Lampiran 1. Kromatogram Penyuntikan Simvastatin Baku pada Pembuatan Kurva kalibrasi
Kromatogram Simvastatin (5 µg/ml), fase diam TC-C18 (4,6 x 150 mm), fase gerak metanol-air (80:20) v/v, laju alir 1,5 ml/menit.
Kromatogram Simvastatin (20 µg/ml), fase diam TC-C18 (4,6 x 150 mm), fase gerak metanol-air (80:20) v/v, laju alir 1,5 ml/menit.
Kromatogram Simvastatin (50 µg/ml), fase diam TC-C18 (4,6 x 150 mm), fase gerak metanol-air (80:20) v/v, laju alir 1,5 ml/menit.
No Konsentrasi (µg/ml)
Retention time (menit)
Area Height USP Tailing
1 5 4,623 201,1 11,82 1,3333
2 10 4,584 408,8 23,87 1,5240
3 20 4,595 893,1 50,92 1,5202
4 30 4,558 1356,1 76,87 1,5915
5 50 4,613 2043,2 121,27 1,5453
Catatan: Luas area merupakan rata-rata dari 3 × replikasi. Lampiran 2. Perhitungan Persamaan Regresi Simvastatin
No
Konsentrasi
(µg/ml) Luas Area X2 Y2 XY X Y
1 0 0 0 0 0
2 5 203,1868 25 41284,8797 1015,9340 3 10 417,6224 100 174408,4773 4176,2241 4 20 843,7825 400 711968,9579 16875,6506 5 30 1271,3642 900 1616367,082 38140,9278
6 50 2254,2307 2500 5081556,094 112711,5355
Lampiran 3. Perhitungan Batas Deteksi (LOD) dan Batas Kuantitasi (LOQ) Simvastatin
Persamaan regresi Y 45,4265X 46,7731
Slope x Sy x itasi
Bataskuant 10 /
45,4265 7609 , 38 10x
8,5326 µg/ml
Lampiran 4. Kromatogram Hasil Penyuntikan Simvastatin Generik (PT. Hexpharm Jaya)
Lampiran 5. Perhitungan Kadar Simvastatin Generik (PT. Hexpharm Jaya)
Y = aX + b
Y = 45,4265X – 46,7731
X
a b Y
Y = luas area, X = konsentrasi (µg/ml) 856,34387 = 45,4265X – 46,7731 X =
45,4265
46,7731 g/ml
856,3438
= 19,8808 µg/ml % Kadar =
g/ml 20
99,76% x
g/ml 19,8808
= 99,16 %
No Berat (mg) Area (Y) % Kadar Sampel
1 169,1 856,34387 99,16
2 169,2 857,08301 99,24
3 169,3 860,04279 99,57
4 169,0 853,08301 98,80
5 169,1 855,49912 99,07
Analisis data statistik untuk mencari kadar sebenarnya dari penyuntikan larutan simvastatin secara KCKT
t hitung (5) =
6 / 0,2508
0,115
-= 1,1241
t hitung (6) =
6 / 0,2508
0,075
= 0,7331
Semua data diterima, maka kadar sebenarnya terletak antara
µ = X (t – 1/2α) dk ×
µ = 99,18 4,0321 × 6 0,2508
µ = (99,18 0,41)%
Lampiran 6. Kromatogram Hasil Penyuntikan Simvastatin Generik (PT. Kimia Farma)
3 4,608 911,20186 57,61439 1,23754 4 4,605 909,53292 55,72168 1,20394 5 4,585 912,77539 58,49834 1,22290 6 4,608 907,23153 57,83221 1,22340 Lampiran 7. Perhitungan Kadar Simvastatin Generik (PT. Kimia Farma)
Y = aX + b 917,64648 = 45,4265X – 46,7731
Analisis data statistik untuk mencari kadar sebenarnya dari penyuntikan larutan simvastatin secara KCKT
t hitung (5) =
6 / 0,3906
0,093
= 0,5834
t hitung (6) =
6 / 0,3906
0,5156
-= 3,2346
Semua data diterima, maka kadar sebenarnya terletak antara
µ = X ±(t – 1/2α) dk ×
n
SD
µ = 105,26±4,0321 × 6 0,3906
µ = (105,26±0,64)%
No Retention Lampiran 9. Perhitungan Kadar Simvastatin Generik (PT. Novell)
Y = aX + b 806,34387 = 45,4265X – 46,7731
Analisis data statistik untuk mencari kadar sebenarnya dari penyuntikan larutan simvastatin secara KCKT
t hitung (6) =
6 / 0,1837
0,1776
= 2,3711
Semua data diterima, maka kadar sebenarnya terletak antara
µ = X (t – 1/2α) dk ×
µ = 93,71 4,0321 × 6 0,1837
µ = (93,71 0,30)%
Lampiran 10. Kromatogram Hasil Penyuntikan Simvastatin Generik (PT. Bernofarm)
No Retention time
1 4,560 908,89191 106,27146 1,30612 2 4,612 906,30054 101,00679 1,29439 3 4,601 905,26172 110,32944 1,30021 4 4,612 910,14039 107,91985 1,28571 5 4,569 910,19152 106,33011 1,29645 6 4,560 908,35376 112,25930 1,30714 Lampiran 11. Perhitungan Kadar Simvastatin Generik (PT. Bernofarm)
Y = aX + b 908,89191 = 45,4265X – 46,7731
Analisis data statistik untuk mencari kadar sebenarnya dari penyuntikan larutan simvastatin secara KCKT
t hitung (6) =
6 / 0,2221
0,0179
= 0,1975
Semua data diterima, maka kadar sebenarnya terletak antara
µ = X (t – 1/2α) dk ×
µ = 104,85 4,0321 × 6 0,2221
µ = (104,85 0,36)%
No Retention Lampiran 13. Perhitungan Kadar Simvastatin Merek Zocor (PT. Merck
Sharp & Dohme) 856,7205 = 45,4265X – 46,7731
Analisis data statistik untuk mencari kadar sebenarnya dari penyuntikan larutan simvastatin secara KCKT
t hitung (6) =
6 / 0,1682
0,2626
-= 3,8279
Semua data diterima, maka kadar sebenarnya terletak antara
µ = X (t – 1/2α) dk ×
µ = 99,06 4,0321 × 6 0,1682
µ = (99,06 0,276%
No Retention time
Area Heigh USP Tailing 1 4,591 905,66431 104,88181 1,00238 2 4,560 903,91968 104,44879 1,00943 3 4,574 906,67816 106,94794 1,00831 4 4,568 905,12695 101,28696 1,00871 5 4,577 903,79537 100,67209 1,00645 6 4,574 907,21806 108,98114 1,00714 Lampiran 15. Perhitungan Kadar Simvastatin Merek Normofat (PT.Soho)
Analisis data statistik untuk mencari kadar sebenarnya dari penyuntikan larutan simvastatin secara KCKT
t hitung (6) =
6 / 0,1538
0,1995
= 3,1818
Semua data diterima, maka kadar sebenarnya terletak antara
µ = X (t – 1/2α) dk ×
µ = 104,55 4,0321 × 6 0,1538
µ = (104,55 0,25)%
No Retention time
Area Heigh USP Tailing 1 4,595 916,66724 127,70652 1,33500 2 4,569 915,68188 120,32990 1,29439 3 4,584 912,10852 120,27592 1,30021 4 4,550 913,25626 110,47364 1,28571 5 4,595 913,10815 107,30705 1,29645 6 4,605 917,89172 106,91313 1,30714 Lampiran 17. Perhitungan Kadar Simvastatin Merek Simbado (PT. Lapi)
Analisis data statistik untuk mencari kadar sebenarnya dari penyuntikan larutan simvastatin secara KCKT
t hitung (5) =
6 / 0,2517
0,184
-= 1,7916
t hitung (6) =
6 / 0,2517
0,3412
= 3,3222
Semua data diterima, maka kadar sebenarnya terletak antara
µ = X (t – 1/2α) dk ×
µ = 105,58 4,0321 × 6 0,2517
µ = (105,58 0,36)%
No Retention time
Area Heigh USP Tailing 1 4,611 905,98230 108,61310 0,80556 2 4,613 904,13354 112,63884 0,87426 3 4,613 906,88025 104,78570 0,82045 4 4,622 906,03528 101,33552 0,82185 5 4,614 904,42523 104,54813 0,91041 6 4,611 905,01801 101,41685 0,73366
Lampiran 19. Perhitungan Kadar Simvastatin Merek Lesvatin (PT. Gracia Pharmindo)
Analisis data statistik untuk mencari kadar sebenarnya dari penyuntikan larutan simvastatin secara KCKT
t hitung (5) =
6 / 0,1164
0,1085
-= 2,2842
t hitung (6) =
6 / 0,1164
0,0432
-= 0,9094
Semua data diterima, maka kadar sebenarnya terletak antara
µ = X (t – 1/2α) dk ×
µ = 104,55 4,0321 × 6 0,1164
Lampiran 20 Contoh perhitungan penimbangan sampel Berat 20 tablet = 3382 mg Kandungan Simvastatin = 10 mg Dibuat larutan uji dengan konsentrasi Simvastatin 20 µg/ml Ditimbang serbuk sampel setara dengan simvastatin 10 mg Berat penimbangan sampel =
=
= 169,1 mg
Sebanyak 169,1 mg sampel dimasukkan ke dalam labu tentukur 50 ml dilarutkan dan dicukupkan dengan metanol sampai garis tanda.
Kadar larutan uji =
= 200 µg/ml
Lalu dipipet 5 ml dari larutan uji dimasukkan ke dalam labu tentukur 50 ml, dilarutkan dan dicukupkan dengan metanol sampai garis tanda. Sehingga didapat konsentrasi 20 µg/ml.
Konsentrasi =
Lampiran 21 Contoh perhitungan untuk mencari kadar tablet simvastatin Generik (PT Hexpham Jaya)
Perhitungan kadar sampel Y = 45,4265X – 46,7731 Luas Area = 856,34387
Konsentrasi perolehan (X) =
45,4265
Penimbangan serbuk = 169,1 mg
Kandungan simvastatin dalam tablet = 10 mg
Kesetaraan serbuk =
(mg)
Kesetaraan serbuk = 3382mg
Konsentrasi teoritis = 1000 200µg/ml
Kadar baku simvastatin yang tertera dalam sertifikat = 99,76 % Kadar =
Lampiran 22. Hasil Pengolahan Data Penetapan Kadar Simvastatin Tablet
1. Hasil analisa kadar tablet simvastatin Generik (PT Hexpharm Jaya) Berat 169,2 10,0059 857,08301 20,0118 19,8971 99,18 169,3 10,0118 860,04279 20,0236 19,9622 99,45 169,0 9,9940 853,08301 19,988 19,8090 98,86 169,1 10,0 855,49912 20,0 19,8622 99,07 169,2 10,0059 857,22903 20,0118 19,9003 99,20
2. Hasil analisa kadar tablet simvastatin Generik (PT Kimia Farma)
99,5 9,9969 917,64648 19,9938 21,2303 105,92 99,4 9,9869 913,17506 19,9738 21,1318 105,54 99,3 9,9768 911,20186 19,9536 21,0884 105,43 99,2 9,9668 909,53292 19,9336 21,0517 105,35 99,3 9,9768 912,77539 19,9536 21,1230 105,60 99,2 9,9668 907,23153 19,9336 21,0010 105,10
= 105,49
3. Hasil analisa kadar tablet simvastatin Generik (PT Novell) Berat si Teoritis
( µg/ml )
134,1 9,9951 806,34387 19,9902 18,7801 93,72 134,2 10,0026 805,19116 20,0052 18,7547 93,52 134,1 9,9951 804,99255 19,9902 18,7504 93,57 134,3 10,0100 809,11310 20,02 18,8411 93,88 134,1 9,9951 806,11719 19,9902 18,7751 93,69 134,2 10,0026 808,29275 20,0052 18,8230 93,86
= 93,71
4. Hasil analisa kadar tablet simvastatin Generik (PT Bernofarm) Berat si Teoritis
( µg/ml )
128,3 9,9914 908,89191 19,9828 21,0376 105,02 128,4 9,9992 906,30054 19,9984 20,9805 104,65 128,3 9,9914 905,26172 19,9828 20,9576 104,62 128,5 10,0070 910,14039 20,014 21,0650 104,99 128,7 10,0225 910,19152 20,045 21,0662 104,84 128,5 10,0070 908,35376 20,014 21,0257 104,80
5. Hasil analisa kadar tablet Zocor (PT Merck Sharp & Dohme)
103,8 9,9961 856,72052 19,9922 19,8891 99,24 103,8 9,9961 854,64795 19,9922 19,8435 99,01 103,9 10,0057 857,39044 20,0114 19,9038 99,22 103,8 9,9961 855,38354 19,9922 19,8596 99,09 103,8 9,9961 855,48657 19,9922 19,8619 99,10 103,6 9,9768 853,05634 19,9536 19,8084 99,03
= 99,12
6. Hasil analisa kadar tablet Normofat (PT Soho) Berat
119,5 9,9933 905,66431 19,9866 20,9665 104,65 119,5 9,9933 903,91968 19,9866 20,9281 104,45 119,3 9,9765 906,67816 19,953 20,9888 104,93 119,5 9,9933 905,12695 19,9866 20,9547 104,59 119,4 9,9849 903,79537 19,9698 20,9254 104,53 119,7 10,0100 907,21806 20,02 21,0007 104,64
= 104,63
7. Hasil analisa kadar tablet Simbado (PT Lapi) Berat
158,9 10,0012 916,66724 20,0042 21,2087 105,76 158,8 9,9949 915,68188 19,9898 21,1870 105,73 158,7 9,9886 912,10852 19,9772 21,1084 105,40 158,8 9,9949 913,25626 19,9898 21,1336 105,46 158,8 9,9949 913,10815 19,9898 21,1304 105,45 158,9 10,0012 917,89172 20,0042 21,2357 105,90
8. Hasil analisa kadar tablet Lesvatin (PT Gracia Pharmindo) Berat
Penimbangan ( mg )
Berat Setara ( mg )
Luas Area
Konsentra si Teoritis
( µg/ml )
Konsentrasi Perolehan
( µg/ ml )
Kadar ( % )
212,4 9,9981 905,98230 19,9962 20,9735 104,63 212,5 10,0028 904,13354 20,0056 20,9328 104,38 212,4 9,9981 906,88025 19,9962 20,9933 104,73 212,4 9,9981 906,03528 19,9962 20,9747 104,64 212,3 9,9934 904,42523 19,9868 20,9392 104,51 212,5 10,0028 905,01801 20,0056 20,9523 104,48
Lampiran 23. Kromatogram Hasil Penyuntikan dari Simvastatin Tablet dan Bahan Baku pada Persen Perolehan Kembali pada Rentang 80%, 100%, dan 120%.
Kromatogram Recovery pada Rentang 80%
(1. Sebelum penambahan baku)
(2. Sesudah penambahan baku)
(1. Sebelum penambahan baku)
(2. Sesudah penambahan baku)
(1. Sebelum penambahan baku)
(2. Sesudah penambahan baku)
Kromatogram Recovery pada rentang 100%
(1. Sebelum penambahan baku)
(2. Sesudah penambahan baku)
(1.Sebelum penambahan baku)
(2. Sesudah penambahan baku)
(1.Sebelum penambahan baku)
(2. Sesudah penambahan baku)
Kromatogram Recovery pada Rentang 120%
(1. Sebelum penambahan baku)
(2. Sesudah penambahan baku)
(1. Sebelum penambahan baku)
(2. Sesudah penambahan baku)
(1. Sebelum penambahan baku)
(2. Sesudah penambahan baku)
Lampiran 24. Perhitungan Recovery dengan Metode Adisi Standar Berat 1 tablet simvastatin mengandung 10 mg simvastatin.
Berat 20 tablet : 2734,2 mg
Rentang spesifik : 80%, 100% 120% dan setiap rentang mengandung 70% analit dan 30% baku pembanding.
Rentang 80% :
Simvastatin = 10mg 100
80
= 8 mg
Analit 70% = 8 100
70
mg = 5,6 mg
Serbuk sampel yang ditimbang setara = 2734,2mg mg
10 20
mg 5,6
= 76,5576 mg = 0,0765 gr Baku 30% = 8mg
100 30
= 2,4 mg
Cara Pembuatan Larutan Sampel
dan dideteksi pada panjang gelombang 238 nm dengan perbandingan fase gerak metanol-air (80:20), laju alir 1,5 ml/menit. Dilakukan sebanyak 3 kali perlakuan.
Cara Pembuatan Larutan Sampel ditambahkan dengan baku
Ditimbang 2,4 mg bahan baku dan 76,5 mg sampel kemudian dimasukkan ke dalam labu 50 ml, larutkan dan cukupkan dengan methanol hingga garis tanda lalu disaring dengan kertas saring, 5 ml filtrat pertama dibuang. Dipipet 5 ml, dimasukkan ke dalam labu 50 ml dan dicukupkan hingga garis tanda sehingga diperoleh larutan dengan konsentrasi 4,8 µg/ml. Dikocok 5 menit lalu disaring dengan membran filter PTFE 0,2 µm. Diinjeksikan sebanyak 20 µl ke sistem KCKT dan dideteksi pada panjang gelombang 238 nm dengan perbandingan fase gerak metanol-air (80:20), laju alir 1,5 ml/menit. Dilakukan sebanyak 3 kali perlakuan.
Rentang 100% :
Simvastatin = 10mg 100
100
= 10 mg
Analit 70% = 10mg 100
70
= 7 mg
Serbuk sampel yang ditimbang setara = 2734,2mg mg
10 20
mg 7
= 95,697 mg
= 0,0956 gr
Baku 30% = 10mg 100
30
Cara Pembuatan Larutan Sampel
Ditimbang serbuk sampel 95,6 mg setara dengan 7 mg simvastatin lalu dimasukkan kedalam labu tentukur 50 ml, dilarutkan dan dicukupkan dengan metanol hingga garis tanda sehingga diperoleh larutan dengan konsentrasi 140 µg/ml, dikocok 5 menit, kemudian disaring dengan kertas saring, 5 ml filtrat pertama dibuang. Dipipet 5 ml filtrat, dimasukkan kedalam labu tentukur 50 ml, dan dicukupkan hingga garis tanda sehingga diperoleh larutan dengan konsentrasi 14 µg/ml. Dikocok 5 menit lalu disaring dengan membran filter PTFE 0,2 µm. Diinjeksikan sebanyak 20 µl ke sistem KCKT dan dideteksi pada panjang gelombang 238 nm dengan perbandingan fase gerak metanol-air (80:20), laju alir 1,5 ml/menit. Dilakukan sebanyak 3 kali perlakuan.
Cara Pembuatan Larutan Sampel ditambahkan dengan baku
Ditimbang 3 mg bahan baku dan 95,6 mg sampel kemudian dimasukkan ke dalam labu 50 ml, larutkan dan cukupkan sampai garis tanda lalu disaring dengan kertas saring, 5 ml filtrat pertama dibuang. Dipipet 5 ml, dimasukkan ke dalam labu 50 ml dan dicukupkan hingga garis tanda sehingga diperoleh larutan dengan konsentrasi 6 µg/ml. Dikocok 5 menit lalu disaring dengan membran filter PTFE 0,2 µm. Diinjeksikan sebanyak 20 µl ke sistem KCKT dan dideteksi pada panjang gelombang 238 nm dengan perbandingan fase gerak metanol-air (80:20), laju alir 1,5 ml/menit. Dilakukan sebanyak 3 kali perlakuan.
Rentang 120% :
Simvastatin = 10mg 100
120
Analit 70% = 12mg 100
70
= 8,4 mg
Serbuk sampel yang ditimbang setara = 2734,2mg mg
10 20
mg 8,4
= 114,8364 mg = 0,1148 gr Baku 30% = 12mg
100 30
= 3,6 mg
Cara Pembuatan Larutan Sampel
Ditimbang serbuk sampel 114,8 mg setara dengan 8,4 mg simvastatin lalu dimasukkan kedalam labu tentukur 50 ml, dilarutkan dan dicukupkan dengan metanol hingga garis tanda sehingga diperoleh larutan dengan konsentrasi 168 µg/ml, dikocok 5 menit, kemudian disaring dengan kertas saring, 5 ml filtrat pertama dibuang. Dipipet 5 ml filtrat, dimasukkan kedalam labu tentukur 50 ml, dan dicukupkan hingga garis tanda sehingga diperoleh larutan dengan konsentrasi 16,8 µg/ml. Dikocok 5 menit lalu disaring dengan membran filter PTFE 0,2 µm. Diinjeksikan sebanyak 20 µl ke sistem KCKT dan dideteksi pada panjang gelombang 238 nm dengan perbandingan fase gerak metanol-air (80:20), laju alir 1,5 ml/menit. Dilakukan sebanyak 3 kali perlakuan.
Cara Pembuatan Larutan Sampel ditambahkan dengan baku
dimasukkan ke dalam labu 50 ml dan dicukupkan hingga garis tanda sehingga diperoleh larutan dengan konsentrasi 7,2 µg/ml. Dikocok 5 menit lalu disaring dengan membran filter PTFE 0,2 µm. Diinjeksikan sebanyak 20 µl ke sistem KCKT dan dideteksi pada panjang gelombang 238 nm dengan perbandingan fase gerak metanol-air (80:20), laju alir 1,5 ml/menit. Dilakukan sebanyak 3 kali perlakuan.
Tabel 5. Data hasil penyuntikan simvastatin tablet sebelum dan sesudah penambahan
Analit.
No
Konsentrasi (%)
Konsentrasi Analit yang ditambahkan
(µg/ml) Sebelum
penambahan analit (µg/ml)
Sesudah penambahan analit (µg/ml) 1
80%
12,5065 17,3544 4,7884
2 12,6525 17,4486 4,7884
3 12,6113 17,3911 4,7884
1 100%
15,0900 21,1675 5,9856
2 17,4858 23,5280 5,9856
3 15,1815 21,1940 5,9856
1 120%
20,1924 27,4910 7,1827
2 20,1732 27,4609 7,1827
3 20,1963 27,4795 7,1827
Contoh Perhitungan % Recovery dengan Metode Adisi Standar
% Perolehan kembali =
A
Keterangan:
CF = konsentrasi analit yang diperoleh setelah penambahan bahan baku (µg/ml)
CA = konsentrasi analit sebelum penambahan bahan baku (µg/ml) C*A = konsentrasi bahan baku yang ditambahkan ke dalam sampel
Tabel 6. Analisis Data Statistik Persen Perolehan Kembali Simvastatin pada Sediaan
Tablet.
No X
1 101,24 0,2838 0,0805
2 100,16 -0,7979 0,6366
3 99,82 -1,1384 1,2959
4 101,53 0,5766 0,3324
5 100,94 -0,0131 0,0001
6 100,44 -0,5093 0,2593
7 101,61 0,6548 0,4287
8 101,46 0,5031 0,2531
9 101,39 0,4404 0,1939
∑ 908,62 ∑ 2 = 3,4805
100,95
= = = 0,6595
Lampiran 27. Gambar alat KCKT, wadah fase gerak, vial autosampler, degasser dan timbangan analitik
Gambar 13. Alat KCKT (Agilent) Gambar 14. Wadah Fase Gerak
Gambar 15. Vial Autosampler Gambar 16. Degasser
