ISOLASI SENYAWA FLAVONOIDA DARI KULIT BATANG
TUMBUHAN SERI (Muntingia calabura L.)
SKRIPSI
MUTIARA SIMATUPANG
090822006
DEPARTEMEN KIMIA
FAKULTAS MATEMATIKA DAN ILMU PENGETAHUAN ALAM
UNIVERSITAS SUMATERA UTARA
ISOLASI SENYAWA FLAVONOIDA DARI KULIT BATANG TUMBUHAN SERI (Muntingia calabura L.)
SKRIPSI
Diajukan untuk melengkapi tugas dan memenuhi syarat mencapai gelar Sarjana Sains
MUTIARA SIMATUPANG 090822006
\
DEPARTEMEN KIMIA
FAKULTAS MATEMATIKA DAN ILMU PENGETAHUAN ALAM UNIVERSITAS SUMATERA UTARA
PERSETUJUAN
Judul : ISOLASI SENYAWA FLAVONOIDA DARI KULIT
BATANG TUMBUHAN SERI(Muntingia calabura L)
Kategori : SKRIPSI
Nama : MUTIARA SIMATUPANG
Nomor Induk Mahasiswa : 090822006
Program Studi : SARJANA (S1) KIMIA
Departemen : KIMIA
Fakultas :MATEMATIKA DAN ILMU PENGETAHUAN
ALAM (FMIPA) UNIVERSITAS SUMATERA UTARA
Disetujui di
Medan, Juni 2011
Komisi Pembimbing :
Pembimbing 2 Pembimbing 1
Drs. Johannes H S, M.Sc Drs. Philippus H. Siregar, M.Si NIP 195307141980031004 NIP 195805041986011002
Diketahui/ Disetujui oleh
Departemen Kimia FMIPA USU Ketua,
PERNYATAAN
ISOLASI SENYAWA FLAVONOIDA DARI KULIT BATANG TUMBUHAN SERI (Muntingia calaburaL)
SKRIPSI
Saya mengakui bahwa skripsi ini adalah hasil kerja saya sendiri, kacuali beberapa kutipan dan ringkasan yang masing-masing disebutkan sumbernya.
Medan, Juni 2011
PENGHARGAAN
Segala puji dan syukur penulis panjatkan kepada Tuhan Yang Maha Kasih dan Maha Kuasa, karena atas kasih dan berkat-Nya yang melimpah penulis bisa menyelesaikan skripsi ini dengan baik dalam waktu yang telah ditetapkan.
Ucapan terimakasih saya sampaikan kepada Bapak Drs. Philippus Siregar, M.Si dan Bapak Drs. Johannes H. Simorangkir , M.Sc selaku pembimbing penulis pada penyelesaian skripsi ini yang telah memberikan panduan, nasihat dan motivasi kepada penulis untuk menyempurnakan skripsi ini. Ucapan terimakasih juga ditujukan kepada Ketua dan Sekretaris Departemen Kimia Ibu Prof.Dr. Rumondang Bulan Nst, M.S dan Bapak Dr.Albert Pasaribu, M.Sc, Bapak Dekan dan Pembantu Dekan Fakultas Matematika dan Ilmu Pengetahuan Alam Universitas Sumatera Utara, semua dosen Departemen Kimia FMIPA USU, Pegawai / Karyawan di LIPI Serpong, rekan-rekan asisten di Lab. Kimia Bahan Alam, dan semua pihak yang tidak bisa saya sebutkan satu per satu yang telah banyak membantu penulis. Yang sangat tidak terlupakan terimakasih kepada orangtua tersayang Ayahanda B. Simatupang dan Ibunda M. Samosir yang mendukung penulis lewat doa dan materi , juga abang saya Ridwan Simatupang, SE, kakak Dornawati,SPd, adek Lenni Simatupang, Amf, Bonar Simatupang, dan Riana Simatupang dan yang istimewa juga buat Erix Anderson Situmeang yang selalu memberikan doa, bantuan kepada penulis. Semoga Tuhan Yang Maha Esa akan membalasnya.
Medan, Juni 2011
ABSTRAK
THE ISOLATION OF FLAVONOID COMPOUND IN THE BARK OF CHERRY (Muntingia calabura L.)
ABSTRACT
The isolation of flavonoid compound which contained in the bark of cherry
(Muntingia calaburaL.) had been done by using maceration technique and methanol
DAFTAR ISI
Daftar lampiran ix
BAB I PENDAHULUAN
1.1.Latar Belakang 1
1.2.Permasalahan 2
1.3.Tujuan Penelitian 2
1.4.Manfaat Penelitian 3
1.5.Lokasi Penelitian 3
2.1.5 Efek Farmakologis Tumbuhan Seri 7
2.1.6 Manfaat Tumbuhan Seri 8
2.2. Senyawa Organik Bahan Alam 8
2.3 Senyawa Flavonoida 10
2.3.1 Struktur Dasar Senyawa Flavonoida 11
2.3.2 Biosintesis dari Flavonoida 12
2.3.3 Klasifikasi Senyawa Flavonoida 13
2.3.4 Sifat kelarutan Flavonoida 19
2.3.2.4 Kromatografi Lapis Tipis Preparatif 24
2.4.3 Harga Rf ( Reterdation Factor) 24
2.5 Teknik Spektroskopi 25
2.5.1 Spektrometri Ultra Violet 25
BAB 3 METODE PENELITIAN
3.1 Alat- alat 29
3.2 Bahan-bahan 30
3.3 Prosedur Penelitian 30
3.3.1 Penyediaan Sampel 30
3.3.2 Uji Pendahuluan terhadap Ekstrak Kulit Batang
Tumbuhan Seri 30
3.3.2.1 Uji Busa 30
3.3.2.2 Skrining Fitokimia 31
3.3.2.3 Analisis Kromatografi Lapis Tipis 31 3.3.3 Prosedur untuk Memperoleh Senyawa Kimia dari
Ekstrak Kulit Batang Tumbuhan Seri 32 3.3.4 Analisa Kromatografi Kolom Hasil Isolasi Senyawa
Flavonoida 33
3.3.5 Pemurnian ( Rekristalisasi ) 33
3.3.6 Uji Kemurnian Hasil Isolasi dengan Kromatografi Lapis
Tipis (KLT) 33
3.3.7 Analisis Spektroskopi Senyawa Hasil Isolasi 34 3.3.7.1 Analisis Senyawa Hasil Isolasi dengan
Spektrofotometer Inframerah 34 3.3.7.2 Analisis Senyawa Hasil Isolasi dengan
Spektrofotometer Resonansi Magnetik Inti Proton
(1H-NMR) 34
3.4 Bagan Isolasi Senyawa Flavonoida dari Kulit Batang Tumbuhan Seri 35
BAB 4 HASIL DAN PEMBAHASAN
4.1 Hasil Penelitian 36
4.2 Pembahasan 38
BAB 5 KESIMPULAN DAN SARAN
5.1 Kesimpulan 40
5.2 Saran 40
DAFTAR LAMPIRAN
Halaman
Lampiran A. Gambar Tumbuhan Seri ( Muntingia calaburaL) 44
Lampiran B. Determinasi Tumbuhan Seri 45
Lampiran C. Hasil Kromatografi Lapis Tipis Senyawa Isolasi
melalui Penampakan Noda dengan Pereaksi 46
Lampiran D. Spektrum UV-Visible Senyawa Hasil Isolasi 47 Lampiran E. Spektrum FT-IR Senyawa Hasil Isolasi 48
ABSTRAK
THE ISOLATION OF FLAVONOID COMPOUND IN THE BARK OF CHERRY (Muntingia calabura L.)
ABSTRACT
The isolation of flavonoid compound which contained in the bark of cherry
(Muntingia calaburaL.) had been done by using maceration technique and methanol
BAB I
PENDAHULUAN
1.1.Latar Belakang
Flavonoida merupakan kandungan khas tumbuhan hijau dengan mengecualikan alga dan hornwort. Flavonoida sebenarnya terdapat pada semua bagian tumbuhan termasuk daun, akar, kulit , tepung sari, nectar, bunga, buah buni, dan biji. Hanya sedikit saja catatan yang melaporkan adanya flavonoida pada hewan, misalnya dalam kelenjar bau berang-berang, sekresi lebah, dan di dalam sayap kupu-kupu , itupun dengan anggapan bahwa flavonoida tersebut berasal dari tumbuhan yang menjadikan makanan hewan tersebut dan tidak dibiosintesis di dalam tubuh mereka. Menurut perkiraan, kira-kira 2% dari seluruh karbon yang difotosintesis oleh tumbuhan diubah menjadi flavonoida . Sebagian besar tanin pun berasal dari flavonoida. Jadi, flavonoida terdapat dalam semua tumbuhan hijau sehingga pastilah ditemukan pula pada setiap ekstrak tumbuhan . ( Markham, 1981)
Salah satu dari tumbuhan berkhasiat ini adalah tumbuhan seri (Muntingia calabura L). Dari hasil penelitian terdahulu, kulit batang tumbuhan seri berkhasiat sebagai obat yaitu untuk peluruh dahak, dan untuk menurunkan kadar glukosa darah pada tikus putih.Sementara penggunaan tumbuhan seri secara tradisional diguna kan untuk penyembuhan asam urat, antiseptik, antiflamasi, dan antitumor. Dimana penggunaannya untuk obat-obatan dilakukan dengan meminum air rebusan dari kulit batang dan daun tumbuhan seri. Sedikit berbeda penggunaannya untuk penyembuhan antiseptik dari tumbuhan seri, yaitu air rebusan daun dan batang tumbuhan seri digunakan bukan dengan cara dikonsumsi, melainkan dioleskan ke daerah luka yakni untuk membunuh bakteri C. Diptheriea, S. Aureus, P Vulgaris, S Epidemidis dan K Rizhophil. ( Verdayanti, 2009).
Penelitian juga pernah dilakukan terhadap tumbuhan seri, yakni bagian daunnya. Dimana daun seri mengandung kelompok senyawa antara lain flavonoida, tannin, triterpen, saponin dan polifenol yang menunjukkan aktifitas antioksidatif. Antioksidan tersebut diduga mampu melindungi sel hati dari kerusakan yang diakibatkan radikal bebas. Pengambilan zat kimia daun seri dilakukan dengan ekstraksi prinsip maserasi dengan pelarut aqua distillated.
Dalam penelitiannya digunakan karbon tetra klorida ( CCl4) sebagai induktor terjadinya hepatotoksik. CCl4 merusak hampir semua sel tubuh termasuk sistem saraf pusat, hati, ginjal, dan pembuluh darah. Adanya efek merusak CCl4 ini terhadap hati dapat dihambat dengan pemberian ekstrak daun kersen, yaitu antioksidan yang terdiri dari flavonoida, triterpen, saponin dan polifenol menyebabkan peroksida lipid yang ditimbulkan oleh radikal bebas CCl4 berkurang, sehingga fungsi membran sel tetap terjaga. (Haki, 2009)
1.2 Permasalahan
Permasalahan dalam penelitian ini adalah bagaimana cara mengisolasi senyawa flavonoida yang terdapat dalam kulit batang tumbuhan seri ( Muntingia calabura L. )
1.3 Tujuan Penelitian
Adapun tujuan dari penelitian ini adalah untuk mengisolasi senyawa flaovonoida yang terdapat dalam kulit batang tumbuhan seri ( Muntingia calabura L. )
1.4Manfaat Penelitian
Dari hasil penelitian ini diharapakan untuk memberikan sumber informasi ilmiah pada bidang Kimia Bahan Alam dalam upaya pemanfaatan senyawa flavonoida dari kulit batang tumbuhan seri ( Muntingia calabura L. )
1.5Lokasi Penelitian
Sampel yang digunakan diperoleh dari daerah Pasar Baru Padang Bulan, Medan. Penelitian dilakukan di laboratorium Kimia Bahan Alam FMIPA Universitas Sumatera Utara. Spektrofotometri UV-Visible, Spektrofotometri Infra Merah ( FT-IR)
dan Spektrofotometri Resonansi Magnetik Inti Proton ( 1H-NMR) dilakukan di LIPI ( Laboratorium Ilmu Pengetahuan Indonesia) Serpong
1.6Metodologi Penelitian
untuk senyawa flavonoida, yaitu dengan menggunakan pereaksi FeCl3 1%, NaOH 10%, Mg-HCl dan H2SO4(p).
Tahap isolasi yang dilakukan : - Ekstraksi Maserasi - Ekstraksi Partisi
- Analisis Kromatografi Lapis Tipis - Analisis Kromatografi Kolom - Rekristalisasi
- Analisis Kristal Hasil Isolasi
Tahapan analisiskristal hasil isolasi yang dilakukan adalah : a) Analisis Kromatografi Lapis Tipis
b) Pengukuran titik lebur
BAB 2
TINJAUAN PUSTAKA
2.1 Tumbuhan Seri
2.1.1 Sistematika Tumbuhan Seri Sistematika Tumbuhan Seri adalah :
Kingdom : Plantae
Divisi : Spermatophyta Class : Dicotyledoneae
Ordo : Malvales
Famili : Elaeocarpaceae
Genus : Muntingia
Spesies : Muntingia calabura L
2.1.2 Nama Lain Tumbuhan Seri
Nama-nama lainnya di beberapa negara adalah: datiles, aratiles, manzanitas (Filipina), mât sâm (Vietnam); khoom sômz, takhôb (Laos); takhop farang (Thailand); krâkhôb barang (Kamboja); dan kerukup siam (Malaysia). Juga di kenal sebagaicapulin blanco, cacaniqua, nigua, niguito (bahasa Spanyol); Jamaican cherry, Panama berry, Singapore cherry (Inggris) dan nama yang tidak tepat, Japanse kers (Belanda), yang lalu dari sini diambil menjadi kersen dalam bahasa Indonesia. Nama ilmiahnya adalah
2.1.3 Morfologi Tumbuhan Seri
Tumbuhan Seri merupakan perdu atau pohon kecil yang tingginya sampai 12 m, meski umumnya hanya sekitar 3-6 m saja. Selalu hijau dan terus menerus berbunga dan berbuah sepanjang tahun. Cabang-cabang mendatar , menggantung di ujungnya membentuk naungan yang rindang. Ranting-ranting berambut halus bercampur dengan rambut kelenjar, demikian pula daunnya. Daun-daun terletak mendatar , berseling ,helaian daun tidak simetris , bundar telur lanset , tepinya bergerigi dan berujung runcing, 1-4 x 4-14 cm sisi bawah berambut kelabu rapat , bertangkai pendek. Daun penumpu yang sebelah meruncing berbentuk benang lk 0,5 cm , agak lama lalu mongering dan rontok , sementara sebelah lagi rudimeter . Bunga dalam berkas berisi 1-3(-5) kuntum, terletak di ketiak agak di sebelah atas tumbuhnya daun , bertangkai panjang, berkelamin dua dan berbilangan lima, kelopak berbagi dalam , taju meruncing bentuk benang, berambut halus , mahkota bertepi rata , bundar telur terbalik , putih tipis gundul lk 1 cm. Benang sari berjumlah banyak , 10 sampai lebih dari 100 helai . Bunga yang mekar menonjol keluar, ke atas helai-helai daun , namun setelah menjadi buah menggantung ke bawah , tersembunyi di bawah helai daun. Umumnya hanya satu-dua bunga yang menjadi buah dalam tiap berkasnya . Bertangkai panjang , bulat hampir sempurna , diameter 1-1,5 cm , hijau kuning dan akhirnya merah apabila masak , bermahkota sisa tangkai putik yang tidak rontok serupa bintang hitam bersudut lima. Berisi beberapa ribu biji yang kecil-kecil , halus , putih dan kekuningan ,terbenam dalam daging dan sari buah yang manis sekali ( Purwonegoro, 1997)
2.1.4 Kandungan Tumbuhan Seri
Zat Berat (gram)
2.1.5 Efek Farmakologis Tumbuhan Seri
a .penyembuh asam Urat (anti urid acid)
Di Indonesia secara tradisional buah kersen digunakan untuk mengobati asam urat dengan cara mengkonsumsi buah kersen sebayak 9 butir 3 kali sehari hal ini terbukti dapat mengurangi rasa nyeri yang ditimbulkan dari penyakit asam urat.
b.antiseptik
Kandungan dan rebusan daun kersen ternyata dapat berkasiat sebagai pembunuh microba berbahaya dan dapat digunakan sebagai anti septik. dari penelitian yang dilakukan oleh penelitian herbal dari Malaysia didapat hasil bahwa rebusan daun kersen dapat digunakan untuk membunuh bakteri C.Diptheriea, S. Aureus, P Vulgaris,
S Epidemidis dan K Rizhophil pada percobaan yang dilakukan secara invitro.
c.antiflamasi
d.antitumor
kandungan senyawa flavonoid yang dikandung daun kersen ternyata memiliki kasiat dapat menghambat perkembangan sel kanker (mouse hapatoma) secara laboratoris yang dilakukan para ilmuwan dari peru.( Hariyono, 2010 )
2.1.6 Manfaat Tumbuhan Seri
Buah kersen langsung dapat dimakan atau diolah menjadi sirup, selai dan permen, rasanya pun tidak kalah dengan minuman olahan dari buah yang mahal.Kayu kersen lunak dan mudah kering, sangat berguna sebagai kayu bakar. Kayu dari tanaman kersen ini juga cukup kuat sehingga banyak yang dipakai untuk membuat perabotan. Kulit kayunya yang mudah dikupas digunakan sebagai bahan tali dan kain pembalut. Daunnya dapat dijadikan semacam teh.
2.2. Senyawa Organik Bahan Alam
Senyawa Organik Bahan Alam dapat diklasifikasikan berdasarkan sifat-sifat kimia yang dimilikinya. Ada empat cara klasifikasi yang diusulkan, yaitu :
1. Klasifikasi berdasarkan struktur kimiawi
Klasifikasi ini berdasarkan kerangka molekular dari senyawa yang bersangkutan . Menurut sistem ini ada empat kelas, yaitu :
a. Senyawa alifatik rantai terbuka atau lemak dan minyak.
Contoh : asam-asam lemak , gula dan asam-asam amino pada umumnya b. Senyawa alisiklik atau sikloalifatik
Contoh : terpenoida , steroida, dan beberapa alkaloida c. Senyawa aromatik dan bonzenoida
Contoh : golongan fenolat dan golongan kuinon d. Senyawa Heterosiklik
Karena aplikasi ini hanyalah superfisial , maka tidak mengherankan jika suatu senyawa organik bahan alam tertentu dapat dimasukkan kedua kelas berlainan. Contoh : geraniol, farsenol, dan skualen , termasuk kelas senyawa alifatik rantai terbuka, timol termasuk senyawa aromatik. Namun, keempat senyawa tersebut merupakan anggota dari kelas terpenoida dan steroida.
2. Klasifikasi berdasarkan Sifat Fisiologik
Setelah penelitian yang mendalam dilakukan terhadap morfin, penisilin dan prostaglandin, maka perhatian para ahli sering ditujukan kepada isolasi dan penentuan fungsi fisiologis dari senyawa organik bahan alam tertentu. Hampir separuh dari obat-obatan yang digunakan sehari-hari merupakan bahan alam , misalnya alkaloida dan antibiotik atau golongan-golongan sintetik . Oleh karena itu, senyawa organik bahan alam dapat juga diklasifikasikan segi aktifitas fisiologik dari bahan yang bersangkutan. Misalnya kelas hormon, vitamin, antibiotik dan mikotoksin.
Meskipun asal-usul biogenetik sangat bervariasi, namun ada kalanya terdapat korelasi yang dekat antara aspek tersebut dengan kegiatannya. Misalnya, meskipun struktur sangat bervariasi , namun senyawa-senyawa yang menunjukkan aktivitas kardiotik ( kardenolid dan bufadienolid ) hanyalah struktur yang memiliki komposisi sebagai berikut : (a) cincin A/B terpadu secara cis; (b) memiliki residu berupa gula pada C3 dan (c) memiliki lakton suku 5 atau 6 yang terkonjugasi pada C17.
3. Klasifikasi berdasarkan Taksonomi
genera, suku atau family tumbuhan tertentu. Dalam satu spesies tunggal dapat ditemukan sejumlah konsitituen yang strukturnya berhubungan erat dengan satu sama lain . Misalnya ” opium “ dari Papaver somniferum mengandung dua puluhan alkaloida termasuk morfin, tebain, kodein, dan nikotin , yang kesemuanya dibiosintesis dari precursor 1- benzilisokuinolin melalui penggandengan (coupling) secara oksidasi . Oleh karena itu, alkaloida-alkaloida tersebut yang strukturnya mirip satu sama lain berasal dari genus tumbuhan tertentu disebut alkaloida opium.
4. Klasifikasi berdasarkan biogenesis
Semua konstituen tumbuhan dan binatang dibiosintesis dalam organism melalui reaksi-reaksi yang dibantu oleh enzim tertentu ( istilah “ biosintesis” dan “biogenesis” mempunyai arti yang sama) : pembentukan bahan alam oleh organism hidup. “ Biosintesis mengacu kepada perolehan data eksperimental dalam membuktikan jalur sintesis yang berlangsung, sedangkan “ biogenesis “ masih bersifat hipotektik dan lebih menekankan aspek spakulatif dari fakta. Setelah pengetahuan tentang kimia organik berkembang sejak tahun 1930-an , beberapa ahli mulai menyusun teori langkah-langkah biogenetic dari senyawa organic dari bahan alam yang berlangsung dalam organism hidup . “ Aturan isoprene “ yang diusulkan oleh Ruzicka menyatakan bahwa semua senyawa terpenoida terbentuk dari unit isoprene C5. ( Tobing,1989)
2.3. Senyawa Flavonoida
2.3.1. Struktur dasar senyawa flavonoida
Senyawa flavonoida adalah senyawa yang mengandung C15 terdiri atas dua inti fenolat yang dihubungkan dengan tiga satuan karbon. Struktur dasar flavonoida dapat digambarkan sebagai berikut :
C C C
A B
Kerangka dasar senyawa flavonoida
Cincin A adalah karakteristik phloroglusinol atau bentuk resorsinol tersubstitusi O
Namun sering terhidroksilasi lebih lanjut :
Cincin B adalah karakteristik 4-, 3,4-, 3,4,5- terhidroksilasi
2.3.2. Biosintesa dari Flavonoida
Gambar 2.
2.3.3. Klasifikasi senyawa Flavonoida
Flavonoida mengandung sistem aromatik yang terkonjugasi sehingga menunjukkan pita serapan kuat pada daerah spektrum sinar ultraviolet dan spektrum sinar tampak, umumnya dalam tumbuhan terikat pada gula yang disebut dengan glikosida (Harbone, 1996).
Menurut Robinson (1995), flavonoida dapat dikelompokkan berdasarkan keragaman pada rantai C3 yaitu :
1.Flavonol
Flavonol paling sering terdapat sebagai glikosida, biasanya 3-glikosida, dan aglikon flavonol yang umum yaitu kamferol, kuersetin, dan mirisetin yang berkhasiat sebagai antioksidan dan antiflamasi. Flavonol lain yang terdapat di alam bebas kebanyakan merupakan variasi struktur sederhana dari flavonol. Larutan flavonol dalam suasana basa dioksidasi oleh udara tetapi tidak begitu cepat sehingga penggunaan basa pada pengerjaannya masih dapat dilakukan.
2. Flavon
Flavon berbeda dengan flavonol dimana pada flavon tidak terdapat gugusan 3-hidroksi. Hal ini mempunyai serapan UV-nya, gerakan kromatografi, serta reaksi warnanya. Flavon terdapat juga sebagai glikosidanya lebih sedikit daripada jenis
glikosida pada flavonol. Flavon yang paling umum dijumpai adalah apigenin dan luteolin. Luteolin merupakan zat warna yang pertama kali dipakai di Eropa. Jenis yang paling umum adalah 7-glukosida dan terdapat juga flavon yang terikat pada gula melalui ikatan karbon-karbon. Contohnya luteolin 8-C-glikosida. Flavon dianggap sebagai induk dalam nomenklatur kelompok senyawa flavonoida.
O
Isoflavon merupakan isomer flavon, tetapi jumlahnya sangat sedikit dan sebagai fitoaleksin yaitu senyawa pelindung yang terbentuk dalam tumbuhan sebagai pertahanan terhadap serangan penyakit. Isoflavon sukar dicirikan karena reaksinya tidak khas dengan pereaksi warna manapun. Beberapa isoflavon (misalnya daidzein) memberikan warna biru muda cemerlang dengan sinar UV bila diuapi amonia, tetapi kebanyakan yang lain tampak sebagai bercak lembayung yang pudar dengan amonia berubah menjadi coklat.
O
jeruk ; dua glikosida yang paling lazim adalah neringenin dan hesperidin, terdapat dalam buah anggur dan jeruk.
O
O
Struktur Flavanon
5. Flavanonol
Senyawa ini berkhasiat sebagai antioksidan dan hanya terdapat sedikit sekali jika dibandingkan dengan flavonoida lain. Sebagian besar senyawa ini diabaikan karena konsentrasinya rendah dan tidak berwarna.
O
O OH
Struktur Flavanonol
6. Katekin
Katekin terdapat pada seluruh dunia tumbuhan, terutama pada tumbuhan berkayu. Senyawa ini mudah diperoleh dalam jumlah besar dari ekstrak kental Uncaria gambir dan daun teh kering yang mengandung kira-kira 30% senyawa ini. Katekin berkhasiat sebagai antioksidan.
O HO
OH OH
OH OH
7. Leukoantosianidin
Leukoantosianidin merupakan senyawa tan warna, terutama terdapat pada tumbuhan berkayu. Senyawa ini jarang terdapat sebagai glikosida, contohnya melaksidin, apiferol.
O
OH
HO OH
Struktur Leukoantosianidin
8. Antosianin
Antosianin merupakan pewarna yang paling penting dan paling tersebar luas dalam tumbuhan. Pigmen yng berwarna kuat dan larut dalam air ini adalah penyebab hampir semua warna merah jambu, merah marak , ungu, dan biru dalam daun, bunga, dan buah pada tumbuhan tinggi. Secara kimia semua antosianin merupakan turunan suatu struktur aromatik tunggal yaitu sianidin, dan semuanya terbentuk dari pigmen sianidin ini dengan penambahan atau pengurangan gugus hidroksil atau dengan metilasi atau glikosilasi.
O
OH
Struktur Antosianin
9.Khalkon
O
Struktur Khalkon
10. Auron
Auron berupa pigmen kuning emas yang terdapat dalam bunga tertentu dan briofita. Dalam larutan basa senyawa ini berwarna merah ros dan tampak pada kromatografi kertas berupa bercak kuning, dengan sinar ultraviolet warna kuning kuat berubah menjadi merah jingga bila diberi uap amonia (Robinson, 1995).
HC O
O
Struktur Auron
Prazat utama flavonoida sendiri sudah diketahui tanpa keraguan sebagai hasil dari banyak percobaan, tetapi masih banyak pertanyaan yang belum terjawab mengenai jalur rinci yang diikuti. Sering teramati bahwa dalam spesies tumbuhan tertentu semua flavoida yang berbeda-beda mempunyai pola hidroksilasi cincin yang sama, perbedaan hanya terdapat asetilasi, glikosilasi, dan struktur bagian C-3. Pengamatan ini menunjukkan bahwa terdapat senyawa antara C-15 yang umum diubah menjadi berbagai senyawa flavonoida setelah pola hidroksilasi cincin terbentuk.
Hidroksilase-3 adalah oksigenase mikrosom, tetapi hidriksilasi-3 dikatalisis oleh enzim yamg larut. Pada flavonoida C-glikosida, gula terikat pada atom karbon flavonoida dan dalam hal ini gula tersebut terikat langsung pada inti benzene dengan suatu ikatan karbon-karbon yang tahan asam (Robinson,1995).
Menurut Harborne (1996), dikenal sekitar sepuluh kelas flavonoida dimana semua flavonoida, menurut strukturnya, merupakan turunan senyawa induk flavon dan semuanya mempunyai sejumlah sifat yang sama yakni:
Golongan flavonoida Penyebaran Ciri khas
Antosianin
Proantosianidin
Flavonol
pigmen bunga merah marak, dan
biru juga dalam daun dan
jaringan lain.
terutama tan warna, dalam daun
tumbuhan berkayu.
Terutamako-pigmen tanwarna
dalam bunga sianik dan asianik;
tersebar luas dalam daun.
seperti flavonol
kadang terdapat juga dalam
jaringan lain
larut dalam air, λmaks 515-545 nm, bergerak dengan BAA pada kertas.
menghasilkan antosianidin (warna
dapat diekstraksi dengan amil
alkohol) bila jaringan dipanaskan
dalam HCl 2M selama setengah
jam.
Setelah hidrolisis, berupa bercak
kuning mirip pada kromatogram
Forestal bila disinari dengan sinar
UV;maksimal spektrum pada
330-350 nm.
Setelah hidrolisis, berupa bercak
coklat redup pada kromatogram
forestal; maksimal spektrum pada
330-350nm
Pada kromatogram BAA berupa
bercak redup dengan Rf tinggi.
Dengan amonia berwarna merah
Maksimal spektrum 370-410nm.
Isoflavon
Glikoflavon
( terutama dalam Citrus )
tanwarna; sering kali dalam akar;
hanya terdapat dalam satu
suku,Leguminosae
Seperti Flavonol
pahit.
Bergerak pada kertas dengan
pengembang air; tak ada uji warna
yang khas
Mengandung gula yang terikat
melalui ikatan C-C; bergerak
dengan pengembang air, tidak
seperti flavon biasa.
2.3.4. Sifat kelarutan Flavonoida
Aglikon flavonoida adalah polifenol dan karena itu mempunyai sifat kimia senyawa fenol, yaitu bersifat agak asam sehingga dapat larut dalam basa. Tetapi harus diingat, bila dibiarkan dalam larutan basa, dan di samping itu terdapat oksigen, banyak yang akan terurai. Karena mempunyai sejumlah gugus hidroksi, atau suatu gula, flavonoida merupakan senyawa polar, maka umumnya flavonoida cukup larut dalam pelarut polar seperti Etanol (EtOH), Metanol (MeOH), Butanol (BuOH), Aseton, Dimetilsulfoksida (DMSO), Dimetilformamida (DMF), Air dan lain-lain. Adanya gula yang terikat pada flavonoida (bentuk yang umum ditemukan) cenderung menyebabkan flavonoida lebih mudah larut dalam air dan dengan demikian campuran pelarut yang disebut diatas dengan air merupakan pelarut yang lebih baik untuk glikosida. Sebaliknya, aglikon yang kurang polar seperti isoflavon, flavanon dan flavon serta flavonol yang termetoksilasa cenderung lebih mudah larut dalam pelarut seperti Eter dan Kloroform (Markham, 1988).
2.4. Teknik Pemisahan
a. Pemisahan kimia adalah suatu teknik pemisahan yang berdasarkan adanya perbedaan yang besar dari sifat-sifat fisika komponen dalam campuran yang akan dipisahkan.
b. Pemisahan fisika adalah suatu teknik pemisahan yang didasarkan pada perbedaan – perbedaan kecil darisifat-sifat fisika antara senyawa-senyawa yang termasuk dalam suatu golongan . (Muldja, 1995)
2.4.1 Ekstraksi
Ekstraksi dapat dilakukan dengan metoda maserasi, perkolasi, dan sokletasi. Sebelum ekstraksi dilakukan, biasanya serbuk tumbuhan dikeringkan lalu dihaluskan dengan derajat kehalusan tertentu, kemudian diekstraksi dengan salah satu cara di atas. Ekstraksi dengan metoda sokletasi dapat dilakukan secara bertingkat dengan berbagai pelarut berdasarkan kepolarannya, misalnya : n–heksana, eter, benzena, kloroform, etil asetat, etanol, metanol, dan air.Ekstraksi dianggap selesai bila tetesan ekstrak yang terakhir memberikan reaksi negatif terhadap pereaksi alkaloida. Untuk mendapatkan larutan ekstrak yang pekat biasanya pelarut ekstrak diuapkan dengan menggunakan alat rotary evaporator. (Harborne, 1987 )
Menurut prosesnya ekstraksi dapat dibagi menjadi dua yaitu Ekstraksi kontiniue dimana pelarut yang sama digunakan secara berulang-ulang sampai proses ekstraksi selesai dan biasanya alat yang digunakan adalah alat soklet. Ekstraksi yang kedua adalah ekstraksi bertahap yaitu ekstraksi selalu digunakan pelarut yang baru samppai ekstraksi selesai dan bisanya digunakan adalah corong pisah. Tekniknya cukup dengan penambahan pelarut yang tidak bercampur dengan pelarut yang pertama melalui corong pisah, kemudian dilakukan pengocokan sampai terjadi kesetimbangan konsentrasi pada kedua pelarut. Setelah didiamkan beberapa saat akan tebentuk dua lapisan. Kesempurnaan ekstraksi tergantung banyaknya ekstraksi yang dilakukan
stasioner dengan luas permukaan yang besar dan yang lainnya merupakan cairan yang merembes lewat. Fasa stasioner mungkin suatu zat padat atau suatu cairan dan fasa yang bergerak mungkin suatu cairan atau suatu gas. ( Underwood, 1981 )
Cara-cara kromatografi dapat digolongkan sesuai dengan sifat-sifat dari fasa diam, yang dapat berupa zat padat atau zat cair . Jika fasa diam berupa zat padat disebut kromatografi serapan , jika berupa zat cair disebut kromatografi partisi. Karena fasa gerak dapat berupa zat cair atau gas maka ada empat macam system kromatografi , yaitu :
1. Fasa gerak cair- fasa diam padat ( kromatografi serapan ) a. Kromatografi Lapis Tipis
b. Kromatografi Penukar Ion 2. Fasa gerak gas- fasa diam padat
a. Kromatografi Gas-Padat 3. Fasa gerak cair- fasa diam zat cair
a. Kromatografi Kertas 4. Fasa gerak gas- fasa diam zat cair
a. Kromatografi gas- cair b. Kromatografi kolom kapiler
Semua pemisahan dengan kromatografi tergantung pada kenyataan bahwa senyawa-senyawa yang dipisahkan terdistribusi diantara fasa gerak dan fasa diam dalam perbandingan yang sangat berbeda- beda dari satu senyawa terhadap senyawa yang lain.( Sastrohamidjojo, 1991)
2.4.2.1. Kromatografi Lapisan Tipis
Kromatografi lapisan tipis (KLT) dapat dipakai dengan dua tujuan. Yang pertama, dipakai selayaknya sebagai metode untuk mencapai hasil kualitatif, kuantitatif, dan preparative.Kedua dipkai untuk menjajaki sistem pelarut dan sistem penyangga yang akan dipakai dalam kromatografi kolom atau kromatografi cair kinerja tinggi.
(kromatografi cair padat ) atau berfungsi sebagai penyangga untuk lapisan zat cair (kromatografi cair-cair).Fasa diam pada KLT sering disebut penyerap, walaupun sering berfungsi sebagai penyangga untuk lapisan zat cair di dalam sistem kromatogarafi cair-cair . Hampir segala macam serbuk dapat dipakai sebagai penyerap pada KLT , yaitu : silika gel (asam silikat). Alumina (aluminium oksida),kiselgur (tanah diatome), dan selulosa. Fasa gerak dapat berupa hampir segala macam pelarut atau campuran pelarut (Sudjadi, 1986).
Kromatografi Lapis Tipis terutama berguna untuk tujuan berikut:
1. Mencari pelarut untuk kromatografi kolom
2. Analisis fraksi yang diperoleh dari kromatografi kolom 3. Identifikasi flavonoida secara ko-kromatografi.
4. Menyegi arah atau perkembangan reaksi seperti hidrolisis ata metilasi 5. Isolasi flavonoida murni skala kecil
6. Penyerap dan pengembang yang digunakan umumnya sama dengan penyerap dan pengembang pada kromatografi kolom dan kromatografi kertas
(Markham, 1981)
2.4.2.2. Kromatografi Kolom
Kromatografi kolom adalah kromatografi yang menggunakan kolom sebagai alat untuk memisahkan komponen-komponen dalam campuran. Alat tersebut berupa pipa gelas yang dilengkapi suatu kran di bagian bawah kolom untuk mengendalikan aliran zat cair. Ukuran kolom tergantung dari banyaknya zat yang akan dipindahkan. Pemisahan tergantung kepada kesetimbangan yang terbentuk pada bidang antar muka di antara butiran-butiran adsorben dan fase bergerak serta kelarutan relatif komponen pada fase bergeraknya (Yazid, E., 2005).
komponen memakai pelarut yang cocok. Kolom hanya berupa tabung kaca yang dilengkapi dengan keran pada salah satu ujung . ( Markham, 1981)
Kolom kromatografi atau tabung untuk pengaliran karena gaya tarik bumi (gravitasi) atau sistem bertekanan rendah biasanya terbuat dari kaca yang dilengkapi dengan keran jenis tertentu pada bagian bawahnya untuk mengatur aliran pelarut. Ukuran keseluruhan kolom sungguh beragam, tetapi biasanya panjangnya sekurang – kurangnya 10 kali garis tengah dalamnya dan mungkin saja sampai 100 kali.
Pada kromatografi kolom, campuran yang akan dipisahkan diletakkan berupa pita pada bagian atas kolom penyerap yang berada dalam tabung kaca, tabung logam atau bahkan tabung plastik. Pelarut (fasa gerak ) dibiarkan mengalir melalui kolom karena aliran yang disebabkan oleh gaya berat atau didorong oleh tekanan. Pita senyawa linarut bergerak melalui kolom dengan laju yang berbeda, memisah dan dikumpulkan berupa fraksi ketika keluar dari alas kolom (Gritter , 1991).
2.4.2.3 Kromatografi Kertas
Kromatografi kertas pertama sekali dikembangkan di pertengahan abad ke 19 dan kemudian digunakan untuk analisis kualitatif dan kuantitatif. Meskipun dalam beberapa tahun metode pemisahan ini digantikan dengan teknik kromatografi lapisan tipis. Fase gerak dalam kromatografi kertas terdiri dari selulosa. Mekanisme terhadap pemisahan melibatkan penyerapan pada zat terlarut pada selulosa dan pemisahan pada zat terlarut antara fase oganik bergerak dan air dalam kertas. (Landgrebe, 1982).
pereaksi pembentuk warna yang cocok atau menyinari lapisan memakai sinar ultraviolet (Gritter, 1991).
2.4.2.5 Kromatografi Lapis Tipis Preparatif
Metode kromatografi juga dapat dilakukan dengan metode kromatografi lapis tipis preparatif yaitu pemisahan yang terdiri atas sejumlah senyawa serupa dengan kromatografi jenis yang sukar dan kadang-kadang lama dipisakan. KLT preparatif adalah cara ideal untuk memisahkan cuplikan kecil (50 mg sampai 1 g). Penjerap yang dipakai adalah silika gel dan dipakai untuk pemisaha campuran senyawa lipofil maupun campuran senyawa hidrofil.Ketebalan adsorben yang paling sering dipakai 0,5-2 mm. Ukuran plat kromatografi biasanya 20 x 20 cm atau 20 x 40 cm.
Cuplikan dilarutkan dalam sedikit pelarut sebelum ditotolkan pada plat kromatografi lapis tipis preparatif. Pelarut yang baik ialah pelarut organik seperti n-heksan, etil asetat, Diklorometana. Cuplikan yang akan dipisahkan ditotolkan berupa garis pada salah satu sisi dari pelat lapisan besar dan dikembangkan secara tegak lurus pada garisan cuplikan sehingga campura akan terpisah menjadi beberapa pita. Pita penjerap tersebut diharapkan mengandung komponen campuran murni kemudian dikerok dari pelat kaca dengan spatula dan ditampung dengan logam tipis atau kertas lilin. Penjerap diletakkan dalam corong kaca memakai kertas saring lalu dielusi beberapa kali dengan pelarut yang cocok ( Gritter, 1991).
2.4.3. Harga Rf (Reterdation Factor)
2.5. Teknik Spektroskopi
Teknik spektroskopi adalah salah satu teknik analisis kimia – fisika yang mengamati tentang interaksi atom atau molekul dengan radiasi elektromagnetik. Ada dua macam instrumen pada teknik spekstroskopi yaitu spektrometer dan spektrofotometer. Instrumen yang memakai monokromator celah tetap pada bidang focus disebut sebagai spektrometer. Apabila spectrometer tersebut dilengkapi dengan detektor yang bersifat fotoelektrik maka disebut spektrofotometer (Muldja, 1995).
Informasi Spektroskopi Inframerah menunjukkan tipe-tipe dari adanya gugus fungsi dalam satu molekul . Resonansi magnetik inti memberikan informasi tentang bilangan dari setiap tipe dari atom hidrogen. Kombinasinya dan data kadang-kadang menentukan struktur yang lengkap dari molekul yang tidak diketahui (Pavia, 1986).
Walaupun spektrum infra – merah merupakan kekhasan sebuah molekul secara menyeluruh, gugus atom tertentu memberikan penambahan pita-pita pada kerapatan tertentu, ataupun didekatnya, apapun bangun molekul selebihnya. Keberlakuan seperti itulah yang memungkinkan kimiawan memperoleh informasi tentang struktur yang berguna serta mendapatkan acuan bagi peta umum frekuensi gugus yang khas (Silverstain , 1986).
2.5.1. Spektrometri Ultra Violet
Ciri spektrum golongan flavonoida utama dapat ditunjukkan sebagai berikut :
λ maksimum
utama (nm)
λ maksimum tambahan (nm) (dengan intensitas
Spektrum Flavonoida biasanya ditentukan dalam larutan dengan pelarut Metanol (MeOH) atau Etanol (EtOH). Spektrum khas terdiri atas dua maksima pada rentang 240-285 nm (pita II) dan 300-550 nm (pita I). Kedudukan yang tepat dan kekuatan nisbi maksima tersebut memberikan informasi yang berharga mengenai sifat flavonoida dan pola oksigenasinya. Ciri khas spektrum tersebut ialah kekuatan nisbi yang rendah pada pita I dalam dihidroflavon, dihidroflavonol, dan isoflavon serta kedudukan pita I pada spektrum khalkon, auron dan antosianin yang terdapat pada panjang gelombang yang tinggi. ( Markham, 1981 )
2.5.2. Spektrofotometri Infra Merah (FT - IR)
Penyerapan ini tercantum , namun spektrum getaran terlihat bukan sebagai garis- garis melainkan pita-pita . Hal ini disebabkan perubahan energi getaran tunggal selalu disertai sejumlah perubahan energi putaran (Silverstein, 1986).
Untuk penafsiran spektrum inframerah tidak ada aturan kaku, namun syarat-syarat tertentu yang harus dipenuhi sebagai upaya untuk menafsirkan suatu spektrum adalah
1. Spektrum harus terselesaikan dan intensitas cukup memadai 2. Spektrum diperoleh dari senyawa murni
3. Spektrofotometer harus dikalibrasi sehingga pita yang teramati sesuai dengan frekuensi atau panjang gelombangnya. Kalibrasi dapat dilakukan dengan menggunakan standar yang dapat diandalkan, seperti polistirena film.
4. Metode persiapan sampel harus ditentukan. Jika dalam bentuk larutan, maka konsentrasi larutan dan ketebalan sel harus ditunjukkan.
Serapan Khas Beberapa Gugus fungsi
Gugus Jenis Senyawa Daerah Serapan (cm-1)
C-H alkana 2850-2960, 1350-1470
C-H alkena 3020-3080, 675-870
C-H aromatik 3000-3100, 675-870
C-H alkuna 3300
C=C alkena 1640-1680
C=C aromatik (cincin) 1500-1600
C-O alkohol, eter, asam karboksilat, ester 1080-1300 C=O aldehida, keton, asam karboksilat, ester 1690-1760
O-H alkohol, fenol(monomer) 3610-3640
O-H alkohol, fenol (ikatan H) 2000-3600 (lebar)
O-H asam karboksilat 3000-3600 (lebar)
N-H amina 3310-3500
C-N amina 1180-1360
-NO2 nitro 1515-1560, 1345-1385
jumlah dan jenis vibrasi itu menjadi sukar sekali atau tidak mungkin sama sekali, karena bukan saja disebabkan besarnya jumlah pusat – pusat vibrasi, melainkan karena juga harus diperhitungkan terjadinya saling mempengaruhi (inter-aksi) beberapa pusat vibrasi.
2.5.3. Spektrofotometri Resonansi Magnetik Inti Proton (1H-NMR)
Spektrometri Resonansi Magnetik Inti (Nuclear Magnetic Resonance, NMR) merupakan alat yang berguna pada penentuan struktur molekul organik. Teknik ini memberikan informasi mengenai berbagai jenis atom hidrogen dalam molekul. Struktur NMR memberikan informasi mengenai lingkungan kimia atom hydrogen, jumlah atom hydrogen dalam setiap lingkungan dan struktur gugusan yang berdekatan dengan setiap atom hydrogen (Cresswell, 1982).
BAB 3 12.Alat pengukur titik lebur
13.Statif dan klem 14.Lampu UV 15.Spatula 16.Pipet Tetes 17.Botol Vial
18.Bejana Kromatografi lapis tipis
19.Spektrofotometer FT – IR Jasco
20.Spektrofotometer 1H-NMR Hitahci FT-NMR R 1986 21.Spektrofotometer UV – Visibel
3.2. Bahan – bahan
1. Kulit batang tumbuhan Seri (Muntingia calabura L)
2. Metanol teknis
3. N-heksana teknis
4. Etil Asetat teknis
5. H2SO4(p)
6. Silikagel 60 G type E E.merck Art. 7734
7. Pereaksi Ferri Klorida 1 %
8. Pereaksi Natrium Hidroksida 10 % 9. Akuades
3.3 Prosedur Penelitian
3.3.1.Penyediaan Sampel
Sampel yang diteliti adalah kulit batang tumbuhan Seri yang diperoleh dari daerah Pasar Baru, Padang Bulan, Medan. Kulit batang tumbuhan Seri segar dirajang halus sebanyak 1000 gram.
3.3.2. Uji Pendahuluan Terhadap Ekstrak kulit batang tumbuhan Seri
Kulit batang tumbuhan Seri diidentifikasi dengan menggunakan cara: 1. Uji Busa
2. Skrining Fitokimia
3. Analisis Kromatografi Lapis Tipis
penangas air. Lalu dikocok-kocok dengan kuat hingga terbentuk busa dan didiamkan selama 10 menit. Ternyata busa hilang yang membuktikan bahwa di dalam kulit batang tumbuhan Seri tidak terdapat senyawa saponin.
3.3.2.2. Skrining Fitokimia
Untuk membuktikan adanya senyawa flavonoida yang terdapat dalam daun tumbuhan seri (muntingia calabura L.) maka dilakukan uji pendahuluan secara kualitatif dengan reaksi warna sebagai berikut :
Prosedur :
- Dimasukkan 10 gram serbuk tumbuhan seri (Muntingia calabura L.) yang telah dirajang ke dalam erlenmeyer
- Ditambahkan metanol 100 ml - Didiamkan selama 24 jam - Disaring
- Dibagi ekstrak metanol ke dalam 4 tabung reaksi - Ditambahkan masing-masing pereaksi
a. Tabung I : dengan FeCl3 1% menghasilkan larutan berwarna hitam b. Tabung II : dengan H2SO4(p) menghasilkan larutaan orange kekuningan c. Tabung III : dengan Mg-HCl menghasilkan larutan berwarna merah muda d. Tabung IV : dengan NaOH 10% menghasilkan larutan berwarna biru violet
3.3.2.3. Analisis Kromatografi Lapis Tipis
Prosedur :
Dimasukkan 10 ml larutan fase gerak metanol : etil asetat dengan perbandingan (90 : 10) v/v ke dalam bejana kromatografi, kemudian dijenuhkan. Ditotolkan ekstrak pekat metanol pada plat KLT. Dimasukkan plat ke dalam bejana yang telah berisi pelarut yang telah dijenuhkan, lalu ditutup dan dielusi. Plat yang telah dielusi dikeluarkan dari bejana, lalu dikeringkan. Diamati warna bercak yang timbul dibawah sinar Ultra Violet dan difiksasi dengan pereaksi FeCl3 1% kemudian dihitung harga Rf yang diperoleh. Perlakuan yang sama dilakukan untuk perbandingan pelarut metanol:etil asetat (80:20)v/v; (70:30)v/v; (60:40)v/v; (50:50)v/v. Yang memberikan pemisahan bercak noda yang baik adalah perbandingan metanol : etil asetat (80:20)v/v.
3.3.3. Prosedur untuk Memperoleh Senyawa Kimia dari Ekstrak Kulit Batang Tumbuhan Seri
3.3.4. Analsisi Kromatografi Kolom Hasil Isolasi Senyawa Flavonoida
Analisis kromatografi kolom hasil isolasi senyawa flavonoida dilakukan terhadap ekstrak pekat etil asetat. Fasa diam yang digunakan adalah silika gel 60 G dan fasa gerak adalah campuran pelarut metanol:etil asetat dengan perbandingan (90: 10)v/v ; (80:20)v/v ; (70:30)v/v ; (60:40)v/v ; (50:50)v/v.
Prosedur :
Dirangkai seperangkat alat kolom kromatografi. Terlebih dahulu dibuburkan silika gel 60 G dengan menggunakan n-Heksan, diaduk-aduk hingga homogen lalu dimasukkan ke dalam kolom kromatografi. Kemudian dielusi dengan menggunakan n-heksan 100% hingga silika gel padat dan homogen. Dimasukkan 21,26 gram ekstrak pekat etil asetat ke dalam kolom kromatografi yang telah berisi bubur silika gel di puncak kolom, lalu ditambahkan fasa gerak metanol : etil asetat dengan perbandingan (80:20)v/v secara perlahan-lahan dan diatur aliran fasa gerak yang keluar dari kolom sama banyaknya dengan penambahan fasa gerak dari atas kolom. Hasil yang diperoleh ditampung dalam botol vial setiap 10 ml, lalu di KLT dan digabung fraksi dengan harga Rf yang sama. Setelah itu diuji flavonoida dan diuapkan pelarutnya.
3.3.5. Pemurnian ( Rekristalisasi )
Prosedur : Kristal pada fraksi 10-50 dilarutkan dengan etil asetat, diaduk hingga semua kristal larut sempurna. Kemudian ditambahkan dengan n-heksana secara perlahan-lahan hingga terjadi pengendapan zat-zat pengotor di dasar wadah, lalu diuapkan sisa pelarut dari kristal.
3.3.6 Uji Kemurnian Hasil Isolasi dengan Kromatografi Lapis Tipis(KLT)
Prosedur :
Dimasukkan 10 ml larutan fasa gerak metanol : etil asetat ke dalam bejana kromatografi , lalu dijenuhkan. Ditotolkan kristal yang sebelumnya dilarutkan dengan metanol pada plat KLT. Dimasukkan plat KLT tersebut ke dalam bejana kromatografi yang telah jenuh. Setelah pelarut fasa gerak merembes sampai batas atas, plat KLT dikeluarkan dari bejana , dikeringkan ,dan difikasasi dengan menggunakan pereaksi Feri Klorida 1 % menghasilkan bercak berwarna hitam yang menunjukkan adanya senyawa flavonoida. (Lampiran C )
3.3.7. Analisis Spektroskopi Senyawa Hasil Isolasi
3.3.7.1. Analisis Senyawa Hasil Isolasi dengan Spektrofotometer UV-Visible
Analisis spektrum UV-Visible dilakukan di Laboratorium Ilmu Pengetahuan Indonesia (LIPI) Serpong ( Lampiran D )
3.3.7.2. Analisis Senyawa Hasil Isolasi dengan Spektrofotometer Inframerah
Analisis spektrum inframerah dengan spektrofotometer dilakukan di Laboratorium Ilmu Pengetahuan Indonesia (LIPI) Serpong ( Lampiran E )
3.3.7.3. Analisis Senyawa Hasil Isolasi dengan Spektrometer Resonansi Magnetik Inti Proton (1H-NMR)
Analisis ini dilakukan di Laboratorium Ilmu Pengetahuan Indonesia (LIPI) Serpong dengan menggunakan CD3OD sebagai pelarut . (Lampiran F)
Diskrining fitokimia
Dimaserasi dengan methanol selama ±72 jam Disaring
Dipekatkan dengan rotarievaporator
Diekstraksi partisi dengan n- heksana
Diuapkan dengan waterbath sampai pekat
Di analisis KLT untuk menentukan eluen pada pemisahan kromatografi kolom 1000 gram kulit batang
tumbuhan seri
residu
Filtrat Residu
Lapisan metanol Ekstrak n-hexan
Ekstrak pekat metanol Ekstrak metanol
FT-IR Ekstrak pekat etil asetat
1H-NMR
Titik Lebur
Kristal Coklat
Kristal coklat murni
Fraksi 10-50 Fraksi 51-80 Fraksi 81-100 Fraksi 101-130
Hasil negatif
BAB 4
HASIL DAN PEMBAHASAN
4.1. Hasil Penelitian
Dari hasil skrining pendahuluan terhadap ekstrak dari kulit batang tumbuhan seri
(Muntingia calabura L.) dengan adanya penambahan pereaksi-pereaksi warna untuk
menentukan golongan senyawa kimia yang dikandung dengan menggunakan pereaksi flavonoida yakni:
1. H2SO4(p) memberikan warna orange kekuningan 2. NaOH 10 % memberikan warna biru violet 3. FeCl3 1 % memberikan warna hitam 4. Mg–HCl memberikan warna merah muda
Kromatografi Lapis Tipis yang dilakukan dengan menggunakan adsorben silika gel 60 F254, dan dengan menggunakan eluen dengan perbandingan pelarut metanol : etil asetat (80 :20)v/v
Dari hasil isolasi kulit batang tumbuhan seri diperoleh kristal berwarna coklat sebanyak 10 mg dengan titik lebur 98-100oC.
Dari hasil analisis Spektrofotometer ultra violet visible (UV – Visible) memberikan panjang gelombang maksimum ( λ maks ) pada peak 1=272,5 nm
Dan pada peak 2= 215,0 nm (Lampiran D).
1. Pada bilangan gelombang 3396,64 cm‐1 , menunjukkan adanya vibrasi ulur OH
Hasil analisis Spektrofotometer Resonansi Magnetik Proton (1HNMR) memberikan pergeseran kimia pada daerah sebagai berikut :
1. Pergeseran kimia pada daerah δ = 1,2421 ppm menunjukkan pergeseran kimia proton dari CH3 – C-C=C-
2. Pergeseran kimia pada daerah δ = 3,8604 ppm pada puncak singlet menunjukkan proton OCH3 pada 4` pada cincin B senyawa flavonoida (Lampiran H.1),(Mabry, 1970)
3. Pergeseran kimia pada daerah δ =3,6433 ppm debgan puncak singlet menunjukkan proton gugus samping pada proton C-7 cincin B senyawa flavonoida ( diduga gugus ramniglukosil) ( Lampiran H.3), (Mabry, 1970) 4. Pergeseran kimia pada daerah δ = 5,9238 ppm dengan puncak singlet
menunjukkan proton H-8 pada cincin B senyawa flavonoida (Lampiran H.2), (Mabry, 1970)
5. Pergeseran kimia pada daerah δ = 5,8749 ppm dengan puncak singlet menunjukkan proton H-6 pada cincin B senyawa flavonoida ( Lampiran H.2 ), (Mabry, 1970)
6. Pergeseran kimia pada daerah δ = 6,8256 – 7,0762 ppm menunjukkan adanya
4.2 Pembahasan
Dari hasil skrining fitokimia dengan menggunakan pereaksi flavonoida kulit batang tumbuhan seri (Muntingia calabura L.) mengandung senyawa flavonoida.
Senyawa flavonoida yang dihasilkan dari pemisahan secara kolom kromatografi diperoleh dari perbandingan pelarut metanol : etil asetat (80:20)v/v.
Dari data spektrum UV-Visible senyawa hasil isolasi dengan menggunakan pelarut metanol menghasilkan panjang gelombang maksimum 272,5 nm. Berdasarkan literatur yakni UV- Visible pembanding senyawa flavonoida dengan rentang panjang gelombangnya 275-295 nm yang digolongkan sebagai flavanon menunjukkan adanya kesesuaian antara senyawa hasil isolasi dengan literatur.
Jadi dari spektrum UV-Visible dan FT-IR dapat disimpulkan bahwa kemungkinan struktur flavonoida yang diisolasi adalah jenis flavanon
O
Dari hasil interpretasi spektrum Resonansi Magnetik Inti Proton (1HNMR), senyawa hasil isolasi dengan menggunakan pelarut Metanol diperoleh :
1.Pergeseran kimia pada daerah δ = 1,2421 ppm menunjukkan pergeseran kimia proton dari gugus CH3 – C-C=C-. Hal ini didukung oleh adanya spektrum inframerah pada bilangan gelombang 1614,42 cm-1, menunjukkan adanya vibrasi gugus C=C
3.Pergeseran kimia pada daerah δ = 7,0762 ppm menunjukkan pergeseran kimia proton gugus aromatis. Hal ini didukung oleh adanya spektrum inframerah pada bilangan gelombang 1614,42 cm-1 menunjukkan vibrasi gugus C=C
BAB 5
KESIMPULAN DAN SARAN
5.1. Kesimpulan
1. Hasil isolasi yang diperoleh dari 1000 g kulit batang tumbuhan seri (Muntingia calabura L.) merupakan senyawa berwarna coklat berbentuk kristal, diperoleh sebanyak 10 mg, Rf= 0,71 , titik lebur 98-100oC.
2. Berdasarkan hasil uji skrining fitokimia dan analisis Kromatografi Lapis Tipis
dengan penampakan noda menggunakan pereaksi FeCl3 1% yang
menghasilkan larutan hitam dan NaOH 10% yang menghasilkan larutan biru violet,dan Mg-HCl yang menghasilkan warna merah muda, dan H2SO4(p) menghasilkan warna orange kekuningan maka dapat disimpulkan kristal coklat hasil isolasi merupakan senyawa flavonoida.
3. Dari hasil interpretasi spektrum UV-Visible,spektrum Inframerah (FT-IR) dan resonansi magnetik inti proton (1H-NMR) dan berdasarkan literatur bahwa hasil isolasi merupakan senyawa flavonoida.
5.2 Saran
DAFTAR PUSTAKA
Bernasconi, G. 1995. Teknologi Kimia. Jilid 2. Edisi Pertama. Jakarta :Pradaya Pratama.
Creswell, C.J. 1982. Analisa Spektrum Senyawa Organik. Edisi ke-2. Terjemahan Kosasih Padmawinata dan Iwang Soediro. Bandung : ITB.
Dalimartha, S. 2005. Tanaman Obat di Lingkungan Sekitar. Cetakan ke-1. Jakarta : Puspa Swara.
Effendi, S.1982. Ensiklopedia Tumbuh-tumbuhan Berkhasiat yang Ada di Bumi Nusantara. Surabaya : Karya Andi.
Gritter, R.J. 1991. Pengantar Kromatografi. Terbitan ke-2 . Terjemahan Kosasih Padmawinata. Bandung : ITB.
Hadisentosa, R. 2011. Manfaat dan Kandungan Gizi Buah-buahan. Jakarta: Forum Wihara.
Haki, M. 2009.Efek Ekstrak Daun Talok ( Muntingia calabura L) terhadap Aktivitas
Enzim SGPI pada Mencit yang Diinduksi karbon Tetra Klorida. Surakarta :
Universitas Sebelas Maret Press.
Harborne,J.B. 1996. Metoda Fitokimia, Penuntun Cara Modern Menganalisa
Tumbuhan. Terbitan ke-2. Terjemahan Kosasih Padmawinata dan Iwang
Soediro. Bandung : ITB.
Khopkar, S.M. 2003. Konsep Dasar Kimia Analitik. Terjemahan A. Saptorahardjo. UI-Press. Jakarta
Mabry, T.J. 1970. The Systematic Identification of Flavonoids. Springer- Verlag. New York
Markham, K.R. 1981. Cara Mengidentifikasi Flavonoida. Terjemahan Kosasih Padmawinata. Bandung : ITB.
Muldja, M.H. 1995. Analisis Instrumental. Cetakan ke-1. Surabaya : Airlangga Universitas Press.
Pavia,L.D.1979. Introduction to Spectroscopy a Guide for Students of Organic Chemistry. Philladelphia : Saunders College.
Sastrohamidjojo,H. 1996. Sintesis Bahan Alam. Yogyakarta : Gadjah Mada University Press.
Silverstein,R.M. 1986. Penyidikan Spektrometrik Senyawa Organik. Edisi ke-4. Terjemahan A.J. Hartomo dan Anny Victor Purba. Jakarta : Erlangga.
Sudjadi. 1986. Metode Pemisahan. Yogyakarta : Kanisius.
Tobing, R.L. 1989. Kimia Bahan Alam. Jakarta :Departemen Pendidikan dan Kebudayaan. Direktorat Jendral Pendidikan Tinggi. Proyek Pembangunan Lembaga Pendidikan Tenaga Kependidikan.
Underwood,A.L.1981. Analisa Kimia Kuantitatif. Edisi ke-4. Terjemahan Soendoro. Jakarta : Erlangga.
Unjianto, B. 2011. Sirup Buah Kersen, Penyembuh Asam Urat. Jakarta : Suara Merdeka Cybernews.
Verdayanti,T.E.2009. Uji Efektifitas Jus Buah Kersen terhadap Penurunan Kadar
Glukosa Darah pada Tikus Putih. Malang : Universitas Muhammadiyah
Yazid, E. 2005. Kimia Fisika untuk Paramedis. Yogyakarta :Penerbit Andi.
Lampiran C.Hasil Kromatografi Lapis Tipis Senyawa Hasil Isolasi Melalui Penampakan Noda dengan Pereaksi
No Penampakan bercak
Pereaksi Warna Noda Rf
1 I FeCl3 1% Hitam 0,71
