapai,

bila sistem pemompaan dapat diandalkan. Waktu retensi berbeda oleh faktor lain dari alatnya, misalnya panjang kolom, jenis fase diam serta banyaknya yang

digunakan pada lapisan penyangga padat, dan banyaknya sampel yang diinjeksikan.

Contoh kromatogram waktu tambat BPFI Ciprofloxacin pada konsentrasi

(39)

[image:39.595.136.486.81.212.2]

Gambar 1. Kromatogram dari larutan Ciprofloxacin HCl BPFI pada konsentrasi

200 mcg/ml, yang dianalisa secara KCKT pada λ 278 nm, kolom VP-ODS (4,6

mm x 25 cm), fase gerak larutan asam fosfat pH 3 dan acetonitril (80:20), laju aliran 1,5 ml/menit.

Penentuan linieritas kurva kalibrasi BPFI Ciprofloxacin ditentukan

berdasarkan luas puncak pada konsentrasi 50, 100, 200 dan 250 mcg/ml, diperoleh hubungan yang linier dengan koefisien korelasi (r) = 0,9993 dan

persamaan garis regresi Y = 76080,88 X + 2385291,75 dengan data penyuntikan larutan baku ciprofloxacin dapat dilihat pada lampiran 9.

Menurut Johnson & Stevenson (1991), penentuan kadar dapat dilakukan

dengan mengukur luas puncak atau tinggi puncak. Luas puncak dapat dipakai untuk pengkuantitatifan jika kita dapat mengendalikan laju alir dengan baik

karena luas puncak tidak begitu bergantung pada keragaman operator dan instrumen. Menurut Snyder & Kirkland (1979), penentuan kadar lebih baik dengan cara pengukuran luas puncak dibanding cara pengukuran tinggi puncak.

(40)

perubahan waktu retensi yang disebabkan oleh variasi suhu dan komposisi

(41)

Hasil linieritas kurva kalibrasi larutan Ciprofloxacin HCl BPFI ditentukan

berdasarkan luas puncak pada berbagai konsentrasi dapat dilihat pada gambar 2.

Gambar 2. Kurva kalibrasi baku Ciprofloxacin konsentrasi versus luas puncak pada konsentrasi 50, 100, 200, 250 mcg/ml yang dianalisa secara KCKT pada λ

[image:41.595.129.446.170.570.2]

(42)

Dari pengolahan data dapat dihitung kadar Ciprofloxacin berdasarkan luas

[image:42.595.113.510.189.755.2]

puncak yang terdapat dalam sediaan kaplet Ciprofloxacin. Hasilnya dapat dilihat pada tabel 2.

Tabel 2. Hasil pengolahan data dari sediaan kaplet Ciprofloxacin

No Sampel Perlakuan Luas Puncak Kadar

(%) 1

Kaplet Ciprofloxacin 500 mg (PT. Indofarma)

1 18288731 102,90

2 18533504 104,48

3 18556158 104,63

4 18581659 104,79

5 18633359 105,17

6 18631713 105,12

2

Kaplet Ciprofloxacin 500 mg (PT. Novell)

1 18470100 104,07

2 18497617 104,52

3 18475627 104,11

4 18441358 103,88

5 18391650 103,56

6 18466128 104,04

3

Kaplet Ciprofloxacin 500 mg (PT. Sanbe)

1 18429592 103,81

2 18437000 103,86

3 18452140 103,95

4 18491889 104,21

5 18450327 103,94

6 18508245 104,32

4

Kaplet Floxifar 500 mg (PT. Ifars)

1 18429435 103,81

2 18349220 103,29

3 18388577 103,54

4 18346932 103,27

5 18272796 102,79

6 18132748 101,89

5

Kaplet Floxigra 500 mg (PT. Graha Farma)

1 17067454 94,99

2 17097816 95,19

3 17067629 94,99

4 17094987 95,17

5 17084408 95,10

6 17099982 95,20

6

Kaplet Lapiflok 500 mg (PT. Lapi)

1 18538495 104,51

2 18601267 104,92

3 18679135 105,42

4 18714052 105,65

5 18684932 105,46

6 18698094 105,55

(43)

Kaplet Viflox 500 mg

(PT.TropicaMaspharmaceutical)

2 18836993 106,44

3 18903570 106,87

4 18972793 107,32

5 18977614 107,35

6 19073339 107,97

Berdasarkan pada hasil pengolahan data dan perhitungan statistik

diperoleh kadar Ciprofloxacin dalam sediaan kaplet seperti pada tabel 3. di bawah ini.

Tabel 3. Data kadar Ciprofloxacin dalam sediaan kaplet yang ditentukan berdasarkan luas puncak

No. Nama Sediaan Kadar

Ciprofloxacin

1. Kaplet Ciprofloxacin (PT.Indofarma) 104,51± 1,37%

2. Kaplet Ciprofloxacin (PT.Novell) 104,03± 0,52%

3. Kaplet Ciprofloxacin (PT.Sanbe) 104,02±0,33 %

4. Kaplet Floxigra 95,11±0,02 %

5. Kaplet Floxifar 103,09±1,12%

6. Kaplet Lapiflok 105,52±0,73%

7. Kaplet Viflox 107,12±0,89%

Sediaan kaplet Ciprofloxacin yang ditentukan kadarnya berdasarkan luas

puncak, keseluruhannya memenuhi persyaratan yang ditetapkan USP 30 (2007) yaitu mengandung Ciprofloxacin, C17H18FN3O3, tidak kurang dari 90,0% dan

tidak lebih dari 110,0% dari jumlah yang tertera pada etiket

[image:43.595.116.510.86.168.2]

(44)

BAB V

KESIMPULAN DAN SARAN

5.1 Kesimpulan

Ciprofloxacin dapat ditentukan kadarnya secara Kromatografi Cair Kinerja Tinggi menggunakan kolom L1 (Oksadetil silana) dengan fase gerak Asam posfat

: acetonitril (80:20).

Hasil penelitian yang dilakukan menunjukkan kadar Ciprofloxacin dalam sediaan kaplet yang ditentukan berdasarkan pengukuran luas puncak

keseluruhannya sesuai dengan persyaratan kadar yang tertera dalam USP 30 (2007), yaitu mengandung Ciprofloxacin C17H18FN3O3 tidak kurang dari 90,0%

dan tidak lebih dari 110,0% dari jumlah yang tertera pada etiket. 5.2 Saran

Disarankan agar dilakukan penelitian lebih lanjut kadar Ciprofloxacin

(45)

DAFTAR PUSTAKA

Anief, M. (2004). Ilmu Meracik Obat. Cetakan Kesebelas. Yogyakarta. Gadjah Mada University Press. Hal. 13.

Badan Pengawasan Obat dan Makanan.(2003). Cara Pembuatan Obat yang Baik.Badan pengawasan Obat dan Makanan. Bandung. Hal 1-21

De Lux Putra, E. (2007). Dasar-dasar Kromatografi Gas & Kromatografi Cair Kinerja Tinggi. Fakultas Farmasi USU-Medan. Hal. 88-91.

Ganiswarna,S.(2007). Farmakologi dan Terapi. Edisi kelima. Bagian Farmakologi FKUI. Jakarta. Universitas Indonesia Press. Hal. 720-721

Gritter, R.J, Bobbit, J.M, dan Schwarting, A.e. (1985). Introduction of Chromatograpy. Penerjemah: K. Padmawinata. Pengantar Kromatografi.Edisi III.Bandung: Penerbit ITB. Hal 186

Moffat, A. C., dkk. (2004). Clarke’s Analysis of Drugs and Poisons.Third Edition. Volume 1. London . The pharmaceutical Press. Hal 808-810

Pharmacopeia USP, (2007). The National Formulary. Edition 30 . The United States Pharmacopeial Convention. Page. 1759 – 1760.

Rohman, A. (2007). Kimia Farmasi Analisis. Yogyakarta. Penerbit Pustaka Pelajar. Hal. 378- 379, 406.

Snyder, L. R., and Kirkland, J. J. (1979). Introduction to Modern Liquid Chromatography. 2nd edition, By Jhon Wiley and Son. London. Page. 554.

Stevenson, R., Johnson, E. (1991). Dasar Kromatografi Cair. Bandung. Penerbit ITB. Hal. 99, 170 – 177.

Sudjana, (2002). Metoda Statistika. Edisi Keenam. Penerbit Tarsito. Bandung. Hal. 165, 229, 491.

(46)

(47)

Lampiran 1. Gambar Alat KCKT dan Syringe 100 µl

(48)

Lampiran 2. Gambar alat ultrasonic cleaner dan penyaring

(49)

(50)

(51)

(52)

(53)

(54)

(55)

[image:55.595.110.460.162.594.2]

Lampiran 9. Perhitungan persamaan regresi dan kurva kalibrasi Ciprofloxacin HCl BPFI yang diperoleh secara KCKT pada 278 nm

Tabel 1.Data Kalibrasi Ciprofloxacin Konsentrasi (X) terhadap Luas Puncak (Y)

No. X

(mcg/ml) Y XY X

2

Y2

1. 50 5941483 297074150 2500 35301220240000

2. 100 10268037 1026803700 10000 105432583800000

3. 200 17768907 3553781400 40000 315734056000000

4. 250 21211268 5302817000 62500 449917890200000

Σ 600 55189665 1080476250 115000 906385750200000

a =

( ) ( )( )

( )

x

( )

x n

n y x xy / / 2 2 − ∑

∑ ∑ ∑ − ∑ a = 4 / ) 600 ( ) 115000 ( 4 / ) 55189665 )( 600 ( ) 0 1018047625 ( 2 − − a = 90000 115000 8278454250 0 1018047625 − − a = 25000 1902022000

a = 76080,88 Y = ax + b

b = Y – a x

b = 13797423,75 – 76080,88 x 150 b = 13797423,75 - 11412132

b = 2385291,75 Y = aX + b

Sehingga diperoleh persamaan regresi Y = 76080,88 X + 2385291,75

(56)

r =

( ) ( )( )

( )

[

x x n

]

[

( )

y

( )

y n

]

n y x xy / / / 2 2 2

2 − ∑ ∑ − ∑

∑ ∑ ∑ − ∑ r =

[

(115000) (600) /4

][

(906385750200000) (55189695) /4

]

4 / ) 55189695 )( 600 ( ) 0 1018047625 ( 2 2 − − − r =

[

25000

]

[

906385750200000 (55189695) /4

]

1902022000 2 − r = 1903354025 1902022000

(57)

Lampiran 10. Perhitungan Limit of Detection (LOD) dan Limit of Quantitation (LOQ) Ciprofloxacin

Persamaan garis regresi Ciprofloxacin BPFI: y = aX + b

y = 76080,88 X + 2385291,75

No Konsentrasi(X)

X - X ( X - X )²

1 50 -100 10000

2 100 -50 2500

3 200 50 2500

4 250 100 10000

∑X = 600

X = 150 ((X-X)² = 25000

SD = 1 ) ( 2 _ − −

∑

n X X

= 25000

3 = 91,29

LOD = slope

SD x 3

= 3 91, 26 76080,88

x

= 0,0035 mcg/ml

LOQ =

slope SD x 10

= 10 91, 26

76080,88 x

(58)

Lampiran 11. Kromatogram dari Larutan Tablet Ciprofloxacin (PT. Indofarma)

(59)

(60)

(61)

(62)

(63)

(f)

a, b, c, d, e, dan f merupakan kromatogram penyuntikan 6 kali dari larutan kaplet Ciprofloxacin (PT. Indofarma) pada konsentrasi 200 mcg/ml yang dianalisa secara KCKT menggunakan kolomVP-ODS (4,6 mm x 25 cm), fase gerak campuran

(64)

Lampiran 12 Analisa data statistik untuk mencari kadar sebenarnya dari penyuntikan larutan CIPROFLOXACIN ( PT. Indofarma ) secara KCKT

No.

Kadar (%)

X

Area

Y

(

)

X

X −

(

X − X

)

2

1. 102,90* 18288731 -1,61 2,5921

2. 104,48 18533504 -0,03 0,0009

3. 104,63 18556158 0,12 0,0144

4. 104,79 18581659 0,28 0,0784

5. 105,13 18633359 0,62 0,3844

6. 105,12 18631713 0,61 0,3721

∑ X = 627,06

X = 104,51

∑

(

X − X

)

2 = 3,4423

SD =

(

)

1 2 −− ∑ n X X = 5 4423 , 3

= 0,8297

Dari 6 data yang diperoleh, data ke 1 adalah yang paling menyimpang sehingga diuji dengan uji Q.

102,90 - 104,48

Q = = 0,7085

105,13 – 102,90

(65)

µ = X ± t(1-1/2 α).dk

n SD ×

µ = 104,51 ± 4,0321

6 8297 , 0 ×

µ = 104,41 ± 1,37

103,14%

Lampiran 13 Kromatogram dari larutan tablet Ciprofloxacin (PT. Novell)

(a)

(66)

(67)

(d)

(68)

(f)

(f)

(69)

a, b, c, d, e, dan f merupakan kromatogram penyuntikan 6 kali dari larutan kaplet

Ciprofloxacin (Novell) pada konsentrasi 200 mcg/ml yang dianalisa secara KCKT

menggunakan kolomVP-ODS (4,6 mm x 25 cm), fase gerak campuran Asam fosfat dan

acetonitril (80:20), volume penyuntikan 20 µl. Laju

Lampiran 14. Analisa data statistik untuk mencari kadar sebenarnya dari penyuntikan larutan CIPROFLOXACIN (PT. Novell ) secara KCKT

No.

Kadar (%)

X

Area

Y

(

)

X

(70)

1. 104,07 18533504 0,04 0,0016

2. 104,52* 18556158 0,49 0,2401

3. 104,11 18581659 0,08 0,0064

4. 103,88 18633359 -0,15 0,0225

5. 103,56 18631713 -0,47 0,2209

6. 104,04 18466128 0,01 0,0001

∑ X = 624,18

X = 104,03

∑

(

X − X

)

2 = 0,4916

SD =

(

)

1 2 −− ∑ n X X = 5 4916 , 0

= 0,3135

104,52 - 104,11

Q = = 0,4271

104,52 - 103,56

nilai Q yang diperoleh tidak melebihi nilai Q0,99 yaitu 0,740 maka semua data diterima.

µ = X ± t(1-1/2 α).dk

n SD ×

µ = 104,03 ± 4,0321

6 3125 , 0 ×

µ = 104,03 ± 0,52

(71)

Lampiran 15 Kromatogram dari Larutan Tablet Ciprofloxacin (PT. Sanbe)

(72)

(73)

(74)

(75)

(e)

(76)

a, b, c, d, e, dan f merupakan kromatogram penyuntikan 6 kali dari larutan kaplet

Ciprofloxacin (PT. Sanbe) pada konsentrasi 200 mcg/ml yang dianalisa secara KCKT

menggunakan kolomVP-ODS (4,6 mm x 25 cm), fase gerak campuran Asam fosfat dan

acetonitril (80:20), volume penyuntikan 20 µl. Laju alir 1,5 ml/menit pada 278 nm.

(77)

No.

Kadar (%)

X

Area

Y

(

)

X

X −

(

X − X

)

2

1. 103,81 18429592 -0,21 0,0441

2. 103,86 18437000 -0,16 0,0256

3. 103,95 18452140 -0,07 0,0049

4. 104,21 18491889 0,19 0,0361

5. 103,94 18450327 -0,08 0,0064

6. 104,32* 18508245 0,3 0,09

∑ X = 624,09

X = 104,02

∑

(

)

2

X

X − = 0,2071

SD =

(

)

1 2 −− ∑ n X X = 5 2071 , 0

= 0,2035

104,32 - 104,21

Q = = 0, 2156

104,32 – 103,81

nilai Q yang diperoleh tidak melebihi nilai Q0,99 yaitu 0,740 maka semua data diterima.

µ = X ± t(1-1/2 α).dk

n SD ×

µ = 104,02 ± 4,0321 0, 2035

6 ×

µ = 104,02± 0,33

(78)

Lampiran 17. Kromatogram dari larutan Tablet Floxigra (PT. Graha Farma)

(a)

(79)

(80)

(d)

(81)

(e)

(82)

a, b, c, d, e, dan f merup