TM LAPORAN PRAKTIKUM MIKROBIOLOGI UMUM T (1)

NAMA NIM

KELOMPOK KELAS ASISTEN

JURUSAN TEKNOLOGI HASIL PERTANIAN

FAKULTAS TEKNOLOGI PERTANIAN

UNIVERSITAS BRAWIJAYA

MALANG

PRELAB

Tanggal Praktikum Jumat, 28 April 2017

Praktikum 3.4 TEKNIK ENUMERASI LANGSUNG

1. Bagaimana cara menghitung mikroba secara langsung menggunakan haemocytometer? Sebutkan dan jelaskan tahapannya!

Haemocytometer memiliki 5 ruang hitung, dimana pada setiap ruang terdapat 16 kotak akan tetapi ruang hitung di bagian tengah terdapat 25 kotak. Sel yang mati yang berada pada batas luar sebelah atas dan berada di sebelah kanan tidak dihitung. Sedangkan sel yang berada pada batas kiri ikut dihitung (Gunasekaran, 2007). Untuk menghitung mikroba pada hemocytometer pertama dibersihkan kaca slide demgam air mengalir kemudian dibersihkan dengan tisu. Pembersihan ruang hitung bisa juga dilakukan dengan alcohol. Setelah itu, diletakkan gelas penutup diatas slide kemudian di jepit dengan penjepit kanan dan kiri. Disiapkan suspensi mikroba yang akan dihitung. Kemudian geser mikroba sebanyak 2 tetes kemudian di teteskan pada tepi gelas penutup. Suspense akan menyebar ke ruang hitung. Dibiarkan beberapa saat agar mikroba stabil. Diletakkan haemocytometer pada meja mikroskop dan dihitung jumlah sel (Harmita, 2008).

Pada perhitungan menggunakan rumus (Gunasekaran, 2007).

Jumlah sel / ml¿ jumlah sel rata−ratatiap petak ×1000× faktor pengenceran luas petak(m m2)×ked a laman petak(mm)

2. Apakah yang harus dilakukan, jika mikroba yang terlihat di Haemocytometer terlalu banyak? Jelaskan

dengan jumlah yang ditumbuhkan. Sedangkan jumlah koloni dapat dihitung dengan rumus jumlah koloni dikalikan dengan 1/faktor pengenceran (Cheesbrough, 2010).

3. Sebutkan ukuran kotak dalam haemocytometer dan tuliskan rumus yang digunakan untuk menghitung mikroba menggunakan haemocytometer

Haemocytometer adalah alat uang digunakan untuk menghitung koloni mikroba yang berupa slide kaca tebal berbentuk persegi panjang. Ruang hitung yang dipakai adalah ruang hitung yang memiliki garis improved Neubauer. Luas kotak pada ruang hitung secara keseluruhan adalah 9mm2_{. Ruang hitung tersebut dibagi lagi menjadi 9 kotak besar, jadi}

masing-masing memiliki luas 1mm2_{. 9 ruang bidang tersebut masih dibagi lagi menjadi 16}

bidang sedang dengan luas masing-masing bidang adalah ¼ mm2 _{x ¼ mm}2_{. Untuk bidang}

besar yang letaknya di tengah, bidang dibagi menjadi 25 kotak kecil dan kemudian 1 bidang tersebut dibagi lagi menjadi 16 kotak kecil. Sehingga, jumlah kotak secara keseluruhan ada 400 kotak. Pada perhitungan menggunakan rumus (Harmita, 2007).

Jumlah sel / ml¿ jumlah sel rata−ratatiap petak ×1000× faktor pengenceran luas petak(m m2_{)× kedalaman petak}

DIAGRAM ALIR

Nama

NIM

Kelas

Kelompo k

Penggunaan Haemocytometer

Haemositometer

Dibilas dengan aquades dan alkohol

Dikeringkan dengan tissue

Diteteskan kultur tepat pada petak haemocytometer

Ditutup dengan kaca penutup dengan kemiringan 450

Diletakkan pada meja mikroskop

Diamati dengan perbesaran paling rendah untuk menemukan petak perhitungan pertama

Diamati dengan perbesaran lebih tinggi untuk menentukan fokus

Dihitung jumlah tiap kotak

Dilakukan perhitungan dengan rumus

Hasil Suspensi kultur

S. cerevisiae

Digojog

TINJAUAN PUSTAKA

Kultur Saccharomyces cerevisiae

Mikroorganisme ini termasuk pada kingdom jamur dengan spesialisasi khamir dengan nama dagang ragi yang telah digunakan pada pembuatan tape singkong maupun tape ketan dan pembuatan wine (minuman beralkohol) yang ditambahkan pada bahan tersebut dalam kondisi anaerob membentuk etanol pada hasil reaksi yang memberikan sifat rasa asam

Saccharomyces cereviceae dapat diproduksi menjadi ragi, baik untuk pembuatan roti ataupun minuman beralkohol. Pada pembuatan roti digunakan S. Cereviceae yang memiliki sifat antara lain menghasilkan CO2 yang tinggi serta mampu menghasilkan tekstur roti yang

baik. Sementara pada proses fermentasi alkohol memiliki sifat antara lain penghasil etanol yang tinggi. Pada fermentasi menggunakan kultur murni diperlukan penyiapan inokulum secara khusus dan dibutuhkan biaya yang relatif tinggi (Restu, 2009).

Nama

NIM

Kelas

Kelompo k

PERTANYAAN

1. Tuliskan hasil pengamatan jumlah sel menggunakan Haemacytometer (Data Kelas) (Data ini adalah data 25 kotak besar)

a. Saccaharomyces cerevisiae umur 24 jam pengenceran 10-1

2 3 1 0 1

1 2 3 6 4

1 3 1 3 2

0 4 4 3 3

2 2 1 2 2

Perhitungan:

∑

sel rata−rata= jumlah totalmikroorganisme yang teramati_jumlahkotak

∑

sel rata−rata=56₂₅=2,24

∑

sel_ml=

∑

sel rata−rata x1000x fp luas petak(mm¿¿2)x kedalaman(mm)¿

¿2,24×1000×10 −1

0,02×0,1

¿112.000sel/ml

Nama

NIM

Kelas

Kelompo k

b. Saccaharomyces cerevisiae umur 48 jam pengenceran 10-1 _{(Tukar Data)}

39 0 0 0 0

31 42 69 81 85

51 47 50 103 63

43 58 59 86 87

23 52 42 72 77

Perhitungan:

∑

sel rata−rata= jumlah totalmikroorganisme yang teramati_jumlahkotak

∑

sel rata−rata=1260₂₅ =50,04

∑

sel_ml=

∑

sel rata−rata x1000x fp luas petak(mm¿¿2)x kedalaman(mm)¿

¿50,04×1000×10 −1

0,02×0,1

¿252.000sel_ml

2. Hitunglah rata-rata jumlah sel serta jumlah sel dalam bahan/ml.



S. cerevisiae

24 jam

FP = 10

–1

Rata-rata jumlah sel:

¿56₂₅

= 2,24

Jumlah sel dalam bahan/ml:

∑

sel_ml

=

∑

sel rata−rata x1000x fp

luas petak(mm2)x kedalaman(mm)

=

2,24_0,02x1000_x0,01x10−1

= 112.000 sel/ml

= 112 x 10

3

_sel/ml



S. cerevisiae

48 jam

FP = 10

-1

Rata-rata jumlah sel:

=

1260₂₅

= 50,4

Jumlah sel dalam bahan/ml =

∑

sel_ml

=

∑

sel rata−rata x1000x fp

luas petak(mm2)x kedalaman(mm)

=

50,4_0,04x1000_x0,01x10−1

= 252.000sel/ml

Nama

NIM

Kelas

Kelompo k

3. Bahas data yang anda peroleh.

Dari data hasil pengamatan yang telah diperoleh, jumlah sel

per ml untuk kultur S. cerevisiae 48 jam adalah 252 x 103 _sel/ml.

tiap petak kecil dikalikan kedalaman petak. Luas petak kecil adalah

sebesar 0,04 mm2 _{didapat dari} 1

25x16=4001 , dan kedalaman standar

dari petak adalah 0,1 mm. Sehingga didapatkan hasil jumlah sel per ml untuk kultur S. cerevisiae 48 jam dengan faktor pengenceran 1

adalah sebesar 252 x 103 _sel/ml.

Dari data hasil pengamatan tuker data yang telah diperoleh, jumlah sel per ml untuk kultur S. cerevisiae 24 jam adalah 112 x

103 _{sel/ml. Hasil ini didapatkan dari penghitungan sel tiap kotaknya}

menggunakan mikroskop perbesaran 400x, seharusnya memakai perbesaran 40x terlebih dahulu namun media tersebut tidak terlihat jadi sukar untuk dihitung, maka praktikan langsung memakai perbesaran 400x sebab media tersebut tampak jelas di mikroskop sehigga mudah sekali untuk dihitung. Jumlah sel secara keseluruhan dari 25 petak adalah 56 sel dengan rata-rata jumlah sel tiap petak adalah 2,24. Hasil ini kemudian dimasukkan ke dalam rumus penghitungan jumlah sel per ml, yaitu rata-rata jumlah sel

dikalikan 1000 dikalikan faktor pengenceran yaitu sebesar 10-1

karena dilakukan pengenceran terlebih dahulu dengan perbandingan kultur : pepton adalah 1 : 9. Kemudian hasil tersebut dibagi dengan luas tiap petak kecil dikalikan kedalaman petak. Luas

petak kecil adalah sebesar 0,04 mm2 _{didapat dari} 1

25x16=4001 , dan

kedalaman standar dari petak adalah 0,1 mm. Sehingga didapatkan hasil jumlah sel per ml untuk kultur S. cerevisiae 24 jam dengan

faktor pengenceran 10-1 _{adalah sebesar 112 x 10}3 _sel/ml.

Dari percobaan serta pembahasan data diatas, didapatkan

bahwa jumlah sel per ml kultur S. cerevisiae pengenceran 10-1 ₄₈

Nama

pengenceran dengan 10-2 _{akan tetapi tidak tau kenapa kultur kami}

ada yang salah, maka dari itu akhirnya kelompok kami meminjam haeocytometer kelompok lain dengan melakukan perhitungan sendiri.

4. Tuliskan kesimpulan yang anda peroleh pada praktikum ini!

Teknik enumerasi langsung ini merupakan teknik yang digunakan untuk menghitung jumlah sel mikroba secara langsung menggunakan haemocytometer dengan bantuan mikroskop. Prinsip dari teknik enumerasi langsung pada praktikum ini adalah menghitung jumlah sel dengan menggunakan mikroskop dengan bantuan haemocytometer. Tujuan dari praktikum ini adalah untuk mengetahui dan menghitung jumlah sel yeast yang telah diinkubasi selama 24 jam dan 48 jam, sehingga dapat diketahui jumlah sel Saccaharomyces cerevisiae per ml. Dalam haemocytometer terdapat 9 kotak besar dan 1 kotak besar terdiri dari 25 kotak sedang dan 1 kotak sedang terdiri dari 16 kotak kecil.

Dari data hasil percobaan diatas, dapat disimpulkan bahwa kultur Saccaharomyces cerevisiae yang berumur 24 jam menghasilkan

jumlah sel sebanyak 112 x 103 _{sel per ml lebih sedikit dari kultur}

Saccaharomyces cerevisiae yang berumur 48 jam yang hanya

menghasilkan jumlah sel sebanyak 252 x 103 _{sel per ml.}

5. Sebutkan kelebihan dan kelemahan dalam penghitungan mikroba menggunakan haemocytometer!

Menurut (Adds, 2008) kelemahan dan kelebihan menggunakan teknik enumerasi langsung sebagai berikut

Kelebihan :

3. Hasil yang diperoleh mudah langsung didapat setelah dimasukkan dalam rumus

4. Dapat digunakan apabila data yang diinginkan harus cepat diperoleh

Kekurangan :

1. Hasil yang didapatkan kurang akurat karena setiap pengamatan memiliki daya hitung berbeda dan juga cara menghitung yang berbeda tiap orang maka hasil yang didapatkan bersifat subyektif. 2. Tidak dapat membedakan sel yang mati karena semua yang

terlihat akan dihitung.

3. Alat yang digunakan mudah rusak sehingga menggunakannya harus berhati hati dalam melakukan praktikum.

6. Jika pada pengamatan sel menggunakan haemocytometer diperoleh data sebagai berikut, hitunglah jumlah sel yeast per ml bahan!

No. Petak Jumlah sel No. petak Jumlah sel

bantuan haemocytometer. Tujuan dari praktikum ini adalah untuk mengetahui dan menghitung jumlah sel yeast yang telah diinkubasi selama 24 jam dan 48 jam, sehingga dapat diketahui jumlah sel Saccaharomyces cerevisiae per ml. Dalam haemocytometer terdapat 9 kotak besar dan 1 kotak besar terdiri dari 25 kotak sedang dan 1 kotak sedang terdiri dari 16 kotak kecil.

Dari data hasil percobaan diatas, dapat disimpulkan bahwa

kultur Saccaharomyces cerevisiae yang berumur 24 jam

menghasilkan jumlah sel sebanyak 251 x 103 _{sel per ml lebih sedikit}

dari kultur Saccaharomyces cerevisiae yang berumur 48 jam yang

hanya menghasilkan jumlah sel sebanyak 250 x 103 _{sel per ml. Dari}

percobaan serta pembahasan data diatas, didapatkan bahwa jumlah

sel per ml kultur S. cerevisiae pengenceran 10-1 _{48 jam lebih sedikit}

dari pada yang 24 jam. Hal ini tidak sesuai dengan literatur mungkin dikarenakan waktu inkubasi terlalu lama dari S. cerevisiae , tidak memperhatikan suhu serta pHnya optimalnya pada media yang tetap adalah + 20 jam, dan humen error . Seharusnya kelompok

kami melakukan pengenceran dengan 10-2 _{akan tetapi tidak tau}

Nama

NIM

Kelas

Kelompo k

Komponen Penilaian :

Jenis Penilaian Nilai

Maksimal

Nilai yang diperoleh

Diagram Alir 10

Data Hasil Pengamatan 10

Pembahasan laporan 70

Kesimpulan 10

TOTAL 100

Kompetensi Mahasiswa dan Nilai Maksimal Tiap Kompetensi

No Kompetensi Bisa Tidak

1. Mampu membuat preparat untuk enumerasi langsung

2. Mampu menentukan petak yang digunakan pada pembacaan haemocytometer

3. Mampu menghitung jumlah mikroba menggunakan haemocytometer

4. Mampu menghitung jumlah mikroba per ml bahan

ANALISA PROSEDUR

Nama dapat tersebar atau tercampur secara merata ke seluruh larutan karena pada tabung reaksi tempat penumbuhan S. cerevisiae selalu terdapat endapan kultur dibawah tabung reaksi, sebelum diambil S. cerevisiae divortex terlebih dahulu lalu diambil larutannya sebanyak 1 ml, caranya yaitu nyalakan bunsen dengan menggunakan korek, pegang tabung reaksi berisi kultur yang telah divortex di tangan kiri dan mikropipet yang telah disterilisasi dengan menggunakan alkohol dan pada ujungnya telah terpasang mikrotip 1 ml di tangan kanan, kemudian membuka sumbat kapas tabung reaksi dengan cara menjepit sumbat menggunakan jari kelingking dan jari manis tangan kanan lalu ditarik, setelah sumbat kapas dilepaskan, mulut tabung reaksi dipanasi sebentar pada atas api bunsen, kemudian tombol pada ujung atas mikropipet ditekan separuh dan mikropipet dimasukan ke dalam tabung reaksi kultur hingga seperempat mikrotip, tombol kemudian dilepaskan dan mikropipet dikeluarkan, mulut tabung reaksi dipanaskan sebentar sekali lagi dan selanjutnya ditutup kembali dengan menggunakan sumbat kapas dan diletakkan di rak tabung. Tabung reaksi lain yang berisi pepton dengan label 1 dipegang dengan menggunakan tangan kanan, sumbat kapas penutupnya dibuka, mulut tabung reaksi dipanaskan sebentar di atas bunsen, mikropipet selanjutnya dimasukkan setengah tabung reaksi, tombol pada ujung atas ditekan penuh hingga semua cairan di dalam mikrotip keluar, mikropipet dikeluarkan dari tabung reaksi, mulut tabung reaksi dipanaskan sebentar sekali lagi kemudian ditutup dengan menggunakan sumbat kapas dan diletakkan di rak tabung sehingga didapatkan S. cerevisiae 24 jam dengan

pengenceran 10-1_{, mikrotip pada ujung mikropipet dilepaskan dan}

dipisahkan di dalam gelas beker.

yang telah divortex di tangan kiri dan mikropipet yang telah disterilisasi dengan menggunakan alkohol dan pada ujungnya telah terpasang mikrotip 1 ml di tangan kanan, kemudian membuka sumbat kapas tabung reaksi dengan cara menjepit sumbat menggunakan jari kelingking dan jari manis tangan kanan lalu ditarik, setelah sumbat kapas dilepaskan, mulut tabung reaksi dipanasi sebentar pada atas api bunsen, kemudian tombol pada ujung atas mikropipet ditekan separuh dan mikropipet dimasukan kedalam tabung reaksi larutan 24 jam (FP 1) hingga seperempat mikrotip, tombol kemudian dilepaskan dan mikropipet dikeluarkan, mulut tabung reaksi dipanaskan sebentar sekali lagi dan selanjutnya ditutup kembali dengan menggunakan sumbat kapas dan diletakkan di rak tabung. Tabung reaksi lain yang berisi pepton dengan label 24 jam (FP 1) dipegang dengan menggunakan tangan kanan, sumbat kapas penutupnya dibuka, mulut tabung reaksi dipanaskan sebentar diatas bunsen, mikropipet selanjutnya dimasukkan setengah tabung reaksi, tombol pada ujung atas ditekan penuh hingga semua cairan didalam mikrotip keluar, mikropipet dikeluarkan dari tabung reaksi, mulut tabung reaksi dipanaskan sebentar sekali lagi kemudian ditutup dengan menggunakan sumbat kapas dan diletakkan di rak tabung sehingga didapatkan S. cerevisiae 24 jam dengan pengenceran 1, mikrotip pada ujung mikropipet dilepaskan dan dipisahkan didalam gelas beker. Setelah itu, hasil pengenceran 24 jam 1 divortex terlebih dahulu sebelum diamati pada alat haemocytometer gunanya untuk agar larutan tersebut tercampur secara merata.

Kemudian lakukan pengenceran 48 jam 10-1_{, mula-mula tabung reaksi}

Nama kelingking dan jari manis tangan kanan lalu ditarik, setelah sumbat kapas dilepaskan, mulut tabung reaksi dipanasi sebentar, kemudian tombol pada ujung atas mikropipet ditekan separuh dan mikropipet dimasukan kedalam tabung reaksi kultur hingga seperempat mikrotip, tombol kemudian dilepaskan dan mikropipet dikeluarkan, mulut tabung reaksi dipanaskan sebentar sekali lagi dan selanjutnya ditutup kembali dengan menggunakan sumbat kapas dan diletakkan di rak tabung. Tabung reaksi

lain yang berisi pepton dengan label 10-1 _{dipegang dengan menggunakan}

tangan kanan, sumbat kapas penutupnya dibuka, mulut tabung reaksi dipanaskan sebentar diatas bunsen, mikropipet selanjutnya dimasukkan setengah tabung reaksi, tombol pada ujung atas ditekan penuh hingga semua cairan didalam mikrotip keluar, mikropipet dikeluarkan dari tabung reaksi, mulut tabung reaksi dipanaskan sebentar sekali lagi kemudian ditutup dengan menggunakan sumbat kapas dan diletakkan di rak tabung

sehingga didapatkan S. cerevisiae 48 jam dengan pengenceran 10-1_,

mikrotip pada ujung mikropipet dilepaskan dan dipisahkan didalam gelas

beker. Setelah itu, hasil pengenceran 48 jam 10-1 _{divortex terlebih dahulu}

sebelum diamati pada alat haemocytometer gunanya untuk agar larutan tersebut tercampur secara merata.

Nama

NIM

Kelas

Kelompo k

cahaya yang diinginkan serta titik dimana perhitungan sampel kultur akan dimulai berupa pojok, batas-batas antar kotak kecil (16) adalah berupa 1 garis tipis, batas-batas antar kotak besar (25) adalah 3 garis tipis, dan batas antara kotak besar dengan sisi luar adalah 3 garis tipis yang setelahnya tidak terdapat garis vertikal maupun horizontal lagi. Untuk menentukan pojokkan dapat diatur dengan menggunakan pengatur vertikal horizontal yang terhubung ke meja preparat. Setelah dirasa pas, kemudian pupil cam yang telah terhubung pada perangkat laptop dan proyektor dipasangkan pada mikroskop dengan cara melepaskan salah satu lensa okuler dan menggantikannya dengan menggunakan pupil cam sehingga sampel kultur yang diamati dapat dihitung dengan mudah dengan cara mengular agar memudahkan pendataan.

Untuk pengamatan sampel larutan 48 jam 10-1_{, Pertama terlebih}

dahulu mensterilisasi haemocytomer dan cover glassnya, cara yang dilakukan adalah memegang haemocytometer dengan erat dan kuat namun tetap berhati-hati, membilas haemocytometer dengan menggunakan aquades pada kedua permukaannya, dibersihkan dengan menggunakan tisu secara searah supaya tidak lecet dipermukaannya karena dapat mempengaruhi hasil, menyemprotkan alkohol 70% ke haemocytometer pada kedua permukaanya, alkohol disemprotkan untuk melarutkan zat-zat organik seperti karbohidrat, lemak dan protein serta kultur yang mungkin masih menempel pada permukaan haemocytometer, kembali dibersihkan dengan menggunakan tisu kering baru secara searah dan kemudian diletakkan ditisu bersih yang telah disediakan. Selanjutnya adalah mensterilisasi cover glass haemocytometer dengan cara yang sama seperti saat mensterilisasi haemocytometernya. Setelah disterilisasi

tabung reaksi 48 jam dengan pengenceran 10-1 _{dipegang ditangan kiri dan}

diatas api bunsen, pipet tetes kemudian dimasukkan untuk mengambil

sampel larutan kultur 48 jam dengan pengenceran 10-1_{, larutan yang berisi}

Nama

NIM

Kelas

Kelompo k

DAFTAR PUSTAKA

Cheesbrough, M. 2010. District Laboratory Practice in Tropical Countries. Cambridge: Cambridge University Press

Gunasekaran, P. 2007. Laboratory Manual in Microbiology. New Delhi: New Age International (P) Limited

Harmita, 2008. Buku Ajar Analisis Hayati. Jakarta: Penerbit Buku Kedokteran EGC