EFEK SITOTOKSIK DAN PENGHAMBATAN KINETIKA
PROLIFERASI FRAKSI ETIL ASETAT
EKSTRAK ETANOLIK TANAMAN CEPLUKAN
(Physalis angulata Linn.) TERHADAP SEL HeLa
SKRIPSI
OLEH :
ALIA EVANINGRUM K 100030168
FAKULTAS FARMASI
UNIVERSITAS MUHAMMADIYAH SURAKARTA
SURAKARTA
EFEK SITOTOKSIK DAN PENGHAMBATAN KINETIKA
PROLIFERASI FRAKSI ETIL ASETAT
EKSTRAK ETANOLIK TANAMAN CEPLUKAN
(Physalis angulata Linn.) TERHADAP SEL HeLa
SKRIPSI
Diajukan untuk memenuhi salah satu syarat mencapai
Derajat Sarjana Farmasi (S.Farm) pada Fakultas Farmasi
Universitas Muhammadiyah Surakarta
di Surakarta
Oleh :
Alia Evaningrum
K 100030168
FAKULTAS FARMASI
UNIVERSITAS MUHAMMADIYAH SURAKARTA
SURAKARTA
iii
PENGESAHAN SKRIPSI
Berjudul :
EFEK SITOTOKSIK DAN PENGHAMBATAN KINETIKA
PROLIFERASI FRAKSI ETIL ASETAT
EKSTRAK ETANOLIK TANAMAN CEPLUKAN
(Physalis angulata Linn.) TERHADAP SEL HeLa
Oleh :
Alia Evaningrum K 100030168
Dipertahankan di hadapan Panitia Penguji Skripsi
Fakultas Farmasi Universitas Muhammadiyah Surakarta
Pada tanggal 27 Januari 2007
Mengetahui,
Fakultas Farmasi
Universitas Muhammadiyah Surakarta
Dekan,
Dra. Nurul Mutmainah, M.Si., Apt.
Pembimbing Utama Pembimbing Pendamping
PERSEMBAHAN
Kebenaran itu datang dari Tuhanmu,
maka janganlah kamu menjadi orang
yang ragu-ragu
(QS. Al Baqarah : 147)
Barang siapa yang m elanggar janji, berarti ia m elanggar
janji setia kepada dirinya sendiri, dan barang siapa
m enepati janjinya kepada A llah m aka A llah akan
m em berinya pahala yang besar
(Q S . A l Fat-h : 10)
Karya ini kupersembahkan
kepada-Mu ya Allah sebagai pencipta
alam semesta, sumber kekuatan
serta tujuan akhir hidupku
Kepada Bapak dan Ibuku, terimakasih atas tiap do’a, cinta serta curahan kasih sayangnya
Untuk adik dan kakak-kakakku tersayang, terimakasih atas dukungannya
Untuk teman dan sahabatku
U ntuk M as Edw in, terim akasih atas w aktu,
perhatian, pengorbanan dan kasih sayangnya
selam a ini
v
DEKLARASI
Saya menyatakan bahwa skripsi ini adalah hasil pekerjaan saya sendiri dan
sepanjang pengetahuan saya tidak berisi materi yang dipublikasikan atau ditulis orang
atau telah dipergunakan dan diterima sebagai persyaratan penyelesaian studi pada
universitas lain, kecuali pada bagian-bagian tertentu yang telah dikatakan dalam teks.
Apabila skripsi ini merupakan jiplakan dari karya orang lain, maka saya siap
menerima sanksi baik secara akademik maupun hukum.
Surakarta, Januari 2007
Peneliti
KATA PENGANTAR
Alhamdulillahhirabbilalamin, berkat anugerahNya penulis dapat
menyelesaikan skripsi ini. Segala ciptaanNya baik di langit ataupun di bumi,
merupakan tanda kebesaranNya, bagi orang yang berfikir.
Skripsi yang berjudul EFEK SITOTOKSIK DAN PENGHAMBATAN
KINETIKA PROLIFERASI FRAKSI ETIL ASETAT EKSTRAK ETANOLIK
TANAMAN CEPLUKAN (Physalis angulata Linn.) TERHADAP SEL HeLa ini
disusun sebagai salah satu syarat untuk mencapai derajat Sarjana Farmasi (S.Farm) di
Fakultas Farmasi Universitas Muhammadiyah Surakarta.
Penelitian yang dikerjakan dalam skripsi ini merupakan sekelumit kecil dari
upaya untuk memerangi penyakit kanker. Manfaat yang besar maupun kecil sangat
kami harapkan dari karya ini, khususnya bagi pengembangan ilmu pengetahuan.
Kritik dan saran yang membangun sangat kami harapkan untuk meningkatkan bobot
ilmiah dari karya ini.
Dalam penyusunan skripsi ini penulis banyak mendapatkan bimbingan dan
dorongan dari berbagai pihak, sehingga penyusunan skripsi ini dapat terealisasikan.
Untuk itu penulis menyampaikan terimakasih kepada :
1. Dra. Nurul Mutmainah, M.Si., Apt., selaku Dekan Fakultas Farmasi Universitas
Muhammadiyah Surakarta.
2. Maryati, M.Si., Apt., selaku pembimbing utama yang telah meluangkan waktu,
tenaga dan pikiran dalam membimbing kami serta untuk semua nasehat yang
vii
3. dr. EM Sutrisna, M.Kes, selaku pembimbing pendamping yang telah meluangkan
waktu, tenaga dan pikiran untuk membimbing kami.
4. Dr. M. Kuswandi, SU., M.Phil., Apt., selaku dosen penguji, atas saran dan
koreksinya untuk memperbaiki skripsi ini.
5. Wahyu Utami, M.Si., Apt., selaku dosen penguji, atas saran dan koreksinya untuk
memperbaiki skripsi ini.
6. Kru Laboratorium Fakultas Farmasi UMS.
7. Kru Laboratorium Parasitologi UGM, khususnya Mbak Rumbi yang telah banyak
membantu pengerjaan skripsi ini.
8. Ayah, ibu, kakak, adik yang selalu memberi dukungan dalam pengerjaan skripsi
ini.
9. Teman-teman seperjuangan (Zaenab, Laila, Dewi Andon, Rina, Dewi Nur, Isna,
mbak Sri ) yang telah bersama-sama berjuang dalam pelaksanaan penelitian ini.
10.Sahabat-sahabatku (Yuni, Avi, Rika, Winda, Nina, Feri, Jarwo, Ari, Yusuf, Leo,
Fahmi) yang selalu memberi semangat, dukungan dan keceriaan.
11.Semua pihak yang telah membantu dalam penyusunan skripsi ini yang tidak dapat
kami sebutkan.
Semoga semua yang kita lakukan selalu dinaungi semangat keikhlasan
sehingga senantiasa menjadi amal ibadah di sisiNya.
Surakarta, Januari 2007
DAFTAR ISI
HALAMAN JUDUL... i
HALAMAN PENGESAHAN... ii
HALAMAN PERSEMBAHAN... iii
HALAMAN DEKLARASI... iv
KATA PENGANTAR... v
DAFTAR ISI ... vii
DAFTAR TABEL ... x
DAFTAR GAMBAR ... xi
DAFTAR LAMPIRAN ... xii
DAFTAR SINGKATAN... ivx
INTISARI... xv
BAB I. PENDAHULUAN A. Latar Belakang Masalah... 1
B. Perumusan Masalah... 4
C. Tujuan Penelitian... 4
D. Tinjauan Pustaka 1. Kanker ... 4
2. Kanker cervix ... 14
3. Sel HeLa ... 15
4. Skrining aktifitas tanaman obat Indonesia ... 15
ix
E. HIPOTESIS ... 23
BAB II. METODE PENELITIAN A. Rancangan Penelitian 1. Jenis penelitian ... 24
2. Variabel penelitian ... 24
B. Bahan dan Alat 1. Bahan penelitian ... 24
2. Alat penelitian ... 25
C. Jalannya Penelitian 1. Determinasi tanaman ... 26
2. Pembuatan serbuk simplisia………... 26
3. Ekstraksi dan fraksinasi... 26
4. Preparasi sel... 27
5. Panen sel ... 28
6. Pembuatan larutan uji ... 28
7. Uji sitotoksik dengan metode MTT ... 28
8. Uji penghambatan kinetika proliferasi ... 29
9. Analisis data ... 29
BAB III. HASIL DAN PEMBAHASAN A. Determinasi Tanaman Physalis angulata Linn. ... 32
B. Ekstraksi dan Fraksinasi ... 32
2. Uji penghambatan kinetika proliferasi ... 39
BAB 1V. KESIMPULAN DAN SARAN A. Kesimpulan ... 42
B. Saran ... 42
DAFTAR PUSTAKA ... 43
xi
DAFTAR TABEL
Tabel I. Hasil Uji Sitotoksik Fraksi Etil Asetat Ekstrak Etanolik Physalis angulata
Linn. terhadap Sel HeLa dengan Metode MTT…… ………... ... 35
Tabel II. Data Konsentrasi dan Probit Akibat Pemberian Fraksi Etil Asetat Ekstrak
Etanolik Physalis angulata Linn. dengan Metode MTT………... . 36
Tabel III. Hasil Uji Penghambatan Kinetika Proliferasi Fraksi Etil Asetat Ekstrak
Etanolik Physalis angulata Linn………… …... ………… …. ……….. .. 40
Tabel IV. Persamaan Kurva Absorbansi Sel Hidup sebagai Fungsi Waktu pada Uji
Penghambatan Kinetika Proliferasi dengan Metode
DAFTAR GAMBAR
Gambar 1. Skema Pembelahan Sel pada Sel Kanker……… ….. .….. … 11
Gambar 2. Cell Cycle Progression dan Regulator-regulatornya……… ….. ..…… 12
Gambar 3. Reaksi Reduksi MTT Menjadi Formazan……… ………… …. …..…. 22
Gambar 4. Skema Kerja Penelitian…... ……… …… …… .. 31
Gambar 5. Kristal Formazan……. ………. …….. ….. 34
Gambar 6. Profil Efek Sitotoksik Fraksi Etil Asetat Ekstrak Etanolik Physalis angulata Linn. terhadap Sel HeLa dengan Metode MTT... 35
Gambar 7. Kurva Probit Jumlah Sel vs Log Berbagai Kadar Sampel dengan Metode MTT……… ……… ….. 36
Gambar 8. Morfologi Sel HeLa……….. ….. ……… ….. …. …... 38
Gambar 9. Profil Pertumbuhan Sel HeLa Hasil Uji Penghambatan Kinetika Proliferasi dengan Fraksi Etil Asetat Ekstrak Etanolik Physalis angulata Linn…………. ……... ... 40
Gambar 10. Tanaman Ceplukan (Physalis angulata Linn.)………... ……… …. ... 50
Gambar 11. Bunga Ceplukan (Physalis angulata Linn.)….. ……… …. . 51
Gambar 12. Buah Ceplukan……… 51
xiii
DAFTAR LAMPIRAN
Lampiran 1. Surat Keterangan Determinasi……… ….. ..……... 47
Lampiran 2. Gambar Tanaman Ceplukan (Physalis angulata Linn.).…… …. ... 50
Lampiran 3 Gambar Bunga dan Buah Ceplukan (Physalis angulata Linn.)…… 51
Lampiran 4. Gambar Alat Soxhlet……….……… …. …... 52
Lampiran 5. Data Uji Sitotoksik Fraksi Etil Asetat Ekstrak Etanolik Tanaman
Ceplukan (Physalis angulata Linn.) terhadap Sel HeLa dengan
Metode MTT……… …………. …..53
Lampiran 6. Tabel Probit……… …. ………….. 54
Lampiran 7. Perhitungan IC50 Fraksi Etil Asetat Ekstrak Etanolik Tanaman
Ceplukan (Physalis angulata Linn.) terhadap Sel HeLa…… ….. .... 55
Lampiran 8. Data Absorbansi Uji Penghambatan Kinetika Proliferasi Sel HeLa
Akibat Perlakuan dengan Fraksi Etil Asetat Ekstrak Etanolik Tanaman
Ceplukan (Physalis angulata Linn.)………… ……… …….. ……… 56
Lampiran 9. Hasil Uji T Penghambatan Kinetika Proliferasi Sel HeLa Akibat
Perlakuan dengan Fraksi Etil Asetat Ekstrak Etanolik Tanaman
Ceplukan (Physalis angulata Linn.) Kadar 50 µg/ml dan 100
µg/ml……… ….. …… 57
Lampiran 10. Data Uji T Penghambatan Kinetika Proliferasi Sel HeLa Akibat
Perlakuan dengan Fraksi Etil Asetat Ekstrak Etanolik Tanaman
Ceplukan (Physalis angulata Linn.) Kadar 50 µg/ml dan 100 µg/ml
Lampiran 11. Data Uji T Penghambatan Kinetika Proliferasi Sel HeLa Akibat
Perlakuan dengan Fraksi Etil Asetat Ekstrak Etanolik Tanaman
Ceplukan (Physalis angulata Linn.) Kadar 50 µg/ml dan 100 µg/ml
pada Jam ke 48……... ... 59
Lampiran 12. Data Uji T Penghambatan Kinetika Proliferasi Sel HeLa Akibat
Perlakuan dengan Fraksi Etil Asetat Ekstrak Etanolik Tanaman
Ceplukan (Physalis angulata Linn.) Kadar 50 µg/ml dan 100 µg/ml
xv
DAFTAR SINGKATAN
Cdk : Cyclin Dependent Kinase
Cyc : Cyclin
DMSO : Dimethyl Sulfokside
DNA : Deoxyribo Nucleic Acid
ELISA : Enzim Linked Immuno Absorbent Assay
FBS : Fetal Bovine Serum
G1 : Growth phase-1
G2 : Growth phase-2
HPV : Human Papilloma Virus
IC : Inhibitory Consentration
MTT : (3-(4,5-Dimethylthiazol-2-yl)-2,5-diphenyltetrazolium bromide)
PBS : Phospat Buffer Saline
pRB : Protein Retino Blastoma
RPMI : Rosewell Park Memorial Institute
SDS : Sodium Dodecyl Sulphat
INTISARI
Kanker merupakan salah satu penyakit penyebab kematian utama di dunia, sedangkan kanker cervix masih menempati urutan pertama penyakit yang paling banyak menyerang wanita di Indonesia. Usaha penyembuhan kanker dengan obat (farmakoterapi) atau dengan senyawa kimia (kemoterapi) pada umumnya belum mampu memberikan hasil yang memuaskan sehingga banyak dijumpai cara-cara pengobatan alternatif antara lain dengan menggunakan obat-obat dari alam. Berdasarkan penelitian Sutrisna (2006), ekstrak etanol tanaman ceplukan mempunyai efek sitotoksik terhadap sel kanker payudara MCF-7 dengan IC50 sebesar 36,674
µg/ml. Penelitian ini bertujuan untuk menguji aktivitas sitotoksik fraksi etil asetat ekstrak etanolik tanaman ceplukan (Physalis angulata Linn.) serta mempelajari pengaruhnya terhadap kinetika proliferasi sel HeLa.
Preparasi ekstrak dilakukan dengan alat Soxhlet menggunakan pelarut etanol 96%, dan dilanjutkan dengan fraksinasi cair-cair menggunakan petroleum eter, kloroform dan etil asetat. Fraksi etil asetat diuji aktivitas sitotoksiknya terhadap sel HeLa dengan metode MTT dengan konsentrasi 31,25 ì g/ml; 62,5 ì g/ml; 125 ì g/ml; 250 ì g/ml; 500 ì g/ml, kemudian diinkubasi selama 24 jam dan dibaca absorbansinya dengan ELISA reader pada panjang gelombang 550 nm. Analisis akhir dilakukan dengan perhitungan nilai IC50. Uji penghambatan kinetika proliferasi dilakukan
dengan konsentrasi 50 µg/ml dan 100 µg/ml dan dibaca absorbansinya pada jam ke 24, 48 dan 72.
Hasil penelitian menunjukkan bahwa fraksi etil asetat ekstrak etanolik tanaman ceplukan mempunyai efek sitotoksik terhadap sel HeLa dengan IC50 sebesar
461,64 µg/ml. Uji penghambatan kinetika proliferasi menunjukkan bahwa fraksi etil asetat ekstrak etanolik tanaman ceplukan mampu memperpanjang kinetika proliferasi sel HeLa.
