UJI TOKSISITAS SUBKRONIK EKSTRAK ETANOL DAUN
KEDONGDONG PAGAR (Lannea coromandelica (Houtt.) Merr.)
PADA ORGAN HATI MENCIT JANTAN
SKRIPSI
Diajukan untuk melengkapi salah satu syarat untuk memperoleh Gelar Sarjana Farmasi pada Fakultas Farmasi
Universitas Sumatera Utara
OLEH:
DILLAKH DARMANSYAH
NIM 091501121
PROGRAM STUDI SARJANA FARMASI
FAKULTAS FARMASI
UNIVERSITAS SUMATERA UTARA
MEDAN
UJI TOKSISITAS SUBKRONIK EKSTRAK ETANOL DAUN
KEDONGDONG PAGAR (Lannea coromandelica (Houtt.) Merr.)
PADA ORGAN HATI MENCIT JANTAN
SKRIPSI
Diajukan untuk melengkapi salah satu syarat untuk memperoleh Gelar Sarjana Farmasi pada Fakultas Farmasi
Universitas Sumatera Utara
OLEH:
DILLAKH DARMANSYAH
NIM 091501121
PROGRAM STUDI SARJANA FARMASI
FAKULTAS FARMASI
UNIVERSITAS SUMATERA UTARA
MEDAN
PENGESAHAN SKRIPSI
UJI TOKSISITAS SUBKRONIK EKSTRAK ETANOL DAUN
KEDONGDONG PAGAR (Lannea coromandelica (Houtt.)
Merr)PADA ORGAN HATI MENCIT JANTAN
OLEH:DILLAKH DARMANSYAH NIM 091501121
Dipertahankan di hadapan Panitia Penguji Skripsi Fakultas FarmasiUniversitas Sumatera Utara
Pada tanggal: 7 Agustus 2015
Disetujui Oleh:
Dosen Pembimbing I, Panitia Penguji,
Aminah Dalimunthe, S.Si., M.Si., Apt. Dr. Edy Suwarso, S.U., Apt NIP 197806032005012004 NIP 130953857
Aminah Dalimunthe, S.Si., M.Si., Apt. Dosen Pembimbing II, NIP 197806032005012004
Drs. Rasmadin Mukhtar, M.S., Apt. Khairunnisa, S.Si., M.Pharm., Ph.D., Apt. NIP 194909101980031002 NIP 197802152008122001
Marianne,S.Si., M.Si., Apt NIP 198005202005012006
Medan, 30 September2015 Fakultas Farmasi
Universitas Sumatera Utara PejabatDekan,
KATA PENGANTAR
Puji dan syukur kehadirat Allah SWT, yang telah melimpahkan rahmat dan
karuniaNya, sehingga penulis dapat menyelesaikan penelitian dan penyusunan
skripsi dengan judul “Uji Toksisitas Subkronik Ekstrak Etanol Daun Kedongdong
Pagar (Lannea coromandelica (Houtt.) Merr.) Pada Organ Hati Mencit Jantan’’
untuk memenuhi syarat dalam memperoleh gelar Sarjana Farmasi pada Fakultas
Farmasi Universitas Sumatera Utara. Shalawat dan salam kepada Rasullah SAW.
Pada kesempatan ini penulis menyampaikan ucapan terima kasih kepada
Pejabat Dekan Fakultas Farmasi Universitas Sumatera Utara, Ibu Dr. Masfria,
M.S., Apt., yang telah memberikan bantuan dan fasilitas selama masa pendidikan.
Ibu Aminah Dalimunthe, S.Si., M.Si., Apt dan BapakDrs. Rasmadin Mukhtar M.S.,
Apt.,yang telah membimbing dengan penuh kesabaran, tulus dan ikhlas selama
penelitian dan penulisan skripsi ini berlangsung. Ibu Dra. Herawati Ginting M.Si.,
Apt., selaku Penasehat Akademik yang telah memberikan bimbingan kepada
penulis selama masa pendidikan.Bapak dan Ibu staf pengajar Fakultas Farmasi
Universitas Sumatera Utara yang telah mendidik penulis selama masa perkuliahan.
Ibu Marianne, S.Si., M.Si., Apt., selaku Kepala Laboratorium Farmakologi dan Ibu
Dra. Suwarti Aris, M.Si., Apt., selaku Kepala laboratorium Farmakognosi yang
telah memberikan fasilitas, petunjuk, dan membantu selama penelitian. Bapak Dr.
Edy Suwarso, S.U., Apt., IbuKhairunnisa, S.Si., M.Pharm., Ph.D., Apt. dan Ibu
Marianne, S.Si.,M.Si., Apt., selaku dosen penguji yang memberikan masukan,
kritik, arahan dan saran dalam penyusunan skripsi ini.
Penulis juga tidak lupa mengucapkan terima kasih dan penghargaan yang
Nurmeika Hafifah, Kakanda dan Adinda tersayang, Efriyanti Kartika S.T dan
Teguh Oktaviansyah Nur atas doa, dorongan dan pengorbanan baik moril maupun
materil, serta teman- teman Masinis 2009 atas doa, dorongan dan semangat dalam
penyelesaian skripsi ini.
Penulis menyadari bahwa skripsi ini masih memiliki banyak kekurangan,
oleh karena itu diharapkan kritik dan saran yang bersifat membangun dari semua
pihak guna perbaikan skripsi ini. akhir kata penulis berharap semoga skripsi ini
dapat bermanfaat bagi ilmu pengetahuan khususnya dibidang farmasi.
Medan, September 2015
Penulis,
UJI TOKSISITAS SUBKRONIK EKSTRAK ETANOL DAUN
KEDONGDONG PAGAR (Lannea coromandelica (Houtt.) Merr)
PADA ORGAN HATI MENCIT JANTAN
ABSTRAK
Uji toksisitas subkronik merupakan pengujian untuk mendeteksi efek toksik yang muncul setelah pemberian zat uji dengan dosis yang berulang pada hewan uji selama 28-90 hari.Daun kedongdong pagar berkhasiat sebagai antiinflammasi, antilambung, menyembuhkan luka, antimikroba, dan antidiabetes.Tujuan dari penelitian ini adalah untuk mengetahui keamanan dosis pada ekstrak etanol daun kedongdong pagar.
Serbuk simplisia dimaserasi dengan pelarut etanol 70%dan diuapkan dengan rotary evaporator ± 40oC selanjutnya ekstrak yang diperoleh diuji toksisitas subkroniknya menggunakan mencit sebanyak 24 ekor dibagi dalam 4 kelompok yaitu kelompok kontrol dan 3 kelompok perlakuan diberikan secara oral setiap hari selama 28 hari. Pengamatan dilakukan setiap hari meliputi gejala klinis, berat badan, kematian mencit, pengukuran kadar SGPT,kadar SGOT, serta histopatologi organ hatikemudiandilakukan analisis statistik dengan uji ANOVA menggunakan Statistical Program Service Solution (SPSS) versi 19.
Hasil pengamatan menunjukkan tidak ditemukan gejala toksik pada kelompok kontrol (Na-CMC 0,5%) dan kelompok ekstrak etanol daun kedongdong pagar dosis 250 mg/kg bb, sedangkan padadosis 500 mg/kg bb dan dosis 1000 mg/kg bb ditemukan gejala toksik. Hasil analisis berat badan dan berat organ relatif menunjukkan tidakada perbedaan yang signifikan antara kenaikan berat badan dan peningkatan berat organ relatif dengan pemberian ekstrak etanol daun kedongdong pagar (p>0,05). Mencit yang mati tidak dijumpai pada kelompok kontrol dan kelompok ekstrak etanol daun kedongdong pagardosis 250 mg/kg bb, sedangkan dosis 500 mg/kg bb dan 1000 mg/kg bb dijumpai ada mencit yang mati selama pemberian sediaan uji. Hasil analisis rata-rata kadar SGPT terdapat perbedaan yang signifikan antara semua kelompok perlakuan (p< 0,05). Kelompok kontrol (45,83 UI/l) dan kelompokEkstrak etanol daun kedongdong pagar dosis 250 mg/kg bb (55,17 UI/l), rata-rata kadar SGPT dari kedua kelompok ini masih dalam batas normal. Kelompok ekstrak etanol daun kedongdong pagar dosis 500 mg/kg bb (83,5 UI/l) dan dosis 1000 mg/kg bb (92,50 UI/l) melewati batas normal. Hasil analisis rata-rata kadar SGOT terdapat perbedaan yang signifikan antara semua kelompok perlakuan (p< 0,05). Kelompok kontrol (245,33UI/l) dankelompok ekstrak etanol daun kedondong pagar dosis 250 mg/kg bb (255,5 UI/l), rata-rata kadar SGOT dari kedua kelompok ini masih dalam batas normal. KelompokEkstrak etanol daun kedongdong pagar dosis 500 mg/kg bb (301,25 UI/l), dan dosis 1000 mg/kg bb (314 UI/l) melewati batas normal. Hasil makropatologi dan histopatologi organ hati pada kelompok kontrol ekstrak etanol daun kedongdong pagar dan dosis 250 mg/kg bb tidak dijumpai perubahan organ sedang dosis 500 dan 1000 mg/kg bb dijumpai perubahan organ, yang berarti ekstrak etanol daun kedongdong pagar toksik pada dosis 500 dan 1000 mg/kg bb.
SUBCHRONIC TOXICITY TESTS ETANOL EXTRACT OF
LEAF KEDONGDONG PAGAR (Lannea coromandelica (Houtt.)
Merr) IN ORGANS LIVER MALE MICE
ABSTRACTSubchronic toxicity is a test to detect the toxic effects that appear after administration of the test substance with repeated doses in animal for 28-90 days.The kedongdong pagar leaves can be used as antiinflamation, antiulcer, wound healing, antimicrobial, and antidiabetic.The aim of this study was to determine the safety dose of ethanol extract of kedongdong pagar leaves.
Simplex powder was macerated by ethanol 70% and evaporated by using rotary evaporator± 40oC then obtained extract was tested for its subchronic toxicity using 24 mice which were divided into 4 groups: control group was given CMC Na 0.5%, the treatment groups which were given with ethanol extract of kedongdong pagar leaves dose 250, 500 and 1000 mg/kg BW which were administered orally everyday for 28 days. Observations were conducted everyday including toxic symptoms, weight loss, death, measurement of SGPT level, SGOT level, macropathology and histopathology of liver then data were analyzed by ANOVA using the Statistical Program Service Solution (SPSS) version 19.
The results showed that the control group and ethanol extract of kedongdong pagar leaves dose 250 mg/kgBW group has no toxic symptoms, while dose 500mg/kg BW group anddose 1000 mg/kg BW group showed toxic symptoms. Result of body weight and relative organ weights analysis showed no significant difference in weight gain and increased organ weight relative within treatment groups given various dose of ethanol extract of kedongdong pagar leaves (p > 0.05). The death mice was not founded in the control group and ethanol extract of kedongdong pagar leaves dose 250mg/kg BW group, while in dose 500 mg/kg BW group and dose 1000 mg/kgBW group was founded the death mice. Result of SGPT level analysis showed significant differences within all groups (p < 0.05). The control group was 45.83 IU/l and ethanol extract of kedongdong pagar leaves dose 250 mg/kg BW group was 55.17 IU/l, SGPT level of these two groups were still in the normal state. Ethanol extract of kedongdong pagar leaves dose 500 mg/kg BW group was 83,5 IU/l and dose 1000 mg/kg BW group was 92.50 IU/l, SGPT level of these two was exceeds the ranges of normal state. Result of SGOT level analysis showed significant differences within all groups (p < 0.05). The control group was 245.33 IU/l, and ethanol extract of kedongdong pagar leaves dose 250 mg/kgBW group was 255.50 IU/l, SGOT level of these two groups were still in the normal state. ethanol extract of kedongdong pagar leaves dose 500 mg/kg BW group was 301.25 IU/l and dose 1000 mg/kg BW group was 314 IU/l, SGOT level of these groups exceeds the ranges of normal state. Macropathology and histopathology of liver result in the control group and treatment groups given with ethanol extract of kedongdong pagar leaves dose 250 mg/kg BW showed no changed while dose 500 and 1000 mg/kgBW showed changed organ, which mean ethanol extract of kedongdong pagar leaves were toxic at dose 500 and 1000 mg/kgBW.
DAFTAR ISI
Halaman
JUDUL ... i
HALAMAN PENGESAHAN ... ii
ABSTRAK ... iii
ABSTRACT ... iv
DAFTAR ISI ... v
DAFTAR TABEL ... ix
DAFTAR GAMBAR ... x
DAFTAR LAMPIRAN ... xi
BAB I PENDAHULUAN ... 1
1.1 Latar Belakang ... 1
1.2 Perumusan Masalah ... 4
1.3 Hipotesis ... 4
1.4 Tujuan Penelitian ... 4
1.5 Manfaat Penelitian ... 4
1.6 Kerangka Pikir Penelitian ... 5
BAB II TINJAUAN PUSTAKA ... 7
2.1 Uraian Tumbuhan ... 7
2.1.1 Sistematika Tumbuhan ... 7
2.1.2 Nama Lokal ... 7
2.1.3 Nama Asing ... 7
2.1.4 Kandungan Kimia ... 8
2.1.5 Morfologi Tumbuhan ... 8
2.2 Ekstraksi ... 8
2.3 Toksisitas ... 10
2.3.1 Uji Toksisitas Akut ... 11
2.3.2 Uji Toksisitas Subkronik ... 12
2.3.3 Uji Toksisitas Kronik ... 12
2.4 Hati ... 13
2.4.1 Anatomi Hati ... 13
2.4.2 Fisiologi Hati ... 15
2.4.3 Histologi Hati ... 15
2.4.4 Jenis Kerusakan Hati ... 16
2.4.5 SGPT (Serum Glutamic Pyruvic Transminase) ... 17
2.4.6 SGOT (Serum Glutamic Oxaloacetic Transminase) .. 18
BAB III METODE PENELITIAN ... 19
3.1 Alat dan Bahan ... 19
3.1.1 Alat ... 19
3.1.2 Bahan ... 19
3.2 Prosedur Pembuatan Simplisia ... 20
3.2.1 Pengambilan Bahan ... 20
3.2.2 Identifikasi Tumbuhan ... 20
3.2.3 Pembuatan Simplisia ... 20
3.3 Pemeriksaan Karakteristik Simplisia ... 20
3.3.1 Pemeriksaan Makroskopik Dan Organoleptik ... 21
3.3.2 Pemeriksaan Mikroskopik ... 21
3.3.3 Penetapan Kadar Air simplisia dan Ekstrak ... 21
3.3.5 Penetapan Kadar Sari Larut Etanol ... 22
3.3.6 Penetapan Kadar Abu Total Simplisia dan Ekstrak ... 22
3.3.7 Penetapan Kadar Abu Tidak Larut Asam Simplisia dan Ekstrak ... 23
3.4 Skrining Fitokimia Simplisia ... 23
3.4.1 Pemeriksaan Flavonoid ... 23
3.4.2 Pemeriksaan Alkaloid ... 24
3.4.3 Pemeriksaan Saponin ... 24
3.4.4 Pemeriksaan Tanin ... 24
3.4.5 Pemeriksaan Glikosida ... 25
3.4.6 Pemeriksaan Steroid / Triterpenoid ... 25
3.5 Proses Pembuatan EEDKP ... 25
3.6 Pemeriksaan Karakteristik EEDKP ... 26
3.7 Skrining Fitokimia EEDKP ... 26
3.8 Penyiapan Hewan Percobaan ... 26
3.9 Pembuatan Pereaksi ... 26
3.9.1 Pembuatan Suspensi Na- CMC 0,5% b/v ... 27
3.9.2 Pembuatan Suspensi EEDKP ... 27
3.10 Pengelompokan Hewan Uji dan Pemberian Sediaan Uji ... 27
3.10.1 Pengamatan Toksisitas Subkronik ... 28
3.10.2 Berat Badan ... 29
3.10.3 Kematian Hewan ... 29
3.10.4 Pengukuran Kadar SGPT dan SGOT ... 29
3.10.5 Penimbangan Organ ... 30
3.10.7 Pemeriksaan Histopatologi Organ ... 30
3.10.8 Analisis Statistik ... 32
BAB IV HASIL DAN PEMBAHASAN ... 33
4.1 Hasil Identifikasi Tumbuhan ... 33
4.2 Hasil Karakterisasi Simplisia dan Ekstrak ... 33
4.3 Skrining Serbuk Simplisia dan Ekstrak ... 34
4.4 Hasil Ekstraksi Daun Kedondong Pagar ... 35
4.5 Hasil Pengujian Toksisitas Subkronik... 35
4.5.1 Hasil Pengamatan Gejala Toksik ... 35
4.5.2 Hasil Pengamaan Berat Badan ... 36
4.5.3 Hasil Pengamatan Kematian ... 38
4.5.4 Hasil Pengukuran KadarSGPT ... 39
4.5.5 Hasil Pengukuran Kadar SGOT ... 40
4.5.6 Hasil Bobot Relatif Organ Hati ... 42
4.5.7 Hasil Pengamatan Makropatologi Organ Hati ... 44
4.5.8 Hasil Histopatologi Organ Hati ... 44
BAB V KESIMPULAN DAN SARAN ... 52
5.1 Kesimpulan ... 52
5.2 Saran ... 52
DAFTAR PUSTAKA ... 53
DAFTAR TABEL
Tabel Halaman
3.1 Hasil karakterisasi simplisia dan ekstrak ... 34
3.2 Hasil skrining serbuk simplisia dan ekstrak ... 34
3.3 Hasil pengamatan gejala toksik ... 36
3.4 Hasil rata-rata berat badan ... 37
3.5 Hasil pengamatan kematian ... 38
3.6 Hasil pengukuran SGPT ... 39
3.7 Hasil pengukuran SGOT ... 41
3.8 Hasil berat organ relatif mencit ... 43
3.9 Hasil pengamatan makropatologi organ hati ... 44
4.0 Hasilhistopatologi berdasarkan kerusakan hepatosit ... 45
DAFTAR GAMBAR
Gambar Halaman
1.1 Skema kerangka pikir Penelitian ... 6
3.1 Grafik rata-rata hasil pengukuran kadar SGPT ... 39
3.2 Grafik rata-rata hasil pengukuran kadar SGOT ... 41
3.3 Gambar histopatologi organ hati kontrol Na-CMC 0,5% ... 46
3.4 Gambar histopatologi organ hati dosis 250 mg/kg bb ... 47
3.5 Gambar histopatologi organ hati dosis 500 mg/kg bb ... 48
DAFTAR LAMPIRAN
Lampiran Halaman
1 Hasil identifikasi Tumbuhan ... 57
2 Komite etik penelitian hewan ... 58
3 Gambar tumbuhan kedongdong Pagar ... 59
4 Gambar daun dan simplisia kedongdong pagar ... 60
5 Hasil identifikasi mikroskopik simplisia ... 61
6 Bagan pembuatan ekstrak ... 62
7 Bagan alur penelitian ... 63
8 Perhitungan hasil penetapan kadar air serbuk simplisia daun kedongdong pagar... 64
9 Perhitungan hasil penetapan kadar sari larut air serbuk simplisia daun kedongdong pagar ... 65
10 Perhitungan hasil penetapan kadar sari larut etanol serbuk simplisia daun kedongdong pagar ... 66
11 Perhitungan hasil penetapan kadar abu total serbuk daun kedongdong pagar... 67
12 Perhitungan hasil penetapan kadar abu tidak larut asamserbuk simplisia daun kedongdong Pagar ... 68
13 Perhitungan hasil penetapan kadar air ekstrak etanol daun kedongdong pagar (EEDKP) ... 69
14 Perhitungan hasil penetapan kadar abu total ekstrak etanol daun kedongdong pagar (EEDKP) ... 70
15 Perhitungan hasil penetapan kadar abu tidak larut asam ekstrak etanol daun kedongdong pagar (EEDKP) ... 71
16 Contoh perhitungan dosis ... 72
17 Hasil pengukuran kadar SGPT ... 73
19 Hasil gambar makroskopik organ hati ... 75
20 Gambar alat,bahan,dan objek yang digunakan ... 77
21 Gambar hewan percobaan yang digunakan ... 79
22 Hasil analisis SPSS berat badan ... 80
23 Hasil analisis SPSS rata-rata kadar SGPT ... 87
24 Hasil analisis SPSS rata-rata kadar SGOT ... 90
UJI TOKSISITAS SUBKRONIK EKSTRAK ETANOL DAUN
KEDONGDONG PAGAR (Lannea coromandelica (Houtt.) Merr)
PADA ORGAN HATI MENCIT JANTAN
ABSTRAK
Uji toksisitas subkronik merupakan pengujian untuk mendeteksi efek toksik yang muncul setelah pemberian zat uji dengan dosis yang berulang pada hewan uji selama 28-90 hari.Daun kedongdong pagar berkhasiat sebagai antiinflammasi, antilambung, menyembuhkan luka, antimikroba, dan antidiabetes.Tujuan dari penelitian ini adalah untuk mengetahui keamanan dosis pada ekstrak etanol daun kedongdong pagar.
Serbuk simplisia dimaserasi dengan pelarut etanol 70%dan diuapkan dengan rotary evaporator ± 40oC selanjutnya ekstrak yang diperoleh diuji toksisitas subkroniknya menggunakan mencit sebanyak 24 ekor dibagi dalam 4 kelompok yaitu kelompok kontrol dan 3 kelompok perlakuan diberikan secara oral setiap hari selama 28 hari. Pengamatan dilakukan setiap hari meliputi gejala klinis, berat badan, kematian mencit, pengukuran kadar SGPT,kadar SGOT, serta histopatologi organ hatikemudiandilakukan analisis statistik dengan uji ANOVA menggunakan Statistical Program Service Solution (SPSS) versi 19.
Hasil pengamatan menunjukkan tidak ditemukan gejala toksik pada kelompok kontrol (Na-CMC 0,5%) dan kelompok ekstrak etanol daun kedongdong pagar dosis 250 mg/kg bb, sedangkan padadosis 500 mg/kg bb dan dosis 1000 mg/kg bb ditemukan gejala toksik. Hasil analisis berat badan dan berat organ relatif menunjukkan tidakada perbedaan yang signifikan antara kenaikan berat badan dan peningkatan berat organ relatif dengan pemberian ekstrak etanol daun kedongdong pagar (p>0,05). Mencit yang mati tidak dijumpai pada kelompok kontrol dan kelompok ekstrak etanol daun kedongdong pagardosis 250 mg/kg bb, sedangkan dosis 500 mg/kg bb dan 1000 mg/kg bb dijumpai ada mencit yang mati selama pemberian sediaan uji. Hasil analisis rata-rata kadar SGPT terdapat perbedaan yang signifikan antara semua kelompok perlakuan (p< 0,05). Kelompok kontrol (45,83 UI/l) dan kelompokEkstrak etanol daun kedongdong pagar dosis 250 mg/kg bb (55,17 UI/l), rata-rata kadar SGPT dari kedua kelompok ini masih dalam batas normal. Kelompok ekstrak etanol daun kedongdong pagar dosis 500 mg/kg bb (83,5 UI/l) dan dosis 1000 mg/kg bb (92,50 UI/l) melewati batas normal. Hasil analisis rata-rata kadar SGOT terdapat perbedaan yang signifikan antara semua kelompok perlakuan (p< 0,05). Kelompok kontrol (245,33UI/l) dankelompok ekstrak etanol daun kedondong pagar dosis 250 mg/kg bb (255,5 UI/l), rata-rata kadar SGOT dari kedua kelompok ini masih dalam batas normal. KelompokEkstrak etanol daun kedongdong pagar dosis 500 mg/kg bb (301,25 UI/l), dan dosis 1000 mg/kg bb (314 UI/l) melewati batas normal. Hasil makropatologi dan histopatologi organ hati pada kelompok kontrol ekstrak etanol daun kedongdong pagar dan dosis 250 mg/kg bb tidak dijumpai perubahan organ sedang dosis 500 dan 1000 mg/kg bb dijumpai perubahan organ, yang berarti ekstrak etanol daun kedongdong pagar toksik pada dosis 500 dan 1000 mg/kg bb.
SUBCHRONIC TOXICITY TESTS ETANOL EXTRACT OF
LEAF KEDONGDONG PAGAR (Lannea coromandelica (Houtt.)
Merr) IN ORGANS LIVER MALE MICE
ABSTRACTSubchronic toxicity is a test to detect the toxic effects that appear after administration of the test substance with repeated doses in animal for 28-90 days.The kedongdong pagar leaves can be used as antiinflamation, antiulcer, wound healing, antimicrobial, and antidiabetic.The aim of this study was to determine the safety dose of ethanol extract of kedongdong pagar leaves.
Simplex powder was macerated by ethanol 70% and evaporated by using rotary evaporator± 40oC then obtained extract was tested for its subchronic toxicity using 24 mice which were divided into 4 groups: control group was given CMC Na 0.5%, the treatment groups which were given with ethanol extract of kedongdong pagar leaves dose 250, 500 and 1000 mg/kg BW which were administered orally everyday for 28 days. Observations were conducted everyday including toxic symptoms, weight loss, death, measurement of SGPT level, SGOT level, macropathology and histopathology of liver then data were analyzed by ANOVA using the Statistical Program Service Solution (SPSS) version 19.
The results showed that the control group and ethanol extract of kedongdong pagar leaves dose 250 mg/kgBW group has no toxic symptoms, while dose 500mg/kg BW group anddose 1000 mg/kg BW group showed toxic symptoms. Result of body weight and relative organ weights analysis showed no significant difference in weight gain and increased organ weight relative within treatment groups given various dose of ethanol extract of kedongdong pagar leaves (p > 0.05). The death mice was not founded in the control group and ethanol extract of kedongdong pagar leaves dose 250mg/kg BW group, while in dose 500 mg/kg BW group and dose 1000 mg/kgBW group was founded the death mice. Result of SGPT level analysis showed significant differences within all groups (p < 0.05). The control group was 45.83 IU/l and ethanol extract of kedongdong pagar leaves dose 250 mg/kg BW group was 55.17 IU/l, SGPT level of these two groups were still in the normal state. Ethanol extract of kedongdong pagar leaves dose 500 mg/kg BW group was 83,5 IU/l and dose 1000 mg/kg BW group was 92.50 IU/l, SGPT level of these two was exceeds the ranges of normal state. Result of SGOT level analysis showed significant differences within all groups (p < 0.05). The control group was 245.33 IU/l, and ethanol extract of kedongdong pagar leaves dose 250 mg/kgBW group was 255.50 IU/l, SGOT level of these two groups were still in the normal state. ethanol extract of kedongdong pagar leaves dose 500 mg/kg BW group was 301.25 IU/l and dose 1000 mg/kg BW group was 314 IU/l, SGOT level of these groups exceeds the ranges of normal state. Macropathology and histopathology of liver result in the control group and treatment groups given with ethanol extract of kedongdong pagar leaves dose 250 mg/kg BW showed no changed while dose 500 and 1000 mg/kgBW showed changed organ, which mean ethanol extract of kedongdong pagar leaves were toxic at dose 500 and 1000 mg/kgBW.
BAB I
PENDAHULUAN
1.1Latar Belakang
Wilayah Indonesia memiliki hutan tropis yang merupakan wilayah dengan
megadiversitas sumber daya alam. Berdasarkan fitogeorafi, Indonesia termasuk di
dalam kawasan Malesia. Kawasan Malesia ini merupakan salah satu kawasan
botani dunia yang terpenting, karenadidalamnya terkandung keanekaragaman
hayati yang menyamai kawasanAmazon di Amerika Selatan. Apabila kekayaan
tumbuhan tersebutdigabungkan dengan kekayaan mikroorganisme dan biota laut,
makaIndonesia merupakan sumber keanekaragaman hayati raksasa (Wahjoedi,
dkk., 2004).
Pemakaian bahan alam, terutama yang berasal dari bahan tumbuh –
tumbuhanyang digunakan untuk tujuan pencegahan dan pengobatanpenyakit telah
dikenal sejak zaman dahulu oleh umat manusia. Bahan – bahanalam ini dikenal
sebagai obat tradisional, oleh karena prinsip-prinsippemakaiannya masih secara
tradisional. Umumnya khasiat obat-obattradisional sampai saat ini hanya
didasarkan pada pengalaman empiris saja(Mulyono, 2004).
Obat tradisional merupakan bahan atau ramuan bahan yang berasaldari
tumbuh-tumbuhan, hewan, dan mineral, sediaan sarian (galenik) ataucampuran dari
bahan tersebut yang secara turun temurun telah digunakanuntuk pengobatan. Saat
ini semakin banyak masyarakat yangmenggunakan bahan alam sebagai obat,
sehingga diperlukan penelitianlebih lanjut mengenai uji keamanan obat tradisional
tersebut (Ditjen POM,2000).
Penelitian mengenai obat tradisional tanaman obat, terusberlangsung bahkan
hingga saat ini baru beberapa penelitianobat tradisional ataupun tanaman obat yang
digunakan dalam fasilitaspelayanan kesehatan. (Ditjen POM, 2000).
Salah satu tanaman yang dapat digunakan sebagai bahan obat alami adalah
daun kedondong pagar, tumbuhan ini secara tradisional digunakan untuk obat luka
luar, luka dalam, sakit perut, penyakit jantung, astringen, lepra, disentri, dan nyeri
lokal (Reddy,dkk., 2011). Berdasarkan hasil penelitian, Daun kedongdong pagar
mengandung senyawa ß-sitosterol, polifenol termasuk tannin seperti asam ellagic,
asam gallic, dan beberapa flavonoid seperti quercetin, kaempferol, isoquercetin,
leucocyanidin, leucodelphidine (Reddy, dkk., 2011).
Beberapa penelitian yang telah dilakukan terhadap khasiat daun
kedongdong pagar, antara lain antiinflammasi (Sholichah, dkk., 2012),
antimaag,(Reddy, dkk., 2011), penyembuhan luka, antimikroba (Sathish, dkk.,
2010), serta antidiabetes (Premjanu, dkk., 2014).Sampai saat ini
penggunaantanaman daun kedongdong pagar sebagaitanaman berkhasiat obat
masih berdasarkan pengalaman empiris. Dosis penggunaan secara ilmiah belum
dilakukan pengkajian secara pasti.Pengembangan daun kedongdong pagar sebagai
bahan sediaan obat alami harus didukung oleh penelitian.Salah satu penelitian yang
dilakukan adalah pengujian toksisitas. Peneliti sebelumnya telah melakukan uji
toksisitas akut dengan nilai LD50 sebesar 2000 mg/kgBB mencit (Reddy, dkk.,
2011).
Toksisitas adalah kemampuan suatu zat kimia dalam menimbulkan
kerusakan pada organisme baik saat digunakan atau saat berada dalam
lingkungan.Secara umum toksisitas dibedakan menjadi toksisitas akut, toksisitas
subkronik dan toksisitas kronik (Priyanto, 2009).Uji toksisitas bertujuan untuk
terdapat dalam zat-zat kimia, termasuk dalam tumbuh-tumbuhan (Widyastuti,
2008).Uji toksisitas subkronik merupakan suatu pengujian untuk mendeteksi efek
toksik yang muncul setelah pemberian zat uji dengan dosis yang berulang pada
hewan uji selama 28-90 hari (OECD, 2008).
Salah satu pengamatan yang diperhatikan dalam uji toksisitas adalah
fungsi organ seperti hati.Hati merupakan organ yang berperan dalam fungsi
metabolisme dan ekskresi di dalam tubuh. Hampir semua substan yang masuk
dalam tubuh dan mengikuti sirkulasi sistemik akan dimetabolisme di hati. Di dalam
hati terdapat hepatosit yang mengandung banyak enzim yang digunakan sebagai
katalisator dalam metabolisme substan, termasuk obat dan makanan (Wiguna,
2011). Adanyakerusakan hati salah satunya akan ditandai dengan nekrosis hepatosit
yang akan melepaskan beberapa enzim dari sitoplasma hepatosit ke ekstrasel. Oleh
karena itu, fungsi hati dapat dimonitor dengan mengamati aktivitas enzim yang
terdapat dalam serum (Baron, 1990).Ada dua jenis enzim yang terdapat di dalam
hepatosit, yaitu SGOT (Serum Glutamat Oksaloasetat Transaminase) dan SGPT
(Serum Glutamat Piruvat Transaminase) (Aria,dkk., 2011).Enzim yang spesifik
diamati untuk memonitor fungsi hati adalah SGPT, jika terjadi kerusakan atau
cedera, sel hati melepaskan enzim ini ke dalam darah. Peningkatan kadar enzim ini
di dalam darah menunjukkan kerusakan hati (Baron, 1990).
Berdasarkan uraian di ataspeneliti tertarik untuk melakukan pengujian
toksisitas subkronik ekstrak etanol daun kedongdong pagar (EEDKP) pada mencit,
mengingat pemanfaatannya yang beragam dan belum ditemukan informasi
mengenai batas keamanannya.
Berdasarkan latar belakang diatas, maka perumusan masalah pada
penelitian ini adalah:
a. Apakah EEDKP berpengaruh terhadap gejala toksikmencit jantan?
b. Apakah EEDKPberpengaruh terhadap berat badan mencit jantan?
c. Apakah EEDKPmemberikan efek toksik pada organ hati mencit jantan?
d. Berapakah batas keamanan dosis EEDKP terhadap mencit jantan?.
1.3 Hipotesis
Berdasarkan perumusan masalah diatas, maka hipotesis pada penelitian ini
diduga:
a. EEDKPberpengaruh terhadapgejala toksik mencit jantan.
b. EEDKPtidak berpengaruh terhadap berat badan mencit jantan.
c. EEDKP memberikan efek toksik pada organ hati mencit jantan.
d. EEDKPaman digunakan pada dosis 250mg/kg bb.
1.4 Tujuan Penelitian
Adapun tujuan penelitian ini untuk mengetahui:
a. pengaruh EEDKP terhadap gejala toksik mencit jantan.
b. pengaruh EEDKP terhadap berat badan mencit jantan.
c. pengaruh EEDKP terhadap organ hati mencit jantan.
d. batas keamanan dosis EEDKP pada mencit jantan.
1.5 Manfaat Penelitian
Adapun manfaat penelitian ini adalah dapat memberikan informasi
mengenai batas keamanan dosis dari EEDKP serta sebagai acuan uji klinik untuk
dijadikan sebagai obat.
1.6 Kerangka Pikir Penelitian
Penelitian dilakukan terhadap mencit jantan yang diberikan EEDKP
selama 28 hari. Tardapat 5 variabel bebas yaitu kelompok (kontrol Na-CMC 0,5
%), perlakuan EEDKP dosis 250, 500 dan 1000 mg/kg bb. Variabel terikat potensi
1.6 Kerangka Pikir Penelitian
Kerangka pikir penelitian ini adalah sebagai berikut terdapat gambar 1.1
Variabel Bebas Variabel terikat Parameter
Gambar 1.1Skema kerangka pikir penelitian
Ekstrak etanol
Kadar SGPT & SGOT
Histopatologi 5. Kadar sari larut
dalam etanol 6. Kadar abu total 7. Kadar abu tidak larut
asam 1. Alkaloid 2. Flavonoid 3. Tanin
4. Steroid/ Triterpenoid 5. Saponin
6. Glikosida 7. Antraquinon
BAB II
TINJAUAN PUSTAKA
2.1 Uraian Tumbuhan
Lannea coromandelica (Houtt.)Merr. atau Daun Kedongdong Pagar adalah
tumbuhan yang dapat tumbuh secara liar dan biasanya dijadikan sebagai pagar oleh
sebagian besar masyarakat Provinsi Aceh, khususnya masyarakat Desa Samakurok,
Kecamatan Tanah Jambo Aye, Kabupaten Aceh Utara. Tumbuhan ini dapat
ditemukan di halaman rumah, ditepi jalan dan banyak terdapat di kebun milik
penduduk.
2.1.1Sistematika Tumbuhan
Berikut adalah sistematika tumbuhan:
Kingdom : Plantae
Divisi : Spermatophyta
Subdivisi : Angiospermae
Kelas : Dicotyledoneae
Bangsa : Sapindales
Suku : Anacardiceae
Marga : Lannea
Spesies : Lannea coromandelica (Houtt.) Merr.
2.1.2 Nama Lokal
Sulawesi : Tamatte , kayu Cina, kayu Jawa, kedongdong laki (tangerang),
Pohon Reo (flores) ( Anonim, 2014)
2.1.3 Nama Asing
2.1.4 Kandungan Kimia
Berdasarkan penelitian yang telah dilakukan, hasil skrining
daunkedongdong pagar menunjukkan adanya golongan senyawa glikosida,
flavonoid, tanin dan steroid-triterpenoid (Safriana, 2014).
2.1.5 Morfologi Tumbuhan
Daun kedongdong pagar adalah tumbuhan liar yang berwarna hijau,
permukaan daun licin, bentuk majemuk menyirip gasal, anak daun berhadapan,
tulang daun menyirip; diameter daun 4,4 - 5,0 cm; panjang daun 7,3 - 10,5 cm;
panjang tangkai daun 0,3 - 0,8 cm, bentuk daun bulat telur, dan ujung daun runcing
(Safriana, 2014).
2.1.6 Khasiat Tumbuhan
Daunkedongdong pagardigunakan sebagai obat antilambung,antiinflamasi,
penyembuh luka, rematik, antikanker, antidiabetes, antidiare, (Kaur, dkk.,
2012).Selain digunakan sebagai obat-obatan, daun kedongdong pagar juga
digunakan dalam masakan sebagai penghilang rasa pahit dari daun pepaya dan buah
pare dengan cara merebus daun kedongdong pagar bersamaan dengan daun pepaya
atau buah pare (Safriana, 2014).
2.2 Ekstraksi
Ekstraksi adalah kegiatan penarikan kandungan kimia yang dapat larut
sehingga terpisah dari bahan yang tidak dapat larut dengan menggunakan suatu
pelarut cair.Senyawa aktif yang terdapat dalam berbagai simplisia dapat
digolongkan kedalam golongan minyak atsiri, alkaloida, flavonoida dan lain-lain.
Dengan diketahuinya senyawa aktif yang dikandung simplisia akanmempermudah
Ekstrak adalah sediaan kering, kental atau cair dibuat dengan menyari
simplisia nabati atau hewani menurut cara yang cocok, di luar pengaruh cahaya
matahari langsung (Depkes,1979).Beberapa metode ekstraksi dengan menggunakan
pelarut dibagi menjadi dua cara, yaitu cara panas dan cara dingin (Ditjen POM,
2000).
a. Cara dingin
1. Maserasi
Maserasi adalah proses penyarian simplisia menggunakan pelarut dengan
beberapa kali pengocokan atau pengadukan pada temperatur ruangan, sedangkan
remaserasi merupakan pengulangan penambahan pelarut setelah dilakukan
penyaringan maserat pertama dan seterusnya.
2. Perkolasi
Perkolasi adalah proses penyarian simplisia dengan pelarut yang selalu
baru sampai sempurna yang umumnya dilakukan pada temperatur ruangan. Serbuk
simplisia yang akan diperkolasi tidak langsung dimasukkan kedalam bejana
perkolator, tetapi dibasahi atau dimaserasi terlebih dahulu dengan cairan penyari
sekurang-kurangnya selama 3 jam.
b. Cara panas
1. Refluks
Refluks adalah proses penyarian simplisia dengan menggunakan alat pada
temperatur titik didihnya dalam waktu tertentu dimana pelarut akan terkondensasi
menuju pendingin dan kembali ke labu.
2. Sokletasi
baru, dilakukan dengan menggunakan alat soklet dimana pelarut akan terkondensasi
dari labu menuju pendingin, kemudian jatuh membasahi sampel.
3. Digesti
Digesti adalah proses penyarian dengan pengadukan kontinu pada
temperatur lebih tinggi dari temperatur kamar, yaitu secara umum dilakukan pada
temperatur 40-50°C.
4. Infundasi
Infundasi adalah proses penyarian dengan menggunakan pelarut air pada
temperatur 90°C selama 15 menit.
5. Dekoktasi
Dekoktasi adalah proses penyarian dengan menggunakan pelarut air pada
temperatur 90°C selama 30 menit.
2.3 Toksisitas
Toksisitas adalah kemampuan suatu zat kimia dalam menimbulkan
kerusakan pada organisme baik saat digunakan atau saat berada dalam lingkungan
(Priyanto, 2009). Uji toksisitas adalah suatu uji untuk mendeteksi efek toksik suatu
zat pada sistem biologi dan untuk memperoleh data dosis-respon yang khas dari
sediaan uji.Data yang diperoleh dapat digunakan untuk memberi informasi
mengenai derajat bahaya sediaan uji tersebut bila terjadi pemaparan pada manusia,
sehingga dapat ditentukan dosis penggunaannya demi keamanan manusia (BPOM
RI, 2011).
Penelitian toksisitas konvensional pada hewan coba sering
untuk berbagai masa pajanan. Penelitian toksikologi biasanya dibagi menjadi tiga
kategori (Lu, 1995):
a. Uji toksisitas akut dilakukan dengan memberikan bahan kimia yang sedang diuji
sebanyak satu kali atau beberapa kali dalam jangka waktu 24 jam.
b. Uji toksisitas jangka pendek (dikenal dengan subkronik) dilakukan dengan
memberikan bahan kimia berulang-ulang, biasanya setiap hari, selama
jangkawaktu kurang lebih tiga bulan untuk tikus dan satu atau dua tahun untuk
anjing.
c. Uji toksisitas jangka panjang dilakukan dengan memberikan bahan kimia
berulang-ulang selama masa hidup hewan coba atau sekurang-kurangnya
sebagian besar dari masa hidupnya, misalnya 18 bulan untuk mencit, 24 bulan
untuk tikus, dan 7-10 tahun untuk anjing dan monyet.
2.3.1 Uji Toksisitas Akut
Uji toksisitas akut adalah suatu pengujian untuk mendeteksi efek toksik
yang muncul dalam waktu singkat setelah pemberian sediaan uji secara oral dalam
dosis tunggal yang diberikan dalam waktu 24 jam (Lu, 1995).Tujuan dilakukannya
uji toksisitas akut adalah untuk menentukan LD50n(potensi ketoksikan) akut dari
suatu senyawa (Priyanto, 2009).Semakin kecil harga LD50maka semakin besar
potensi ketoksikannya (OECD, 2001).
Prinsip uji toksisitas akut oral yaitu, sediaan uji dalam beberapa tingkat
dosis yang diberikan pada beberapa kelompok hewan uji dengan satu dosis per
kelompok, kemudian dilakukan pengamatan terhadap adanya efek toksik dan
kematian (OECD, 2001).
Tujuan toksisitas akut adalah untuk mendeteksi toksisitas dari suatu zat,
bahayasetelah pemaparan suatu zat secara akut dan untuk memperoleh informasi
awal yang dapat digunakan untuk merancang uji toksisitas selanjutnya serta untuk
memperoleh nilai LD50 suatu sediaan (BPOM RI., 2011).
2.3.2 Uji Toksisitas Subkronik
Uji toksisitas subkronik adalahsuatu pengujian untuk mengetahui efek
toksik yang muncul setelah pemberian sediaan uji dengan dosisyang diberikan
secara oral pada hewan uji, biasanya setiap hari atau lima hari seminggu(BPOM
RI., 2011).
Tujuan toksisitas subkronik adalah untuk memperoleh informasi adanya
efek toksik zat yang tidak terdeteksi pada uji toksisitas akut, informasi
kemungkinan adanya efektoksik setelah pemaparan sediaan uji secara berulang
dalam jangka waktu tertentu, informasi dosis yang tidak menimbulkan efek toksik
(No Observed-Adverse Effect Leve/NOEL), dan mempelajari adanya efek
reversibilitas zat tersebut (BPOM RI., 2011).
Prinsip uji toksisitas subkronik oral adalah sediaan uji dalam beberapa
tingkat dosis diberikan setiap hari pada beberapa kelompok hewan uji dengan satu
dosis per kelompok selama 28 atau 90 hari.Selama pemberian sediaan uji, hewan
harus diamati setiap hari untuk menentukan adanya toksisitas.Selama waktu dan
pada akhir periode pemberian sediaan uji, hewan yang mati dan masih hidup
diotopsi selanjutnya dilakukan pengamatan secara makropatologi pada setiap organ
dan jaringan.Selain itu juga dilakukan pemeriksaan hematologi, biokimia klinis dan
histopatologi (BPOM RI., 2011).
2.3.3 Uji Toksisitas Kronik
Uji toksisitas kronis dilakukan dengan memberikan senyawa uji
2009). Prinsip toksisitas kronik oral pada umumnya sama dengan uji toksisitas
subkronik, hanya sediaan uji yang diberikan lebih lama tidak kurang dari 12 bulan.
Pengamatan juga dilakukan secara lengkap seperti gejala toksik, monitoring berat
badan dan konsumsi makanan, pemeriksaan hematologi, biokimia klinis,
makropatologi, penimbangan organ dan histopatologi (OECD, 2008).
2.4 Hati
Salah satu organ yang sering menderita karena adanya zat-zat toksik
adalah hati.Bahan kimia kebanyakan mengalami metabolisme dalam hati dan oleh
karenanya banyak bahan kimia yang berpotensi merusak sel-sel hati.Bahan kimia
yang dapat mempengaruhi hati disebut hepatotoksik (Wicaksono, 2002).
2.4.1 Anatomi Hati
Hati merupakan kelenjar metabolik dalam tubuh yang paling besar. organ
ini memiliki berat rata-rata 1500 gram atau 2,5% berat badan pada orang dewasa.
Bagian atas hati berbentuk cembung dan terletak di bagian kanan bawah diafragma
dan sebagian disebelahkiri bawah. bagian bawah hati berbentuk cembung dan
melindungi pankreas, ginjal kanan, lambung, dan usus (Price dan Wilson, 2005).
Warnanya dalam keadaan segar merah kecoklatan, warna tersebut terutama
disebabkan oleh adanya darah yang amat banyak (Lee, dkk., 1997).
Hati terdiri dari dua lobus utama,yakni lobus kanan dan kiri yang
masing-masing terdiri dari dua segmen. Lobus kanan dibagi menjadi segmen anterior dan
dan poterior. Lobus kiri dibagi menjadi segmen medial dan lateral. Segmen median
terbagi menjadi dua bagian, satu lobus qudratus dan caudatus (Hage, 1982).
Hati tersusun oleh beberapa tipe sel, yaitu:
a. Hepatosit
Hepatosit lobulus memiliki sebuah vena sentral (vena terminalis) dan traktus portal
yang terletak di perifer.
b. Sel duktus biliaris
Sel-sel duktus biliaris membentuk duktus dalam traktus portal lobulus
hepar. Duktus dari lobulus-lobulus yang berdekatan menyatu berjalan menuju hilus
hepar, dengan ukuran dan garis tengahnya secara bertahap membesar.
c. Sel Vaskular
Hati memiliki pendarahan ganda. Organ ini menerima darah melalui arteri
hepatika dan vena porta. Arteri hepatika dan vena porta masuk ke hepar di porta
hepatis lalu bercabang menjadi pembuluh yang lebih halus berjalan sejajar sampai
mencapai vena sentralis.
d. Sinusoid
Sinusoid adalah saluran darah yang melebar dan berliku-liku, sinusoid
hepar dipisahkan dari hepatosit di bawahnya oleh spatium perisinusoideum (disse)
subendoteial. Akibatnya, zat makanan yang mengalir di dalam sinusoid memiliki
akses langsung melalui dinding endoteial yang tidak utuh dengan hepatosit.
Struktur dan jalur sinusoid yang berliku di hepar memungkinkan pertukaran zat
yang efisien antara hepatosit dan darah. Selain endotel, sinusoid hepar juga
mengandung makrofag, yang disebut sel kuppffer (macrophagocytus stellatus),
terletak di sepanjang sinusoid.
e. Kandung empedu
Kandung empedu adalah organ kecil berongga yang melekat pada
permukaan bawah hepar. Empedu diproduksi oleh hepatosit dan mengalir melalui
2.4.2Fisiologi Hati
Organ hati terlibat dalam metabolisme zat makanan serta sebagianbesar
obat dan toksikan (Lu, 1995). Hati mempunyai fungsi yang sangat banyak dan
kompleks yang penting untuk mempertahankan hidup (Husadha, 1996)yaitu :
a. Fungsi pembentukan dan ekskresi empedu
Hal ini merupakan fungsi utama hati yaitu mengekskresikan sekitar satu
liter empedu setiap hari.Garam empedu penting untuk pencernaan dan absorbsi
lemak dalam usus halus.
b. Fungsi metabolik
Hati berperaan penting dalam metabolisme karbohidrat, lemak, protein,
vitamin dan juga memproduksi energi.Hati mengubah ammonia menjadi urea,
untuk dikeluarkan melalui ginjal dan usus.
c. Fungsi pertahanan tubuh
Hati mempunyai fungsi detoksifikasi dan perlindungan yang dilakukan
oleh enzim-enzim hati untuk melakukan oksidasi, reduksi, hidrolisis, atau konjugasi
zat yang kemungkinan membahayakan dan mengubahnya menjadi zat yang secara
fisiologis tidak aktif.Fungsi perlindungan dilakukan oleh sel kupffer yang terdapat
di dinding sinusoid hati.
2.4.3 Histologi Hati
Hati terdiri atas unit-unit heksagonal yaitu lobulus hati.Di bagian tengah
setiap lobulus hati terdapat sebuah vena sentralis yang dikelilingi secara radial oleh
sel-sel hati (hepatosit) (Junqueira dan Corneiro, 2007).
Hepatosit (sel parenkim hati) merupakan sebagian besar organ hati.
Hepatosit bertanggung jawab terhadap peran sentral hati dalam metabolisme. Sel –
melapisi sinusoid hati dan merupakan bagian penting dari sistem retikuloendotelial
tubuh (Lu, 1995).Darah dipasok melalui vena porta dan arteri hati dan disalurkan melalui
vena sentral dan kemudian vena hati ke vena kava (Lu, 1995).Sebanyak 80% dari aliran
darahnya berasal dari vena porta yang mengangkut darah rendah oksigen.Sisanya (20%)
berasal dari arteri hepatika yang memasok darah kaya oksigen.Darah meninggalkan hati
melalui vena hepatika yang mengalir menuju vena kava inferior (Underwood, 1994).
2.4.4 Jenis Kerusakan Hati
Toksikan dapat menyebabkan berbagai jenis efek toksik pada berbagai
organel dalam sel hati, mengakibatkan berbagai jenis kerusakan hati, seperti berikut
(Lu, 1995):
a. Perlemakan Hati (Steatosis)
Perlemakan hati adalah hati yang mengandung berat lipid lebih dari 5%.
b. Nekrosis Hati
Nekrosis hati adalah kematian hepatosit. Nekrosis dapat bersifat fokal
(sentral, pertengahan, perifer) atau masif. Nekrosis hati merupakan suatu
manifestasi toksik yang berbahaya tetapi tidak selalu kritis karena hati mempunyai
kapasitas pertumbuhan kembali yang luar biasa.
c. Kolestatis
Jenis kerusakan hati ini bisanya bersifat akut dan jarang ditemukan
dibandingkan dengan perlemakan hati dan nekrosis.
d. Sirosis
Sirosis ditandai oleh adanya septa kolagen yang tersebar di sebagian besar
hati. Pada sebagian besar kasus, sirosis disebabkan nekrosis sel tunggal karena
kurangnya mekanisme perbaikan sehingga terjadi fibroblastik dan pembentukan
e. Hepatitis yang Mirip Hepatitis Virus
Berbagai macam obat mengakibatkan suatu sindroma klinis yang tidak
dapat dibedakan dari hepatitis virus. Pada umumnya, obat itu mempunyai ciri-ciri
berikut:
1. Kerusakan hati semacam itu tidak dapat diperlihatkan pada hewan.
2. Tampaknya beberapa efek pada manusia tidak berkaitan dengan dosis.
3. Masa laten sangat beragam.
4. Toksisitas hanya muncul pada beberapa individu yang rentan.
5. Gambaran histologi lebih beragam.
6. Biasanya pasien memperlihatkan tanda-tanda hipersensivitas lain dan
kadang-kadang bereaksi terhadap suatu dosis tantangan.
7. Demam, ruam dan eosinofilia sering ditemukan.
f. Karsinogenesis
Karsinoma hepatoseluler dan kolangiokarsinoma adalah jenis neoplasma
ganas yang paling umum pada hati. Jenis karsinoma lainnya antara lain
angiosarkoma, karsinoma kelenjar, karsinoma trabekular dan karsinoma sel hati
yang tidak berdiferensiasi.
2.4.5 SGPT (Serum Glutamic Pyruvic Transaminase)
Pengamatan fungsi hati adalah dengan mengamati aktivitas enzim
SGPT.Hati sering menjadi organ sasaran karena sebagian toksikan memasuki tubuh
melalui sistem gastrointestinal dan setelah diserap toksikan dibawa oleh vena porta
ke hati. Toksikan kemudian akan dimetabolisme menjadi radikal bebas yang akan
memecah sel hati (Lu, 1995).Oleh karna itu, jika sel hati mengalami nekrosis dapat
segera dideteksi melalui peningkatan aktivitas enzim.Salah satu enzim yang
SGPT.Enzim SGPT ini lebih spesifik terhadap kerusakan hati dan merupakan
enzim yang banyak terdapat di sitosol dalam hati(Husadha, 1996).
2.4.6 SGOT (Serum Glutamic Oxaloacetic Transaminase)
SGOT merupakan enzim yang banyak ditemukan pada organ hepar
terutama padasitosol(Ganong, 2008). Dengan adanya peranan yang cukup penting
dari jenis enzim ini utamanya dalam organ hepar, maka kemudian digunakan dalam
pemeriksaan laboratorium untuk mendeteksi adanya kelainan fungsi hati. Jika
terjadi peningkatan Serum Glutamic Oksaloasetic Transaminase (SGOT) dalam
darah, maka dapat diduga bahwa telah terjadi kelainan pada hati (Handoko,2003).
Karena itu peningkatan kadar enzim ini pada serum dapat dijadikan indikasi
terjadinya kerusakan jaringan yang akut. Ketika terjadi kerusakan pada
hati,makasel-sel hepatositnya lebih permeabel sehingga enzim bocor ke dalam
pembuluh darah menyebabkan kadarnya meningkat pada serum (Nurcahyani,
BAB III
METODE PENELITIAN
Penelitian ini menggunakan metode eksperimental dengan tahapan
penelitian meliputi pengumpulan dan pengolahan tumbuhan, pembuatan ekstrak
etanol daun kedongdong pagar (EEDKP), skrining fitokimia dari ekstrak EEDKP,
penyiapan hewan percobaan, pengamatan gejala klinis, berat badan,berat organ hati
relatif, kematian, pengukuran SGPT dan SGOT, serta histopatologi organ hati dan
analisis data menggunakan statistic metode one-way analysis of variance (ANOVA).
3.1 Alat dan Bahan 3.1.1 Alat
Alat-alat yang digunakan terdiri dari lemari pengering, oven (Dynamica),
tanur (Nabertherm), rotary evaporator (Stuart),seperangkat alat penetapan kadar
air, desikator, mikroskop (Olympus), neraca hewan (GW-1500),neraca listrik
(Mettler Toledo), blender (Panasonic), alat-alat gelas laboratorium, mortir dan
stamfer, aluminium foil, kaca objek,kaca penutup, kertas saring, krusen tang, oral
sonde, pipet tetes, dan spuit 1 ml (Terumo),mikroskop digital,neraca kasar (ohaus),
kamera digital, alat bedah (Wells spencer).
3.1.2 Bahan
Bahan tumbuhan yang digunakan pada penelitian ini adalah daun
kedongdong pagar (Lannea coromandelica (Houtt.)Merr.).Bahan kimia yang
digunakan kecuali dinyatakan lain berkualitas pro analisis adalah etanol 70%
(destilasi), pereaksi bouchardat, dragendorff, mayer, besi (III) klorida, Molish,
timbal (II) asetat, asam sulfat, asam klorida, metanol, kloroform-isopropanol,
serbuk seng,natrium klorida 0,9%natrium carboxy methyl cellulose0,5% dan
akuades.
3.2 Prosedur Pembuatan Simplisia 3.2.1 Pengambilan Bahan
Pengambilan bahan tumbuhan dilakukan secara purposif tanpa
membandingkan dengan tumbuhan yang sama dari daerah lain. Bahan tumbuhan
daun kedongdong pagar diambil dari Desa Samakurok, Kecamatan Tanah Jambo
Aye, Kabupaten Aceh Utara, Provinsi Aceh.
3.2.2 Identifikasi Tumbuhan
Identifikas bahan tumbuhan daun kedongdong pagar dilakukan di
Lembaga Ilmu Pengetahuan Indonesia Pusat Penelitian Biologi - LIPI Bogor.Hasil
determinasi tumbuhan dapat dilihat pada Lampiran 1, halaman 57.
3.2.3 Pembuatan Simplisia
Bahan daun kedongdong pagar dikumpulkan, sortasi basah, dicuci bersih
di bawah air mengalir, ditiriskan, dan ditimbang beratnya (2.600 g).Daun
kedongdong pagar selanjutnya dikeringkan di lemari pengering hingga kering,
sortasi kering, kemudian ditimbang beratnya (1500 g) dan disimpan dalam wadah
plastik yang tertutup rapat.
3.3 Pemeriksaan Karakteristik Simplisia
Pemeriksaan karakteristik simplisia meliputi pemeriksaan makroskopik,
mikroskopik, penetapan kadar air, penetapan kadar sari larut air, penetapan kadar
sari larut etanol, penetapan kadar abu total, dan penetapan kadar abu tidak larut
3.3.1 Pemeriksaan Makroskopik dan Organoleptik
Pemeriksaan makroskopik dan organolepik dilakukan dengan mengamati
bentuk, bau dan rasa dari daun kedongdong pagar, serbuk simplisia daun
kedongdong pagar.
3.3.2 Pemeriksaan Mikroskopik
Pemeriksaan mikroskopik dilakukan terhadap serbuk simplisia daun
kedongdong pagar.Serbuk simplisia daun kedongdong pagar diletakkan di atas kaca
objek yang telah ditetesi dengan larutan kloralhidrat dan ditutup dengan kaca
penutup, selanjutnya diamati di bawah mikroskop.Hasil pemeriksaanmikroskopik
dapat dilihat pada Lampiran 4, halaman 60.
3.3.3 Penetapan Kadar Air Simplisia dan Ekstrak
Penetapan kadar air dilakukan dengan metode Azeotropi (destilasi
toluena). Alat terdiri dari labu alas bulat 500 ml, alat penampung, pendingin, tabung
penyambung dan tabung penerima.
Cara kerja:
Dimasukkan 200 ml toluena dan 2 ml air suling ke dalam labu alas bulat,
lalu didestilasi selama 2 jam. Setelah itu, toluena dibiarkan mendingin selama 30
menit, dan dibaca volume air pada tabung penerima dengan ketelitian 0,05 ml.
Kemudian ke dalam labu tersebut dimasukkan 5 g serbuk simplisia yang telah
ditimbang seksama, labu dipanaskan hati-hati selama 15 menit. Setelah toluena
mendidih, kecepatan tetesan diatur lebih kurang 2 tetes tiap detik sampai sebagian
besar air terdestilasi, kemudian kecepatan tetesan dinaikkan hingga 4 tetes tiap
detik.Setelah semua air terdestilasi, bagian dalam pendingin dibilas dengan
toluena.Destilasi dilanjutkan selama 5 menit, kemudian tabung penerimadibiarkan
air dibaca dengan ketelitian 0,05 ml. Selisih kedua volume air yang dibaca sesuai
dengan kandungan air yang terdapat dalam bahan yang diperiksa. Kadar air
dihitung dalam persen (WHO, 1992). Hasil perhitungan penetapan kadar air dapat
dilihat pada Lampiran 8 dan 13, halaman 64 dan 69.
3.3.4 Penetapan Kadar Sari Larut Air
Sebanyak 5 g serbuk simplisia, dimaserasi selama 24 jam dalam 100 ml
air-kloroform (2,5 ml kloroform dalam air suling sampai 1 liter) dalam labu
bersumbat sambil dikocok sesekali selama 6 jam pertama, kemudian dibiarkan
selama 18 jam, lalu disaring. Sejumlah 20 ml filtrat pertama diuapkan sampai
kering dalam cawan penguap yang berdasar rata yang telah ditara dan sisa
dipanaskan pada suhu 105oC sampai bobot tetap.Kadar dalam persen sari yang larut
dalam air dihitung terhadap bahan yang telah dikeringkan (Depkes RI, 1977). Hasil
perhitungan penetapan kadar sari larut air dapat dilihat pada Lampiran 9, halaman
65.
3.3.5 Penetapan Kadar Sari Larut Etanol
Sebanyak 5 g serbuk simplisia, dimaserasi selama 24 jam dalam 100 ml
etanol 96% dalam labu bersumbat sambil dikocok sesekali selama 6 jam pertama,
kemudian dibiarkan selama 18 jam.Kemudian disaring cepat untuk menghindari
penguapan etanol.Sejumlah 20 ml filtrat diuapkan sampai kering dalam cawan
penguap yang berdasar rata yang telah dipanaskan dan ditara.Sisa dipanaskan pada
suhu 105oC sampai bobot tetap.Kadar dalam persen sari yang larut dalam etanol
96% dihitung terhadap bahan yang telah dikeringkan (Depkes RI, 1977).
3.3.6 Penetapan Kadar Abu Total Simplisia dan Ekstrak
Sebanyak 2 g serbuk simplisia dimasukkan dalam krus porselin yang telah
habis, jika arang masih tidak dapat dihilangkan, ditambahkan air panas, saring
melalui kertas saring bebas abu. Pijarkan sisa dan kertas saring dalam krus yang
sama. Masukkan filtrat ke dalam krus, uapkan, pijarkan hingga bobot tetap,
timbang.Kadar abu dihitung terhadap bahan yang telah dikeringkan (Depkes RI,
1977). Hasil perhitungan penetapan kadar abu total dapat dilihat pada Lampiran 11
dan 14, halaman 67 dan 70.
3.3.7 Penetapan Kadar Abu Tidak Larut Asam Simplisia dan Ekstrak
Abu yang diperoleh dalam penetapan kadar abu dididihkan dalam 25 ml
asam klorida encer selama 5 menit, bagian yang tidak larut dalam asam
dikumpulkan, disaring melalui kertas saring bebas abu, cuci dengan air panas,
dipijarkan, kemudian didinginkan dan ditimbang sampai bobot tetap. Kadar abu
yang tidak larut dalam asam dihitung terhadap bahan yang telah dikeringkan
(Depkes RI, 1977). Hasil perhitungan penetapan kadar abu tidak larut asam dapat
dilihat pada Lampiran 12 dan 15, halaman 68 dan 71.
3.4 Skrining Fitokimia Simplisia
Skrining fitokimia serbuk simplisia daun kedongdong pagar meliputi
pemeriksaan senyawa golongan flavonoid, alkaloid, saponin, tanin, glikosida dan
steroid/triterpenoid.
3.4.1Pemeriksaan Flavonoid
Sebanyak 10 g serbuk simplisia ditambahkan 10 ml air panas, dididihkan
selama 5 menit dan disaring dalam keadaan panas, ke dalam 5 ml filtrat
ditambahkan 0,1 g serbuk magnesium dan 1 ml asam klorida pekat dan 2 ml amil
alkohol, dikocok dan dibiarkan memisah. Flavonoida positif jika terjadi warna
3.4.2 Pemeriksaan Alkaloid
Serbuk simplisia ditimbang sebanyak 0,5 g kemudian ditambahkan 1 ml
asam klorida 2 N dan 9 ml air suling, dipanaskan di atas penangas air selama 2
menit, didinginkan dan disaring. Filtrat yang diperoleh dipakai untuk tes alkaloid.
Diambil 3 tabung reaksi, lalu ke dalamnya dimasukkan 0,5 ml filtrat. Pada
masing-masing tabung reaksi:
- Ditambahkan 2 tetes pereaksi Mayer
- Ditambahkan 2 tetes pereaksi Bouchardat
- Ditambahkan 2 tetes pereaksi Dragendorff
Alkaloid positif jika terjadi endapan atau kekeruhan pada dua dari tiga percobaan
diatas (Depkes RI, 1977).
3.4.3 Pemeriksaan Saponin
Serbuk simplisia ditimbang sebanyak 0,5 g dan dimasukkan ke dalam
tabung reaksi, lalu ditambahkan 10 ml air panas, didinginkan, kemudian dikocok
kuat-kuat selama 10 menit. Jika terbentuk busa setinggi 1-10 cm yang stabil tidak
kurang dari 10 menit dan buih tidak hilang dengan penambahan 1 tetes asam
klorida 2 N menunjukkan adanya saponin (Depkes RI, 1977).
3.4.4 Pemeriksaan Tanin
Sebanyak 0,5 g serbuk simplisia disari dengan 10 ml air suling lalu
disaring, filtratnya diencerkan dengan air suling sampai tidak berwarna. Diambil 2
ml larutan dan ditambahkan 1-2 tetes pereaksi besi (III) klorida 1%.Jika terjadi
warna biru kehitaman atau hijau kehitaman menunjukkan adanya tanin (Depkes RI,
3.4.5 Pemeriksaan Glikosida
Serbuk simplisia ditimbang sebanyak 3 g, lalu disari dengan 30 ml
campuran etanol 96%-air (7:3) dan 10 ml asam klorida 2 N, direfluks selama 2 jam,
didinginkan dan disaring. Diambil 20 ml filtrat, ditambahkan 25 ml air suling dan
25 ml timbal (II) asetat 0,4 M, dikocok, didiamkan selama 5 menit, lalu disaring.
Filtrat disari dengan 20 ml campuran kloroform-isopropanol (3:2) sebanyak 3 kali.
Pada kumpulan sari lapisan isopropanol diuapkan pada suhu tidak lebih dari 50oC.
Sisanya dilarutkan dengan 2 ml metanol untuk larutan percobaan. 0,1 ml larutan
percobaan diuapkan diatas penangas air, pada sisa ditambahkan 2 ml air dan 5
tetes Molish, kemudian ditambahkan hati-hati 2 ml asam sulfat, terbentuk cincin
berwarna ungu pada batas cairan, menunjukkan adanya ikatan gula (Depkes RI,
1977).
3.4.6 Pemeriksaan Steroid/Triterpenoid
Serbuk simplisia ditimbang sebanyak 1 g, dimaserasi dengan 20 ml
n-heksan selama 2 jam, disaring. Filtrat diuapkan dalam cawan penguap dan pada
sisanya ditambahkan pereaksi Liebermann-Burchard melalui dinding cawan.
Apabila terbentuk warna ungu atau merah yang berubah menjadi biru ungu atau
biru hijau menunjukkan adanya steroid/triterpenoid (Harborne, 1987).
3.5 Proses Pembuatan EEDKP
Proses pembuatan ekstrak dilakukan dengan cara maserasi menggunakan
pelarut etanol. Menurut Farmakope Herbal Indonesia Edisi I (2008), caranya adalah
sebagai berikut: sebanyak 500 g serbuk kering simplisia dimasukkan ke dalam
bejana, ditambahkan 5 L etanol 70%. Rendam selama 6 jam pertama sambil
carafiltrasi. Proses penyarian sekurang-kurangnya diulangi dua kali dengan jenis
dan jumlah pelarut yang sama. Semua maserat dikumpulkan, kemudian maserat
yang diperoleh diuapkan dengan alat rotary evaporator (Depkes RI, 2008).
3.6 Pemeriksaan Karakteristik EEDKP
Pemeriksaan karakteristik ekstrak etanol daun kedongdong pagar meliputi,
penetapan kadar air, penetapan kadar abu total, dan penetapan kadar abu tidak larut
dalam asam. Prosedur pemeriksaan karakterisasi ekstrak etanol daun kedongdong
pagar sama seperti prosedur karakterisasi simplisia daun kedongdong pagar.
3.7 Skrining Fitokimia EEDKP
Skrining terhadap ekstrak etanol daun kedongdong pagar dilakukan untuk
mengetahui metabolit sekunder yang terkandung di dalam ekstrak. Prosedur
pemeriksaan ekstrak etanol daun kedongdong pagar sama seperti prosedur skrining
fitokimia terhadap simplisia daun kedongdong pagar.
3.8 Penyiapan Hewan Percobaan
Hewan percobaan yang digunakan dalam penelitian adalah mencit putih
jantan dengan berat badan 25 – 35 g, berumur 2-3 bulan. Sebelumpengujian,mencit
diaklimatisasi terlebih dahulu selama 7-14 hari , sebanyak 24 ekor mencit dibagi
dalam 4 kelompok.
3.9 Pembuatan Pereaksi
Pembuatan pereaksi mencakup pembuatan suspensi Na-CMC 0,5% b/v,
pembuatan suspensi EEDKP yang diperoleh dari hasil orientasi dengan dosis 250
3.9.1 Pembuatan Suspensi Na-CMC 0,5% b/v
Sebanyak 0,5 g Na-CMC ditaburkan dalam lumpang yang berisi 10 ml air
suling panas. Didiamkan selama 15 menit lalu digerus hingga diperoleh massa yang
transparan, lalu digerus sampai homogen, diencerkan dengan air suling,
dihomogenkan dan dimasukkan ke labu tentukur 100 ml, dicukupkan volumenya
dengan air suling hingga 100 ml.
3.9.2 Pembuatan Suspensi EEDKP
Dalam pengujian akan digunakan 3 variasi dosis yakni dosis 250 mg/kg
bb, 500 mg/kg bb, 1000 mg/kg bb. Sejumlah 250 mg, 500 mg, dan 1000 mg ekstrak
etanol daun kedongdong pagar dimasukkan ke dalam lumpang dan ditambahkan
suspensi Na-CMC 0,5% b/v sedikit demi sedikit sambil digerus sampai homogen
hingga 10 ml.
3.10Pengelompokan Hewan Ujidan Pemberian Sediaan Uji
Hewan uji yang digunakan yaitu mencit (Mus musculus) yang sehat
sebanyak 24 ekor yang dibagi ke dalam 4 kelompok perlakuan, tiap kelompok
terdiri dari 6 ekor mencit jantan. kelompok 1 sebagai kontrol, kelompok 2,3 dan 4
sebagai kelompok perlakuan.
Pembagian kelompok hewan uji sebagai berikut :
kelompok 1: Kontrol, diberi larutan suspensi Na-CMC 0,5 % b/v
kelompok 2: Perlakuan, diberikan EEDKP dengan dosis 250 mg/kg bb
kelompok 3: Perlakuan, diberikan EEDKP dengan dosis 500 mg/kg bb
Sediaan uji diberikan secara oral menggunakan oral sonde setiap hari
selama 28 hari dan dilakukan pengamatan.
3.10.1 Pengamatan Toksisitas Subkronik
Sediaan uji diberikan secara oral setiap hari selama 28 hari. Pengamatan
dilakukan selama 2 jam setelah 1 jam pemberian sediaan uji. Kemudian dilakukan
pengamatan hewan uji terhadap gejala toksik yang muncul.Pengamatan terjadinya
gejala-gejala toksik dan gejala klinis yang berupa perilaku fisik (tremor, salivasi,
diare, lemas, gerak-gerik hewan seperti berjalan mundur dan menggunakan
perut(Supriningrum, 2014).
Adapun cara pengamatannya, yaitu:
1. Salivasi
Pengeluaran salivasi mencit yang telah diberi ekstrak etanol daun
kedongdong pagar dibandingkan dengan kontrol, menggunakan kertas saring.
2 Diare
Pengeluaran tinja mencit yang telah diberi ekstrak etanol daun
kedongdong pagar dibandingkan dengan kontrol, menggunakan kertas saring.
3 Tremor
Hewan yang telah diberi ekstrak etanol daun kedondong pagar, diamati
tremor atau tubuh hewan bergetar.
4 Lemas
Hewan yang telah diberi ekstrak etanol daun kedongdong pagar diamati
5 Gerak-gerik hewan
Hewan yang telah diberi ekstrak etanol daun kedongdong pagar diamati
gerak-geriknyaseperti berjalan mundur dan berjalan menggunakan perut.
3.10.2 Berat Badan
Mencit ditimbang setiap hari selama 28 hari untuk menentukan volume
sediaan uji yang akan diberikan. Perubahan berat badan harus dianalisis
seminggusekali. Pada akhir penelitian, hewan yang masih bertahan hidup ditimbang
dan kemudian dikorbankan(BPOM RI., 2011).
3.10.3 Kematian Hewan
Mencit diamati kematiannya dari hari pertama sampai hari terakhir. Mencit
yang mati selama waktu pemberian sediaan uji segera diotopsi dan organ diamati
secara histopatologi(BPOM RI., 2011).
3.10.4 Pengukuran Kadar SGPTdan SGOT
Pada akhir periode pemberian sediaan uji semua mencit yang masih hidup
diotopsi. Hewan didislokasi lehernya kemudian darah diambil melalui jantung
(intra cardiac) secara perlahan-lahan menggunakan alat suntik steril sebanyak 1-3
ml. Sebanyak 1 ml darah dimasukkan ke dalam tabung mikrosentrifuge dan
didiamkan pada suhu kamar selama 10 menit, kemudian dipindahkan ke dalam
tangas es dan segera disentrifus selama 10 menit dengan kecepatan 3000 rpm
hingga dihasilkan serum yang bening. Serum dipisahkan, kemudian diperiksa kadar
SGPT dan SGOT dengan menggunakan alat sprektrofotometer.
Penetapan kadar SGPT dan SGOT dengan cara sejumlah 100 µl serum uji
tabung reaksi 5 ml, dihomogenkan dengan bantuan vortex. Absorbansi diukur
dengan spektrofotometer pada suhu 37°C tepat setelah menit ke 1, 2, dan 3 pada
panjang gelombang 340 nm. Hal yang sama dilakukan terhadap blanko
(preaksi+akuades). Kadar SGPT dan SGOT dapat ditentukan dengan menghitung
rata-rata selisih absorbansi sampel permenit dikalikan faktor 1745(BPOM RI.,
2011).
3.10.5 Penimbangan Organ
Organ yang akan ditimbang (absolut) harus dikeringkan terlebih dahhulu
dengan kertas penyerap, kemudian segera ditimbang, sedangkan yang dianalisis
adalah bobot relatif (indeks organ), yaitu bobot organ absolut dibagi bobot
badan(BPOM RI., 2011).
3.10.6 Pengamatan Makropatologi Organ
Mencit yang mati segera diotopsi dan dilakukan pengamatan.Pengamatan
meliputi warna, permukaan dan konsistensi organ hati secara visual(BPOM RI.,
2011).
3.10.7 Pemeriksaan Histopatologi Organ
Organ yang diperiksa secara histopatologi adalah hati.Organ yang sudah
dipisahkan segera dimasukkan dalam larutan dapar formalin 10% dan dibuat
preparat histopatologi dengan pewarnaan hematoksilin & eosin kemudian diperiksa
di bawah mikroskop.
Prosedur pembuatan preparat histopatologi:
a. Organ yang akan dihistologi direndam didalam larutan dapar formalin 10%
b. Organ yang akan dihistologi dipotong, untuk hati dilakukan pemotongan pada
lobus terbesar hati.
c. Untuk menghilangkan sisa formalin dilakukan pencucian dengan air mengalir.
d. Dilakukan proses dehidrasi dengan etanol 70%, 80%, 90%, etanol absolut.
Kemudian dilanjutkan dengan penjernihan menggunakan xilen sebanyak tiga
kali selama 1 jam.
e. Proses penanaman. Caranya: sampel direndam dengan parafin cair pada suhu
60–70o Cselama 2 jam.
f. Dilakukan pencetakan dan dibiarkan membeku, kemudian blok parafin
dipotong dengan menggunakan alat mikrotom dengan ketebalan irisan 5-7 µm.
Setelah memperoleh potongan yang bagus, potongan tersebut ditempelkan
pada kaca obyek. Sayatan organ yang telah menempel pada kaca obyek segera
diletakkan pada permukaan pemanas dengan suhu 56 - 58° C selama kurang
lebih 10 detik, sehingga organ meregang dan menempel pada kaca obyek
sambil diatur jangan sampai organ berkerut atau melipat. Selanjutnya preparat
disimpan dalam suhu kamar untuk dilakukan pewarnaan.
g. Pewarnaan dilakukan dengan menggunakan hematoksilin-eosin. Pertama
sediaan direndam dengan larutan xilen untuk proses deparafinasi
masing-masing selama 12 menit. Kemudian dilakukan proses dehidrasi dengan
merendam preparat dalam etanol 70%, 80%, 90%, etanol absolut selama 5
menit, dicuci dengan air mengalir. Selanjutnya direndam dengan larutan
hematoksilin selama 5 menit, dicuci dengan air mengalir, dilakukan pewarnaan
dengan eosin. Kemudian, dicelupkan ke dalam etanol 70%, 80%, 90%, dan
etanol absolut masing-masing selama 10 menit. Terakhir dimasukkan kedalam
3.10.8 Analisis Statistik
Data jumlah hewan uji yang mati dianalisa secara statistik menggunakan
SPSS dengan metode One Way Analysis of Variance (ANOVA) dilanjutkan dengan
uji post hoc Tukey untuk mengetahui perbedaan signifikan berat badan, berat
BAB IV
HASIL DAN PEMBAHASAN 4.1Hasil Identifikasi Tumbuhan
Identifikasi tumbuhan dilakukan diLembaga Ilmu Pengetahuan Indonesia
(LIPI) Pusat Penelitian dan Pengembangan Biologi, Bogor menyebutkan bahwa
tumbuhan yang digunakan adalah tumbuhan daun kedongdong pagar (Lannea
coromandelica (Houtt.) Merr.)suku Anacardiaceae. Hasil identifikasi dapat dilihat
pada Lampiran 1, halaman 57dan gambar tumbuhan sertadaun tumbuhan dapat
dilihat pada Lampiran 2, halaman 58.
4.2 Hasil Karakterisasi Simplisia dan Ekstrak
Berdasarkan hasil pemeriksaan makroskopik terhadap daun kedongdong
pagar segar menunjukkan daun kedongdong pagar berwarna hijau, bentuk majemuk
menyirip gasal, tulang daun menyirip, diameter daun 4,4 - 5,0 cm, panjang daun 7,3
- 10,5 cm, dan panjang tangkai daun 0,3 - 0,8 cm, sedangkan hasil pemeriksaan
makroskopik terhadap simplisia daun kedongdong pagar menunjukkan daun
kedongdong pagar berwarna hijau kecoklatan dan mempunyai bentuk yang
mengerut. Hasil pemeriksaan mikroskopik (membujur, melintang) simplisia daun
kedongdong pagar terlihat jaringan epidermis, jaringan palisade, jaringan parenkim,
stomata tipe parasitik, kristal kalsium oksalat berbentuk druse dan berkas pembuluh
bentuk spiral. Hasil pemeriksaan kadar simplisia daun kedongdong pagar dan
