اهی نوین رد کشاورزی و منابع طبیعی اولین همایش ملی ایده ها

(1)

هدیا یلم شیامه نیلوا یعیبط عبانم و یزرواشک در نیون یها

– هام نابآ 1397

The first national conference on novel ideas in agriculture and natural resources (November, 2018)

1268

قیقر رثا هدننک

کینکت اب نیاتشله واگ مرپسا تیسنج تبسن رب فلتخم یاه real-time

qPCR

یمتسر هدیپس

1

یریصن یگیب یقت دمحم،*

،2

یرظن دومحم ،3

یلیکو ییابطابط حلاص

4

،ماد داژن حلاصا و کیتنژ یوجشناد1

یماد مولع هورگ ناتسزوخ یعیبط عبانمو یزرواشک هاگشناد ،ییاذغ عیانصو ماد مولع هدکشناد ،

ناتسزوخ یعیبط عبانم و یزرواشک هاگشناد ،ییاذغ عیانص و ماد مولع هدکشناد ،یماد مولع هورگ ،داتسا2

داتسا3

رای یماد مولع هورگ ، م و یزرواشک هاگشناد ،ییاذغ عیانص و ماد مولع هدکشناد ،

ناتسزوخ یعیبط عبان

یماد مولع هورگ ،رایشناد4

ناتسزوخ یعیبط عبانم و یزرواشک هاگشناد ،ییاذغ عیانص و ماد مولع هدکشناد ، :لووسم هدنسیون * [email protected]

هدیکچ مهم ینم ندرک هریخذ اهدیئوزوتامرپسا رمع لوط ندرک ینلاوط ،فده و تسا یعونصم حیقلت رد هلحرم نیرت

ترارح هجرد رد

یم مک .دشاب قیقر لومعم یازجا زا یکی هدننک

مخت هدرز ،اه یم تظفاحم ییامرس کوش ربارب رد مرپسا زا هک تسا غرم

.دنک

قیقر تلاکشم هدننک

قیقر هلمج زا.تسا هدش یهایگ عبانم زا هدافتسا یارب لیامت شیازفا هب رجنم یناویح عبانم یواح یاه -

هدننک رز زا یراع هک یا مخت هد

یم غرم قیقر نیا .تسا دموردنآ ،دشاب یگژیو یاراد هدننک

مخت هدرز هب تبسن یصاخ یاه غرم

مخت هدرز یارب ینیزگیاج ناونعب هک تسا یم رارق هدافتسا دروم غرم

.دریگ قیقر داجیا ثعاب مرپسا ندرک کنخ و یزاس

ندش هکت هکت هب مرپسا تیساسح هدشDNA

نج تبسن رییغت هب رجنم هک یم یس

رثا هسیاقم روظنم هب رضاح شهوژپ .دوش

قیقر سیرت هدننک -

مخت هدرز قیقحت نیا رد .تسا هدش ماجنا مرپسا تیسنج تبسن رب دموردنآ و غرم قیقر زا سپ

هنومن ندرک -

،اه لولس فذح و ینم یوشتسش روظنم هب زا مرپسا یفاضا داوم ریاس و هدرم یاه

Swim up مرپسا زا سپس ،دش هدافتسا

شور زا هدش جارختسا Swimup

، جارختسا تفرگ ماجنا یکمن هتفای هنیهب شور هبDNA

. جارختسا زا سپ ،DNA

real-

time PCR تاعطق ریثکت یارب

90 ، 89 ، 79 نژ یارب بیترت هب یزاب تفج یاه

،PLP ،SRY تفج زا هدافتسا ابPAR

تفرگ ماجنا یصاصتخا یاهرگزاغآ نومزآ زا هدافتسا اب یرامآ زیلانآ و

t-test و تفرگ ماجنا هک دش هبساحم تیسنج تبسن

،داد ناشن هنومن رد

قیقر یاه سیرت رفاب اب هدش

- مخت هدرز نژ لماح یاهدیئوزوتامرپسا تیعمج نایم غرم و SRY

PLP

ینعم توافت هنومن رد هکیتروص رد .درادن دوجو یراد

قیقر یاه هدش یاهیئوزوتامرپسا نیب دموردنآ اب لماح

نژ وSRY PLP

ینعم توافت (دراد دوجو راد

05 / (P<0 زا هدافتسا و قیقر

هب رجنم دموردنآ هدننک شیازفا

یئوزوتامرپسا د

موزومورک لماح یاه X

یم .دوش ،تیسنج تبسن ،هدننک قیقر :یدیلک ناگژاو

،SRY PLP

همدقم نیرتمهم زا یکی یعونصم حیقلت یروانف

یم یلثمدیلوت یاه هدش هئارا تاناویح یکیتنژ حلاصا یارب هک دشاب

،کینکت نیا رد .تسا

یم لااب یکیتنژ شزرا اب رن ماد سأر دنچ اب اهنت (درک هیهت ار ماد نارازه حیقلت یارب زاین دروم مرپسا ناوت

14 ینم ندرک هریخذ .)

مهم نلاوط ،فده و تسا یعونصم حیقلت رد هلحرم نیرت یم مک ترارح هجرد رد اهدیئوزوتامرپسا رمع لوط ندرک ی

اریز ،دشاب

هلصاف هب هجوت اب .تسین نکمم تسدرود قطانم هب نآ لاقتنا ناکما هجیتن رد و هتفر نیب زا اعیرس قاتا یامد رد اهدیئوزوتامرپسا مرپسا نیب ینامز یام ندرک هریخذ یارب بسانم طیحم کی نتشاد ،یعونصم حیقلت و یریگ

قیقر ناونعب ینم ع زاین دروم هدننک

،تسا قیقر یم مهارف ار یطیارش هدننک لمحت ار یعونصم حیقلت و یرادهگن اب طبترم یعیبط ریغ طیارش دیئوزوتامرپسا هک دنک

ک (دن 9 .) قیقر لومعم یازجا زا یکی هدننک

مخت هدرز ،اه یم تظفاحم ییامرس کوش ربارب رد مرپسا زا هک تسا غرم

(دنک 1 ).

(2)

هدیا یلم شیامه نیلوا یعیبط عبانم و یزرواشک در نیون یها

– هام نابآ 1397

1269

ل نیئتورپوپی مخت هدرز یاهدیپیلوفسف رد دوجوم نیتیسل و اه

یم بوسحم مرپسا هدننک تظفاحم لماع ناونعب ،غرم (دوش

3 ) . روضح

مخت هدرز رد داوم یرس کی یم مرپسا سفنت زا تعنامم بجوم غرم

هدنز و ییابنج هک دوش یم شهاک ار مرپسا ینام

رما نیا .دهد

ک نیزگیاج یارب اضاقت هک هدش ببس (دبای شیازفا نیزگیاج داوم رگید ای نآ رثؤم شخب اب هدرز ندر

4 .) قیقر هلمج زا رگید هدننک

مخت هدرز زا یراع هک یم غرم

قیقر نیا .تسا دموردنآ ،دشاب یگژیو یاراد هدننک

مخت هدرز هب تبسن صاخ یاه دنترابع هک تسا غرم

یم هک یناویح داوم زا ندوب یراع :زا یگدولآ عبنم دناوت

قیقر یارب ندوب هدافتسا لباق ،دشاب هریخذ و یزاس

یراع ،بسانم یزاس

(تسا فلتخم یاهوراد و یرتکاب ،نومروه هنوگره زا ندوب 8

قیقر .) هکت هب مرپسا تیساسح داجیا ثعاب مرپسا ندرک کنخ و یزاس

ندش هکت یمDNA

(دوش 7 یم یسنج تبسن رییغت هب رجنم هک ) اهنت یسنج تبسن رد رییغت .دوش

یم هدنز رد رییغت اب دناوت و ینام

موزومورک لماح مرپسا درکلمع ای و X

(دیآ تسدب Y 18

مرپسا تیعمج نیب یسنج تبسن رد رییغت .) و X

ناشن Y کی هدنهد

(تسا هدش فیرعت شیپ زا سنج کی زا نینج دیلوت رد رثؤم درکیور 10

کینکت زا یرایسب .) یکیزیف یزاسادج یارب هتشذگ یاه

مرپسا وX

شور نیا و دنتشاد زکرمت Y یاوتحم ،کرحت رد توافت ساسا رب اه

مرپسا نزو وDNA . دنا هدش ماجنا اه

شور نیا اه

(دنتشاد ینم تیفیک رب بولطمان تارثا 11

شور یمامت .) شور کی رگید فرط زا .دندوبن قفوم یرتموتیسولف زجب یزاسادج یاه

هزادنا یارب دیدج یریگ

Real time qPCR سا

تقد اب هک ت 99

تسا هدش هدافتسا دصرد (

5 ) کینکت زا هدافتسا اب . Real time

یمqPCR قیقد روطب ار یسنج تبسن ناوت ناسآ و رت

(درک نییعت رت 10

.) نژ زا یکی موزومورک رد دوجوم یاه

،Y Sex- related

؛Y gene(SRY) یم

موزومورک هاتوک یوزاب یور نژ نیا ،دشاب (دراد رارق رمورتناس هب کیدزن Y

17 نژ هک اجنآ زا ) یمSRY

-

هدنز رب دناوت موزومورک ینام

یم دشاب رثؤم Y موزومورک یتیعمج تبسن نازیم رب نآ شقن ناوت

یاه و X رارق یسررب دروم Y

(داد 10 موزومورک ییاسانش تهج دیدناک نژ نینچمه .) ریخا شهوژپ رد X

Proteolipid protein(PLP) یم

رد نژ نیا .دشاب

تفاب همه یم نایب یبصع ریغ و یبصع یاه

تفاب همه رد و دوش یم زوتپوپآ عنام ،یعیبط ریثکت یط رد یبصع ریغ یاه

(دوش 15 .)

قیقر ود رثا یسررب هعلاطم نیا زا فده سیرت هدننک

- مخت هدرز کینکت اب نیاتشله واگ مرپسا تیسنج تبسن رب دموردنآ و غرم

Reale time qPCR .تسا

شور و داوم جارختسا رد هدافتسا دروم داوم یمامت تکرش زا اهدیئوزوتامرپسا زاDNA

Merck دادعت ،شیامزآ ماجنا تهج ،دندش هیهت ناملآ 4

زا لازنا 1 هداهن تکرش هزیوآرد رویط و ماد داژن حلاصا هاگتسیا رد رظن دروم رن واگ سار زا هدافتسا اب ،ناتسزوخ دهاج یماد یاه

لبهم عمج یعونصم هنومن .دیدرگ یروآ

زا شیب نتشاد اب و یلاع تیفیک اب ینم یاه 70

تهج و دییات کرحتم دیئوزوتامرپسا دصرد

قیقر لحارم ماجنا قیقر شخب کی هب ،دندش میسقت شخب ود هب یزاس

هدننک سیرت - مخت هدرز رگید شخب هب و غرم

هدوزفا دموردنآ

.دش د یوشتسش روظنم هب قیقحت نیا ر لولس فذح و ینم

زا مرپسا یفاضا داوم ریاس و هدرم یاه Swim upp

سپس ،دش هدافتسا

شور زا هدش جارختسا مرپسا زا Swim upp

جارختسا تفرگ ماجنا یکمن هتفای هنیهب شور هبDNA

. جارختسا زا سپ. زاDNA

،مرپسا Real-time PCR تاعطق ریثکت یارب

90 ، 89 ، 79 نژ یارب بیترت هب یزاب تفج یاه

،PLP ،SRY زا هدافتسا ابPAR

تفرگ ماجنا یصاصتخا یاهرگزاغآ تفج نومزآ زا هدافتسا اب یرامآ زیلانآ و

t- test ماجنا تفرگ .دش هبساحم تیسنج تبسن و

ثحب و جیاتن :جیاتن هنومن رد هک داد ناشن رضاح شهوژپ زا هدمآ تسدب جیاتن قیقر یاه

اب هدش سیرت رفاب -

مخت هدرز نایم غرم

تیعمج

نژ لماح یاهدیئوزوتامرپسا وSRY

ینعم توافتPLP راد

ومن رد هکیتروص رد .درادن دوجو ی ن

ه قیقر یاه نیب دموردنآ اب هدش

(3)

هدیا یلم شیامه نیلوا یعیبط عبانم و یزرواشک در نیون یها

– هام نابآ 1397

1270

نژ لماح یاهیئوزوتامرپسا وSRY

ینعم توافتPLP (دراد دوجو راد

05 / (P<0 قیقر زا هدافتسا و شیازفا هب رجنم دموردنآ هدننک

موزومورک لماح یاهیئوزوتامرپسا یمX

.دوش

جیاتن Reale time qPCR هنومن

قیقر یاه نژ نایب تبسن هک داد ناشن دموردنآ اب هدش

( عجرم نژ هب تبسن PLP رادقم )PAR

نژ نایب هب تبسن یرتشیب پ دراد عجرم نژ هب تبسنSRY

یم س رثا هک تفگ ناوت موزومورک لماح یاهدیئوزوتامرپسا رب دموردنآ

ینعم رثا X راد دراد ی . هجیتن هنوگنیا سپ یم یریگ

دوش قیقر ود زا هدافتسا هک سیرت و دموردنآ فلتخم هدننک

- مخت هدرز غرم

قیقر زا هدافتسا و دنراد اهدیئوزوتامرپسا تیسنج تبسن یور رب یتوافتم تارثا یازفا هب رجنم دموردنآ هدننک

نژ ش هب تبسنPLP

هجیتن رد و هدشSRY هدام

ییاز هدیم شیازفا ار یلو د

قیقر رد سیرت هدننک -

مخت هدرز غرم

ینعم رثا مرپسا تیسنج تبسن رب یراد

.دشن هدهاشم :ثحب مرپسا تبسن زنژوتامرپسا دنیارف یط رد هب X

،Y 1:1 موزومورک لماح مرپسا نازیم سپ ،تسا موزومورک لماح مرپسا ابX

(تسا ربارب یدیلوتY 13

واگ ینم رد هکنیا هب هجوت اب .) دودح( تسا یدیسا یمکpH

9 / 6 - 6 / 6 ( ) 10 دامجنا و شزادرپ لوط رد .)

تیلاعف ،ینم عیام یم کیتکلا دیسا دیلوت هب رجنم لولس یکیلوباتم یاه

شهاک و طیحم ندش یدیسا هب رجنم هک دوش یمpH

-

دوش ( 12 موزومورک لماح مرپسا هکنیا لیلدب و .) موزومورک لماح مرپسا هب تبسنY

یدیسا طیحم رد و دراد یرتشیب تیساسحX

تبسن نتفر نیب زا هب رجنم هک یلماوع زا یکی سپ دراد یرتمک ماود 1:1

یم تارییغت ،دوش .تسا ینم طیحم ردpH

( ناراکمه و نسح تاقیقحت قبط 2016

ب یهجوت لباق عونت ) قیقر نی

نژ دصرد نیگنایم رد دامجنا و ندرک کنخ ،ندرک وSRY

سیرت زا هک شهوژپ نیا رد .دراد دوجو ینم عیام رد ZFX -

مخت هدرز قیقر ناونعب غرم

دندیسر هجیتن نیا هب ،دش هدافتسا هدننک

یم ینم دامجنا دنیآرف هک نژ دصرد شهاک ثعاب دناوت

نژ دصرد شیازفا وSRY نیا .دوش )هدام نادنزرف لامتحا شیازفا(ZFX

قیقر زا هدافتسا لیلدب تسا نکمم یسنج تبسن رد فلاتخا و عونت هدننک

تحت ای و اه ریثأت

هتسب و شزادرپ داجیا ینم یدنب

(دوش 6 .) تاشیامزآ جیاتن Azizedin

و (ناراکمه 2014 شور رد هک داد ناشن ) Swim upp

موزومورک لماح مرپسا نا لیلدبY

کچوک هزاد رت

عیرس یانش و اهنآ عیرس هلول یلااب تمس هب اهنآ تکرح و دنراد یرت

موزومورک لماح مرپسا هکیلاح رد .تسا رت هزادنا لیلدب X

گرزب نییاپ تمسق رد دنراد لیامت ،رتشیب نزو و رت (دننامب یقاب هلول رت

2 .)

ندوب لااب هب هجوت اب قیقر یتظفاحم رثا

رد لداعت و مرپسا رد کرحت شیازفا و ریم و گرم شهاک هب رجنم هک دموردنآ هدننک Ph

یم مرپسا طیحم .دوش

ک اجنآ زا ه مرپسا یمونژDNA

لمح یاه هدننک

وX مرپسا هک یروطب تسا توافتمY لمح یاه

هدننک X

مرپسا هب تبسن یرتشیب موزومورک ابیرقت لمح یاه

هدننک دنرادY

( 16 ) هب هجوت اب سپ . گرزب

مزومورک لماح مرپسا رس ندوب رت X

و نزو شیب نآ رت ، مزومورک لماح مرپسا ندنام یقاب و ژویفیرتناس یط رد هلول هت ردX

، موزومورک لماح مرپسا دصرد هنومن رد X

هدش جارختسا شیازفا

هنومن رد . تسا هتفای قیقر یواح یاه

نژ لماح یاهدیئوزوتامرپسا تیعمج نایم دموردنآ هدننک و SRY

ینعم توافت PLP (دراد دوجو یراد

05 / 0 P<

هنومن رد یلو .) قیقر یواح یاه

سیرت هدننک -

مخت هدرز ینعم توافت غرم

هدهاشم یراد

.دشن

عبانم

1- Aisen, E. G., Alvarez, H. L., Venturino, A., & Garde, J. J. 2000. Effect of trehalose and EDTA on cryoprotective action of ram semen diluents. Theriogenology, 53(5), 1053-1061.

2- Azizeddin, A., Ashkar, F. A., King, W. A., & Revay, T. 2014. Enrichment of Y‐Chromosome‐Bearing Bull Spermatozoa by Swim‐up Through a Column. Reproduction in domestic animals, 49(1), e1-e4.

(4)

هدیا یلم شیامه نیلوا یعیبط عبانم و یزرواشک در نیون یها

– هام نابآ 1397

1271

3- Bergeron, A., & Manjunath, P. 2006. New insights towards understanding the mechanisms of sperm protection by egg yolk and milk. Molecular reproduction and development, 73(10), 1338-1344.

4- Bousseau, S., & Brillard, J. P. 1994. In vitro and in vivo results of fertility in cattle, following inseminations performed with semen diluted and frozen in a diluent free of animal origin products (Biociphos Plus). In European AI Vets. Sixth Meeting. Edinburgh, Scotland.

5- Bryja, J., & Konecny, A. 2003. Fast sex identification in wild mammals using PCR amplification of the Sry gene.

FOLIA ZOOLOGICA-PRAHA-, 52(3), 269-274.

6- Hassan, B. J., Hossain, S. O. and Jebur, M. Sh. 2016. Evaluation of semen sex ratio in cooled and frozen semen straws by real -time PCR. College of Veterinary Medicineary Baghdad University.

7- López-Pérez, A., & Pérez-Clariget, R. 2012. Ram seminal plasma improves pregnancy rates in ewes cervically inseminated with ram semen stored at 5° C for 24 hours. Theriogenology, 77(2), 395-399.

8- Moussa, M., Martinet, V., Trimeche, A., Tainturier, D. and Anton, M. 2002. Low density lipoproteins extracted from hen egg yolk by an easy method: cryoprotective effect on frozen–thawed bull semen. Theriogenology. 57.6:

1695-1706.

9. Ohl, D. A., & Menge, A. C. 1996. Assessment of sperm function and clinical aspects of impaired sperm function.

Frontiers in Bioscience, 1, e96-108.

10- Parati, K., Bongioni, G., Aleandri, R., & Galli, A. 2006. Sex ratio determination in bovine semen: A new approach by quantitative real time PCR. Theriogenology, 66(9), 2202-2209.

11- Prasad, S., Rangasamy, S., & Satheshkumar, S. 2010. Sex preselection in domestic animals-current status and future prospects. Veterinary World, 3(7), 346.

12- Rigau, T., Piedrafita, J., Reverter, A., Canal, M., & Rodríguez-Gil, J. E. 1996. The rate of L-lactate production: a feasible parameter for the fresh diluted boar semen quality analysis. Animal Reproduction Science, 43(2-3), 161- 172.

13- Rorie, R. W., Delgado, P. A., & Lester, T. D. 2014. Variation among beef bulls in the ratio of X-to Y- chromosome bearing spermatozoa. Advances in Reproductive Sciences, 2(04), 69.

14- Sharafi, M., Forouzanfar, M., Hosseini, S. M., Hajian, M., Ostadhosseini, S., Hosseini, L., ... & Esfahani, M. H.

N. 2009. In vitro comparison of soybean lecithin based-extender with commercially available extender for ram semen cryopreservation. Int J Fertil Steril, 3(3).

15- Skoff, R. P., Bessert, D. A., Cerghet, M., Franklin, M. J., Rout, U. K., Nave, K. A., ... & Armant, D. R. 2004.

The myelin proteolipid protein gene modulates apoptosis in neural and non-neural tissues. Cell death and differentiation, 11(12), 1247.

16- Underwood, S.L., Vigneault, C . and Blondin, P. 2001. Flow cytometric sorting of mammalian sperm for predetermination of sex. In Journals. Sid. ir: 429-440.

17- Waters, P. D., Wallis, M. C., & Graves, J. A. M. 2007. Mammalian sex—origin and evolution of the Y chromosome and SRY. In Seminars in cell & developmental biology (Vol. 18, No. 3, pp. 389-400). Academic Press.

18- Xu, Z. Z., Johnson D, L. and Burton, L. J . 2000. Factors affecting the sex ratio in dairy cattle in New Zealand. Proceedings-new zealand society of animal production. Vol. 60. New Zealand Society of Animal Production.