i
UJI AKTIVITAS SITOPROTEKTIF EKSTRAK APEL LOKAL DAN APEL IMPOR (Malus domestica Borkh) TERHADAP INDUKSI H2O2
PADA SEL FIBROBLAS NIH3T3
SKRIPSI
Diajukan sebagai salah satu syarat untuk memperoleh gelar Sarjana Farmasi
Diajukan Oleh : DARSINI 1308010008
PROGRAM STUDI FARMASI FAKULTAS FARMASI
UNIVERSITAS MUHAMMADIYAH PURWOKERTO PURWOKERTO
v
PERSEMBAHAN
Dengan nama Allah Yang Maha Pengasih lagi Maha Penyayang. Skripsi ini akan
dipersembahkan untuk:
1. Bapak dan Mamah tercinta yang selama ini telah memberikan kasih sayang yang
begitu besar dan senantiasa memberikan dukungan dari segala aspek serta doa yang
selalu dipanjatkan untuk mengiringi perjalanan hidup anak-anaknya. Termikasih atas
semuanya, tak cukup untuk membalah cinta dan kasih sayang yang telah kalian
berikan selama ini.
2. Kakakku tersayang Darsiti yang selalu mendukung dan memberikan doa kepada
adiknya. Terimakasih telah mendukung dan memberi semangat.
3. Adikku tersayang Akhmad syaefullah yang selalu memberikan semangat dan doa
kepada kakaknya.
4. Keluarga besar Alm.Bapak Warsip dan keluarga besar Alm.Bapak Tohari yang selalu
memberikan dukungan, nasihat dan doa kepada saya selama ini.
5. Dosen pembimbingku (Ibu Nunuk dan Pak Anjar) yang selama ini dengan sabar
membimbingku, terima kasih banyak.
6. Dosen, seluruh laboran dan Staf Karyawan Fakultas Farmasi Universitas
Muhammadiyah Purwokerto.
7. Sahabatku yang selalu setia disampingku dan memberikan dukungan serta doanya
Sulaeman, untuk sahabat seperjuangan SMKF Rita Permatasari, Van Fatkhan,
Prayogo Pangestu dan Desy Amalia G sekaligus menjadi partner penelitain yang
saling mendukung dan berjuang bersama. Kakak-kakak yang telah membawa kami ke
UMP Ari Fariz Mustofa dan Diaz. Sahabat saya Mitha R, Rumiyana Hartiningsih,
Noni Lestiwowati, Fitria naelinnajah, telah memberikan dukungan dan semangat.
Teman seperjuangan dalam penelitian (TIM KULTUR) Mba Dyfa Anggita, Endah
Nur I, Euis Aisyah, Fitria Yosi M, Nurfina Mafazah, Atika Dewi W, Siti Mulyanah,
Senja Nur S, Binaripan, Ridwan Setiaji terimakasih sudah saling membantu. Farmasi
angkatan 2013 terimakasih sudah menemani dan berjuang bersama, khususnya
untuk anak-anak farmasi kelas B kalian telah menjadi teman, sahabat, serta
keluarga. serta semua sahabatku yang tak dapat disebutkan satu per satu disini.
MOTTO
All imposible is possible for those who believe
Don’t lose the faith, keep praying, keep trying
“jika kamu tidak dapat menahan lelahnya beajar maka kamu harus sanggup menahan perihnya kebodohan”
vii
KATA PENGANTAR
Puji syukur penulis panjatkan kepada Allah SWT yang telah memberikan rahmat dan karuniaNya, sehingga penulis dapat menyelesaikan penelitian skripssi dengan judul “AKTIVITAS SITOPROTEKTIF EKSTRAK APEL LOKAL DAN APEL IMPOR (Malus domestica, Borkh) TERHADAP INDUKSI H2O2 PADA
SEL FIBROBLAST NIH3T3”. Skripsi ini disusun untuk memenuhi salah satu syarat dalam memperoleh gelar sarjana S1 di Fakultas Farmasi Universitas Muhammdiyah Purwokerto.
Penulis menyadari bahwa tanpa bantuan dari berbagai pihak, penulis tidak dapat menyelesaikan tugas ini dengan baik. Oleh karena itu, pada kesempatan ini penulis mengucapkan terimakasih kepada:
1. Drs. H. Syamsuhadi Irsyad, S.H., M.H. selaku Rektor Universitas Muhammadiyah Purwokerto.
2. Dr. Agus Siswanto, M.Si., Apt. selaku Dekan Fakultas Farmasi.
3. Dr. Nunuk Aries Nurulita, M.Si., Apt. Selaku dosen pembimbing I yang telah memberikan arahan, masukan, dan bimbingan dalam penyusunan skripsi ini.
4. Anjar Mahardian Kusuma, M.Sc., Apt. Selaku dosen pembimbing II dan pembimbing akademik yang telah memberikan arahan, bimbingan, dan masukan dalam penyusunan skripsi ini dan dalam akademik.
5. Seluruh dosen, laboran dan staf karyawan Fakultas Farmasi Universitas Muhammadiyah Purwokerto.
6. Kedua orang tua tercinta yang selama ini telah memberikan usaha berupa doa dan dukungan dari segala aspek.
7. Kakak dan adik tersayang yang selalu mendukung dan memberikan doa. 8. Sahabat-sahabat yang tak dapat disebutkan satu per satu disini, terimakasih
Penulis menyadari dalam penulisan skripsi ini masih jauh dari kata sempurna, untuk itu penulis sangat mengharapkan kritik dan saran yang membangun demi kebaikan penelitian di masa mendatang.
Semoga Allah SWT senantiasa membalas amal kebaikan yang telah Bapak/Ibu/Saudara berikan, dan harapan penulis semoga skripsi ini dapat bermanfaat bagi penulis sendiri dan bagi semua pihak yang membutuhkan.
Purwokerto, Juni 2017 Penulis,
ix
Uji Aktivitas Sitoprotektif Ekstrak Apel Lokal Dan Apel Impor (Malus domestica,
Borkh.) Terhadap Induksi H2O2 Pada Sel Fibroblas NIH3T3
Darsini1, Nunuk Aries Nurulita 2, Anjar Mahardian Kusuma 3.
ABSTRAK
Radikal bebas adalah atom, gugus atom atau molekul yang memiliki satu atau lebih elektron yang tidak berpasangan sehingga menyebabkan radikal bebas bersifat tidak stabil dan sangat reaktif. Radikal bebas dalam tubuh dapat menyebabkan penyakit degeneratif seperti kanker, kerusakan hati dan penuaan. Antioksidan berfungsi untuk menetralisis radikal bebas dan mencegah terjadinya kerusakan yang timbul akibat radikal bebas. Penelitian ini dilakukan uji aktivitas sitoprotektif pada pemberian ekstrak apel lokal dan apel import dari paparan H2O2
terhadap sel fibroblast NIH3T3. Penelitian ini bertujuan untuk menentukan bahwa dengan pemberian Ekstrak Apel Lokal (EAL) dan Ekstrak Apel Impor (EAI) dapat mempengaruhi % viabilitas sel fibroblast NIH3T3, menentukan bahwa dengan pemberian EAL dan EAI dapat melindungi sel fibroblast NIH3T3 dari paparan H2O2 pada uji induksi H2O2 dan recovery induksi H2O2. Uji viabilitas sel
menggunakan metode 3-(4,5-dimetiltiazol-2-yl)-2,5-difeniltetrazolium bromide (MTT). Konsentrasi larutan EAL dan EAI yaitu sebesar 50, 125, 250, 500, dan 1000 μg/mL. Uji induksi dan recovery H2O2 melihat pengaruh induksi H2O2
terhadap pemberian EAL, EAI, dan vitamin C. Hasil uji viabilitas sel EAL dan EAI memberikan nilai IC50 528 µg/mL dan 463 µg/mL. Perbandingan nilai IC50
EAL dan EAI menunjukan perbedaan signifikan (sig=0,006). Hasil induksi EAL dan EAI konsentrasi 50 ,125 , 250 ,500 dan 1000 µg/mL dengan kontrol negatif H2O2 terdapat perbedaan yang signifikan (sig = 0,05). Hasil Recovery induksi
EAL dan EAI konsentrasi 50 ,125 , 250 ,500 dan 1000 µg/mL dengan kontrol negatif H2O2 terdapat perbedaan yang signifikan (sig = 0,000). EAL dan EAI
memiliki kemampuan sitoprotektif dalam mempertahankan sel dari induksi H2O2.
Kata Kunci : Radikal bebas, antioksidan, apel lokal dan apel impor, H2O2, sel
Cytoprotective Activity Test of Local Apples and Imported Apple Apples (Malus domestica, Borkh.) Against H2O2 Induction On Fibroblast Cells NIH3T3
Darsini1, Nunuk Aries Nurulita 2, Anjar Mahardian Kusuma 3.
ABSTRACT
Free radicals are atoms, atomic groups or molecules that have one or more unpaired electrons that cause free radicals are unstable and highly reactive. Free radicals in the body can cause degenerative diseases such as cancer, liver damage and aging. Antioxidants serve to neutralize free radicals and prevent the occurrence of damage caused by free radicals. This study tested cytoprotective activity on local apple extract and imported apples from H2O2 exposure to NIH3T3 fibroblast cells. This study aims to determine that by administering EAL (Local Apples Extract) and EAI (Imported Apple Extract) can affect % viability of NIH3T3 fibroblast cells, determining that by administering EAL and EAI can protect fibroblast cells NIH3T3 from H2O2 exposure on H2O2 induction test and induction H2O2 recovery. Cell viability test using 3 (4,5dimethyltiazole2yl) -2,5-diphenyltetrazolium bromide (MTT) method. Concentrations of EAL solution and EAI were 50, 125, 250, 500, and 1000 μg/mL. The induction and recovery test of H2O2 observes the effect of H2O2 induction on EAL, EAI, and Vitamin C. The results of EAL cell viability test EAL and EAI give IC50 528 μg/mL and 463 μg/mL. The comparison of IC50 EAL and EAI values shows significant differences (sig = 0,006). The result of induction of EAL and EAI concentration 50, 125, 250,
500 and 1000 μg/mL with negative control H2O2 there was significant difference
(sig = 0,05). The results of EAL Induction Recovery and EAI concentrations of 50,
125, 250, 500 and 1000 μg/mL with negative control of H2O2 were significant
differences (sig = 0,000). EAL and EAI have a cytoprotective ability in maintaining cells from H2O2 induction.
xi
RIWAYAT HIDUP
Nama : Darsini
TTL : Cirebon, 25 November 1994 Jenis Kelamin : Perempuan
Agama : Islam
Pendidikan : Fakultas Farmasi UMP (2013-2017)
SMK Farmasi Muhammadiyah 2 Kedawung (2010-2013) SMPN 7 Kota Cirebon (2007-2010)
SDN 1 Pamengkang (2002-2007) Kegiatan Ilmiah Mahasiswa :
a. PKM-P (Program Kreativitas Mahasiswa – Penelitian) = Cegah Penuaan Dini dengan EKSALA, Ekstrak Apel Malang Melalui Penghambatan Enzim Beta-galaktosidase Tahnun 2017 (Anggota)
Keanggotaan Organisasi :
Anggota Bidang Keilmuan Ikatan Mahasiswa Muhammadiyah (IMM) Komisariat Farmasi periode 2013 - 2014.
Pengalaman :
a. Asisten Praktikum Ilmu Resep Dasar di Laboratorium Teknologi Farmasi (2014)
b. Asisten Praktikum Biokimia di Laboratorium Kimia Organik (2014) c. Asisten Praktikum Farmasi Fisikia di Biologi Farmasi (2014)
d. Asisten Praktikum FTS Solid di Laboratorium Teknologi Farmasi (2015) e. Asisten Praktikum Ilmu Resep Dasar di Laboratorium Teknologi Farmasi
(2016)
f. Asisten Praktikum Biokimia di Laboratorium Kimia Organik (2017) g. Asisten Praktikum FTS Solid di Laboratorium Teknologi Farmasi (2017) h. Asisten Praktikum FTS Semi-Solid Liquid di Laboratorium Teknologi Farmasi
(2017)
DAFTAR ISI
A. Penelitian Terdahulu ... 4
xiii
G. Hipotesis ... 13
BAB III METODE PENELITIAN ... 12
A. Jenis dan Rancangan Penelitian ... 14
B. Variabel Penelitian ... 14
C. Waktu dan Tempat Penelitian ... 14
D. Alat dan Bahan Penelitian ... 15 4. Skrining Golongan Metabolit Sekunder ... 5. Panen Sel Line Fibroblast NIH3T3 ... 6. Uji Viabilitas Sel dengan Metode MTT ... 7. Induksi Stres dengan H2O2 ...
4. Skrining Golongan Metabolit Sekunder ... 25
5. Uji Viabilitas Sel dengan Metode MTT ... 28
6. Uji Efek Induksi H2O2 dan Recovery ... 31
B. Keterbatasan Penelitian ... 40
BAB V KESIMPULAN DAN SARAN ... 41
A. Kesimpulan ... 41
B. Saran ... 41
DAFTAR PUSTAKA ... 42
DAFTAR TABEL
Halaman Tabel 1. Klasifikasi Ekstrak Apel ... 24 Tabel 2. Hasil Randemen Ekstrak Apel Lokal dan Apel Import ... 25 Tabel 3. Hasil Uji Identifikasi Skrining Metabolit Sekunde Ekstrak Apel
Lokal dan Apel Import ... 26 Tabel 4. Analisis Probit ... 30
xv
DAFTAR GAMBAR
Halaman
Gambar 1. Apel (Malus domestica, Brokh) ... 9 Gambar 2. Kerangka Konsep ... 13 Gambar 3. Hail Proses Ekatraksi Apel Lokal dan Apel Import, (A) Buah
Apel Segar, (B) Serbuk Simplisia, dan (C) Ekstrak Kental Apel Lokal dan Apel Import (Malus domestica, Brokh) ... 25 Gambar 4. Efek perlakuan EAL dan EAI. Terdapat perubahan morfologi sel
yang diberi perlakuan dibandingkan dengan kontrol sel dibawah pengamatan mikroskop interverted dengan perbesaran 10x.
... 29 Gambar 5. Grafik Konsentrasi EAL Dan EAI vs %viabilitas sel. ... 29 Gambar 6. Efek Perlakuan EAL dan EAI Setelah Paparan H2O2. Ekstrak
Dapat Melindungi Morfologi Sel Yang Diberi Paparan H2O2.
Dilakukan Dibawah Pengamatan Mikroskop Inverted Perbesaran 20x. ...……. 33 Gambar 7 Efek Induksi Pada EAL Dan EAI Dengan Diberikan Paparan
H2O2 Terhadap Sel Fibroblas NIH3T3. Sel Diberi Pengobatan Dengan 50, 125,250, dan 1000 µg/mL Ekstrak Apel dan Asam Askorbat 352 µM Selama 1 Jam Sebelum Stres Oksidatif H2O2
DAFTAR LAMPIRAN
Halaman
Lampiran 1. Cara kerja sistematis ... 47
Lampiran 2. Hasil Determinasi ... 48
Lampiran 3. Gambar Buah Apel ... 49
Lampiran 4. Proses Maserasi Dengan Etanol 70% ... 49
Lampiran 5. Proses Penguapan Dengan Rotary Evaporator ... 49
Lampiran 6. Penguapan Ekstrak Cair ... 50
Lampiran 7. Perhitungan Randemen Ekstrak Etanol Apel Lokal dan Apel Import ... 50
Lampiran 8. Uji Skrining Metabolit Sekunder . ... 51
Lampiran 9. Perhitungan Seri Konsentrasi Untuk Uji Viabilitas Sel Ekstrak Apel Lokal dan Apel Import. ... 52
Lampiran 10. Mapping (Pemetaan) Uji Viabilitas Sel. ... 52
Lampiran 11. Hasil %viabilitas Sel Pada Uji Viabilitas Sel. ... 55
Lampiran 12. Analisis Probit Untuk Uji Viabilitas Sel Ekstrak Apel Lokal .... 55
Lampiran 13. Analisis Probit Untuk Uji Viabilitas Sel Ekstrak Apel Import .... 57
Lampiran 14. Hasil Analisis Perbandingan IC50 Ekstrak Apel Lokal dan Apel Import Dengan Menggunakan Two-Way Annova ... ... 58
Lampiran 15. Hasil Analisis Uji Induksi H2O2 ... ... 59
Lampiran 16. Hasil Analisis Recovery ... ... 90
xvii
DAFTAR SINGKATAN
DMSO (Dimetil Sulfoksida)
DMEM (Dulbecco’sI Modified Ecgle Medium) DNA (Deoxyribo Nucleid Acid) EAI (Ekstrak Apel Import) EAL (Ekstrak Apel Lokal) ELISA (Enzym-linked Immunosorbent Assay)
FBS (Fetal Bovine Serum)
H2O2 (Hidrogen Peroksida)
IC50 (Inhibition concentration 50)
MTT (3-(4,5-dimethythiazol-2-yl)-2,5-diphenyl tetrazolium bromide) PBS (Phosphate Buffer Saline)
SDS (Sodium Dudecyl Sulphate)
