ﻫﺎ از ﭘﺮواﻧﻪ ﻫﺎي ﻣﺨﺘﻠﻒ اﺳﺘﺨﺮاج روش ﮐﯿﻔﯽ و ﮐﻤﯽ ﻣﻘﺎﯾﺴﻪ DNA

(1)

١

ﻪﺴﯾﺎﻘﻣ ﯽﻤﮐ و ﯽﻔﯿﮐ شور

جاﺮﺨﺘﺳا ﻒﻠﺘﺨﻣ يﺎﻫ ﻪﻧاوﺮﭘ زاDNA

ﺎﻫ

ﻪﺟاﻮﺧ ﯽﻠﮔ طﺎﺸﻧ

1

ﻮﺠﻣزر ﻞﯿﺋاﺮﺒﺟ،*

يﺮﺻﺎﻧ ماﺮﻬﺑ ،1

1

1 - هﺪﮑﺸﻧاد ،ﯽﮑﺷﺰﭙﻫﺎﯿﮔ هوﺮﮔ مﻮﻠﻋ

ﻞﯿﺑدرا ،ﯽﻠﯿﺑدرا ﻖﻘﺤﻣ هﺎﮕﺸﻧاد ،يزروﺎﺸﮐ

هﺪﻨﺴﯾﻮﻧ لﻮﺌﺴﻣ :*

[email protected]

هﺪﯿﮑﭼ

شور ﺮﺑ ﯽﻨﺘﺒﻣ ﯽﻟﻮﮑﻟﻮﻣ يﺎﻫ ﺖﻓﺮﺸﯿﭘ ﺐﺒﺳPCR

ﺖﺳا هﺪﺷ ﯽﻣﻮﻧﻮﺴﮐﺎﺗ رد ﯽﻤﻬﻣ يﺎﻫ .

جاﺮﺨﺘﺳا ﯽﻟﻮﮑﻟﻮﻣ تﺎﻌﻟﺎﻄﻣ رد مﺪﻗ ﻦﯿﻟوا

ﯽﻣ ﺐﺳﺎﻨﻣ ﺖﯿﻤﮐ و ﺖﯿﻔﯿﮐ ﺎﺑDNA ﺪﺷﺎﺑ

. ﻪﻌﻟﺎﻄﻣ ﻦﯾا رد ﻪﺳ

جاﺮﺨﺘﺳا شور ﻞﻣﺎﺷDNA

،CTAB ﻞﻨﻓ - ﺮﻠﮐ و مﺮﻓ و Lysis buffer زا

درآ ﺪﯿﺑ ﻞﻣﺎﺷ ﻪﻧاوﺮﭘ عﻮﻧ ﻪﺳ (Lep:. Pyralidae)

Ephestia kuehniella ﯽﻨﯿﻣز ﺐﯿﺳ ﺪﯿﺑ ،

Phthorimea operculella

(Lep:.Gelechidae) و

ﺪﻨﻗرﺪﻨﻐﭼ راﻮﺨﮔﺮﺑ Spodoptera exigua (Lep:.Noctuidae)

ﺖﻓﺮﮔ راﺮﻗ ﻪﺴﯾﺎﻘﻣ درﻮﻣ .

هد شور ﺮﻫ ياﺮﺑ

دﺪﻋ ﻮﮔ ﺮﻫ زا ﻪﻧاوﺮﭘ ﺖﻓﺮﮔ راﺮﻗ ﺶﯾﺎﻣزآ درﻮﻣ ﻪﻧ

. ﺖﯿﻔﯿﮐ ﺖﯿﻤﮐ و زرﺎﮔآ لژ يور DNA

ﺘﮑﭙﺳا ﺎﺑDNA ﺮ ﺮﺘﻣﻮﺘﻓو ي ﺪﺷ ﻦﯿﯿﻌﺗ .

ناﺰﯿﻣ

بﺬﺟ جﻮﻣ لﻮﻃ رد DNA

260 جﻮﻣ لﻮﻃ رد ﻦﯿﺌﺗوﺮﭘ بﺬﺟ ،ﺮﺘﻣﻮﻧﺎﻧ 280

ﯽﺑﺬﺟ ﺖﺒﺴﻧ و ﺮﺘﻣﻮﻧﺎﻧ 260

ﻪﺑ 280 ﻦﯿﯿﻌﺗ ياﺮﺑ ﺮﺘﻣﻮﻧﺎﻧ

صﻮﻠﺧ ﺪﺷ دروآﺮﺑDNA

. داد نﺎﺸﻧ ﺞﯾﺎﺘﻧ شور رد ﺎﻫﺪﻧﺎﺑ ﺖﯿﻔﯿﮐ

CTAB زا ﺮﺘﻬﺑ ﻪﻧﻮﮔ ﻪﺳ ﺮﻫ ياﺮﺑ شور ﺮﯾﺎﺳ

ﺎﻫ دﻮﺑ . ﺖﻈﻠﻏ ﺰﯿﻧDNA

دﻮﺑ ﺮﺘﺸﯿﺑ شور ﻦﯾا رد .

صﻮﻠﺧ ظﺎﺤﻟ زا ﯽﺑﺬﺟ ﺖﺒﺴﻧ ﺰﯿﻧDNA

280 / 260 شور رد ﺮﺘﻣﻮﻧﺎﻧ شور ﺮﯾﺎﺳ زا ﺮﺘﻬﺑCTAB

دﻮﺑ ﺎﻫ . رد ﺎﻣا

شور ﺮﯾﺎﺳ ﺎﻫ

ﺖﺒﺴﻧ ﻦﯾا دﻮﺑ ﺮﯿﻐﺘﻣ ﯽﻠﯿﺧ

. شور رد ﻞﻨﻓ - مﺮﻓوﺮﻠﮐ و دﻮﺑ ﺮﺘﺸﯿﺑ ﯽﮔدﻮﻟآ رد

شور Lysis buffer جاﺮﺨﺘﺳا ﻞﺣاﺮﻣ داﺪﻌﺗ

دﻮﺑ ﺮﺘﺸﯿﺑ .

شور ﺖﯾﺎﻬﻧ رد CTAB

جاﺮﺨﺘﺳا ياﺮﺑ ﺪﻣآرﺎﮐ و ﺮﺛﻮﻣ ﯽﺷور ناﻮﻨﻋ ﻪﺑ ﻪﺘﺳار زاDNA

Lepidoptera ﺪﺷ دﺎﻬﻨﺸﯿﭘ

.

يﺪﯿﻠﮐ تﺎﻤﻠﮐ :

ﺖﻈﻠﻏ ،ﺖﯿﻤﮐ ،ﺖﯿﻔﯿﮐ ،جاﺮﺨﺘﺳا

ﻪﻣﺪﻘﻣ

هزوﺮﻣا ﺚﺣﺎﺒﻣ ﯽﻟﻮﮑﻟﻮﻣ زا ﺖﯿﻤﻫا ﯽﻧوﺰﻓازور ﯽﺳرﺮﺑ رد

يﺎﻫ مﻮﻠﻋ ﯽﺘﺴﯾز رادرﻮﺧﺮﺑ هدﻮﺑ

و يﺎﻫﺪﯿﺳا جاﺮﺨﺘﺳا ﮏﯿﺌﻠﮐﻮﻧ

DNA) و

ﻦﯿﻟوا(RNA

مﺎﮔ رد ﻦﯾا ﯽﺳرﺮﺑ ﺎﻫ ﺖﺳا . رد يرﺎﯿﺴﺑ دراﻮﻣزا جاﺮﺨﺘﺳا داﻮﻣ

ﯽﮑﯿﺘﻧژ ﺎﺑ ﺖﯾدوﺪﺤﻣ ﯽﯾﺎﻫ

هاﺮﻤﻫ ﺖﺳا ﻪﮐ ﺮﯿﯿﻐﺗ ﺐﯿﮐﺮﺗرد و

جاﺮﺨﺘﺳاﺮﻓﺎﺑPH ﻪﺘﺴﻧاﻮﺗ

ﺖﺳا رد دﻮﺒﻬﺑ ﯽﻤﮐ و ﯽﻔﯿﮐ و DNA جاﺮﺨﺘﺳا RNA

هﺪﺷ ﺮﺛﻮﻣ ﺪﺷﺎﺑ

) 1 (

) . 4 ( ﻞﻣﺎﺷ شور ﻪﺳ زا

،CTAB

Proteinase K و

Chelex ياﺮﺑ جاﺮﺨﺘﺳا زاDNA

Chironomidae ﺪﻧدﺮﮐ هدﺎﻔﺘﺳا

. نﺎﺸﻧ ﺞﯾﺎﺘﻧ ﯽﻣ هﺪﺷ ﺮﮐذ شور ﻪﺳ زا ﻪﭼﺮﮔا داد

-

ﺖﯿﻔﯿﮐ ﯽﻟو دﺮﮐ هدﺎﻔﺘﺳا جاﺮﺨﺘﺳا ياﺮﺑ ناﻮﺗ شور رد DNA

ﻪﺑ ﺖﺒﺴﻧ CTAB ﺎﻬﺷور ﺮﯾﺎﺳ

دﻮﺑ ﺮﺘﻬﺑ . ﻪﺘﺷﺬﮔ رد ياﺮﺑ CTAB

جاﺮﺨﺘﺳا ﺖﻓﺎﺑ زا DNA

چرﺎﻗ و ﯽﻫﺎﯿﮔ يﺎﻫ ﯽﻣ هدﺎﻔﺘﺳا ﺎﻫ

ﺪﺷ ) 2 (.

ﺣ رد نﻮﻨﮐا ﯽﻟو ﯽﻣ هدﺎﻔﺘﺳا ﻢﻫ نﺎﺘﺳﻮﭘ ﺖﺨﺳ و تاﺮﺸ

دﻮﺷ ) 3 ( .

ﯽﻣCTAB ﻪﺑ ﻪﮐ ﯽﯾﺎﻫﺪﯾرﺎﮐﺎﺳ ﯽﻠﭘ ﺪﻧاﻮﺗ ﺪﻨﮐ فﺬﺣ ار ﺪﻨﺘﺴﻫ ﻞﺼﺘﻣDNA

. ) 5 ( ﺪﻧداد نﺎﺸﻧ ﯽﻣCTAB

ﺗ ﺖﯿﻔﯿﮐ ﺪﻧاﻮ ﺮﺘﻬﺑ ارDNA

ﺪﻨﮐ . ﺖﯿﻔﯿﮐ ﻪﻧﻮﻤﻧ ﮏﯾDNA

دراد ﯽﮕﺘﺴﺑ نآ جاﺮﺨﺘﺳا شور و يراﺪﻬﮕﻧ هﻮﺤﻧ ،ﻦﺳ ﻪﺑ .

و ﻊﯾﺮﺳ شور ﮏﯾ ﻪﯾارا ،ﯽﺳرﺮﺑ ﻦﯾا زا فﺪﻫ

جاﺮﺨﺘﺳا ياﺮﺑ نﺎﺳآ ﻪﺘﺳار تاﺮﺸﺣ زاDNA

Lepidoptera ﯽﻣ ﯽﻟآ تﺎﺒﯿﮐﺮﺗ و ﻦﯿﺌﺗوﺮﭘ ﻪﺑ ﯽﮔدﻮﻟآ مﺪﻋ و ﻻﺎﺑ صﻮﻠﺧ ،ﮏﭼﻮﮐ ﻪﺜﺟ ﺎﺑ

-

ﺪﺷﺎﺑ .

ور و داﻮﻣ ش

ﻫﺎ

جاﺮﺨﺘﺳا ياﺮﺑ ﻪﻧﻮﮔ ﺮﻫ زاDNA

10 زآ درﻮﻣ ﻪﻧﻮﻤﻧ ﺖﻓﺮﮔ راﺮﻗ ﺶﯾﺎﻣ

. درآ ﺪﯿﺑ درﻮﻣ رد (Lep:. Pyralidae)

Ephestia kuehniella و

ﺐﯿﺳ ﺪﯿﺑ ﯽﻨﯿﻣز (Lep:. Gelechidae) Phthorimea operculella

ياﺮﺑ و ﻪﻧاوﺮﭘ نﺪﺑ ﻞﮐ ﺪﻨﻗرﺪﻨﻐﭼ راﻮﺨﮔﺮﺑ

Spodoptera exigua

(Lep:. Noctuidae) ﺪﺷ هدﺎﻔﺘﺳا جاﺮﺨﺘﺳا ياﺮﺑ ﻪﻧاوﺮﭘ ﻪﻨﯿﺳ ﻪﺴﻔﻗ ﺖﻤﺴﻗ زا

. شور ﻪﺑ جاﺮﺨﺘﺳا ياﺮﺑ CTAB

ﻪﺑ اﺪﺘﺑا ﻪﻧﻮﻤﻧ 600

جاﺮﺨﺘﺳا ﺮﻓﺎﺑ ﺮﺘﯿﻟوﺮﮑﯿﻣ )

Mercaptoethanol, 1MTris-base, CTAB –

β 0/5MEDTA, 5M NaCl, ﻂﺳﻮﺗ ﻪﻧﻮﻤﻧ و ﺪﺷ ﻪﻓﺎﺿا (

ﺪﺷ ﻪﻟ ﯽﺑﻮﺧ ﻪﺑ ﻞﺘﺴﭘوﺮﮑﯿﻣ .

تﺪﻣ ﻪﺑ ﻪﻧﻮﻤﻧ ﺪﻌﺑ 60

يﺎﻣد رد ﻪﻘﯿﻗد 65

ﺖﻓﺮﮔ راﺮﻗ داﺮﮕﯿﺘﻧﺎﺳ ﻪﺟرد .

ﻪﺑ ﯽﯾور ﻊﯾﺎﻣ ،ژﻮﯿﻔﯾﺮﺘﻧﺎﺳ زا ﺲﭘ

نآ ﻪﺑ و ﻞﻘﺘﻨﻣ يﺪﯾﺪﺟ پﻮﯿﺗ 550

ﺮﻠﮐ ﺮﺘﯿﻟوﺮﮑﯿﻣ و

مﺮﻓ ﻞﮑﻟا ﻞﯿﻣآوﺰﯾا– )

24:1 ( ا ﺪﯾدﺮﮔ ﻪﻓﺎﺿ .

ﯾﺎﻣ ،دﺪﺠﻣ ژﻮﯿﻔﯾﺮﺘﻧﺎﺳ زا ﺪﻌﺑ ﻊ

ﻪﺑ ﯽﯾور

(2)

٢

و ﻞﻘﺘﻨﻣ يﺪﯾﺪﺟ پﻮﯿﺗ 750

لﻮﻧﺎﭘوﺮﭘوﺰﯾا ﺮﺘﯿﻟوﺮﮑﯿﻣ دﺮﺳ

ﺪﯾدﺮﮔ ﻪﻓﺎﺿا .

ﺲﭙﺳ رﺰﯾﺮﻓ رد ﺐﺷ ﮏﯾ تﺪﻣ ﻪﺑ 20

- داﺮﮕﯿﺘﻧﺎﺳ ﻪﺟرد

ﺪﯾدﺮﮔ يراﺪﻬﮕﻧ .

مزﻻ نﺎﻣز ﺖﺷﺬﮔ زا ﺪﻌﺑ

، ﺪﺷ ژﻮﯿﻔﯾﺮﺘﻧﺎﺳ ﻪﻧﻮﻤﻧ .

ﺪﻗﺎﻓ ﯽﯾور ﻊﯾﺎﻣ و هﺪﺷ ﻪﺘﺨﯾررود DNA

ﺎﺑ هﺪﺷ ﻦﯿﺸﻧ ﻪﺗDNA

لﻮﻧﺎﺗا زا هدﺎﻔﺘﺳا 70

% ﺪﺷ هداد ﻮﺸﺘﺴﺷ .

نﺎﯾﺎﭘ رد 50 ﺮﺘﯿﻟوﺮﮑﯿﻣ ﺮﻓﺎﺑ

(1M Tris, 0.5M EDTA) TE ﻪﻓﺎﺿا ﻪﻧﻮﻤﻧ ﻪﺑ

ﺪﺷ رد و 20 -

ﻪﺟرد داﺮﮕﯿﺘﻧﺎﺳ يراﺪﻬﮕﻧ

ﺪﺷ .

شور ﻪﺑ جاﺮﺨﺘﺳا ياﺮﺑ ﻞﻨﻓ

ﺮﻠﮐ– و ﺮﻓ رد ﻪﻧﻮﻤﻧ 400

جاﺮﺨﺘﺳا ﺮﻓﺎﺑ ﺮﺘﯿﻟوﺮﮑﯿﻣ (1M Tris, 0.5 M EDTA, SDS 10%)

ﻪﺑ و ﺪﺷ ﻪﻟ

تﺪﻣ 60 يﺎﻣد رد ﻪﻘﯿﻗد 60

ﻢﺠﺣ ﮏﯾ ﻪﻧﻮﻤﻧ ﻪﺑ ﺲﭙﺳ ﻞﻨﻓ

- ﺮﻠﮐ و مﺮﻓ ﻞﮑﻟا ﻞﯿﻣآوﺰﯾا– )

25:24:1 ( ﻪﻓﺎﺿا

ﺪﺷ . ﺪﺷ ژﻮﯿﻔﯾﺮﺘﻧﺎﺳ ﺲﭙﺳ .

ﻞﻘﺘﻨﻣ يﺪﯾﺪﺟ پﻮﯿﺗ ﻪﺑ ﯽﯾور ﻊﯾﺎﻣ مﺮﻓوﺮﻠﮐ ﻢﺠﺣ ﮏﯾ ﺎﺑ هرﺎﺑود و

- زا ﺪﻌﺑ و ﺪﺷ هداد ﻮﺸﺘﺴﺷ ﻞﮑﻟا ﻞﯿﻣآوﺰﯾا

ژﻮﯿﻔﯾﺮﺘﻧﺎﺳ دﺪﺠﻣ

يﻮﺘﺤﻣ ﯽﯾور ﻊﯾﺎﻣ ، ﻞﻘﺘﻨﻣ يﺪﯾﺪﺟ پﻮﯿﺗ ﻪﺑDNA

و دﺮﺳ لﻮﻧﺎﭘوﺮﭘوﺰﯾا ﻢﺠﺣ ﮏﯾ و 20

ﺮﺘﯿﻟوﺮﮑﯿﻣ 5NACL

رﻻﻮﻣ

ﺐﺷ ﮏﯾ و ﺪﺷ ﻪﻓﺎﺿا نآ ﻪﺑ يﺎﻣد رد

20 - ﺖﻓﺮﮔ راﺮﻗ داﺮﮕﯿﺘﻧﺎﺳ ﻪﺟرد .

ژﻮﯿﻔﯾﺮﺘﻧﺎﺳ زا ﺪﻌﺑ ﺪﻗﺎﻓ ﯽﯾور ﻊﯾﺎﻣ

و هﺪﺷ ﻪﺘﺨﯾر رودDNA

لﻮﻧﺎﺗا زا هدﺎﻔﺘﺳا ﺎﺑ هﺪﺷ ﻦﯿﺸﻧ ﻪﺗ DNA 70

% هداد ﻮﺸﺘﺴﺷ ﺪﺷ

. د نﺎﯾﺎﭘ ر 50 ﺮﻓﺎﺑ ﺮﺘﯿﻟوﺮﮑﯿﻣ رد و ﺪﺷ ﻪﻓﺎﺿا ﻪﻧﻮﻤﻧ ﻪﺑTE

20 - ﻪﺟرد

ﺪﺷ يراﺪﻬﮕﻧ داﺮﮕﯿﺘﻧﺎﺳ .

شور ﻪﺑ جاﺮﺨﺘﺳا ياﺮﺑ Lysis buffer

رد ﻪﻧﻮﻤﻧ اﺪﺘﺑا 450

ﻞﻣﺎﺷ جاﺮﺨﺘﺳا ﺮﻓﺎﺑ ﺮﺘﯿﻟوﺮﮑﯿﻣ )

SDS 20%, 1MTris,0.5MEDTA (

ﻪﻟ

ﺪﺷ . تﺪﻣ ﻪﺑ ﺲﭙﺳ 60

يﺎﻣد رد ﻪﻘﯿﻗد 60

نﺪﺷ ﻪﺑﻮﮑﻧا زا ﺪﻌﺑ ﻪﻧﻮﻤﻧ ﻪﺑ ،

150 ﺮﺘﯿﻟوﺮﮑﯿﻣ

5NACL

رﻻﻮﻣ

و 65 ﺮﺘﯿﻟوﺮﮑﯿﻣ CTAB10%

يﺎﻣد رد ﻪﻘﯿﻗد هد تﺪﻣ ﻪﺑ ًادﺪﺠﻣ و ﺪﺷ ﻪﻓﺎﺿا 65

ﺲﭙﺳ 700 ﺮﺘﯿﻟوﺮﮑﯿﻣ

ﮐﻠ ﺮ و مﺮﻓ - ﻞﮑﻟا ﻞﯿﻣآوﺰﯾا )

24:1 ( و ﺪﺷ ﻪﻓﺎﺿا ﺪﺷ ژﻮﯿﻔﯾﺮﺘﻧﺎﺳ

. ﯽﯾور ﻊﯾﺎﻣ يﻮﺘﺤﻣ

و ﻞﻘﺘﻨﻣ يﺪﯾﺪﺟ پﻮﯿﺗ ﻪﺑDNA 600

ﺮﺘﯿﻟوﺮﮑﯿﻣ

و دﺮﺳ لﻮﻧﺎﭘوﺮﭘوﺰﯾا 60

تﺎﺘﺳا ﺮﺘﯿﻟوﺮﮑﯿﻣ آ

مﻮﯿﻧﻮﻣ 10 رﻻﻮﻣ نآ ﻪﺑ ﺪﺷ ﻪﻓﺎﺿا .

يﺎﻣد رد ﺐﺷ ﮏﯾ تﺪﻣ ﻪﺑ ﻪﻧﻮﻤﻧ 20

- داﺮﮕﯿﺘﻧﺎﺳ ﻪﺟرد

ﺖﻓﺮﮔ راﺮﻗ .

ﺪﻗﺎﻓ ﯽﯾور ﻊﯾﺎﻣ ،ژﻮﯿﻔﯾﺮﺘﻧﺎﺳ زا ﺪﻌﺑ ودDNA

ر و ﺪﺷ ﻪﺘﺨﯾر ﻞﮑﻟا ﺎﺑ هﺪﺷ ﻦﯿﺸﻧ ﻪﺗDNA

70 % ﺪﺷ هداد ﻮﺸﺘﺴﺷ .

ﻪﻧﻮﻤﻧ ﻪﺑ

50 ﺮﻓﺎﺑ ﺮﺘﯿﻟوﺮﮑﯿﻣ يﺎﻣد رد و ﺪﺷ ﻪﻓﺎﺿاTE

20 - داﺮﮕﯿﺘﻧﺎﺳ ﻪﺟرد يراﺪﻬﮕﻧ

ﺪﺷ .

ﺖﯿﻔﯿﮐ ﺖﯿﯿﻌﺗ ياﺮﺑ ﻪﻧﻮﻤﻧ DNA

زرﺎﮔآ لژ يور ﺎﻫ 8/

0 % ﺖﯿﻤﮐ ﻦﯿﯿﻌﺗ ياﺮﺑ و لﺪﻣ ﺮﺘﻣﻮﺘﻓوﺮﺘﮑﭙﺳا هﺎﮕﺘﺳد زا DNA

BIO RAD

ا ﺪﺷ هدﺎﻔﺘﺳ .

بﺬﺟ ناﺰﯿﻣ جﻮﻣ لﻮﻃ رد DNA

260 جﻮﻣ لﻮﻃ رد ﻦﯿﺌﺗوﺮﭘ بﺬﺟ ،ﺮﺘﻣﻮﻧﺎﻧ 280

ﯽﺑﺬﺟ ﺖﺒﺴﻧ و ﺮﺘﻣﻮﻧﺎﻧ 260

ﻪﺑ 280

صﻮﻠﺧ ﻦﯿﯿﻌﺗ ياﺮﺑ ﺮﺘﻣﻮﻧﺎﻧ ﺪﺷ دروآﺮﺑ DNA

. ياﺮﺑ ﺖﻈﻠﻏ ﻪﺒﺳﺎﺤﻣ ﯽﺑﺬﺟ دﺪﻋDNA

260 ﺮﺘﻣﻮﻧﺎﻧ × ﺖﻗر ﺐﯾﺮﺿ ×

ﺮﺑ ﺢﯿﺤﺼﺗرﻮﺘﮐﺎﻓ

ﺪﺷ ﻪﺒﺳﺎﺤﻣ ﺮﺘﯿﻟوﺮﮑﯿﻣ ﺮﺑ مﺮﮔﻮﻧﺎﻧ ﺐﺴﺣ .

ﺚﺤﺑ و ﺞﯾﺎﺘﻧ

شور داد نﺎﺸﻧ زرﺎﮔآ لژ يور هﺪﻣآ ﺖﺳﺪﺑ يﺎﻫﺪﻧﺎﺑ ﻪﺴﯾﺎﻘﻣ وCTAB

Lysis buffer شور زا ﺮﺘﻬﺑ

ﻞﻨﻓ - مﺮﻓوﺮﻠﮐ ﺖﺳا . ﻪﺳ ﺮﻫ ياﺮﺑ

رد ﺎﻫﺪﻧﺎﺑ ﯽﮕﺘﺴﮑﺷ ،ﻪﻧﻮﮔ ﻦﯾا

شور زا ﺮﺘﻤﮐ شور ﻞﻨﻓ

- مﺮﻓوﺮﻠﮐ دﻮﺑ ) ﻞﮑﺷ - 1 ( . ﺖﻈﻠﻏ ﻦﯿﻨﭽﻤﻫ و دﻮﺑ ﺮﺘﺸﯿﺑ شور ﻦﯾا رد ﺰﯿﻧDNA

ﺪﻧدﻮﺑ ﺮﺗ ﮓﻧرﺮﭘ ﺎﻫﺪﻧﺎﺑ .

ﯽﻤﮐ ﻪﺴﯾﺎﻘﻣ شور داد نﺎﺸﻧ ﺰﯿﻧDNA

وCTAB Lysis buffer شور زا ﺮﺘﻬﺑ

ﻞﻨﻓ - ﻓوﺮﻠﮐ ﺮ م ﺖﺳا ) لوﺪﺟ -

1 ( .

(3)

٣

شور- 5،^CTABشور- 4 .(Ephestia kuehniella )Lysis buffer شور - 3 ،مﺮﻓوﺮﻠﮐ-ﻞﻨﻓ شور - 2 ،^CTAB شور- 1 :1-ﻞﮑﺷ ﻞﻨﻓ ،مﺮﻓوﺮﻠﮐ– 6

- شور Lysis buffer )

(Phthorimea operculella .

7 - شور ،CTAB 8 - ﻞﻨﻓ شور

، مﺮﻓوﺮﻠﮐ– 9

- Lysis

buffer ) Spodoptera exigua (

(4)

۴

لوﺪﺟ

- 1 : ﯽﻤﮐ ﻪﺴﯾﺎﻘﻣ شور ﻪﺳ رد هﺪﺷ جاﺮﺨﺘﺳاDNA

ﻞﻨﻓ ،CTAB - ،مﺮﻓوﺮﻠﮐ Lysis buffer

شور داد نﺎﺸﻧ ﻖﯿﻘﺤﺗ ﻦﯾا زا ﻞﺻﺎﺣ ﺞﯾﺎﺘﻧ جاﺮﺨﺘﺳا ياﺮﺑ ﯽﻤﮐ ﻢﻫ و ﯽﻔﯿﮐ ظﺎﺤﻟ زا ﻢﻫ CTAB

زا DNA Lepidoptera ﺷور

ﯽ

ﯽﻣ ﺐﺳﺎﻨﻣ ﺪﺷﺎﺑ

. شور را هﺪﻣآ ﺖﺳﺪﺑ يﺎﻫﺪﻧﺎﺑ ﺖﯿﻔﯿﮐ ﺷور ﺮﯾﺎﺳ زا ﺮﺘﻬﺑCTAB

و دﻮﺑ ﺎﻬ ﺖﺷاد ار ﯽﮕﺘﺴﮑﺷ ﻦﯾﺮﺘﻤﮐ ﺖﻈﻠﻏ ﻦﯿﻨﭽﻤﻫ

ﺰﯿﻧ هﺪﻣآ ﺖﺳﺪﺑDNA شور ﻦﯾا رد

شور ﺮﯾﺎﺳ زا ﺮﺘﺸﯿﺑ دﻮﺑ ﺎﻫ

) . 2 ( داد نﺎﺸﻧ ﺰﯿﻧ ﺖﯿﻔﯿﮐ

شور ردDNA ﺎﻬﺷور ﺮﯾﺎﺳ زا ﺮﺘﻬﺑCTAB

ﺖﺳا . ﯽﻣ ﺰﯿﻧ ﺎﻬﺷور ﺮﯾﺎﺳ زا دﺮﮐ هدﺎﻔﺘﺳا ناﻮﺗ

. شور رد Lysis buffer

ﻞﺣاﺮﻣ داﺪﻌﺗ جاﺮﺨﺘﺳا

شور زا ﺮﺘﺸﯿﺑ لﺎﻤﺘﺣا و دﻮﺑ CTAB

ﯽﮔدﻮﻟآ ﯽﻟآ داﻮﻣ ﻪﺑ ﺑ شور ﻦﯾا رد

ﺖﺳا ﺮﺘﺸﯿ .

رد ﻞﻨﻓ شور -

ﺮﻓوﺮﻠﮐ م ﺰﯿﻧ ﺪﻨﺘﺷاﺪﻧ ﯽﺑﻮﺧ ﺖﯿﻔﯿﮐ ﺎﻫﺪﻧﺎﺑ و دﻮﺑ ﺮﺘﺸﯿﺑ ﯽﮔدﻮﻟآ ناﺰﯿﻣ .

هوﻼﻌﺑ

Ephestiakuehniella

Phthorimeaoperculella Spodopteraexigua

شور راﺮﮑﺗ DNAﺖﻈﻠﻏ مﺮﮔﻮﻧﺎﻧ / ﺮﺘﯿﻟوﺮﮑﯿﻣ

بﺬﺟ ﺖﺒﺴﻧ DNA/Protein

DNAﺖﻈﻠﻏ ﺎﻧ مﺮﮔﻮﻧ / ﺮﺘﯿﻟوﺮﮑﯿﻣ

DNA ﺖﻈﻠﻏ مﺮﮔﻮﻧﺎﻧ / ﺮﺘﯿﻟوﺮﮑﯿﻣ

CTAB

1 570 /2 47 1490 /2 32 1800 6

2 870 /1 31 1200 2 5/ 1210 /4 48

3 1360 /1 34 1490 /1 47 1700 /3 95

4 2000 /1 63 2590 /1 31 2040 /3 09

5 1500 /0 86 1740 /2 35 1670 /2 35

6 1940 /1 67 890 /2 47 1060 /2 12

7 1530 /1 98 1100 /1 48 980 /2 39

8 1570 /1 42 6800 /2 61 630 /1 75

9 1280 /1 88 890 /2 47 890 /2 22

10 1040 2 1100 /1 48 1150 /1 71

Phenol- choloroform

1 800 /1 35 1580 /7 52 70 /0 63

2 1140 /1 58 1490 /7 09 370 /1 32

3 850 /1 23 1560 /3 46 770 /3 34

4 790 /2 13 1360 /1 74 230 1

5 530 /0 81 1310 /2 62 350 /1 16

6 840 /1 29 1230 /3 07 400 /4 44

7 920 /2 70 1500 /2 77 1490 /4 96

8 540 /1 63 1460 /3 04 1700 /4 25

9 960 /0 48 1360 /2 19 1860 9 3/

10 620 /1 29 8400 2 4/ 1570 /5 23

Lysis buffer

1 470 /1 17 1130 /4 91 610 /2 17

2 450 5 1660 /4 25 1030 /2 14

3 900 /2 19 790 /6 58 1370 /2 24

4 560 4 840 /4 66 1050 /1 75

5 1120 /3 73 480 /3 42 670 /1 06

6 280 /0 58 360 /1 56 810 /1 76

7 360 /1 44 540 /2 25 790 /2 25

8 760 2 1340 /8 93 900 /1 91

9 700 /2 91 1000 /4 54 1440 /2 71

10 1280 /4 41 1520 12 /66 1390 /1 13

(5)

۵

ﯽﻣ هدﺎﻔﺘﺳا ﻞﻨﻓ ﯽﻤﺳ هدﺎﻣ زا شور ﻦﯾا رد دﻮﺷ

. صﻮﻠﺧ ظﺎﺤﻟ زا ﯽﺑﺬﺟ ﺖﺒﺴﻧ ﺰﯿﻧDNA

280 / 260 شور رد ﺮﺘﻣﻮﻧﺎﻧ زا ﺮﺘﻬﺑCTAB

شور ﺮﯾﺎﺳ دﻮﺑ ﺎﻫ

. صﻮﻠﺧ ياﺮﺑ ﺖﺒﺴﻧ ﻦﯾﺮﺘﻬﺑ هدوﺪﺤﻣ ردDNA

2 - 7/

1 ﯽﻣ ﺪﺷﺎﺑ . شور رد Lysis buffer دﻮﺑ ﺮﯿﻐﺘﻣ ﯽﻠﯿﺧ ﺖﺒﺴﻧ ﻦﯾا

.

صﻮﻠﺧ ﻨﻓ شور ردDNA

ﻞ شور زا ﺮﺘﻬﺑ مﺮﻓوﺮﻠﮐ– Lysis buffer

دﻮﺑ . ﺖﻈﻠﻏ ناﺰﯿﻣ و هﺪﺷ دﺎﯾ دراﻮﻣ مﺎﻤﺗ ﻦﺘﻓﺮﮔ ﺮﻈﻧ رد ﺎﺑ DNA

شور ﺖﯾﺎﻬﻧرد هﺪﻣآ ﺖﺳﺪﺑ جاﺮﺨﺘﺳا ياﺮﺑ ﺪﻣارﺎﮐ و ﺮﺛﻮﻣ ﯽﺷور ناﻮﻨﻋ ﻪﺑCTAB

ﻪﺘﺳار زاDNA Lepidoptera ﯽﻣ دﺎﻬﻨﺸﯿﭘ

دﻮﺷ .

ﯽﯾﺎﻬﻧ يﺮﯿﮔ ﻪﺠﯿﺘﻧ

شور داد نﺎﺸﻧ ﯽﺳرﺮﺑ ﻦﯾا زا ﻞﺻﺎﺣ ﺞﯾﺎﺘﻧ جاﺮﺨﺘﺳا ياﺮﺑ ﯽﻔﯿﮐ ﻢﻫ و ﯽﻤﮐ ظﺎﺤﻟ زا ﻢﻫ ﺪﻣآرﺎﮐ و ﺮﺛﻮﻣ ﯽﺷور CTAB

ﻪﻧاوﺮﭘ زاDNA

ﺖﺳا ﺎﻫ . ﻞﻨﻓ شور رد ﺎﻣا ﺖﺳا ﺐﺳﺎﻨﻣ جاﺮﺨﺘﺳا ياﺮﺑ ﺰﯿﻧ ﺎﻬﺷور ﺮﯾﺎﺳ ﻪﭼﺮﮔا و ﯽﻤﺳ هدﺎﻣ ﮏﯾ ﻪﮐ ﻞﻨﻓ زا هدﺎﻔﺘﺳا ﻞﯿﻟد ﻪﺑ مﺮﻓوﺮﻠﮐ–

ﺖﺳا كﺎﻧﺮﻄﺧ شور رد و

Lysisbuffe ﻞﺣاﺮﻣ ندﻮﺑ ﯽﻧﻻﻮﻃ ﻞﯿﻟد ﻪﺑ

ﯽﮔدﻮﻟآ لﺎﻤﺘﺣا و ﯽﻟآ داﻮﻣ ﻪﺑ

شور ﺖﯾﺎﻬﻧ رد ياﺮﺑ CTAB

جاﺮﺨﺘﺳا ﻪﻧاوﺮﭘزاDNA

ﺎﻫ ﯽﻣ دﺎﻬﻨﺸﯿﭘ دﻮﺷ

.

ﻊﺑﺎﻨﻣ 1- Lodhi, M.A., Ye. G.N., Weeden. N.F., Reisch. B.I. 1998. A simple and efficient method of DNA extraction from grapevine cultivar and vitis species. Plant Mol. Biol. Rep., 12: 6-13

2- Sharma ,R., Mahla ,H.R., Mohapatra, T., Bhargava, S.C., Sharma., M.M. 2003. Isolating plant genomic DNA without liquid nitrogen. Plant MOL. Biol. Rep., 21:43-50.

3- Shi,J.,Xie., Y.P.,Xue., J.L. Yao, G.O.2005. Comparative study of methods for isolation of genomic DNA of scale insects, Chiness Bull. Ent., 42:207-211.

4- Wang, Q., W., X. 2012. Coparison of methods for DNA extraction from a single Chironomid for PCR analysis. Pakistan J. Zoo, 44(2): 421-426.

5- Zhao, X.M., Duszynski, D.W., Loker, E.S. 2001. A simple method of DNA Extraction For Eimeria species, J. Microbiol. Meth., 44: 131-137.