Y HOC VitT NAM THÀNG 1 - SO 1/2015 TÀI LIÉU T H A M KHÀO
1. Ngò Ngpc Lién and Tran Còng Hòa (2012),
"Tìiyc trang ton thupng thanh quàn cOa giào vién héu hoc và mpt s5 yéu to nguy cp". Nói san Hói nghi khoa hgc- ky thuàt toàn quoc, pp. 16-21.
2. Pham Thi Ngoc (2010), Nghièn CÙÌJ bénh glong nghè nghiép ò giào vién tìéu hoc tai huyén Dóng Anh - thành pho Ha Nói và de xuàt càc giài phàp can thièp, Luàn àn Tién sT y hpc, Vién ve sinh dich t i Trung Udng.
3. Tran Duy Ninh (2010), Dành già thut trang roi Ioan giong nói cùa nò giào vièn tiéj hoc thành pho Thài Nguyén và hièu qua cùa mot so bién phàp can thièp, Luàn àn Tién sy Y hpc. Dai hpc Thài Nguyén.
Khièu Hihi Thu'òng and CS (2006), Nghièn cùU ton thu'dng thanh quàn và mot so yéu tó nguy ed cùa giào vién tiéu hoc huyén VQ Thu", tinh Thài Binh, Oé tài nhành nghién CÙXJ khoa hoc cap Bò.
Morrison M and T Angsuwarangsee (2002),
"Extrinsic laryngeal muscular tension ih patients with voice disorders", J Voice, 16(3), pp. 333-343.
Roy N., R. M. Merrill, S. Thibeault, et al.
(2004), "Prevalence of voice disorders in teaehers and the general population", J Speech Lang Hear Res, 47(2), pp. 281-293.
Smith E., J. Lemke, M. Taylor, et al. (1998),
"Frequency of voice problems among teaehers and other oceupations", J Voice, 12(4), pp. 480-488,
NGHIÈN CÙ'U U'NG DUNG KY THUAT NUOI CAY CUM TE BÀO GOC MÀU CUÓNG RÓN TAI BÉNH VIÈN NHI TRUNG UffNG
TOM
TATKy thuàt nuól eay eym tè bào CFU (Coiony Forming Unit) dupc sy dung dành già khà nang song và tao eym cùa té bào góc tao màu (HSCs). Muc tièu. U'ng dung ky thuàt nuòi cày cum té bào CFU trong dành già chat lUpng té bào màu cuóng rón sau y.ù ly và sau luu trff. Phudng phàp nghién cóU: Ky thuàt nuól cay cum té bào CFU dupc sy dung de dành già chat Iudng té bào MCR tai eàe thòi diè'm. Két qua:
305 mau màu cuóng rón dà dUpe nuói cày dành già khà nàng mpc cum CFU tal eàe thòi dié'm khàc nhau.
Két qua mpc cum CFU ehiém 96% tai thòi diém sau xù ly, 69%, 6 1 % và 72% lan lUpt tal thòi diém sau lUu trff 6 tìiàng, 12 thàng và 24 tiiang. Quan sat thay cà ba lo^i cum CFU-GM; CFU- GEMM; BFU-E ben càc mSu cay có két qua. Kèìlu$n: Ky thuàt nuòi cày cum CFU có y nghla trong viéc dành già chat mau màu cuong rón sau \ff ly, sau luli trff và tru'óc khi tién hành ghép cho bènh nhàn.
TÓ khóa: nuòi cày CFU; màu cuóng ron; CFU- GM; CFU- GEMM; BFU-E.
* Bénh vién Nhi Trung udng Chiù tràch nhiém chinh: Tran Minh Dién Email: [email protected] Dt: 0982222888 Ngày nhàn bài: 20/11/2014
Ngày phàn bién khoa hpc: 30/11/2014 Ngày duyét bài: 15/12/2014
V ù B ì n h Q u a n g * , Ngo Dlèm N g p c * , Nguyén T h i T h a n h M a i * , T r a n M i n h D i é n *
SUMMARY
APPLY COLONY FORMIN UNITS ASSAYS ON CORD BLOODS CELLS AT NATIONAL
HOSPITAL OF PEDIATRICS CFU (Coiony Forming Unit) assays was used to assess one of survival capacities of Hematopoetie stem cells, based on the eapacity of proliferation and difirenciation of HCSs to the colonies. Objectives: 1.
Applying CFU assays. 2. Initial evaluation of quality of HSCs from Cord Blood (CB) using CFU assay.
Methods: HSCs from CB were eultured in medium StemfifACS HSC'CFU and were determme the number and the morphology after 14 days. The type of CFU was analysised are: CFU-GM; CFU- GEMM; BFU-E.
Resuits: 305 samples of HSCs from CB were eultured and analysied. The success rate of CFU assays are: post processing (96%), postthaw 6 months (69%), postthaw 12 months (61%), postthaw 24 months (72%).
Conclusion: CFU assays have an important role in the assessing procedure quality of HSCs fram CB.
Keywords: CFU, HSCs, CFU-GM; CFU- GEMM;
BFU-E I. OÀT VÀN DE
Trong qua trình phàt tnén, té bào gÓe tao màu {HSCs) trai qua sff phàn chia, t y tai tao và tàng sinh de tao ra càe té bào tìèn thàn tao màu {hematopoietic progenitors). Sau dò, càc té bào
Y HOC VIÉT NAM THÀNG 1 - S O 1/2015
này tìèp tue biét hóa de tao cac tè bào^màu trUòng thàiih là eàe té bào lympho T và B, tè NK, té bào duói gai, bach eau mono/ dai thyc bào, bach càu hat, hóng càu và tìeu càu. _NhÌéu thù;
nghiém in vitro và in vivo dà du'dc sy dung de mò tà càc tè bào HSCs ò càc giai doan cùa qua trình biét hóa, trong dò CFU (coiony forming unit) là ioai thy nghiém cho phép dành già tinh tao dòng cùa càc tè bào này (1).
Co mot so loai CFU Qxitìc su dung de dành già tinh tao dòng eùa càc HSCs nhff: Ddn vj tao eum dòng hóng eau {erythroid, CFU-E). Dòn vi tao eum dòng bach càu hat {granulocyte, CFU- G). Ddn vj tao eum dòng bach càu mono/dai thyc bào {monocyte/macrophage, CFU-M). Ddn vj tao cum dòng bach càu hat- bach cau nionó/dai ' thffc bào {granulocyte- monocyte/macrophage, CFU-GM). Tè bào góc djnh hffdng sinh tuy {granuiocyte-erythrold- monocyte/maavphage-megakaryocyte, CFU- GEMM), sé biét lioà de thành càc té bào gòc ddn nàng djnh hffóng eùa mot dòng té bào màu nhu dòng hat- mono (CFU- GM), dòng hóng rau (CFU- E) và dòng tiéu C3u (CFU- megakaryoeyte) (3)
De tài xày dffng ngàn hàng màu cuong ròn d Bénh vién Nhi Trung Udng dà dffdc thffc hién tff nàm 2010, vói nguon màu cuong ròn ty nhffng già dinh có con bj bénh và nhùTig già dinh có nhu cau Iffu giff màu cuóng rÓn dff phòng de phuc vu eho viéc dieu tri bènh hay tff nhffng ngffòi tình nguyen hièn cho cpng dong. Cùng vói
càe ky thuàt khàc, ky thuàt nuói cày cum té bào CFU du'dc nghién effu thyc hièn dà góp phàn vào cóng viéc dành già chat lu'dng té bào màu cuóng rón Ò càe giai doan khàc nhau eùa qua trình y.ù ly, bào quàn và tru'dc ghép. Ty dò, chùng tòi tién hành nghièn cffu này vói muc tièu nhd sau:
&ng dung ky thuàt nuói cày cum te bào CFU trong dành già chat lu'dng té bào màu cuóng rón sau xóly và sau Idu tró.
II. DÓI TU'ONG VÀ PHU'ONG PHÀP NGHIÉN CÙTJ 2.1. DÒI tu'dng nghièn cù'u
Càc mau màu cuóng rón cùa nhffng già dinh dàng ky Iffu giff tff nàm 2010-2014 tai Ngàn hàng màu cuóng rón, Khoa Ngàn Hàng Màu, Bénh vlén Nhi Trung ddng
2.2. Phffdng phàp nghién cù'u Ky thuàt nuól cày cum tè bào CFU dffdc sff dung de dành già chat lu'dng té bào MCR tal eàe thdi diém sau xff ly và sau Idu trff.
Su dung 0.5ml MCR nuòi cày trong mói tìUÒng StemMACS HSC-CFU (Human) (Mìltenyl-Blotec, Gennany), trai dèu lèn dTa nuòi eay (35mm^). Ù ò 37^, 5%C0^ trong 14 ngày. Sau 14 ngày, quan sàt và dèm so lu'dng tùTig eum té bào dffa tìieo hình thài dffdi kinh hien vi soi ngffdc.
III. KET QUA
3.1. Ky thuàt nudi cày cum tè bào CFU
Nghién cùU 305 mau MCR dddc nuól cày eum CFU tal eàe thòi diém: sau xff ly, sau Iffu trff 6 thàng, 12 thàng và 24 thàng.
Bang 1: SÓ mau MCR dUde nuói cày eum CFU tal càc thòi diè'm Sò' lan và thòi diè'm nudi cày
Nudi caiy 1 lan - Sau xff ly -Sau càt giff 6 thàng - Sau eat giff 12 thàng -Saucàt^iy 24 thàng Nudi cay 2 lan
- Sau xy ly và sau càt giff 6 thàng - Sau xy ly và sau càt giy 12 thàng - Sau xy ly và sau càt giy 24 thàng - Sau eat qiy 12 thànq và 24 thànq Nudi cày 3 Tàn
Sau xy ly Sau cat giy 12 thàng Sau càt giff 24 thànq
Sd màu 240 169 Ì3 22 36 55 8 43
1
3
10
Y HOC VIET NAM THÀNG 1 - SÒ 1/2015 Hình J;Thòi diém eàe mau MCR 6\Sóc nuòi cày CFU
sau XLfly 1? 6 thang 12thang 1124 thang
3.2. Két qua nudi càfy cum t è bào CFU:
Hình 2: Kèt qua mpc cum CFU tai càe thdi diém khàc nhau Sau xi> IV 6 thàng
có mot cum CFU khòng inipr'"FU
3.3. Sd lu'dng càc dòng t è bào gdc t a o màu trèn 1 dia nudi cày:
Ba hinh thài cum CFU chù yèu là BFU-E, CFU-GM, CFU-GEMM sé dUde phàn tich trèn tffng dia và lày già trj trung bình eùa 2 dTa. Tff so Iffdng càc cum CFU dém dUdc trén dia, chùng tói làp biéu do so sành giffa càc thòi diém nuói cay vdi tffng dòng té bào khàc nhau.
Hình 3: Sò lu'dng trung bình eàe CFU trong 1 dia nuòi cày tai càc thòi diè'm
6 , 0
*^;i
• OthB l?UiB 1 -"-ItliB
Y HOC VIÉT NAM THÀNG 1 - SÓ 1/2015 3.4. Hình ành m o t sd cum CFU chù yéu du'dc phàn tich
Hình 4: Hình ành eum CFU cho mot so dòng tè bào
IV. BAN LUÀN
Trong vòng 4 nàm tff 2010 dèn 2014, chùng tói dà thu thàp và càt giff dffde 305 mau màu cuong rón. Trong 305 mau này, chùng tói thffc hièn 380 làn nuòi cay tal cac thòi diè'm khàc nhau de dành già khà nàng mpc eum CFU, cu thè có 231 mau dà dddc nuói cày ngay sau khi xff ly ban dau de dành già chat Iffdng mau sau xff ly và trdòc khi luu trff, chiém 6 1 % . 21 mau ùùcic nuòi eay tal thòi dlèm 6 thàng, chièm 5 %.
78 mau dffdc nuòi cày tal thòi diem 12 thàng, ehiém 2 1 % , và 50 mau dUde nuòi cày tal t h t ì diém 24 thàng, ehiém 13%. Néu tfnh theo so thòi diém nuói cay trèn mot mau thi eò 240 mau dutìe nuòi eay tal 1 thòi dlèm sau xff ly, 55 mau dffdc nuói cay tal hai thòi diém: sau xff ly và sau Iffu trff hoac 6 thàng, hoac 12 thàng, hoac 24 thàng de dành già chat Iffdng Idu trff tnang thòi gian ngàn, trung bình và dai. Có 10 mau dupc nuòi cày tal 3 thòi diem: sau xff ly, sau luli trff 12 thàng và 24 thàng (Bang 1 và Hình 1)
Ve két qua nuòi cày cum CFU, dói vói càc mau sau xù ly, ty Ié mau thành cóng, quan sàt thày mpc càc cum CFU chièm 96%. Tuy nhién, ty Iè này thay doi d càc thdi diém nuói cày sau Iffu trff. Tal thdi diém sau lUu trff 6 thàng, 12 thàng và 24 thàng, ty Ié mpc eum CFU co két qua lan ludt tà 69%, 6 1 % và 7 2 % . Trong nghièn eùff cùa Anagnostakis cóng bo nàm 2014, ty Ié mpc cum CFU chung cùa càe mau sau lUu trff 6, 12, 24 thàng làn lUdt là 79.39%, 80.48% và 80.66%
(7) (Hình 2).
Trono 55 màu Cùtic kiem tra tal 2 thòi dlèm, eó 12 mau eó két qua mpc eum CFU tòt tal tal thòi diém sau xff ly, nhutig lai khóng mpc cum tal càc thòi diém nuòi eay tiép theo, trong dò 2 màu khóng mpc tal t h t ì diem 6 thàng và 10 màu khòng mpc tai thòi diem 12 thàng. Chùng tòi ly^
ehpn 10 màu eó két qua mpc eum CFU thành còng tai thòi diém sau xff ly de tiép tue dành già chat Iffdng tal 2 thòi diem sau 12 thàng và sau 24 thàng. Jronq dò, 3 mau mpc eum CFU tòt tal eà 2 thòi diém này, 2 màu ehi mpe eum CFU tal thòi diém 12 thàng và 5 mau khòng mpe cum CFU tai cà 2 thòi diém. Ngoài ra, trong tong so 305 màu dffde tién hành nuòi eay CFU, eó 1 màu khòng mpc eym CFU tal thdi diè'm sau xff ly và 6 thàng, và 1 màu khòng mpe eum CFU tal thòi diém 12 và 24 thàng.
Khi xem xét ve kèt qua mpc cum CFU eùa eàe màu màu cuóng rón dddc nuói cày, chùng tòi nhàn thày ràng hàu hèt càc mau that bai khóng mpc eym CFU thuóe ve càe nhóm mau sau lUu trff. Diéu này mot mat eó the dffpc ly giài vì ty Ié song eùa tè bào gÓc màu cuong rón sé giàm di theo thdi gian lUu trff, màt khàe chùng tòi chu'a loai trff càc nguyén nhàn lièn quan dén ky thuàt n h d ky thuàt xff ly, lUu trff, rà dòng và ky thuàt nuòi cày. Mot so màu khi rà dòng sau Iffu trff khòng ^Móc rffa chat bào quàn DMSO, mot so màu bì dòng khi tìèn hành nuòi cày. Màt khàc, trong nghién cùU này, ty Ié khòng moc cum CFU cùa chùng tòi khòng giàm dàn dói VÓI eàe màu sau luli trff 6 thàng, 12 thàng và 24 thàng. Ty Ié này làn Iddt là 69%, 5 1 % và 72%.
Diéu này eó the ly giài bài ky thuàt nuói cày eum tè bào CFU dffdc thffc hién d eàe thòi diém kliàc nhau vói mot c3 mau khàe nhau, cu the là so màu dupc dành già tai thdi diém sau IUTJ trff 6 thàng là 5%, sau 12 thàng là 2 1 % và sau 24 thàng là 13%. Vì vày ty Ié này chda thffc sff phàn ành chinh xàc dddc ty Ié moc hoàc khóng mpe eym tai càe thòi diém này. Hdn nffa, day mài ehi là nghièn cffu bdóe dau, chùng tòi can phài so sành kèt qua nuól cày CFU vdi càc chi so dành già chat Iffdng té bào màu cuÓng rón khàe
Y HOC VIÈT NAM THÀNG 1 . SO 1/2015 nhff ehi so CD34+, ehi sò t è bào TNC và nhuóm
tè bào liàng trypan. Kèt qua so sành sé dddc còng bo trong mot bào eao mang tình tong quàt và day dù hdn.
Tff biéu do ta thày rang, eàe dòng t è bào da tièm nàng (BFU-E, CFU-GM và CFU-GEMM) dèu eó sff suy giàm sò lu'dng cum tè bào trung bình theo thdi gian Idu trff (7). Kèt qua này cQng tUdng tff VÓI nghién effu cùa nhóm tàc già Anagnostakis nàm 2014. Diéu dò eho thày ràng, eàe màu màu cuong ròn sé màt dan di khà nàng bièt hóa thành nhiéu dòng te bào khàe nhau, chi giff dffde khà nàng bièt hòa thành mot vài dòng xàc djnh khi Iffu trff ò thòi gian dai. Tuy nhién, ttieo nghién euff eùa Yoo HK nàm 2007, dói vói càc mau sau Iffu trff, chi so CFU-GM dffdc xem là mot chi sò tìn cày de dành già khà nàng mpe mành ghép khi Iffa ehpn càc ddn vj t é bào goc cho ghép, vì nhàn thày chi có CFU-GM có sff khàc bièt eò y nghTa khi so sành vói cac ehi so dành già chat Iffdng khàc nhd CD34+ và TNC trén cac bénh nhàn ghép (8) (Hình 3).
V. K f r LUiSiN
Nghién effu 305 mau màu cuong ron dà dudc nudi cày dành già khà nàng mpc cum CFU.
Két qua mpc cum CFU ehiém 9 6 % tal thdi diém sau xff ly, 6 9 % , 6 1 % và 7 2 % làn l'ffdt tai thdi
diém sau lu\i trff 6 thàng, 12 thàng và 24 thàng.
Quan sàt thày eà ba loai eym CFU-GM; CFU- GEMM. Dièu này có y nghTa quan trong trong viéc danh già cliàt màu màu cuóng rón sau xff ly, sau luti trff và tru'óc khi tién hành ghép eho bénh nliàn.
TÀI LIÈU T H A M KHÀO
1. Proulx C. (2014). ''Human Hematopoietic Progenitor Celi Assay".
2. Yiping Fan et al. (2010). "Unravelling the Mystery of Stem/Progenitor Cells in Human Breast Milk", PLoS ONE; 5(12):el4421
3. Miltenyi Biotec GmbH: User Guide of StemMACS HSC-CFU Media (human).
4. Broxmeyer H.E. et al. (1992). "Growth charaeterìstics and expansion of human umbillcal cord blood and estimation of its potential for transplantation in aduits", Proc. Nati. Acad. Sci.
USA;(89): 4109-4113.
5. Kaufman D.S. et al. (2001). "Hematopoiebe eolony-forming cells derived from human embrvonic stem cells", PNAS; (98): 10716-10721.
6. loannis Anagnostakis et al. (2014).
"Sueeessful short term cryopreservation of volume redueed cord blood units in a cryogenic meehanieal freezer: effects on celi recovery, viability and elonogenlc potential". Trans and cel eng; (54):2U-223.
DÀNH GIÀ HIÈU QUA DIEU TRI BÉNH VIÉM QUANH RÀNG MAN TINH BANG PHUaNG PIHÀP KHÒNG PHÀU THUAT
N g u y e n T h i M a i Phu-ffug*, T r a n V à n K h à n h * , N g u y e n T r o n g T u e * , T r a n H u y T h i n h * , L e V à n H i r n g * , N g u y e n T h i H a * , T ^ T h à n h V à n *
TOM TAT
Nghién effu dupc tien hành vói muc dich dành già sy thay dól ve làm sàng, can làm sàng, và so lUpng vi khuan Actinobaclllus actlnomyeetemcomitans (A.
actinomycetemeomitans), Porphyromonas gingivalis (P. glngivalis) cùa 70 bénh nhan vièm quanh ràng thè man tình trUde và sau diéu tri 03 thàng bang phUOng phàp khóng phau thuàt. Ky thuàt realtime PCR dUpc
* TrUòng Dai hpe Y Ha Nói
Chju trach nhiém chinh: Nguyen Thj Mai PhUPng Email; [email protected] Dt: 0918422450 Ngày nhàn bài: 15/11/2014
Ngày phàn bién khoa hpc: 25/11/2014 Ngày duyét bài; 5/12/2014
ùhg dung de djnh lupng vi khuàn A.
actìnomycetemcomitans, P. ginglvalis. Két qua cho thày diéu trj bang phUPng phàp khòng phau thuàt rat có hiéu qua ve iàm sàng eung nhU so lUpng A.
aetinomyeetemcomitans, P. glngivalis trUóe và sau dièu tn eó y nghia (p<0,05): chi sò viém Idi (Gì) 2,37
± 0,93 giàm 0,97 ± 0,74 (p<0,001); dò sàu tùi (PPD) 5,78 ± l,35mm giàm 3,86 ± 1,42 mm (p<0,001);
màt bàm dinh làm sàng (CAL) 5,73 ± 3,15 giam 4,90
± 3,09 mm (p< 0,001); so lUpng vi khuan A aetinomycetemcomitans và P. gingivalis giàm dàng ké tu 20,29 ± 3,3 et, 20,35 ± 3,94 Ct xuong 26,45 ± 3,62 Q,và 24,80 ± 4,67 Ct.
Tó khóa: Realtime PCR, A.
actinomycetemeomitans, P. gingivails, viém quanh ràng man tinh
