لﻮﺌﺴﻣ هﺪﻨﺴﻳﻮﻧ *
: ﻲﻧﺎﻣز ﺎﺿرﺪﻤﺤﻣ ﻦﻔﻠﺗ
: 44580363 -
E-mail: [email protected] 021
نژ لﺎﻘﺘﻧا pgip1
ﺑﻮﻟ ﻴ ﺎ اﺰﻠﻛ ﻪﺑ ﻮﺠﺸﻧاد ﻢﻗر
) ﻢﻗر R line Hyola 308 (
ا ﺖﻬﺟ ﻳ
ﻠﻋ ﺖﻣوﺎﻘﻣ دﺎﺠ ﻴ
ﻪ
چرﺎﻗ Sclerotina sclerotiorum ﺳﻮﭘ ﻞﻣﺎﻋ
ﻴ ﮔﺪ ﻲ ﻪﻗﺎﺳ
ﻠﻋ ﻲ ﺪﺑﺎﻋ
1ي ﻔﻄﺼﻣ ، ﻲ ﺒﻠﻄﻣ
2ﻲ ﻧﺎﻣز ﺎﺿرﺪﻤﺤﻣ ،
3ﻲ ﭘ وﺮﺴﺧ و * ﻴ ﺮ
4ي
1 ، 2 ، 3
، نادﺎﺘﺳا و ﺪﺷرا ﻲﺳﺎﻨﺷرﺎﻛ ﻖﺑﺎﺳ يﻮﺠﺸﻧاد ﻠﻣ هﺎﮕﺸﻫوﮋﭘ
ﻲ ﺳﺪﻨﻬﻣ ﻲ ﺘﻧژ ﻴ ﻚ
ز و ﻳ روﺎﻨﻓ ﺖﺴ ي ناﺮﻬﺗ ، ، 4
، رﺎﻳدﺎﺘﺳا زروﺎﺸﻛ هﺪﻜﺸﻧاد ي
ﻠﻋﻮﺑ هﺎﮕﺸﻧاد ﻲ
ﺳ ﻴ ﺪﻤﻫ ،ﺎﻨ نا
) رﺎﺗ ﻳ رد ﺦ ﻳ ﺖﻓﺎ : 27 / 3 / 88 - رﺎﺗ ﻳ ﻮﺼﺗ ﺦ ﻳ ﺐ : 31 / 6 / 89 (
ﻜﭼ ﻴ هﺪ
ﻳ
ﻜ ﻲ زا شور ﺎﻫ ي ذﻮﻔﻧ زا ﺖﻌﻧﺎﻤﻣ چرﺎﻗ
ﺎﻫ ي ﺑ ﻴ رﺎﻤ ﻳ ﮔ نورد ﻪﺑ اﺰ ﻴ
ﻟﺎﻌﻓ رﺎﻬﻣ ،نﺎﻫﺎ ﻴ
ﺖ
ﻢﻳﺰﻧآ ﺎﻫ ي ﺘﻜﭘ ﻴ زﺎﻨ ي ) ﻠﭘ ﺪﻨﻧﺎﻣ ﻲ ﻧورﻮﺘﻛﻻﺎﮔ زﺎ
( اﻳ ﻦ چرﺎﻗ ﺎﻫ ﻣ ﻲ ﺪﺷﺎﺑ . ﺌﺗوﺮﭘ ﻴ ﻦ ﺎﻫ ي هﺪﻨﻨﻛرﺎﻬﻣ
ﻟﺎﻌﻓ ﻴ ﺰﻧآ ﺖ ﻳ ﻠﭘ ﻢ ﻲ زﺎﻧورﻮﺘﻛﻻﺎﮔ )
(PGIP
ﺌﺗوﺮﭘ ﻪﻠﻤﺟ زا ﻴ
ﻦ ﺎﻫ ﻲﻳ ﺧﺮﺑ ﻂﺳﻮﺗ ﻪﻛ ﺪﻨﺘﺴﻫ ﻲ
زا
ﮔ ﻴ ﺑ نﺎﻫﺎ ﻴ ﻣ نﺎ ﻲ ﮔ ﻪﺑ چرﺎﻗ ذﻮﻔﻧ ترﺪﻗ ﺪﻧردﺎﻗ و ﺪﻧﻮﺷ ﻴ
ﺎﻤﻧ رﺎﻬﻣ ار هﺎ ﻳ
ﺪﻨ . ا رد ﻳ ﻘﺤﺗ ﻦ ﻴ ﺖﻬﺟ ﻖ
اﻳ چرﺎﻗ ﻪﺑ ﺖﻣوﺎﻘﻣ دﺎﺠ
Sclerotina sclerotiorum
ﮔ رد ﻴ نژ ،اﺰﻠﻛ هﺎ
pgip1
ا ﻪﺑ ﻳ ﮔ ﻦ ﻴ ﻞﻘﺘﻨﻣ هﺎ
دﺮﮔ ﻳ ﻣ و ﺪ ﻴ ﻘﻣ ناﺰ ﻓﺮﮔ راﺮﻗ ﻲﺳرﺮﺑ درﻮﻣ نآ ﺖﻣوﺎ ﺖ
. ﺪﺑ ﻳ نژ اﺪﺘﺑا رﻮﻈﻨﻣ ﻦ
pgip1
ﺑﻮﻟ ﻴ ﺎ ﻢﻗر
رد ﻮﺠﺸﻧاد ﻞﻗﺎﻧ
ﺑ ﻴ ﻧﺎ ﻲ
pBI121
ﺖﺤﺗ هﺪﻧﺮﺒﺸﻴﭘ
CaMV 35S
ﻮﮕﻟا زا هدﺎﻔﺘﺳا ﺎﺑ و نﻮﻠﻛ ي
PCR
ﺰﻧآ ﻢﻀﻫ و ﻳ
ﻤ ﻲ درﻮﻣ ﺖﻓﺮﮔ راﺮﻗ ﺪﻴﺋﺄﺗ .
ﻪﺑ نژ لﺎﻘﺘﻧا ﺖﻬﺟ هﺎﻴﮔ
زا يﺮﺘﻛﺎﺑ
Agrobacterium
tumefaciens
ﻮﺳ ﻳ ﻪ
LBA4404
ر و ﻳ ﻪﻧﻮﻤﻧﺰ ﺎﻫ ي ﺗﻮﻛ ﻴ ﻧوﺪﻠ ﻲ دﺮﮔ هدﺎﻔﺘﺳا ﻳ
ﺪ . ﺖﻬﺟ ﺪﻴﺋﺄﺗ ﮔ ﻴ نﺎﻫﺎ
راﺮﺗ ﻳ ﺖﺨ ﺖﺳد ﻪﺑ ﻮﮕﻟا زا هﺪﻣآ ي
ﺎﻫﺮﮔزﺎﻏآ زا هدﺎﻔﺘﺳا ﺎﺑ PCR
ي ﺻﺎﺼﺘﺧا ﻲ
دﺮﮔ هدﺎﻔﺘﺳا ﻳ
ﺪ .
زرا ﻳ ﺑﺎ ﻲ ﮔ ﺖﻣوﺎﻘﻣ ﻴ
راﺮﺗ نﺎﻫﺎ ﻳ
چرﺎﻗ ﺮﺑاﺮﺑ رد ﺖﺨ
S. sclerotiorum
ر ﻪﺑ شو
detached leaf
assay
ﺖﻓﺮﮔ مﺎﺠﻧا .
ﻟﺎﻧآ ﻴ ﺎﺘﻧ ﺰ ﻳ ﺞ ﺖﺳد ﻪﺑ ﮔ ﻪﻛ داد نﺎﺸﻧ هﺪﻣآ ﻴ
راﺮﺗ نﺎﻫﺎ ﻳ
ﻟﺎﻤﺘﺣا ﺖﺨ ﻲ
ﺖﺒﺴﻧ ،
ﮔ ﻪﺑ ﻴ ﺪﻫﺎﺷ هﺎ )
اﺰﻠﻛ ي ﻏ ﻴ راﺮﺗ ﺮ ﻳ ﺖﺨ ( چرﺎﻗ ﺮﺑاﺮﺑ رد
S. sclerotiorum
ﺑ ﺖﻣوﺎﻘﻣ زا ﻴ
ﺮﺘﺸ ي
ﻣ رادرﻮﺧﺮﺑ ﻲ
ﺪﻨﺷﺎﺑ .
يﺪﻴﻠﻛ يﺎﻫ هژاو نژ ،اﺰﻠﻛ :
pgip1
اززﺎﺑ ،نژ لﺎﻘﺘﻧا ، ﻲﻳ
،
Sclerotina sclerotiorum
.
ﻪﻣﺪﻘﻣ
درﻮﻣ ﻲﻳاﺬﻏ داﻮﻣ ﻦﻴﻣﺄﺗ ﺮﻈﻧ زا ﻢﻬﻣ ﻲﻫﺎﻴﮔ اﺰﻠﻛ زﺎﻴﻧ
ﺮﺸﺑ ﻲﻣ ﺷﺎﺑ ﺪ . ﻪﻛ رﻮﺸﻛ رد ﻦﻏور يﻻﺎﺑ فﺮﺼﻣ ﻪﺑ ﻪﺟﻮﺗ ﺎﺑ
دوﺪﺣ 5 / 1 و ﺖﺳا ﻦﺗ نﻮﻴﻠﻴﻣ 80
تادراو زا نآ ﺪﺻرد
ﻦﻴﻣﺎﺗ ﻲﻣ ﻮﺷ ياﺮﺑ هﺎﻴﮔ ﻦﻳا زا هدﺎﻔﺘﺳا ﺪﺳر ﻲﻣ ﺮﻈﻧ ﻪﺑ ،د
ﺶﻳاﺰﻓا و ﻦﻏور تادراو ﺶﻫﺎﻛ ﺪﻴﻟﻮﺗ رد رﻮﺸﻛ ﻲﻳﺎﻔﻛدﻮﺧ
ﺪﺷﺎﺑ ﺐﺳﺎﻨﻣ زﺎﻴﻧ درﻮﻣ ﻲﻳاﺬﻏ داﻮﻣ .
ﺰﻴﻧ هﺎﻴﮔ ﻦﻳا ﻲﻓﺮﻃ زا
و تﺎﻓآ مﻮﺠﻫ ضﺮﻌﻣ رد هراﻮﻤﻫ نﺎﻫﺎﻴﮔ ﺮﻳﺎﺳ ﺪﻨﻧﺎﻣ يرﺎﻤﻴﺑ
ﺎﻫ ي ﺚﻋﺎﺑ ﻪﻛ هدﻮﺑ ﻲﻔﻠﺘﺨﻣ
،لﻮﺼﺤﻣ ﺶﻫﺎﻛ
نازروﺎﺸﻛ لﺎﺒﻘﺘﺳا مﺪﻋ ﺖﻳﺎﻬﻧ رد و ﺪﻴﻟﻮﺗ ﻪﻨﻳﺰﻫ ﺶﻳاﺰﻓا ﻲﻣ نآ ﺖﺸﻛ زا ددﺮﮔ
. ﺑ ﻪﻟﺎﺳ ﺮﻫ ﻪ
ﺖﻠﻋ رﺎﻤﻴﺑ ي ﺎﻫ ي
عاﻮﻧا ﻪﻛ ﻲﻧﻮﮔﺎﻧﻮﮔ چرﺎﻗ
ﺎﻫ و يﺮﺘﻛﺎﺑ ﺎﻫ ي ﺑﻴ رﺎﻤ ﻳ اﺰ رد
ﻪﺑ ﻲﻧاواﺮﻓ ترﺎﺴﺧ ،ﺪﻨﻳﺎﻤﻧ ﻲﻣ دﺎﺠﻳا ﻒﻠﺘﺨﻣ نﺎﻫﺎﻴﮔ دراو يزروﺎﺸﻛ تﻻﻮﺼﺤﻣ ﻲﻣ
ﻮﺷ د . عوﺮﺷ ﺎﺑ نﺎﻣﺰﻤﻫ
اﺰﻠﻛ ﺖﺸﻛ ﻪﻌﺳﻮﺗ ﻪﻣﺎﻧﺮﺑ )
لﺎﺳ 1378 ( ﻲﮔﺪﻴﺳﻮﭘ يرﺎﻤﻴﺑ
ﻞﻣﺎﻋ ﺎﺑ اﺰﻠﻛ ﻪﻗﺎﺳ ﺪﻴﻔﺳ
Sclerotinia sclerotiorum
ﺰﻴﻧ
ﻧﺎﺘﺳا رد
ﺖﺳا ﻪﺘﻓﺎﻳ شﺮﺘﺴﮔ رﻮﺸﻛ ﻲﻟﺎﻤﺷ يﺎﻬ
) زا ﺶﻴﺑ
50 نﺎﺘﺴﻠﮔ و نارﺪﻧزﺎﻣ نﺎﺘﺳا ود رد اﺰﻠﻛ ﺖﺸﻛ ﺪﺻرد
دﺮﻴﮔ ﻲﻣ ترﻮﺻ (
رد ﻖﻃﺎﻨﻣ ﻦﻳا ﺮﺑ هوﻼﻋ نﻮﻨﻛا و
ترﻮﺼﺑ ﺰﻴﻧ نﺎﺘﺳدﺮﻛ و سرﺎﻓ يﺎﻬﻧﺎﺘﺳا هﺪﻫﺎﺸﻣ دوﺪﺤﻣ
ﻲﻣ
(Afshari-Azad, 2001)ددﺮﮔ .
لواﺪﺘﻣ ﻦﻳا زا يرﺎﻴﺴﺑ ﺎﺑ هزرﺎﺒﻣ ياﺮﺑ شور ﻦﻳﺮﺗ
ﻤﻴﺑ يرﺎ ﺎﻫ چرﺎﻗ عاﻮﻧا زا هدﺎﻔﺘﺳا ﺶﻛ
ﺎﻫ ي ﺖﺳا ﻲﻳﺎﻴﻤﻴﺷ .
ﻪﺑ نوﺮﻘﻣ يدﺎﺼﺘﻗا ﺮﻈﻧ زا ﺎﻬﻨﺗ ﻪﻧ داﻮﻣ ﻪﻧﻮﮔ ﻦﻳا ﺎﻣا ﻧ ﻪﻓﺮﺻ ﻲﻤ ﺷﺎﺑ و ﺖﺴﻳز ﻂﻴﺤﻣ نﺪﺷ هدﻮﻟآ ﺚﻋﺎﺑ ﻪﻜﻠﺑ ،ﺪﻨ
دﺎﺠﻳا ﺰﻴﻧ ﻪﻧﻮﮔ
ﺎﻫ ي ﺑ ﻴ رﺎﻤ ﻳ اﺰ ي ﻪﺑ موﺎﻘﻣ چرﺎﻗ
ﺶﻛ
ﻲﻣ ﻮﺷ ﺪﻧ . ياﺮﺑ ﺐﺳﺎﻨﻣ ﻲﻨﻳﺰﮕﻳﺎﺟ ﻦﺘﻓﺎﻳ ﺖﻬﺟ شﻼﺗ ﻦﻳا
ﻲﻳﺎﻴﻤﻴﺷ تﺎﺒﻴﻛﺮﺗ ﻪﺑ ﺮﺠﻨﻣ ،
زا هدﺎﻔﺘﺳا شور
ﺎﻫ ﻒﻠﺘﺨﻣ ي
ﻪﻧﻮﮔ ﻦﻳا ﻚﻳژﻮﻟﻮﻴﺑ لﺮﺘﻨﻛ يرﺎﻤﻴﺑ
ﺎﻫ ﺖﺳا هﺪﺷ
(Seidl
et al., 2006; Kubicek et al., 2001)
. دﺮﺑرﺎﻛ شور ﺎﻫ ي
ﻟﻮﻜﻠﻣ ﻲ ﺑ ﻪ ﺎﻬﻧژ لﺎﻘﺘﻧا رﻮﻈﻨﻣ ي
ﻠﻋ ﺖﻣوﺎﻘﻣ ﻴ
ﻪ
يرﺎﻤﻴﺑ ﺎﻫ ي ﮔ ﻴ ﻫﺎ ﻲ ﮔ ﻪﺑ ﻴ ﻋارز نﺎﻫﺎ ﻲ
، ﻲﻣ ﻧاﻮﺗ ناﻮﻨﻌﺑ ﺪ
ﻳ ﻤﻜﺗ شور ﻚ ﻴ
ﻠ ﻲ ﺮﻗ هدﺎﻔﺘﺳا درﻮﻣ ﮔ را
ﻴ دﺮ . هراﻮﻳد
ﻫﺎﻴﮔ لﻮﻠﺳ ﻲ
راﺪﻳﺎﭘ رﺎﺘﺧﺎﺳ ﻦﺘﺷاد ﺎﺑ
، ﻋﺎﻓد ﺪﺳ ﻦﻴﻟوا ﻲ
نژﻮﺗﺎﭘ ﻞﺑﺎﻘﻣ رد ﺎﻫ
ﺖﺳا . ﻦﻳا هﺪﻧزﺎﺳ تﺎﺒﻴﻛﺮﺗ نﺎﻴﻣ زا
هراﻮﻳد
، ﻠﭘ ﻲ ﺎﻫﺪﻳرﺎﻛﺎﺳ ي
ﻨﻴﺘﻜﭘ ﻲ ﻠﺻا ءﺰﺟ ﻲ ﻪﻴﻟوا هراﻮﻳد
ﻪﭙﻟود يا
(De Lorenzo et al., 1994; Favaron et al., ﺎﻫ
1994; Hahn et al., 1989)
، ﻲﺧﺮﺑ و ﻚﺗ زا
ﻪﭙﻟ يا ﺎﻫ
Dixon et al., 1996) (
ﻲﻣ ﺷﺎﺑ ﻨ ﺪ . چرﺎﻗ ﺎﻫ ﻪﺑ ﻪﺘﺴﺑ
ﻤﻳﺰﻧآ ﻞﻴﺴﻧﺎﺘﭘ ﻲ
ﻪﺑ ردﺎﻗ دﻮﺧ ﻋﺎﻓد ﺪﺳ ﻦﻳا ﺐﻳﺮﺨﺗ
ﻲ
ﻲﻣ ﺷﺎﺑ ﺪﻨ . ﻦﻴﻟوا ءﺰﺟ ﺎﻫزﺎﻨﻴﺘﻜﭘ ﻢﻳﺰﻧآ
ﺎﻫ ﻲﻳ ﺪﻨﺘﺴﻫ ﻪﻛ رد
چرﺎﻗ ﺎﻫ ذﻮﻔﻧ ﺖﻬﺟ ﻫﺎﻴﮔ لﻮﻠﺳ ﻪﺑ
ﻲ ﺢﺷﺮﺗ ﻲﻣ ﻮﺷ ﺪﻧ . زا
ﺎﻫزﺎﻨﻴﺘﻜﭘ نﺎﻴﻣ
، ﻠﭘ ﻲ ﺎﻫزﺎﻧورﻮﺘﻛﻻﺎﮔ
(Polygalacturonase
ﻤﻬﻣ ﺶﻘﻧ ،/PG)
ﻲ ﺗ رد ﺰﺠ ﻳ ﻪ ﮔ لﻮﻠﺳ هراﻮﻳد ﻴ
ﻫﺎ ﻲ ﺪﻧراد
(Huang & Allen, 2000; Shieh et al., 1997; ten
.
Have et al., 1998; Motallebi et al., 2003; Zamani
.
et al., 2000)
. ﻦﻳا ﻢﻳﺰﻧآ ﺎﻫ ﻂﺳﻮﺗ ﺑ نژﻮﺗﺎﭘ ور ﺮ ي ﺖﻓﺎﺑ
ﺢﺷﺮﺗ نﺎﺑﺰﻴﻣ ﻲﻣ
ﻮﺷ ﺪﻧ . ﺛﺄﺗ ﻴ ا ﺮ ﻳ ﻦ ﻢﻳﺰﻧآ ﺎﻫ ﺠﻳا ﺚﻋﺎﺑ و دﺎ
يﺪﻴﻧورﻮﺘﻛﻻﺎﮔﻮﮕﻴﻟوا تﺎﻌﻄﻗ يزﺎﺳﺎﻫر ﻲﻣ1
،ددﺮﮔ ﻦﻳا ﻪﻛ
چرﺎﻗ ﺪﺷر ياﺮﺑ مزﻻ ﻲﻨﺑﺮﻛ ﻊﺒﻨﻣ ﻦﻴﻣﺄﺗ ﻦﻤﺿ تﺎﻌﻄﻗ
،
ﻲﭼرﺎﻗ نژﻮﺗﺎﭘ نﻮﻴﺳاﺰﻴﻧﻮﻠﻛ و ذﻮﻔﻧ ار
ﺰﻴﻧ ﻞﻴﻬﺴﺗ
ﻲﻣ ﺪﻨﻳﺎﻤﻧ
Shanmugam, 2004) (
.
1. Oligogalacturonide
ﻦﻴﺌﺗوﺮﭘ هﺪﻨﻨﻛرﺎﻬﻣ يﺎﻫ ﻢﻳﺰﻧآ
زﺎﻧورﻮﺘﻛﻻﺎﮔ ﻲﻠﭘ رد 2
ﺗ ﻪﺑ ﺄ ﻗ ﻒﻴﻫ ﺖﻓﺮﺸﻴﭘ ﻦﺘﺧاﺪﻧا ﺮﻴﺧ
ﺶﻫﺎﻛ ،ﻲﭼرﺎ
نﺎﺑﺰﻴﻣ ﺖﻓﺎﺑ ﻲﮔﺪﻴﺳﻮﭘ
، ﺦﺳﺎﭘ ﺮﮕﻳد ﻚﻳﺮﺤﺗ ﻲﻋﺎﻓد يﺎﻫ
هﺎﻴﮔ ﺖﻳﺎﻬﻧ رد و ﻒﻗﻮﺗ
ﻲﭼرﺎﻗ نﻮﻴﺳاﺰﻴﻧﻮﻠﻛ ﺪﻧراد ﺶﻘﻧ
(DeLorenzo et al., 1994; DeLorenzo et al., 1997;
.
Hahn et al., 1989)
. هﺪﻨﻨﻛرﺎﻬﻣ ﻦﻳا ﺎﻫ
يﺎﻬﻟﻮﻜﻟﻮﻣ
ﻲﻟﻮﻜﻟﻮﻣ نزو ﺎﺑ ﻲﻨﻴﺌﺗوﺮﭘﻮﻜﻴﻠﮔ 55
- 40 نﻮﺘﻟادﻮﻠﻴﻛ
ﻲﻣ ﺷﺎﺑ ﺎﺑ هﺎﻴﮔ ﻲﻟﻮﻠﺳ جرﺎﺧ ﺲﻜﻳﺮﺗﺎﻣ ﻪﺑ ﻪﻛ ﺪﻨ يﺎﻫﺪﻧﻮﻴﭘ
ﻲﻧﻮﻳ ﻞﺼﺘﻣ هﺪﺷ
(Salvi et al., 1990; Johnston et ﺪﻧا
al., 1994)
.
ﺎﻬﻧژ ي هﺪﻨﻨﻛﺪﻛ ﺑ PGIP
ﻪ ﻧژ هداﻮﻧﺎﺧ ترﻮﺻ ﻲ
نﺎﻣزﺎﺳ ﻫد ﻲ هﺪﺷ ﺪﻧا . ﺎﻀﻋا ي ﻦﻜﻤﻣ هﺪﻧاﻮﻧﺎﺧ ﺮﻫ ﻒﻠﺘﺨﻣ
ﺌﺗوﺮﭘ ﺖﺳا ﻴ
ﻦ ﺎﻫ ﻲﻳ ﺮﻘﺗ تﺎﻔﺻ ﺎﺑ ﻳ
ﺎﻣا ﺪﻨﻨﻛ ﺪﻛ ﻪﺑﺎﺸﻣ ًﺎﺒ
ﻲﮔﮋﻳو ﺖﺳا توﺎﻔﺘﻣ ﺎﻬﻧآ ﻲﻤﻴﻈﻨﺗ ﻞﻤﻋ و
(De Lorenzo
et al., 2001; Ferrari et al., 2003)
. يدﺪﻌﺘﻣ تﺎﺷراﺰﮔ
ﻣ نﺎﺸﻧ ﻲ ﺑ ﻪﻛ ﺪﻫد ﻴ
ﺌﺗوﺮﭘ نﺎ ﻴ ﻦ ﺎﻫ ي ﻟﺎﻌﻓ هﺪﻨﻨﻛرﺎﻬﻣ ﻴ
ﺖ
ﺰﻧآ ﻳ ﻠﭘ ﻢ ﻲ ﮔ رد زﺎﻧورﻮﺘﻛﻻﺎﮔ ﻴ
راﺮﺗ نﺎﻫﺎ ﻳ
لﺮﺘﻨﻛ ﺖﻬﺟ ﺖﺨ
يرﺎﻤﻴﺑ ﺎﻫ ي ﭼرﺎﻗ ﻲ ﺖﺳا ﻪﺘﻓﺮﮔ راﺮﻗ هدﺎﻔﺘﺳا درﻮﻣ
(Aguero et al., 2005; Manfredini et al., 2005;
.
Powell et al., 2000; Tamura et al., 2004)
.
ا زا فﺪﻫ ﻳ ﻘﺤﺗ ﻦ ﻴ نژ لﺎﻘﺘﻧا ﻖ
pgip1
ﻮﺠﺸﻧاد ﻢﻗر ي
ﮔ ﻴ ﺑﻮﻟ هﺎ ﻴ ﮔ ﻪﺑ ﺎ ﻴ ﺮﺘﻛﺎﺑوﺮﮔآ زا هدﺎﻔﺘﺳا ﺎﺑ اﺰﻠﻛ هﺎ ﻳ
و مﻮ
ﺳرﺮﺑ ﻲ ﻣ ﻴ ﮔ ﺖﻣوﺎﻘﻣ ناﺰ ﻴ
راﺮﺗ نﺎﻫﺎ ﻳ ﺖﺨ ﺖﺳد ﻪﺑ ﻪﺑ هﺪﻣآ
چرﺎﻗ
S. sclerotiorum
ﻲﻣ ﺷﺎﺑ ﺪ .
اﻮﻣ و د شور ﺎﻫ
ﮔ داﻮﻣ ﻴ ﻫﺎ ﻲ ﻮﺳ و ﻳ ﺎﻫ ﻪ ي ﺮﺘﻛﺎﺑ ي
ﺎﻫرﺬﺑ ي ﻢﻗر اﺰﻠﻛ
R line Hyola 308
ﻪﻧاد ﺖﻛﺮﺷ زا
ﺎﻫ ي ﻨﻏور ﻲ ﻬﺗ ﻴ دﺮﮔ ﻪ ﻳ ﻪﺟرد رد هدﺎﻔﺘﺳا نﺎﻣز ﺎﺗ و هﺪ
تراﺮﺣ 4 ﻪﺟرد ﻲﺘﻧﺎﺳ داﺮﮔ راﺪﻬﮕﻧ ي ﺪﻧﺪﺷ . ﺮﺘﻛﺎﺑ ي
Escherichia coli
) ﻮﺳ ﻳ
DH5α ﻪ ( ﺮﺘﻛﺎﺑ و ي
Agrobacterium tumefaciens
ﻮﺳ ﻳ
LBA4404 ﻪ زا
ﻠﻣ هﺎﮕﺸﻫوﮋﭘ ﻲ
ﺳﺪﻨﻬﻣ ﻲ ﺘﻧژ ﻴ ﻬﺗ ﻚ ﻴ دﺮﮔ ﻪ ﻳ ﺪ .
ﻤﺳﻼﭘ ﻴ هدﺎﻔﺘﺳا درﻮﻣ داﻮﻣ و ﺎﻫﺪ
ا رد ﻳ ﻘﺤﺗ ﻦ ﻴ اﺮﺑ ﻖ ي ﻬﺗ ﻴ هزﺎﺳ ﻪ ﺎﻫ ي ﻧژ ﻲ لﺎﻘﺘﻧا ﺖﻬﺟ
ﮔ ﻪﺑ ﻴ هﺎ ﺪﻴﻤﺳﻼﭘ زا ،
pBI121
) ﺖﻛﺮﺷ زا
Novagen
(
2. Polygalacturonase-inhibiting proteins/ PGIP
ﺪﺷ هدﺎﻔﺘﺳا .
اﺮﺑ ي ﺶﻨﻛاو مﺎﺠﻧا ﺰﻧآ زا PCR
ﻳ
Taq- ﻢ
polymerase
) ﺖﻛﺮﺷ زا
Fermentas
( دﺮﮔ هدﺎﻔﺘﺳا ﻳ
ﺪ .
ﻢﻳﺰﻧآ ﺎﻫ ي اﺮﺑ هدﺎﻔﺘﺳا درﻮﻣ ي
ﺰﻧآ ﻢﻀﻫ ﻳ
ﻤ
DNA ﻲ و
ﺰﻧآ ﻳ ﻟ ﻢ ﻴ ﺖﻛﺮﺷ زا زﺎﮕ
Fermentas
ﻬﺗ ﻴ دﺮﮔ ﻪ ﻳ ﺪ . داﻮﻣ
ﺷ ﻴ ﻤ ﻴ ﺎ ﻲﻳ ﺑ صﻮﻠﺧ ﻪﺟرد ﺎﺑ هدﺎﻔﺘﺳا درﻮﻣ ﻴ
ژﻮﻟﻮ ي ﻟﻮﻜﻠﻣ ﻲ
ﻧ و ﻴ ﻛ ﺰ ﻴ زﺎﺳ ﺺﻟﺎﺧ ﺖ
DNA ي ﺖﻛﺮﺷ زا
Roche
ﻬﺗ ﻴ ﻪ
ﺪﺷ . ﻧ درﻮﻣ داﻮﻣ ﻴ
ﻬﺗ ﺖﻬﺟ زﺎ ﻴ
ﺤﻣ ﻪ ﻴ ﮔ ﺖﺸﻛ ﻂ ﻴ
ﻫﺎ ﻲ و
ﺮﺘﻛﺎﺑ ﻳﺎ ﻲﻳ ﻧ و ﻴ ﻈﻨﺗ ﺰ ﻴ ﻢ ﻨﻛ ﮔ ﺪﺷر هﺪﻨ ﻴ
ﻫﺎ
(BAP) ﻲ زا
ﺖﻛﺮﺷ
Sigma
ﻬﺗ ﻴ دﺮﮔ ﻪ ﻳ ﺪ .
نژ ندﺮﻛ نﻮﻠﻛ pgip1
ﺑ ﻞﻗﺎﻧ رد ﻴ
ﻧﺎ ﻲ ﮔ ﻴ ﻫﺎ ﻲ
ﻤﺳﻼﭘ ﻴ
pUC19 ﺪ وﺎﺣ
ي
pgip1 نژ ﻪﺘﻳراو زا
ﺎﻴﺑﻮﻟ هﺎﻴﮔ يﻮﺠﺸﻧاد
(Fallahi, 2006)
ﻟ شور ﻪﺑ ﻴ ﻠﻗ ﺰ ﻴ ﺎ ﻲﻳ
Sambrook & Russell, 2001) (
ﺮﺘﻛﺎﺑ زا
E. coli ي
ﺄﺗ ﺖﻬﺟ و هﺪﺷ جاﺮﺨﺘﺳا DH5α
ﻴﻳ ژ رﻮﻀﺣ ﺪ ﻢﻀﻫ زا ن
ﺰﻧآ ﻳ ﻤ ﻲ ﻮﮕﻟا و ﺐﺳﺎﻨﻣ
PCR ي دﺮﮔ هدﺎﻔﺘﺳا ﻳ
ﺪ . ﻤﺳﻼﭘ ﻴ ﺪ
pUC19
وﺎﺣ ي
pgip1 نژ ﺄﺗ ﻴﻳ ﻧ و هﺪﺷ ﺪ ﻴ
ﺑ ﻞﻗﺎﻧ ﺰ ﻴ ﻧﺎ ﻲ
pBI121
ﺎﺑ ﻢﻳﺰﻧآ ﺎﻫ
SacI/XbaI ي و هﺪﺷ هداد شﺮﺑ
ﺮﺘﻛﺎﺑ ﻪﺑ لﺎﻘﺘﻧا و ندﺮﻛ نﻮﻠﻛ ﻞﺣاﺮﻣ
E. coli DH5α ي
ﺖﻓﺮﮔ مﺎﺠﻧا دراﺪﻧﺎﺘﺳا شور ﻖﺒﻃ .
بﺎﺨﺘﻧا ﺖﻬﺟ
ﻤﺳﻼﭘ ﻴ ﺎﻫﺪ ي ﻛﺮﺗﻮﻧ ﻴ ﺐ ﺘﻧآ زا ﻲ ﺑ ﻴ ﺗﻮ ﻴ ﺎﻣﺎﻧﺎﻛ ﻚ ﻳ
ﺴ ﻴ ﻦ
µg/ml) 50 ( ﺤﻣ رد ﻴ دﺮﮔ هدﺎﻔﺘﺳا ﺖﺸﻛ ﻂ ﻳ
ﺪ . ﻤﺳﻼﭘ ﻴ ﺪ
pBI121
وﺎﺣ ي
pgip1 نژ ﺎﺑ بوذ و دﺎﻤﺠﻧا شور ﻪﺑ
ﺮﻠﻛ زا هدﺎﻔﺘﺳا ﻳ
ﺴﻠﻛ ﺪ ﻴ ﻢ ) 20 ﻲﻠﻴﻣ رﻻﻮﻣ ( ﺎﻣ تزا و ﻳ ﻪﺑ ﻊ
ﺮﺘﻛﺎﺑ ي
A. tumefaciens
ﻮﺳ ﻳ
LBA4404 ﻪ دﺮﮔ ﻞﻘﺘﻨﻣ
ﻳ ﺪ
Sambrook & Russell, 2001) .(
هدﺎﻣآ ﺎﺳ ز ي ﮔ داﻮﻣ ﻴ ﻫﺎ ﻲ ﮔ ﻪﺑ نژ لﺎﻘﺘﻧا شور و ﻴ
هﺎ
ﻂﺳﻮﺗ هﺪﺷ ﻪﺋارا شور ﻪﺑ اﺰﻠﻛ روﺬﺑ
Moloney et al.
(1989)
ﻧﻮﻔﻋﺪﺿ ﻲ ﻂﻴﺤﻣ يور ندز ﻪﻧاﻮﺟ ياﺮﺑ و هﺪﺷ
ﻪﻧاﻮﺟ ﺖﺸﻛ
(1X MS, sucrose 30 g/l, agar 8 g/l, ﻲﻧز
pH 5.8)
راﺮﻗ ﺪﻧﺪﺷ هداد .
قﺎﺗا رد ،هﺪﺷ ﺖﺸﻛ روﺬﺑ
ﻂﻳاﺮﺷ ﺖﺤﺗ ﺖﻓﺎﺑ ﺖﺸﻛ 16
ﺷور ﺖﻋﺎﺳ و ﻲﻳﺎﻨ
8 ﺖﻋﺎﺳ
يﺎﻣد و ﻲﻜﻳرﺎﺗ 25
ﻪﺟرد ﻲﺘﻧﺎﺳ داﺮﮔ ﺪﻧﺪﺷ يراﺪﻬﮕﻧ .
گﺮﺑ ﺎﻫ ي ﻪﭙﻟ يا نﺎﻫﺎﻴﮔ 5 ﺎﻬﻧآ گﺮﺒﻣد لﻮﻃ ﻪﻛ هزور
دوﺪﺣ 2 ﻲﻠﻴﻣ ﻪﻧاﻮﺟ فﺬﺣ زا ﺲﭘ و ﺪﻧﺪﺷ اﺪﺟ ،دﻮﺑ ﺮﺘﻣ
ﻣد ﻲﻳﺎﻬﺘﻧا گﺮﺒ
ﺎﻫ تﺪﻣ ﻪﺑ 48
ور ﺖﻋﺎﺳ ي
ﺶﻴﭘ ﻂﻴﺤﻣ
(1X MS, sucrose 30 g/l, BAP 3.5 mg/l, agar ﺖﺸﻛ
8 g/l, pH 5.8)
ﺪﻧﺪﺷ ﺖﺸﻛ .
ﻪﻧﻮﻤﻧﺰﻳر ﻦﻳا زا ﺲﭘ ﺎﻫ
مﻮﻳﺮﺘﻛﺎﺑوﺮﮔآ ﺖﻓﺎﻳرد هدﺎﻣآ ﻪﻠﺣﺮﻣ ﻲﻣ
ﺷﺎﺑ ﺪﻨ . هﺪﺷ مرﻮﻔﺴﻧاﺮﺗ مﻮﻳﺮﺘﻛﺎﺑوﺮﮔآ ﻪﻧﺎﺒﺷ ﺖﺸﻛ زا
(OD650=1)
ﺪﺷ ﻪﻴﻬﺗ بﻮﺳر )
ﺖﻋﺮﺳ ﺎﺑ 5000g
تﺪﻣ ﻪﺑ
10 ﻪﻘﻴﻗد ( ﺲﭙﺳ يﺮﺘﻛﺎﺑ ﺎﻫ ي بﻮﺳر ﻳ لﻮﻠﺤﻣ رد ﻪﺘﻓﺎ
ﺴﻧﺎﭙﺳﻮﺳ ﺖﻟﺎﺣ ﻪﺑ MS
ﻴ ﺪﺷ هدروآ رد نﻮ .
ﻪﻧﻮﻤﻧﺰﻳر ﻫ ﺎ ي
ﻞﻣﺎﺷ هدﺎﻔﺘﺳا درﻮﻣ گﺮﺑ
ﺎﻫ ي ﻪﭙﻟ يا ﻪﻛ ﺪﻧدﻮﺑ 24
ﺖﻋﺎﺳ
ﻪﻗﺎﺳﻮﻧ ءﺎﻘﻟا ﺖﺸﻛ ﻂﻴﺤﻣ يور ﺮﺑ )
ﺖﺸﻛ ﺶﻴﭘ (
ﺪﻧدﻮﺑ .
ﻣد گﺮﺒ ﺎﻫ ي گﺮﺑ ﺎﻫ ي ﻪﭙﻟ يا تﺪﻣ ﻪﺑ 90
ﻂﻴﺤﻣ رد ﻪﻴﻧﺎﺛ
ﺪﻧﺪﺷ هداد راﺮﻗ مﻮﻳﺮﺘﻛﺎﺑوﺮﮔآ نﻮﻴﺴﻧﺎﭙﺳﻮﺳ .
ﻦﻳا گﺮﺑ ﺎﻫ ي
ﻪﭙﻟ يا ﺎﺗ ﺪﻧﺪﺷ هداد راﺮﻗ ﻞﻳﺮﺘﺳا ﻲﻓﺎﺻ ﺬﻏﺎﻛ يور ﺮﺑ
ًﺎﺘﺒﺴﻧ ﺪﻧدﺮﮔ ﻚﺸﺧ .
ﻲﺘﺸﻜﻤﻫ ﻂﻴﺤﻣ رد ﺲﭙﺳ
(1X
MS, sucrose 30 g/l, BAP 3.5 mg/l, agar 8 g/l, pH
.
يﺎﻣد و ﻲﻜﻳرﺎﺗ رد و ﺪﻧﺪﺷ هداد ﺖﺸﻛ 5.8)
25 ﻪﺟرد
ﻲﺘﻧﺎﺳ داﺮﮔ ﺪﻨﺘﻓﺮﮔ راﺮﻗ .
زا ﺲﭘ 48 ﺖﻋﺎﺳ ﻪﻧﻮﻤﻧﺰﻳر ﺎﻫ ﻪﺑ
ﻪﻗﺎﺳﻮﻧ ءﺎﻘﻟا ﻲﺑﺎﺨﺘﻧا ﻂﻴﺤﻣ
(1X MS, sucrose 30 g/l,
BAP 3.5 mg/l, agar 8 g/l, pH 5.8)
، يوﺎﺣ ﻪﻛ
15mg/l
و ﻦﻴﺴﻳﺎﻣﺎﻧﺎﻛ 200mg/l
،ﺖﺳا ﻢﻴﺴﻛﺎﺗﻮﻔﺳ
ﺪﻧﺪﺷ ﻞﻘﺘﻨﻣ .
ﻪﻧﻮﻤﻧﺰﻳر ﺎﻫ ﻂﻴﺤﻣ ﻪﺑ رﺎﺒﻜﻳ ﻪﺘﻔﻫ ود ﺮﻫ
ﺪﻧﺪﺷ ﺖﺸﻛاو ﻪﺑﺎﺸﻣ .
ﻮﻧ مﻮﺳ ﻪﺘﻔﻫ رد ﻪﻗﺎﺳ
ﺎﻫ يدﺪﻌﺘﻣ ي
ﻧﺎﻗﻮﻓ ﺢﻄﺳ رد ﻲ
زا ﻲﻀﻌﺑ ﻪﻧﻮﻤﻧﺰﻳر
ﺎﻫ ﺪﻧﺪﻣآ دﻮﺟو ﻪﺑ .
ﻮﻧ ﻦﻳا زا يداﺪﻌﺗ ﻪﻗﺎﺳ
ﺎﻫ ﻂﻴﺤﻣ يور ﺮﺑ هﺪﺷ ﺪﻴﻟﻮﺗ ي
ا مﺪﻋ ﺖﻠﻋ ﻪﺑ ﻪﻴﻘﺑ و ﺪﻧﺪﻧﺎﻣ ﻲﻗﺎﺑ هﺪﻧز و ﺰﺒﺳ قﻮﻓ ﻲﺑﺎﺨﺘﻧ ﻦﻴﺑ زا و هﺪﺷ ﺪﻴﻔﺳ ﻦﻴﺴﻳﺎﻣﺎﻧﺎﻛ ﻪﺑ ﺖﻣوﺎﻘﻣ نژ ﺖﻓﺎﻳرد
ﺪﻨﺘﻓر . ﻲﻣ ﺮﻈﻧ ﻪﺑ ﻮﻧ ﺪﺳر
ﻪﻗﺎﺳ ﺎﻫ ﺪﻴﻤﺳﻼﭘ ،هﺪﻧﺎﻣ هﺪﻧز ي
pBI121
) ﺮﻈﻧ درﻮﻣ ﻲﻧژ هزﺎﺳ ﻞﻣﺎﺣ (
و هدﻮﻤﻧ ﺖﻓﺎﻳرد ار
ﺪﻧا هﺪﺷ ﺖﺨﻳراﺮﺗ .
ﻮﻧ ﻪﻗﺎﺳ ﺎﻫ ﮔ ﻂﻴﺤﻣ رد هﺪﺷ ﻲﻳاززﺎﺑ ﺰﺒﺳ ي ،ﺮﮕﺸﻨﻳﺰ
ﻪﻗﺎﺳﻮﻧ نﺪﺷ ﻞﻳﻮﻃ ﻂﻴﺤﻣ ﻪﺑ و هﺪﺷ اﺪﺟ
(1X MS,
sucrose 30 g/l, agar 8 g/l, pH 5.8)
يوﺎﺣ
25 mg/l
و ﻦﻴﺴﻳﺎﻣﺎﻧﺎﻛ 200mg/l
ﻞﻘﺘﻨﻣ ﺖﺳا ﻢﻴﺴﻛﺎﺗﻮﻔﺳ
ﺪﻧﺪﻳدﺮﮔ . ﻢﺘﺴﻳﺮﻣ ﻞﻴﻜﺸﺗ و ﻪﭽﻫﺎﻴﮔ ﻲﻓﺎﻛ ﺪﺷر زا ﺲﭘ
ﻪﺸﻳر ﻂﻴﺤﻣ ﻪﺑ ﺎﻫ ﻪﻧﻮﻤﻧ ،لﺎﻌﻓ
(1X MS, sucrose ﻲﻳاز
30 g/l, IBA 2 mg/l, agar 8 g/l, pH 5.8)
، ﺑ ﻪ هوﻼﻋ
ﻲﺘﻧآ ﻚﻴﺗﻮﻴﺑ ﻦﻴﺴﻳﺎﻣﺎﻧﺎﻛ يﺎﻫ
(25 mg/l)
ﻢﻴﺴﻛﺎﺗﻮﻔﺳ و
(200 mg/l)
ﺪﻧﺪﺷ هداد لﺎﻘﺘﻧا .
ﻀﻌﺑ ﺖﺳا ﺮﻛذ ﻪﺑ مزﻻ ﻲ
ﻪﻧﻮﻤﻧ زا ﺤﻣ نﺎﻤﻫ رد ﺎﻫ ﻴ
ﻮﻃ ﻂ ﻳ ر ﻪﻗﺎﺳﻮﻧ نﺪﺷ ﻞ ﻳ
راد ﻪﺸ
ﻣ ﻲ ﺘﺣا و ﺪﻧﺪﺷ ﻴ
ﺟﺎ ﻲ ﺤﻣ ﻪﺑ لﺎﻘﺘﻧا ﻪﺑ ﻴ
ر ﻂ ﻳ ﻪﺸ از ﻲﻳ
ﺪﻨﺘﺷاﺪﻧ . دوﺪﺣ زا ﺲﭘ نﺎﻫﺎﻴﮔ 4
ﻫ هﺪﻫﺎﺸﻣ زا ﺲﭘ و ﻪﺘﻔ
ﻪﺸﻳر ﺎﻬﻧآ يور ﺮﺑ و ﺪﻧﺪﺷ ﻞﻘﺘﻨﻣ ناﺪﻠﮔ ﻪﺑ ﻲﻓﺎﻛ يﺎﻫ ﻢﻛ ﻲﺠﻳرﺪﺗ يﺎﻫﺬﻔﻨﻣ دﺎﺠﻳا ﺎﺑ ﺲﭙﺳ ﺪﺷ هﺪﻴﺸﻛ نﻮﻠﻳﺎﻧ
ﺪﻧﺪﺷ رﺎﮔزﺎﺳ ﻂﻴﺤﻣ ﻪﺑ ﻢﻛ .
ياﺮﺑ هﺪﺷ هدﺎﻔﺘﺳا كﺎﺧ
ناﺪﻠﮔ رﻮﻃ ﻪﺑ يﺮﻴﮔرﺬﺑ مﺎﻤﺗا ﺎﺗ و دﻮﺑ هﺪﺷ ﻞﻳﺮﺘﺳا ﺎﻫ
ﺪﻧﺪﺷ يرﺎﻴﺑآ ﺐﺗﺮﻣ .
جاﺮﺨﺘﺳا ﮔ ﻲﻣﻮﻧژ DNA
ﻴ و هﺎ PCR
ﮔ گﺮﺑ زا ﻲﻣﻮﻧژ DNA
ﻴ ز شور ﻪﺑ اﺰﻠﻛ هﺎ ﻳ
جاﺮﺨﺘﺳا ﺮ
دﺮﮔ ﻳ ﺪ : ﻲﻠﻴﻣ ﺪﺼﻧﺎﭘ ﮔ گﺮﺑ زا مﺮﮔ
ﻴ ﻪﺑ موﺎﻘﻣ نﺎﻫﺎ
ﺎﻣﺎﻧﺎﻛ ﻳ ﺴ ﻴ ﺎﻣ تزا ﺎﺑ دﺎﻤﺠﻧا زا ﺲﭘ ﺪﻫﺎﺷ و ﻦ ﻳ
هدﺎﻔﺘﺳا ﺎﺑ ﻊ
پﻮﻴﺗ رد ﻪﺸﻴﺷ ردﻮﭘ زا يﺎﻫ
5 / 1 ﻲﻠﻴﻣ يﺮﺘﻴﻟ هﺪﻴﻳﺎﺳ
ﺪﻳدﺮﮔ . ﻲﻠﻴﻣ ﻚﻳ ﺲﭙﺳ جاﺮﺨﺘﺳا ﺮﻓﺎﺑ ﺮﺘﻴﻟ
) TNE Tris-
50 HCl
ﻲﻠﻴﻣ ﻣ رﻻﻮ
EDTA ، 100 ﻲﻠﻴﻣ رﻻﻮﻣ
NaCl ،
150 ﻲﻠﻴﻣ رﻻﻮﻣ
pH ﺎﺑ ﺮﺑاﺮﺑ 8 ( ﻪﺑ و ﺪﺷ ﻪﻓﺎﺿا ردﻮﭘ ﻪﺑ
تﺪﺷ ﺪﺷ هداد نﺎﻜﺗ .
ﻞﺻﺎﺣ نژﻮﻤﻫ ﻪﺑ 60
ﺮﺘﻴﻟوﺮﻜﻴﻣ
20% SDS
و ﺪﻳدﺮﮔ ﻪﻓﺎﺿا تﺪﻣ ﻪﺑ
رﻮﻄﺑ ﺖﻋﺎﺳ ﻢﻴﻧ
دﺮﮔ طﻮﻠﺨﻣ ﻢﻳﻼﻣ ﻳ
ﺪ . ﺲﭙﺳ 150 ﺮﺘﻴﻟوﺮﻜﻴﻣ ﺪﻳﺮﻠﻛ
ﻢﻳﺪﺳ 5 رﻻﻮﻣ و 130 ﺮﺘﻴﻟوﺮﻜﻴﻣ
CTAB
10 ﺻرد ﺪ
ﺪﺷ ﻪﻓﺎﺿا .
و ﺪﻳدﺮﮔ طﻮﻠﺨﻣ ﻲﻣارآ ﻪﺑ ﻪﻠﺻﺎﺣ نژﻮﻤﻫ 20
رد ﻪﻘﻴﻗد 65
داﺮﮕﻴﺘﻧﺎﺳ ﻪﺟرد )
ﺮﻫ رد ﻢﻳﻼﻣ ندز ﻢﻫ ﺎﺑ 5
ﻪﻘﻴﻗد ( راﺪﻬﮕﻧ ي ﺪﻳدﺮﮔ . ﻪﻟﻮﻟ ود ﻦﻴﺑ ﻞﺻﺎﺣ طﻮﻠﺨﻣ
فروﺪﻨﭘا 5 / 1 ﺮﻫ ﻪﺑ و ﺪﻳدﺮﮔ ﻢﻴﺴﻘﺗ ﻞﻳﺮﺘﺳا يﺮﺘﻴﻟ ﻲﻠﻴﻣ
راﺪﻘﻣ ﻪﻟﻮﻟ 375
مﺮﻓوﺮﻠﻛ طﻮﻠﺨﻣ ﺮﺘﻴﻟوﺮﻜﻴﻣ /
ﻞﻴﻣآوﺰﻳا
ﻞﻜﻟا ) 24:1 ( ﺑ ﻲﻣارآ ﻪﺑ و هﺪﺷ ﻪﻓﺎﺿا ﻪ
تﺪﻣ 10 ﻪﻘﻴﻗد
ﺪﺷ هدز ﻢﻫ .
ژﻮﻴﻔﻳﺮﺘﻧﺎﺳ زا ﺪﻌﺑ 15
ﻪﻘﻴﻗد رد يا
g
13000 يوﺎﺣ ﻪﻛ ﻲﻳور زﺎﻓ ، ﻪﻟﻮﻟ ﻪﺑ دﻮﺑ ﻲﻣﻮﻧژ DNA
دﺮﮔ ﻞﻘﺘﻨﻣ ﺰﻴﻤﺗ ﻳ
ﺪ
DNA . ندوﺰﻓا ﺎﺑ ﻲﻣﻮﻧژ 2
/ 1 ﻢﺠﺣ
ﻞﻧﺎﭘوﺮﭘوﺰﻳا 15
ﻪﻘﻴﻗد ژﻮﻴﻔﻳﺮﺘﻧﺎﺳ
g) 13000 ( بﻮﺳر ﻲﻫد
ﺪﺷ . ﻞﻧﺎﺗا ﺎﺑ ﻪﻠﺻﺎﺣ بﻮﺳر 70
د و ﺪﺷ هداد ﻮﺸﺘﺴﺷ ﺪﺻر
ﺎﻣد رد نﺪﺷ ﻚﺸﺧ زا ﺪﻌﺑ ي
رد ،قﺎﻃا 75
- 50
ﻄﻘﺗ رﺎﺑود ﺮﻄﻘﻣ بآ ﺮﺘﻴﻟوﺮﻜﻴﻣ ﻴ
ﺪﻳدﺮﮔ ﻞﺣ هﺪﺷ نوﺮﺘﺳ ﺮ
ﺎﻣد رد و ي 20 - ﻪﺟرد ﻲﺘﻧﺎﺳ داﺮﮔ ﺪﺷ يراﺪﻬﮕﻧ .
ﺖﻬﺟ نژ ﺮﻴﺜﻜﺗ
pgip1
ﺎﻫﺮﮔزﺎﻏآ زا
RB1 ي ﺎﺟ ﺎﺑ ﻳ هﺎﮕ
ﺰﻧآ شﺮﺑ ﻳ ﻤ
XbaIﻲ
5′- gct cta gaA TGA CTC AAT )
TCA ATA TCC CAG-3’
(
RB2 و ﺎﺟ ﺎﺑ ﻳ ﺷﺮﺑ هﺎﮕ ﻲ
) SacI 5′- gca cga gct cTT AAG TGC AGG AAG
GAA GAG-3’
( دﺮﮔ هدﺎﻔﺘﺳا ﻳ
ﺪ
PCR . ﺲﭘ ﻲﺻﺎﺼﺘﺧا
ﻢﺠﺣ ﻪﺑ ﻲﺸﻨﻛاو طﻮﻠﺨﻣ رد يزﺎﺳ ﻪﻨﻴﻬﺑ زا 25
ﻞﻣﺎﺷ ،ﺮﺘﻴﻟوﺮﻜﻴﻣ 5
/ 1 ﻲﻠﻴﻣ
Mgcl2 رﻻﻮﻣ
، 30 مﺮﮔﻮﻧﺎﻧ
ﻮﮕﻟا DNA
، 3 / 0 ﻣ ﻴ رﻻﻮﻣوﺮﻜ
،ﺮﮔزﺎﻏآ 2
/ 0
ﻲﻠﻴﻣ
dNTPرﻻﻮﻣ و ، 1 ﻢﻳﺰﻧآ ﺪﺣاو
Taq-polymerase
و
5 / 2 ﺮﻓﺎﺑ ﺮﺘﻴﻟوﺮﻜﻴﻣ
(10X)
ﺖﻓﺮﮔ ترﻮﺻ .
ﺶﻨﻛاو ﺲﭙﺳ
ياﺮﺑ 30
،رود يﺎﻣد ﻞﻣﺎﺷ 95
ﻪﺟرد ﻲﺘﻧﺎﺳ داﺮﮔ ﻪﺑ
تﺪﻣ 45 يﺎﻣد ،ﻪﻴﻧﺎﺛ 54
ﻪﺟرد ﻲﺘﻧﺎﺳ داﺮﮔ تﺪﻣ ﻪﺑ 30
يﺎﻣد ،ﺖﻳﺎﻬﻧ رد و ﻪﻴﻧﺎﺛ 72
ﻪﺟرد ﻲﺘﻧﺎﺳ داﺮﮔ ﺑ ﻪ تﺪﻣ
60 ﺪﻳدﺮﮔ مﺎﺠﻧا ﻪﻴﻧﺎﺛ .
مﺎﻤﺗا زا ﺪﻌﺑ 30
رد ﺶﻨﻛاو ،رود
72 ﻪﺟرد ﻲﺘﻧﺎﺳ داﺮﮔ تﺪﻣ ﻪﺑ 5
ﺖﻓﺮﮔ راﺮﻗ ﻪﻘﻴﻗد .
لﻮﺼﺤﻣ زرﺎﮔآ لژ يور PCR
ﻳ ﻚ زرﻮﻓوﺮﺘﻜﻟا ﺪﺻرد
ﺪﻳدﺮﮔ .
زرا ﻳ ﺑﺎ ﻲ ﻻ ﺖﻣوﺎﻘﻣ ﻳ
ﺎﻬﻨ ي راﺮﺗ ﻳ اﺮﺷ رد ﺖﺨ ﻳ
ﻂ
ﺎﻣزآ ﻳ ﻫﺎﮕﺸ ﻲ
ﺑ ﻪ ﺎﻘﻣ رﻮﻈﻨﻣ ﻳ
ﮔ ﺖﻣوﺎﻘﻣ ﻪﺴ ﻴ
اﺰﻠﻛ نﺎﻫﺎ ي راﺮﺗ ﻳ ﺎﺑ ﺖﺨ
ﮔ ﻴ ز شور زا ﺪﻫﺎﺷ نﺎﻫﺎ ﻳ
ﺖﺴ ﺠﻨﺳ ﻲ دﺮﮔ هدﺎﻔﺘﺳا ﻳ
ﺪ . د ر
اﻳ ﻦ زا شور ﻪﻳﺎﻣ
ﻧز ﻚﺴﻳد ﺎﺑ ﻲ چرﺎﻗ ﻲﻣﻮﻴﻠﺴﻴﻣ يﺎﻫ
S. sclerotiorum
ﺮﺑ يور گﺮﺑ ﺎﻫ ي نﺎﻫﺎﻴﮔ زا هﺪﺷاﺪﺟ
دﺮﮔ هدﺎﻔﺘﺳا ﻪﻌﻟﺎﻄﻣ درﻮﻣ ﻳ
ﺪ . ﻪﻴﺷﺎﺣ زا رﻮﻈﻨﻣ ﻦﻳا ياﺮﺑ
ﻚﺴﻳد ،چرﺎﻗ ﻲﻨﻠﻛ هزور ﻪﺳ ﺖﺸﻛ ﺮﻄﻗ ﻪﺑ ﻲﻳﺎﻫ
5
ﻲﻠﻴﻣ هداد راﺮﻗ گﺮﺑ ﻲﻠﺻا گﺮﺒﮔر يور و ﻪﺘﺷادﺮﺑ ﺮﺘﻣ
ﺪﺷ . ﻠﭘ ﺮﻫ رد ﻴ ﻚﻳ ﺖ ﮔ ﺮﻫ ياﺮﺑ و گﺮﺑ ﻴ
هﺎ 3 رد راﺮﻜﺗ
ﺪﺷ ﻪﺘﻓﺮﮔ ﺮﻈﻧ .
گﺮﺑ ﺎﻫ ﺎﻣد رد ﺢﻴﻘﻠﺗ زا ﺲﭘ ي
و قﺎﻃا
ﻠﭘ ﻞﺧاد ﻴ وﺎﺣ ﺖ ي ﻓﺎﺻ ﺬﻏﺎﻛ ﻲ
ﺎﺗ ﺪﻧﺪﺷ هداد راﺮﻗ بﻮﻃﺮﻣ
يﻻﺎﺑ ﻲﺒﺴﻧ ﺖﺑﻮﻃر 90
ﻢﻫاﺮﻓ ﺎﻬﻧآ فاﺮﻃا رد ﺪﺻرد
ددﺮﮔ . يور زوﺮﻜﻧ ﻢﺋﻼﻋ ﺖﺒﺛ و ﻲﺳرﺮﺑ گﺮﺑ
ﺎﻫ ﺢﻴﻘﻠﺗ ي
ﺎﻳزرا و ﺖﻓﺮﮔ ترﻮﺻ ﻪﻧازور ترﻮﺼﺑ هﺪﺷ ﻢﺋﻼﻋ تﺪﺷ ﻲﺑ
ﺖﺒﺛ هﺪﺷ دﺎﺠﻳا زوﺮﻜﻧ ﺮﻄﻗ ﻦﺘﻓﺮﮔ ﺮﻈﻧ رد ﺎﺑ يرﺎﻤﻴﺑ دﺮﮔ ﻳ ﺪ .
ﺎﺘﻧ
ﻳ ﺞ
ﺪﻴﻤﺳﻼﭘ ﺐﻴﻛﺮﺗﻮﻧ
pUCFF2
وﺎﺣ نژ ي
pgip1
، ﺎﺑ
زا هدﺎﻔﺘﺳا يﻮﮕﻟا
درﻮﻣ ﻲﻤﻳﺰﻧآ ﻢﻀﻫ و PCR
ﺪﻴﺋﺄﺗ راﺮﻗ
ﺖﻓﺮﮔ . ﻢﻳﺰﻧآ ود زا هدﺎﻔﺘﺳا ﺎﺑ ﻲﻤﻳﺰﻧآ ﻢﻀﻫ يﻮﮕﻟا
XbaI/SacI
، نژ دﻮﺟو
pgip1
رد ار ﺪﻴﻤﺳﻼﭘ
pUCFF2
ﺄﺗ درﻮﻣ ﺋ داد راﺮﻗ ﺪﻴ )
ﻞﻜﺷ 1
.( يﻮﮕﻟا ﻦﻴﻨﭽﻤﻫ ﺎﺑ PCR
ﺻﺎﺼﺘﺧا يﺎﻫﺮﮔزﺎﻏآ زا هدﺎﻔﺘﺳا
،ﻲ ا رﻮﻀﺣ ﻳ رد ار نژ ﻦ
ﺪﻴﻤﺳﻼﭘ
pUCFF2
ﺄﺗ درﻮﻣ ﺋ داد راﺮﻗ ﺪﻴ )
ﻞﻜﺷ 1 .(
نژ لﺎﻘﺘﻧا ﺖﻬﺟ
pgip1
ﮔ ﻪﺑ ﻴ اﺰﻠﻛ هﺎ
، ﻪﻌﻄﻗ
DNA
هﺪﺷ ﻢﻀﻫ )
وﺎﺣ ي
pgip1نژ ( رد ﺑ رﻮﺘﻛو ﻴ ﻧﺎ
pBI121 ﻲ
دﺮﮔ نﻮﻠﻛ ﻳ
ﺪ . هزﺎﺳ ﺳد ﻪﺑ ﺖ ﻮﮕﻟا زا هدﺎﻔﺘﺳا ﺎﺑ هﺪﻣآ ي
ﺰﻧآ ﻢﻀﻫ ﻳ ﻤ ﻲ ﻧ و ﻴ ﻮﮕﻟا ﺰ
PCR ي ﺄﺗ درﻮﻣ ﻴﺋ ﺖﻓﺮﮔ راﺮﻗ ﺪ
) ﻞﻜﺷ 2 ( و ﺑ ﻧ ﻪ
pBIAA1 مﺎ دﺮﮔ يراﺬﮕﻣﺎﻧ
ﻳ ﺪ .
pgip1 نژ
ا رد ﻳ لﺮﺘﻨﻛ ﺖﺤﺗ هزﺎﺳ ﻦ هﺪﻧﺮﺒﺸﻴﭘ
CaMV 35S
نﻮﻠﻛ
دﺮﮔ ﻳ ﺖﺳا هﺪ . اﻳ اراد هزﺎﺳ ﻦ ي
nptII نژ ﻪﺑ ﻪﻛ هدﻮﺑ
ﮔ بﺎﺨﺘﻧا رﻮﻈﻨﻣ ﻴ
راﺮﺗ نﺎﻫﺎ ﻳ
رد ﺖﺨ ﻳ ﺖﻓﺎ هﺪﻨﻨﻛ اﻳ ﻦ
T-DNA
ﺤﻣ رد ﻴ وﺎﺣ ﻂ ي ﺎﻣﺎﻧﺎﻛ ﻳ ﺴ ﻴ ا ﺶﻘﻧ ﻦ ﻳ ﻣ ﺎﻔ ﻲ ﺎﻤﻧ ﻳ ﺪ
) ﻞﻜﺷ 3 .(
ﻧژ هزﺎﺳ
pBIAA1ﻲ زا ﺲﭘ و ﻞﻘﺘﻨﻣ مﻮﻳﺮﺘﻛﺎﺑوﺮﮔا ﻪﺑ
ﺄﺗ ﻴﺋ هدﺎﻔﺘﺳا ﻲﻧوﺪﻠﻴﺗﻮﻛ يﺎﻫ ﻪﻧﻮﻤﻧﺰﻳر ﻪﺑ لﺎﻘﺘﻧا ﺖﻬﺟ ،ﺪ دﺮﮔ
ﻳ ﺪ . گﺮﺒﻣد هﺪﻋﺎﻗ ﻲﻤﺧز يﺎﻬﻟﻮﻠﺳ )
ﺰﻳر ناﻮﻨﻋ ﻪﺑ
ﻪﻧﻮﻤﻧ ( ﺖﻬﺟ ﺖﻓﺎﻳرد
T-DNA
ﺎﻬﻧآ زا و ﺪﺷ هدﺎﻔﺘﺳا
ﺎﻫﺎﻴﮔ ﺪﻣآ ﺖﺳد ﻪﺑ ﻲﻟﺎﻤﺘﺣا ﺖﺨﻳراﺮﺗ ن )
ﻞﻜﺷ 4 .(
ﺄﺗ رﻮﻈﻨﻣ ﻪﺑ ﻴﺋ
راﺮﺗ ﺪ ﻳ ﺘﺨ ﻲ نﺎﻫﺎﻴﮔ ﻪﻌﻟﺎﻄﻣ شور زا
يﻮﮕﻟا يور ﺮﺑPCR
ﻲﻣﻮﻧژ DNA
گﺮﺑ ﺎﻫ ﺰﺒﺳ و ناﻮﺟ ي
اﻳ ﻦ ﻫﺎﻴﮔ نﺎ ﺪﻳدﺮﮔ هدﺎﻔﺘﺳا ﺪﻫﺎﺷ هﺎﻴﮔ و .
ﺎﺘﻧ ﻳ ﺞ ﺖﺳد ﻪﺑ
هﺪﻣآ ندﻮﺑ ﺖﺨﻳراﺮﺗ نژ ﻂﺳﻮﺗ اﺰﻠﻛ نﺎﻫﺎﻴﮔ
pgip1
ار
ﺄﺗ ﻴﺋ دﻮﻤﻧ ﺪ ﻃ ﻪﻛ ﻲ نآ يا ﻪﻌﻄﻗ دوﺪﺣ 1Kb
) درﻮﻣ لﻮﻃ
رﺎﻈﺘﻧا ( ﺜﻜﺗ ﻴ دﺮﮔ ﺮ ﻳ ﺪ ) ﻞﻜﺷ 5 .(
ﮔ زا ﻴ ﺪﺷر نﺎﻫﺎ ﻳ
ﺲﭘ ﻪﺘﻓﺎ
ﻫﺪﻠﮔ زا ﻲ ا و ﻳ ﮔرﺬﺑ ،فﻼﻏ دﺎﺠ ﻴ
ﺮ ي ﺑ ﻪ ﺪﻣآ ﻞﻤﻋ .
bp M 1 2
3000
1000
500
ﻞﻜﺷ 1 - ﺪﻴﻤﺳﻼﭘ ﺪﻴﻳﺎﺗ
pUCFF2
ﺎﺑ يﻮﮕﻟا زا هدﺎﻔﺘﺳا ﻲﻤﻳﺰﻧآ ﻢﻀﻫ و PCR
:
1
pUCFF2( ﻢﻳﺰﻧآ ﺎﺑ هﺪﺷ ﻢﻀﻫ ﻫ
SacI يﺎ
XbaI و
2 ( لﻮﺼﺤﻣ ﺐﻴﻛﺮﺗﻮﻧ ﺪﻴﻤﺳﻼﭘ زا PCR
pUCFF2
يﺎﻫﺮﮔزﺎﻏآ ﺎﺑ و RB1
،RB2
-M
ﺮﻛرﺎﻣ
DNA
bp M 1 2
2000
1000
500
ﻞﻜﺷ 2 - ﺐﻴﻛﺮﺗﻮﻧ ﺪﻴﻤﺳﻼﭘ ﺪﻴﻳﺎﺗ
pBIAA1
نژ يوﺎﺣ
pgip1
يﻮﮕﻟا و ﻲﻤﻳﺰﻧآ ﻢﻀﻫ زا هدﺎﻔﺘﺳا ﺎﺑ
:PCR
1 ( ﺪﻴﻤﺳﻼﭘ ﻢﻳﺰﻧآ ﻢﻀﻫ يﻮﮕﻟا
pBIAA1
زا هدﺎﻔﺘﺳا ﺎﺑ ﺐﻴﻛﺮﺗﻮﻧ
XbaI/SacI
2 ( ﻲﺻﺎﺼﺘﺧا يﺎﻫﺮﮔزﺎﻏآ ﻪﻠﻴﺳﻮﺑ هﺪﺷ ﺮﻴﺜﻜﺗ ﻪﻌﻄﻗ
RB1/RB2 M ،
- ﺮﻛرﺎﻣ
DNA
ﻞﻜﺷ 3 - ﻪﻘﻄﻨﻣ ﻚﻴﺗﺎﻤﺷ ﻞﻜﺷ
T-DNA
هزﺎﺳ
pBIAA1
نژ يوﺎﺣ
pgip1
:
RB, right border; LB, left border; Nos-pro, nopaline synthase promoter; NPTII, neomycin phosphotransferase; Nos-ter, terminator of nopaline synthase; 35s-pro, 35S promoter of cauliflower mosaic virus; pgip1, bean polygalacturonase inhibiting protein gene.
Nos-Pro NPTII Nos-Ter 35s-Pro Pgip1 Nos-Ter
RB LB
SacI XbaI
ج ب
ا
ﻒﻟ
و ﻫ
ـ د
ﻞﻜﺷ 4 - اﺰﻠﻛ هﺎﻴﮔ ﻲﻳاززﺎﺑ و نژ لﺎﻘﺘﻧا ﺪﻨﻳآﺮﻓ :
ﻒﻟا ( نوﺪﻠﻴﺗﻮﻛ ﺶﻴﭘ ﻂﻴﺤﻣ يور ﺮﺑ هﺪﺷ ﺖﺸﻛ يﺎﻫ
ب ،ﺖﺸﻛ ( ج ،نوﺪﻠﻴﺗﻮﻛ زا ﻪﻗﺎﺳﻮﻧ ﻲﻳاززﺎﺑ (
يور ﺮﺑ اﺰﻠﻛ ﻲﻟﺎﻤﺘﺣا ﺖﺨﻳراﺮﺗ هﺎﻴﮔ
ﻫ و د ،ﻦﻴﺴﻳﺎﻣﺎﻧﺎﻛ يوﺎﺣ ﺖﺸﻛ ﻂﻴﺤﻣ ـ
( ﻪﭽﻫﺎﻴﮔ ﻲﺠﻳرﺪﺗ يرﺎﮔزﺎﺳ و ،اﺰﻠﻛ يﺎﻫ
( ﻼﻏ ﻞﻴﻜﺸﺗ ﺖﺨﻳراﺮﺗ ياﺰﻠﻛ هﺎﻴﮔ زا يﺮﻴﮔرﺬﺑ ﺖﻬﺟ ف
bp M 1 2 3
2000
1000
500
ﻞﻜﺷ 5 - ﺶﻨﻛاو لﻮﺼﺤﻣ نژ رﻮﻀﺣ تﺎﺒﺛا ياﺮﺑ PCE
pgip1
اﺰﻠﻛ هﺎﻴﮔ رد )
زا هدﺎﻔﺘﺳا ﺎﺑ
ﻲﺻﺎﺼﺘﺧا يﺎﻫﺮﮔزﺎﻏآ و RB1
(RB2
ﺪﺻرد ﻚﻳ زورﺎﮔآ يور ﺮﺑ :
1 ( لﻮﺼﺤﻣ زا هﺪﺷ ﺮﻴﺜﻜﺗ PCR
ﺪﻴﻤﺳﻼﭘ DNA pBIAA1
) ﺖﺒﺜﻣ لﺮﺘﻨﻛ (
2 ( لﻮﺼﺤﻣ نژ يوﺎﺣ ﻲﻟﺎﻤﺘﺣا ﺖﺨﻳراﺮﺗ هﺎﻴﮔ زا هﺪﺷ ﺮﻴﺜﻜﺗ PCR
pgip1
3 ( ﺶﻨﻛاو لﻮﺼﺤﻣ زا هدﺎﻔﺘﺳا ﺎﺑ PCR
ﺖﺨﻳراﺮﺗ ﺮﻴﻏ ياﺰﻠﻛ هﺎﻴﮔ DNA
) ﻲﻔﻨﻣ لﺮﺘﻨﻛ (
،
M - ﺮﻛرﺎﻣ DNA
شور ﺖﺴﻳز ﻲﻔﻴﻛ هدﺎﻔﺘﺳا ﺎﺑ ﻲﺠﻨﺳ
چرﺎﻗ زا
S. sclerotiorum
ﺑ ﻪ ﺎﻘﻣ رﻮﻈﻨﻣ ﻳ
ﻪﺴ ﮔ ﺖﻣوﺎﻘﻣ ﻴ
نﺎﻫﺎ
ﻛ ﺰﻠ ا
PCRي ﮔ ﺎﺑ ﺖﺒﺜﻣ ﻴ
ﺪﻫﺎﺷ نﺎﻫﺎ )
دﺪﻌﺘﻣ يﺎﻫراﺮﻜﺗ ﺎﺑ (
ﻪﻛ داد نﺎﺸﻧ ﻣ
ﻴ ا زوﺮﻜﻧ ناﺰ ﻳ
ﮔ گﺮﺑ رد هﺪﺷ دﺎﺠ ﻴ
نﺎﻫﺎ
راﺮﺗ ﻳ ﮔ ﻪﺑ ﺖﺒﺴﻧ ﺖﺨ ﻴ
هﺎ ﺪﻫﺎﺷ نﺎﺸﻧ ﺖﻣوﺎﻘﻣ هﺪﻨﻫد
نﺎﻫﺎﻴﮔ ﻦﻳا ﺮﺘﺸﻴﺑ ﻲﻣ
ﺷﺎﺑ ﺪ ) ﻞﻜﺷ 6 .(
هرﺎﻤﺷ هﺎﻴﮔ 9
نﺎﺸﻧ دﻮﺧ زا ار اﺰﻳرﺎﻤﻴﺑ چرﺎﻗ ﺮﺑاﺮﺑ رد ﺖﻣوﺎﻘﻣ ﻦﻳﺮﺘﺸﻴﺑ هداد
، ﻟﺎﺣ رد ﻲ ﻣ ﻪﻛ ﻴ ا زوﺮﻜﻧ ناﺰ ﻳ
ﮔ رد هﺪﺷ دﺎﺠ ﻴ
هرﺎﻤﺷ هﺎ 5
توﺎﻔﺗ ﻲﻨﻌﻣ راد ي ﮔ ﺎﺑ ار ﻴ ﻤﻧ نﺎﺸﻧ ﺪﻫﺎﺷ هﺎ ﻲ
داد . ﺎﺳ ﻳ ﺮ
ﮔ ﻴ نﺎﻫﺎ ﺗوﺎﻔﺘﻣ تﺎﺟرد ﺖﺒﺜﻣ PCR
ﻲ نﺎﺸﻧ ار ﺖﻣوﺎﻘﻣ زا
ﻣ ﻲ ﺪﻧداد .
ﺚﺤﺑ
ﺖﻴﻤﻫا ﻪﺑ ﻪﺟﻮﺗ ﺎﺑ ﺑﻴ
رﺎﻤ ي ﺳﻮﭘ ﻴ ﮔﺪ ﻲ ﻂﺳﻮﺗ ﻪﻗﺎﺳ
چرﺎﻗ
S. sclerotiorum
ﮔ رد ﻴ اﺰﻠﻛ هﺎ رد ﺣ ﻖﻴﻘﺤﺗ ﺮﺿﺎ
ﻖﻳﺮﻃ زا رﻮﻛﺬﻣ يرﺎﻤﻴﺑ ﻪﺑ هﺎﻴﮔ ﻦﻳا ﺖﻣوﺎﻘﻣ لﺎﻘﺘﻧا
ﻚﻳ
ج ب
ﻒﻟا
ﻞﻜﺷ 6 - زا ﺲﭘ هﺪﺷ دﺎﺠﻳا زوﺮﻜﻧ ناﺰﻴﻣ ﻪﺴﻳﺎﻘﻣ 48
چرﺎﻗ ﺢﻴﻘﻠﺗ ﺖﻋﺎﺳ
S. scletoriorum
ﻪﺑ اﺰﻠﻛ هﺎﻴﮔ گﺮﺑ يور ﺮﺑ شور
Detached
leaf assay
: ﻒﻟا ( هرﺎﻤﺷ ﺖﺨﻳراﺮﺗ ياﺰﻠﻛ هﺎﻴﮔ گﺮﺑ 5
ب ، ( ﻠﻛ هﺎﻴﮔ گﺮﺑ ج ،ﺖﺨﻳراﺮﺗﺮﻴﻏ ياﺰ
( هرﺎﻤﺷ ﺖﺨﻳراﺮﺗ ياﺰﻠﻛ هﺎﻴﮔ گﺮﺑ 9
) ﻪﻧﻮﻤﻧ ناﻮﻨﻋ ﻪﺑ قﻮﻓ تاﺪﻫﺎﺸﻣ ﻲﻣ ﻪﺑﺎﺸﻣ ﺞﻳﺎﺘﻧ ﺎﺑ ﺶﻳﺎﻣزآ يﺎﻫراﺮﻜﺗ زا ﻲﻳﺎﻫ
ﺪﺷﺎﺑ .(
ﺖﻣوﺎﻘﻣ نژ
pgip1) ( ﺖﺳا هدﻮﺑ ﺮﻈﻧ ﺪﻣ .
ﻪﻛ ﺎﺠﻧآ زا مﺎﻗرا
ﻟﻮﺼﺤﻣﺮﭘ ﻲ اﺰﻠﻛ زا ا ﻪﺑ ﻪﻛ ﻳ ﺑ ﻦ ﻴ رﺎﻤ ي رد ﺪﻨﺷﺎﺑ موﺎﻘﻣ
ﻧ سﺮﺘﺳد ﻲﻤ
ﺷﺎﺑ ﺪ
، ا ﺎﻬﻨﺗ اﺬﻟ ﺪﺟ ماﺪﻗ
ي اﺮﺑ ﻪﻛ ي لﺮﺘﻨﻛ
اﻳ ﺑ ﻦ ﻴ رﺎﻤ ي ترﻮﺻ رﻮﺸﻛ رد ﻲﻣ
دﺮﻴﮔ
، زا هدﺎﻔﺘﺳا
چرﺎﻗ
Folicur ﺶﻛ ﻲﻣ
ﺷﺎﺑ ﻤﺤﺗ ﺮﺑ هوﻼﻋ ﻪﻛ ﺪ ﻴ
ﺰﻫ ﻞ ﻳ ﻪﻨ
ز ﻳ ﮔدﻮﻟآ ﺐﺟﻮﻣ ،دﺎ ﻲ
ز ﻳ ﺖﺴ ﺤﻣ ﻴ ﻄ ﻲ ﻧ ﻴ ﺰ ﻲﻣ ددﺮﮔ .
نژ زا ﻖﻴﻘﺤﺗ ﻦﻳا رد
pgip1
هﺎﻴﮔ يﻮﺠﺸﻧاد ﻪﺘﻳراو
ﻲﺘﺨﻳراﺮﺗ ﺖﻬﺟ ﺎﻴﺑﻮﻟ ﻢﻗر
R line Hyola 308
اﺰﻠﻛ هﺎﻴﮔ
ا رد ﺖﺨﻳراﺮﺗ نﺎﻫﺎﻴﮔ ﺖﻣوﺎﻘﻣ ناﺰﻴﻣ و ﺪﻳدﺮﮔ هدﺎﻔﺘﺳ
چرﺎﻗ ﺮﺑاﺮﺑ
S. sclerotiorum
درﻮﻣ ﺖﻓﺮﮔ راﺮﻗ ﻪﻌﻟﺎﻄﻣ .
نژ ﺖﻴﻤﻫا اﺰﻓا ﺖﻬﺟ pgip
ﻳ ﺶ ﺮﺑاﺮﺑ رد نﺎﻫﺎﻴﮔ ﺖﻣوﺎﻘﻣ
چرﺎﻗ ﺎﻫ ﻦﻴﻘﻘﺤﻣ ﻂﺳﻮﺗ ﺮﻴﺧا يﺎﻬﻟﺎﺳ رد اﺰﻳرﺎﻤﻴﺑ ي
ﺖﺳا هﺪﺷ شراﺰﮔ ﻲﻔﻠﺘﺨﻣ
Manfredini et al. .
(2005)
نژ ﺑﻮﻟ pgip
ﻴ ﻪﺑ ار ﺎ ﮔ ﻴ ﺑارآ هﺎ ﻴ ﺴﭘوﺪ ﻴ ﻞﻘﺘﻨﻣ نﻮﺗﻮﺗ و ﺲ
ﺑ ﻪﻛ ﺪﻧداد نﺎﺸﻧ و هدﻮﻤﻧ ﻴ
ا نﺎ ﻳ زا ﺖﻌﻧﺎﻤﻣ ﻪﺑ ردﺎﻗ نژ ﻦ
ﻟﺎﻌﻓ ﻴ ﺰﻧآ ﺖ ﻳ ﻠﭘ ﻢ ﻲ چرﺎﻗ زﺎﻧورﻮﺘﻛﻻﺎﮔ
Botrytis cinera
ﻲﻣ ﺷﺎﺑ ﺪ . ﻨﭽﻤﻫ ﻴ نژ ﻦ ﺑﻼﮔ pgip
ﻲ ﻪﺟﻮﮔ ،ﻮﻟﺎﻣﺮﺧ ﻪﺑ
ﮕﻧﺮﻓ ﻲ ﻪﻛ ﺖﺳا هﺪﺷ هداد نﺎﺸﻧ و هﺪﺷ ﻞﻘﺘﻨﻣ رﻮﮕﻧا و
اﻳ ﻧﻮﻠﻛ ندﺮﻛ دوﺪﺤﻣ رد نژ ﻦ ﻴ
ﺳاﺰ ﻴ ﺑ چرﺎﻗ نﻮ ﻴ
رﺎﻤ ﻳ رد اﺰ
ﮔ ﻴ ا ﺶﻘﻧ هﺎ ﻳ ﻣ ءﺎﻔ ﻲ
(Aguero et al., 2005; Powell ﺪﻨﻛ
et al., 2000; Tamura et al., 2004)
. ﻨﭽﻤﻫ ﻴ ﺑ ﻦ ﻴ نﺎ
ﺳ PGIP
ﻴ ﮔ رد ﺐ ﻴ ﻟﺎﻌﻓ رﺎﻬﻣ ﺐﺒﺳ نﻮﺗﻮﺗ هﺎ ﻴ
ﺖ ﻢﻳﺰﻧآ ﺎﻫ ي
ﻠﭘ ﻲ زﺎﻧورﻮﺘﻛﻻﺎﮔ ي
چرﺎﻗ ﺎﻫ ي ﺑ ﻴ رﺎﻤ ﻳ دﺮﮔ اﺰ ﻳ
ﺖﺳا هﺪ
Oelofse et al., 2006) .(
ﺎﺠﻧآ زا ﻣ رد ﻪﻛ ﻞﺤ شﺮﺑ يﺎﻫ ا ﻳ ﺎﻬﺘﻧا رد هﺪﺷ دﺎﺠ ي
گﺮﺒﻣد ﻲﻧوﺪﻠﻴﺗﻮﻛ )
ﻪﻧﻮﻤﻧﺰﻳر ناﻮﻨﻋ ﻪﺑ (
اﺰﻠﻛ هﺎﻴﮔ ﺎﻬﻟﻮﻠﺳ
ي ﺒﺳﺎﻨﻣ ﻲ اﺮﺑ ي نژ لﺎﻘﺘﻧا اﺬﻟ ،دراد دﻮﺟو
ا رد ﻳ ﻦ
ﻘﺤﺗ ﻴ نژ لﺎﻘﺘﻧا ﺖﻬﺟ ﻖ
pgip1
ﮔ ﻪﺑ ﻴ زا اﺰﻠﻛ هﺎ گﺮﺑ
ﺎﻫ ي
ﺗﻮﻛ ﻴ ﻧوﺪﻠ ﻲ دﺮﮔ هدﺎﻔﺘﺳا ﻳ
ﺪ . دﺪﻌﺘﻣ تﺎﺷراﺰﮔ ي
ﻧ ﻴ ﺰ
ر زا هدﺎﻔﺘﺳا ندﻮﺑ ﺐﺳﺎﻨﻣ ﻳ
ﻪﻧﻮﻤﻧﺰ ﺎﻫ ي ﺗﻮﻛ ﻴ ﻧوﺪﻠ ﻲ ﺖﻬﺟ
ﮔ ﻪﺑ نژ لﺎﻘﺘﻧا ﻴ
ﻣ نﺎﺸﻧ ار اﺰﻠﻛ هﺎ ﻲ
(Monoley et ﺪﻫد
al., 1989; Sharma, 1987)
.
ﻪﻛ ﺎﺠﻧآ زا ﺶﻘﻧ ﻪﺑ طﻮﺑﺮﻣ هﺪﺷ ﺮﺸﺘﻨﻣ تﺎﻌﻟﺎﻄﻣ رد
يﺎﻬﻧژ ﺖﻴﻟﺎﻌﻓ رﺎﻬﻣ رد ﺎﻴﺑﻮﻟ pgip
ﺰﻧآ ﻳ ﻠﭘ ﻢ ﻲ زﺎﻧورﻮﺘﻛﻻﺎﮔ
ﻦﻴﺌﺗوﺮﭘ زا ﻲﭼرﺎﻗ هدﺎﻔﺘﺳا هﺎﻴﮔ ﻦﻳا زا هﺪﺷ جاﺮﺨﺘﺳا يﺎﻫ
ﺖﺳا هﺪﻳدﺮﮔ
(DeLorenzo & Ferrari, 2002;
Desiderio et al., 1997)
، رﺎﻬﭼ ﻪﻜﻨﻳا ﻦﺘﻓﺮﮔ ﺮﻈﻧ رد ﺎﺑ و
نژ ﺖﺳا هﺪﺷ شراﺰﮔ ﺎﻴﺑﻮﻟ رد pgip (D’Ovidio et al.,
2004)
. ﻌﺗ و ﻪﻌﻟﺎﻄﻣ ﻴﻴ
ﻣ ﻦ ﻴ ﻟﺎﻌﻓ ناﺰ ﻴ ﮔﺪﻧرادزﺎﺑ ﺖ ﻲ
ﺮﻫ لﻮﺼﺤﻣ ﻳ
ا زا ﻚ ﻳ آﺮﻓ مﺎﺠﻧا نوﺪﺑ ﺎﻬﻧژ ﻦ ﻳ
ﺎﻫﺪﻨ ي
ﻧﻻﻮﻃ ﻲ ﺺﻟﺎﺧ زﺎﺳ ي ﻧ روﺪﻘﻣ ﻲﻤ ﺷﺎﺑ ﺪ . ﻟ ﺑ اﺬ ﻴ ﺮﻫ نﺎ ﻳ زا ﻚ
ﺎﻬﻧژ ي ﺳ رد هﺪﺷ نﻮﻠﻛ pgip
ﻴ گﻮﻟوﺮﺘﻫ ﻢﺘﺴ ﻲﻣ
ﻧاﻮﺗ هار ﺪ
ﺮﺗ ﺐﺳﺎﻨﻣ ي
ﺳرﺮﺑ ﺖﻬﺟ ﻲ
ﻣ ﻴ ﮔﺪﻧراد زﺎﺑ ناﺰ ﻲﺻﺎﺼﺘﺧا ﻲ
زا ﻚﻳ ﺮﻫ ﺪﺷﺎﺑ ﺎﻬﻧآ
. ﺶﻘﻧ ﻪﻌﻟﺎﻄﻣ نﺎﻜﻣا ﻖﻴﻘﺤﺗ ﻦﻳا رد
pgip1 نژ هﺪﺷ ﻢﻫاﺮﻓ اﺰﻠﻛ هﺎﻴﮔ رد ﻲﺻﺎﺼﺘﺧا رﻮﻃ ﻪﺑ
ﻲﻣ نﺎﺸﻧ ﻪﻛ ﺖﺳا نژ ﻦﻳا نﺎﻴﺑ ﺪﻫد
ﻲﻣ ﻧاﻮﺗ ناﺰﻴﻣ ﺪ
ﺗ چرﺎﻗ يرﺎﻤﻴﺑ ﻪﻌﺳﻮ
S. sclerotiorum
رد ار گﺮﺑ ﺎﻫ ي
ﺪﻳﺎﻤﻧ رﺎﻬﻣ اﺰﻠﻛ هﺎﻴﮔ .
نژ نﺎﻴﺑ ﻪﺑ طﻮﺑﺮﻣ ﺞﻳﺎﺘﻧ ﻖﻴﻘﺤﺗ ﻦﻳا رد
pgip1
رد
هرﺎﻤﺷ ﺖﺨﻳراﺮﺗ ياﺰﻠﻛ هﺎﻴﮔ ﻪﻛ داد نﺎﺸﻧ اﺰﻠﻛ هﺎﻴﮔ 9
هرﺎﻤﺷ ﺖﺨﻳراﺮﺗ هﺎﻴﮔ و ﺖﻣوﺎﻘﻣ ناﺰﻴﻣ ﻦﻳﺮﺘﺸﻴﺑ ياراد 5
شﺮﺘﺴﮔ ﻞﺑﺎﻘﻣ رد ﺖﻣوﺎﻘﻣ ناﺰﻴﻣ ﻦﻳﺮﺘﻤﻛ ياراد چرﺎﻗ
S. sclerotiorum
ﻲﻣ ﺷﺎﺑ ﺪﻨ . ﻂﻴﺤﻣ رد نﺎﻫﺎﻴﮔ ﺪﺷر
يﻮﮕﻟا ﺮﻴﻈﻧ ﻲﻟﻮﻜﻠﻣ ﺪﻫاﻮﺷ و ﻦﻴﺴﻳﺎﻣﺎﻧﺎﻛ يوﺎﺣ ﻲﺑﺎﺨﺘﻧا نژ رﻮﻀﺣ PCR pgip1
دﻮﻤﻧ ﺪﻴﻳﺄﺗ نﺎﻫﺎﻴﮔ ﻦﻳا رد ار .
ﺖﺴﻳز ﺞﻳﺎﺘﻧ سﺎﺳاﺮﺑ نﺎﻫﺎﻴﮔ ﻦﻳا ﺖﻣوﺎﻘﻣ ناﺰﻴﻣ ،ﻲﺠﻨﺳ
ﺮﺑاﺮﺑ رد
S. sclerotiorum
توﺎﻔﺘﻣ رﺎﻴﺴﺑ ﻲﻣ
ﺷﺎﺑ ﺪ . ﺎﺠﻧآ زا
ﺮﻫ ﻪﻛ ناﻮﻨﻋ ﻪﺑ هﺪﻣآ ﺖﺳد ﻪﺑ ﺖﺨﻳراﺮﺗ نﺎﻫﺎﻴﮔ زا ﻚﻳ
بﻮﺴﺤﻣ ﻞﻘﺘﺴﻣ ﻦﻳﻻ ﻚﻳ ﻲﻣ
ددﺮﮔ دورو زا ﻲﺷﺎﻧ ﻪﻛ
ﻲﻓدﺎﺼﺗ
T-DNA
هﺎﻴﮔ نآ مﻮﻧژ رد ﺮﻈﻧ درﻮﻣ نژ يوﺎﺣ
ﻲﻣ ﺷﺎﺑ ﻲﻣ ﺮﻈﻧ ﻪﺑ اﺬﻟ ﺪ ﺎﻬﻧآ ﺖﻣوﺎﻘﻣ ناﺰﻴﻣ توﺎﻔﺗ ﻪﻛ ﺪﺳر
هﺪﺷ هدﺎﻔﺘﺳا چرﺎﻗ ﻪﻴﻠﻋ ﻲﻣ
ﻧاﻮﺗ ﺖﻴﻌﻗﻮﻣ توﺎﻔﺗ زا ﻲﺷﺎﻧ ﺪ
د نژاﺮﺗ ﻦﺘﻓﺮﮔ راﺮﻗ ﺪﺷﺎﺑ هﺎﻴﮔ مﻮﻧژ ﻒﻠﺘﺨﻣ طﺎﻘﻧ ر
. ﻦﻳا
ﻪﺘﻓﺮﮔ راﺮﻗ ﺪﻴﻛﺄﺗ درﻮﻣ ﺰﻴﻧ يﺮﮕﻳد ﻦﻘﻴﻘﺤﻣ ﻂﺳﻮﺗ ﻪﺘﻜﻧ
(Bhall & Smith, 1998; Stem & Kooper, ﺖﺳا
1997)
. ﺳرﺮﺑ ﻪﺑ طﻮﺑﺮﻣ تﺎﻌﻟﺎﻄﻣ ﻲ
ا ﻳ ﮔ رد ﺖﻣوﺎﻘﻣ دﺎﺠ ﻴ
نﺎﻫﺎ
ﺖﺳد ﻪﺑ اﺮﺷ رد هﺪﻣآ ﻳ
مزﻻ و ﺖﺳا هﺪﺷ مﺎﺠﻧا ﻪﻧﺎﺨﻠﮔ ﻂ
ا ﺖﺳا ﻳ چرﺎﻗ ﺮﺑاﺮﺑ رد ﺖﻣوﺎﻘﻣ ﻦ
S. sclerotiorum
رد
اﺮﺷ ﻳ ا ﻪﻋرﺰﻣ ﻂ ي
ﻧ ﻴ ﺳرﺮﺑ درﻮﻣ ﺰ ﻲ
ﮔ راﺮﻗ ﻴ دﺮ .
REFERENCES
1. Afshari-Azad, H. (2001). The most important canola diseases. Nashr-e- Amozesh-e- Keshavazi. Pp.
1-17. (In Farsi).
2. Aguero, C. B., Uratsu, S. L., Greve, C., Powell, A. T. Labavitch, J. M., Meredith, C. P. & Dandekar, A.
M. (2005). Evaluation of tolerance to Pierce's disease and Botrytis in transgenic plants of Vitis vinifera L.
expressing the pear PGIP gene. Molecular Plant Pathology, 6(1), 43-51.
3. Bhalla, P. L. & Smith, N. (1998). Agrobacterium tumefaciens mediated transformation of cauliflower, Brassica oleracea var. botrytis. Molecular Breeding, 4, 531-541.
4. D’Ovidio, R., Raiola, A., Capodicasa, C., Devoto, A., Pontiggia, D., Roberti, S., Galletti, R., Conti, E., O’Sullivan, D. & DeLorenzo, G. (2004). Characterization of the Complex Locus of Bean Encoding Polygalacturonase-Inhibiting Proteins Reveals Subfunctionalization for Defense against Fungi and Insects. Plant Physiology, 135, 2424–2435.
5. DeLorenzo, G. & Ferrari, S. (2002). Polygalacturonase-inhibiting proteins in defense against phytopathogenic fungi, Curr Opin Plant Biol, 5, 295–299.
6. DeLorenzo, G., Ovidio, R. D. & Cervone, F. (2001). The role of polygalacturonase-inhibiting proteins (PGIPs) in defense against pathogenic fungi. Annu Rev Phytopathol, 39, 313-335.
7. DeLorenzo, G., Cervone, F., Bellicampi, D., Caprari, C., Clark, A. J., Desiderio, A., Devoto, A., Forrest, R., Leckie, F., Nuss, L. & Salvi, G. (1994). Polygalacturonase, PGIP and oligogalacturonides in cell–cell communication. Biochem Sci Trans, 22, 396–399.
8. DeLorenzo, G., Castoria, R., Bellincampi, D. & Cervone, F. (1997). Fungal invasion enzymes and their inhibition. In: Carrol, G. and P. Tudzynski. Eds., the Mycota. V. Plant Relationships Part B. Springer, Berlin, pp. 61–83.
9. Desiderio, A., Aracri, B., Leckie, F., Mattei, B., Salvi, G., Tigelaar, H., Van Roekel, J. S. C., Baulcombe, D. C., Melchers, L. S. , DeLorenzo, G. & Cervone F. (1997). Polygalacturonase-inhibiting proteins (PGIPs) with different specificities are expressed in Phaseolus vulgaris. Mol Plant-Microbe Interact, 10, 852–860.
10. Dixon, M., Jones, D., Keddie, J., Thomas, C., Harison, K. & Jones, J. (1996). The tomato Cf-2 disease resistance locus comprises two functional genes encoding leucine-rich repeats proteins. Cell, 84, 457–459.
11. Fallahi, F. (2006). Inhibitory activity of PGIP on polygalacturonase of sclerotiorum , isolation and cloning of pgip1 and pgip2 genes from Juls and Daneshjoo bean cultivars. M.Sc Thesis. Biology Dept., Faculty of Science, Razi Univ., Kermanshah, Iran.
12. Favaron, F., D’ovidio, R., Porceddu, E. & Alghisi, P. (1994). Purification and molecular characterization of a soybean polygalacturonase-inhibiting protein. Planta, 195, 80–87.
13. Ferrari, S., Vairo, D., Ausubel, F. M., Cervone, G. & DeLorenzo, G. (2003). Tandemly duplicated Arabidopsis genes that encode polygalacturonase- inhibiting proteins are regulated coordinately by different signal transduction pathways in response to fungal infection. Plant Cell, 15, 93-106.
14. Hahn, M. G., Buchell, P., Cervone, F., Doares, S. H., O’Neill, R. A., Darvill, A. & Albersheim, P.
(1989). Roles of cell wall constituents in plant pathogen interactions. In: E. Nester and T. Kosuge, Eds., Plant–Microbe Interactions. McGraw-Hill, New York, pp 131–181.
15. Huang, Q. & Allen, C. (2000). Polygalacturonases are required for rapid colonization and full virulence of Ralstonia solanacereaum on tomato plants. Physiol Mol Plant Pathol, 57, 77–83.
16. Johnston, D. J., Williamson, B. & Mcmillan, G. P. (1994). The interactions in planta of polygalacturonases from Botrytis cinerea with a wall-bound polygalacturonase-inhibiting protein (PGIP)
in raspberry fruits. J Exp Bot, 45, 1837–1843.
17. Kubicek, C. P., Mach, R. L., Peterbauer, C. K. & Lorito, M. (2001). Trichoderma: from genes to biocontrol. Journal of Plant Pathology, 83(2), 11-23.
18. Manfredini, C., Sicilia, F., Ferrari, S., Pontiggia, D., Salvi, G., Caprari, C., Lorito, M. & DeLorenzo, G.
(2005). Polygalacturonase-inhibiting protein 2 of Phaseolus vulgaris inhibits BcPG1, a polygalacturonase of Botrytis cinerea important for pathogenicity, and protects transgenic plants from infection. Physiol Mol Plant Pathol, 67(2), 108-115.
19. Moloney, M. M., Walker, J. M. & Sharma, K. K. (1989). High efficiency transformation of Brassica napus using Agrobacterium vectors. Plant Cell Rep, 8, 238–242.
20. Motallebi, M., Zamani, M. R. & Hosseinzadeh Colagar, A. (2003). Relationship between polygalacturonase activity and pathogenicity among Iranian isolates of Ascochyta rabiei. J Sci &
Technol Agric & Natur Resour, 6(4),159-169. (In Farsi).
21. Oelofse, D. D., Meyer, I. A., Riaan Arendse, S., Gazendam, I. & Berger, D. K. (2006). Apple polygalacturonase inhibiting protein1 expressed in transgenic tobacco inhibits polygalacturonases from fungal pathogens of apple and the anthracnose pathogen of lupins. Phytochemistry, 67(3), 255-263.
22. Powell, A. L., van Kan, J., ten Have, A., Visser, J., Greve, L. C., Bennett, A. B. & Labavitch, J. M.
(2000). Transgenic expression of pear PGIP in tomato limits fungal colonization. Mol Plant Microb Interact, 13, pp. 942–950.
23. Salvi, G., Giarrizzo, F., DeLorenzo, G. & Cervone, F. (1990). A polygalacturonase-inhibiting protein in the flowers of Phaseolus vulgaris L. Plant Physiology, 136, 513-518.
24. Sambrook, J. & Russell, D. W. (2001). Molecular cloning: a laboratory manual. Cold Spring Harbor Press, NewYork, NY.
25. Seidl, V., Schmoll, M., Scherm, B., Balmas, V., Seiboth, B., Migheli, Q. & Kubicek, C. P. (2006).
Antagonism of Pythium blight of Zucchini by Hypocrea jecorina does not require cellulase gene expression but is improved by carbon catabolism derepression. FEMS Microbiology Letters, Volume 257 Page 145 - April 2006
26. Shanmugam, V. (2004). Role of extracytoplasmic leucine rich repeat proteins in plant defence mechanisms. J Microbiological Research, 09-014
27. Sharma, K. K. (1987). Control of organ differentiation from somatic tissues and pollen embryogenesis in anther culture of B. juncea. Ph.D. thesis, Department of Botany, University of Delhi
28. Shieh, M. T., Brown, R. L., Whitehead, M. P., Cary, J. W., Cotty, P. J., Cleveland, T. E. & Dean, R. A.
(1997). Molecular genetics evidence for the involvement of a specific polygalacturonase, P2c, in the invasion and spread of Aspergillus flavus in cotton balls. Appl Environ Microbiol, 63, 3548–3552.
29. Stam, M. M. & Kooper, J. N. M. (1997). The silence of genes in transgenic plants. Ann Bot, 79, 3-12.
30. Tamura, M. G., Tao, R., Labavitch, J. M. & Dandekar, A. M. (2004). Transformation of persimmon with a pear fruit polygalacturonase inhibiting protein (PGIP) gene. Scientia Horticulturae, 103, 19-30.
31. ten Have, A., Mulder, W., Visser, J. & van Kan, J. A. (1998). The endopolygalacturonase gene Bcpg 1 is required for full virulence of Botrytis cinerea. Mol Plant Microbe Interact, 11, 1009–1016.
32. Zamani, M. R., Motallebi, M. & Arefpour, M. A. (2000). Comparative study of polygalacturonase activity from different Iranian isolates of Fusarium oxysporum. Iranian Journal of Agricultural Science, 31, 293-302. (In Farsi).
