SKRIPSI
DILLA NOVITA
PERBANDINGAN AKTIVITAS ANTIOKSIDAN
EKSTRAK ETANOL DAUN Jatropha gossypifolia
Linn DARI BERBAGAI METODE EKSTRAKSI
REMASERASI
PROGRAM STUDI FARMASI
FAKULTAS ILMU KESEHATAN
SKRIPSI
DILLA NOVITA
PERBANDINGAN AKTIVITAS ANTIOKSIDAN
EKSTRAK ETANOL DAUN Jatropha gossypifolia
Linn DARI BERBAGAI METODE EKSTRAKSI
REMASERASI
PROGRAM STUDI FARMASI
FAKULTAS ILMU KESEHATAN
iii
Lembar Pengesahan
PERBANDINGAN AKTIVITAS ANTIOKSIDAN
EKSTRAK ETANOL DAUN
Jatropha gossypifolia
Linn
DARI BERBAGAI METODE EKSTRAKSI
REMASERASI
SKRIPSI
Dibuat untuk memenuhi syarat mencapai gelar Sarjana Farmasi pada Program Studi Farmasi Fakultas Ilmu Kesehatan
Universitas Muhammadiyah Malang 2015
Oleh:
DILLA NOVITA NIM : 201110410311220
Disetujui Oleh:
Pembimbing I Pembimbing II
Siti Rofida, S.Si., M.Farm., Apt Sovia Aprina Basuki, S.Farm., M.Si., Apt
iv
Lembar Pengujian
PERBANDINGAN AKTIVITAS ANTIOKSIDAN
EKSTRAK ETANOL DAUN
Jatropha gossypifolia
Linn
DARI BERBAGAI METODE EKSTRAKSI
REMASERASI
SKRIPSI
Telah diuji dan dipertahankan di depan tim penguji Pada tanggal 29 Juni 2015
Oleh:
Dilla Novita 201110410311220
Tim Penguji:
Penguji I Penguji II
Siti Rofida, S.Si., M. Farm., Apt. Sovia Aprina Basuki,S.Farm.M.Si.Apt. NIP 11408040453 NIP 11408040452
Penguji III Penguji IV
Drs. H. Achmad Inoni, Apt. Ahmad Shobrun Jamil, S. Si., M.P.
v
KATA PENGANTAR
Assalamu’alaikum warohmatullahi wabarokatuh.
Syukur alhamdulillah senantiasa terpanjatkan kehadirat Allah SWT yang telah melimpahkan rahmat dan hidyah-Nya serta telah memberikan nikmat berupa petunjuk, kesehatan, serta kesabaran kepada penulis sehingga dapat menyelesaikan skripsi yang berjudul Perbandingan Aktivitas Antioksidan
Ekstrak Etanol Daun Jatropha gossypifolia Linn dari Berbagai Metode
Ekstraksi Remaserasi.
Di dalam tulisan ini disajikan pokok-pokok pembahasan yang meliputi: perbandingan pengaruh aktivitas antioksidan dari berbagai metode ekstraksi remaserasi. Variabel yang digunakan oleh peneliti dalam penelitian ini yaitu nilai absorbansi terhadap laturan uji dengan kontrol pereaksi, serta konsentrasi ekstrak dengan dua metode ektraksi remaserasi. Hasil uji dari variabel tersebut merupakan nilai persen penghambatan ekstrak terhadap radikal bebas DPPH.
Tulisan ini tidak akan selesai tanpa ada bimbingan, dukungan dan do’a dari
orang-orang disekitar penulis. Pada kesempatan yang berharga ini, penulis mengucapkan terima kasih dari lubuk hati terdalam kepada:
1. Allah SWT yang telah memberikan rahmat dan hidayah-Nya kepada umat-Nya, Rasulullah SAW yang telah menuntun kita menuju jalan yang lurus. 2. Untuk kedua orangtua, Bapak Suhaemik dan Ibu Sholihati tercinta dan
tersayang yang tak pernah lelah memberikan kasih sayang, dukungan, arahan,
serta do’a demi kesuksesan ananda.
3. Bapak Prof. Dr. Muhajir Efendy, M.AP. selaku rektor Universitas Muhammadiyah Malang.
4. Yoyok Bekti Prasetyo, S.Kep, M.Kep., Sp.Kom selaku Dekan Fakultas Ilmu Kesehatan Universitas Muhammadiyah Malang.
vi
6. Drs. H. Achmad Inoni, Apt selaku penguji I dan Ahmad Shobrun Jamil, S.Si., MP selaku penguji II atas saran dan kritik yang diberikan sehingga penyusunan skripsi ini menjadi lebih baik.
7. Ahmad Shobrun Jamil, S.Si., MP juga selaku dosen wali. Terima kasih atas arahan bapak baik mengenai bidang akademik atau non akademik selama ini. 8. Untuk semua Dosen Farmasi Universitas Muhammadiyah Malang yang sudah
memberikan waktunya untuk mengajarkan ilmu-ilmu yang sangat bermanfaat. Terutama Ibu Arina Swastika Maulita, S.Farm., Apt., dan Ibu Sendi Lia Yunita, S. Farm., Apt. yang telah susah payah membantu jalannya ujian skripsi sehingga kami dapat melaksanakan ujian skripsi dengan baik. 9. Staff Tata Usaha Program Studi Farmasi Fakultas Ilmu kesehatan Universitas
Muhammadiyah Malang terima kasih karena telah banyak membantu dalam hal administrasi.
10. Teman-teman farmasi UMM angkatan 2011, yang telah memberi semangat. 11. Teman-teman sejawat kelompok antioksidan yang selalu ada disetiap waktu :
Lina, Rahman, Novi, Anita, Farida, Mareta, dan Kakak Lisna selalu kompak setiap saat.
12. Teman-teman satu kelompok organ yang selalu berbagi dan bersama: Asyifa dan Yulianita.
13. Temanku tercinta yang selalu memberi support hingga saat ini : Fardiana, Farida, Dewi, Nining.
14. Teman-teman KKN 107 yang selalu kompak dalam setiap suasana: Daus, Bayu, Dirami, Iin, dan Mas Muamar yang telah menjadi motivasi penulis dalam penyelesaian tulisan ini.
15. Kakak-kakakku yang paling konyol dan baik hati yang telah menjadi keluarga selama saya di Malang: Mas Agus, Mas Linus, Mbak Ferlyna, Mas Desis, Mas Dika, Mbak Evita terimakasih atas pengalaman yang kalian berikan. 16. Teman-teman kos Rajawali House tercinta yang selalu ramai dan bising:
vii
17. Teman-teman UKM Inkado UMM yang selalu kompak dan jahil, khususnya untuk para sensei yang telah berbagi ilmunya kepada kami.
18. Untuk semua pihak yang belum disebutkan namanya, penulis mohon maaf dan terima kasih yang sebesar-besarnya. Semua keberhasilan ini tak luput dari bantuan, doa yang telah kalian semua berikan.
Akhir kata kesempurnaan hanya milik Allah SWT dan kesalahan milik penulis, penulis menyadari masih banyak kekurangan yang terdapat dalam tulisan ini, sehingga penulis mengharapkan kritik dan saran yang sifatnya membangun demi kesempurnaan tulisan ini. Semoga penulisan skripsi ini dapat berguna bagi penelitian berikutnya ataupun bagi semua pihak yang membaca skripsi ini, aamiin.
Wassalamu’alaikum warohmatullohi wabarokatuh
Malang, 29 Juni 2015 Penyusun
viii
RINGKASAN
Radikal bebas merupakan suatu molekul yang memiliki satu atau lebih pasangan elektron yang tidak saling berpasangan. Hal ini yang menyebabkan molekul radikal bebas bersifat sangat reaktif. Hal ini dapat memicu terjadinya stres oksidatif yang sangat berbahaya bagi tubuh. Radikal bebas dalam jumlah yang berlebih dapat mengoksidasi biomolekul sel-sel dalam tubuh sehingga mengakibatkan berbagai macam penyakit seperti aterosklerosis, jantung koroner, alzheimer, diabetes hingga dapat menyebabkan kerusakan sel DNA dan mutasi sel (kanker). Agar tubuh terhindar dari dampak radikal bebas, maka diperlukan suatu senyawa yang dapat menghambat proses oksidasi dari radikal bebas tersebut. Antioksidan merupakan suatu senyawa yang dapat menghambat proses oksidasi dari molekul radikal bebas dengan cara mendonorkan salah satu elektronnya ke molekul radikal bebas sehingga menyebabkan radikal bebas menjadi suatu molekul yang lebih stabil. Salah satu tanaman obat yang dapat digunakan sebagai antioksidan alami adalah daun jarak merah (Jatropha gossypifolia Linn) dengan kandungan senyawa kimia antara lain alkaloid, flavonoid, polifenol, antrakuinon, dan tannin.
Penelitian ini dilakukan untuk mengetahui perbandingan aktivitas antioksidan ekstrak etanol daun Jatropha gossypifolia Linn dari dua metode ekstraksi remaserasi yaitu remaserasi non kinetik dan remaserasi kinetik. Tujuannya untuk mengetahui metode ekstraksi yang optimal untuk mendapatkan nilai aktivitas antioksidan terbaik pada daun Jatropha gossypifolia Linn. Selain itu dilakukan identifikasi profil KLT untuk mengetahui profil senyawa kimia yang terkandung dalam ekstrak etanol daun Jatropha gossypifolia Linn.
Pada pembuatan simplisia daun Jatropha gossypifolia Linn digunakan daun yang masih muda atau berwarna ungu. Daun kemudian dibersihkan, ditiriskan, dan dikeringkan di dalam oven pada suhu 50ᴼC selama tiga hari. Kemudian dilakukan penyerbukan dan pengayakan sehingga diperoleh 200,96 gram serbuk simplisia kering. Pada proses ekstraksi masing-masing sebanyak 100 gram serbuk simplisia digunakan untuk remaserasi non kinetik dan kinetik dengan dilarutkan dalam 1000 ml etanol 96% untuk setiap kali maserasi. Untuk remaserasi non kinetik dilakukan maserasi sebanyak tiga kali dengan perendaman dengan penggantian pelarut baru setiap 24 jam. Sedangkan untuk remaserasi kinetik dilakukan pengadukan secara kontinyu selama 4 jam dengan kecepatan 350 rpm. Filtrat dari hasil ekstraksi kedua metode tersebut disaring dan dipekatkan dengan vacuum rotary evaporator dan diperoleh rendemen ekstrak non kinetik sebesar 12,98% sedangkan rendemen ekstrak kinetik sebesar 9,20%.
Pada identifikasi profil KLT ekstrak etanol daun Jatropha gossypifolia Linn dilakukan pengujian kandungan senyawa metabolit sekunder alkaloid, terpenoid, flavonoid, polifenol, serta antrakuinon. Fase diam yang digunakan adalah kiesel gel GF254. Adapun fase gerak yang digunakan aldalah n-heksana : kloroform : etil asetat : asam formiat (6 : 3 : 3 : 1 tetes). Noda hasil eluasi diamati pada sinar tampak UV 254 nm dan 365 nm. Hasil identifikasi KLT menunjukkan bahwa ekstrak etanol daun Jatropha gossypifolia Linn positif mengandung golongan senyawa alkaloid, terpenoid, flavonoid, polifenol, serta antrakuinon.
ix
pengukuran panjang gelombang maksimum (λ maks) larutan kontrol pereaksi
DPPH dan juga pengukuran optimasi waktu inkubasi untuk menentukan operating time dari larutan uji serta larutan kontrol positif. Selanjutnya dilakukan pengukuran absorbansi larutan uji pada suhu ruangan dan tempat yang gelap dengan waktu inkubasi ekstrak remaserasi non kinetik selama 45 menit dan remaserasi kinetik selama 70 menit. Pengukuran absorbansi larutan uji dilakukan dengan larutan pengoreksi uji (blanko) sesuai pada panjang gelombang yang telah diukur sebelumnya. Perlakuan yang sama juga dilakukan pada larutan kontrol positif dengan waktu inkubasi selama 20 menit. Hasil dari pengukuran absorbansi selanjutnya digunakan sebagai data untuk menghitung persen inhibisi yang kemudian data dianalisis dengan regresi linier untuk memperoleh nilai IC50. Nilai IC50 dari ekstrak remaserasi non kinetik dan remaserasi kinetik dianalisis dengan program SPSS menggunakan uji t-Test Independent dua sampel bebas pada nilai α = 0,05 untuk mengetahui perbedaan kemampuan peredamannya terhadap radikal bebas DPPH.
x
ABSTRAK
Latar belakang: Antioksidan merupakan senyawa yang dapat mencegah
kerusakan sel dan jaringan tubuh akibat radikal bebas. Salah satu tanaman yang berpotensi sebagai antioksidan alami adalah daun Jatropha gossypifolia Linn. Bagian tanaman ini memiliki senyawa metabolit sekunder flavonoid dan polifenol yang berperan sebagai antioksidan karena mampu mereduksi radikal bebas dalam jaringan tubuh. Pemilihan metode ektraksi yang tepat juga memiliki pengaruh terhadap besarnya aktivitas antioksidan dalam tanaman tersebut.
Tujuan: Penelitian ini bertujuan untuk mengetahui perbandingan aktivitas
penghambatan terhadap radikal bebas ekstrak etanol daun Jatropha gossypifolia Linn yang diekstraksi dari metode ekstraksi remaserasi non kinetik dan kinetik.
Metode: In vitro DPPH dimana daun Jatropha gossypifolia Linn diekstraksi dengan dua metode yaitu remaserasi non kinetik dan kinetik menggunakan pelarut etanol 96%. Kemudian dilakukan identifikasi senyawa metabolit sekunder secara KLT. Pengukuran aktivitas antioksidan dilakukan dengan metode DPPH secara kuantitatif menggunakan spektrofotometer UV-Vis untuk mengetahui nilai IC50 dari kedua ekstrak.
Hasil dan kesimpulan: Hasil identifikasi profil KLT menunjukkan ekstrak etanol
daun Jatropha gossypifolia Linn positif mengandung alkaloid, terpenoid, flavonoid, polifenol, dan antrakuinon. Ekstrak dari hasil remaserasi non kinetik dan kinetik masing-masing memiliki nilai IC50 sebesar 27,45 µg/ml dan 31,32 µg/ml. Sedangkan IC50 dari vitamin C sebagai kontrol positif adalah sebesar 1,47 µg/ml. Dari hasil analisis statistik uji t-Test Independent menggunakan SPSS dapat disimpulkan bahwa kemampuan peredaman terhadap radikal bebas DPPH ekstrak etanol 96% daun Jatropha gossypifolia Linn dengan remaserasi non kinetik lebih tinggi daripada remaserasi kinetik (p = 0,033 < α = 0,05).
Kata Kunci: Daun Jatropha gossypifolia, Remaserasi, Antioksidan, Metode
xi
ABSTRACT
Background: Antioxidants are compounds that prevent cell and tissue damage
caused by free radicals. One of plants that have potential as natural antioxidants are leaves of Jatropha gossypifolia Linn. It has secondary metabolites as flavonoids and polyphenols that act as antioxidants because of able to reduce free radicals in the body tissues. Appropiate extraction method also has significant influence to the plant antioxidant activity.
Aim: This study aimed to compare the inhibitory activity against free radicals the
ethanol extract of Jatropha gossypifolia Linn. leaves which extracted by non kinetic and kinetic remaceration.
Method: In vitro of DPPH which are the leaves of Jatropha gossypifolia Linn. extracted by two method such as non kinetic and kinetic remaceration that use ethanol 96% as the solvent. Then do identification of secondary metabolites by TLC method. The measurement of antioxidant activity performed quantitatively by DPPH method using spectrophotometer UV-Vis to determine the IC50 values of both extracts.
Result and conclusion: The TLC profile identification show that the ethanolic
extract of Jatropha gossypifolia leaves are positif contain alkaloids, terpenoids, flavonoids, polyphenols, and anthraquinone. The IC50 values of non kinetic and kinetic remaceration are 27,45 µg/ml and 31,32 µg/ml. While the IC50 values of vitamin C as the positive control is 1,47 µg/ml. In statistical analysis of t-Test independent using SPSS program can be concluded that the reduction ability against free radical DPPH of ethanolic extract of Jatropha gossypifolia Linn. leaves from non kinetic remaceration is higher than kinetic remaceration (p=0,033 < α=0,05).
xii
DAFTAR ISI
Halaman
HALAMAN JUDUL ... i
LEMBAR PENGESAHAN ... iii
LEMBAR PENGUJIAN ... iv
KATA PENGANTAR ... v
RINGKASAN ... viii
ABSTRAK ... x
ABSTRACT ... xi
DAFTAR ISI ... xii
DAFTAR TABEL ... xvi
DAFTAR GAMBAR ... xvii
DAFTAR LAMPIRAN ... xviii
DAFTAR SINGKATAN ... xix
BAB I PENDAHULUAN ... 1
1.1 Latar Belakang ... 1
1.2 Rumusan Masalah ... 3
1.3 Tujuan Penelitian ... 3
1.4 Hipotesis ... 3
1.5 Manfaat Penelitian ... 3
BAB II TINJAUAN PUSTAKA ... 5
2.1 Tinjauan Tentang Tanaman Jarak Merah ... 5
2.1.1 Klasifikasi Tanaman Jarak Merah ... 5
2.1.2 Morfologi Tanaman Jarak Merah ... 6
2.1.3 Daerah Asal dan Penyebaran Tanaman Jarak Merah ... 7
2.1.4 Kandungan Tanaman Jarak Merah ... 7
2.1.5 Kegunaan dan Khasiat Tanaman Jarak Merah ... 8
2.2 Ekstraksi ... 9
2.2.1 Cara Dingin ... 10
2.2.2 Cara Panas ... 10
xiii
2.4 Pemilihan Solven ... 12
2.5 Tinjauan Kromatografi ... 13
2.6 Radikal Bebas ... 14
2.7 Antioksidan ... 15
2.7.1 Sumber Antioksidan ... 15
2.7.2 Mekanisme Antioksidan ... 16
2.7.3 Flavonoid ... 17
2.7.4 Vitamin C ... 18
2.8 Pengujian Aktivitas Antioksidan ... 18
2.8.1 Metode DPPH ... 19
2.8.2 Metode CUPRAC ... 19
2.8.3 Metode FRAP ... 19
2.8.4 Metode ABTS ... 20
2.8.5 Metode TRAP ... 20
2.8.6 Metode ORAC ... 21
2.9 Spektrofotometri ... 21
BAB III KERANGKA KONSEPTUAL ... 23
3.1 Skema Kerangka Konseptual ... 23
3.2 Uraian Teori Konseptual ... 24
BAB IV METODE PENELITIAN ... 26
4.1 Tempat Penelitian ... 26
4.2 Alat Penelitian ... 26
4.2.1 Pembuatan Serbuk Simplisia ... 26
4.2.2 Proses Ekstraksi... 26
4.2.3 Identifikasi Profil KLT ... 27
4.2.4 Pengujian Aktivitas Antioksidan ... 27
4.3 Bahan Penelitian ... 28
4.3.1 Bahan Uji... 28
4.3.2 Proses Ekstraksi... 28
4.3.3 Identifikasi Profil KLT ... 28
4.3.4 Pengujian Aktivitas Antioksidan ... 28
xiv
4.4.1 Desain Penelitian ... 28
4.4.2 Variabel Penelitian ... 29
4.5 Prosedur Penelitian ... 29
4.5.1 Persiapan Ekstrak Etanol 96% Daun Jarak Merah ... 29
4.5.2 Identifikasi Profil KLT ... 31
4.5.3 Persiapan Pembuatan Larutan Uji Aktivitas Antioksidan 31 4.5.4 Pengukuran Aktivitas Antioksidan dengan Spektrofotometri UV-Vis ... 35
4.6 Analisis Data ... 36
4.6.1 Perhitungan Persen Penghambatan ... 36
4.6.2 Perhitungan IC50 ... 37
4.6.3 Analisis Analitik ... 38
BAB V HASIL PENELITIAN ... 39
5.1 Hasil Determinasi Tanaman Jarak Merah ... 39
5.2 Hasil Pembuatan Serbuk Simplisia Daun Jarak Merah ... 39
5.3 Hasil Pembuatan Ekstrak Etanol Daun Jarak Merah... 40
5.4 Hasil Identifikasi Profil KLT Ekstrak Etanol Daun Jarak Merah 41 5.4.1 Hasil Identifikasi Senyawa Alkaloid ... 41
5.4.2 Hasil Identifikasi Senyawa Terpenoid ... 41
5.4.3 Hasil Identifikasi Senyawa Flavonoid... 42
5.4.4 Hasil Identifikasi Senyawa Polifenol ... 43
5.4.5 Hasil Identifikasi Senyawa Antrakuinon... 43
5.4.6 Hasil Nilai Rf dari Identifikasi Profil KLT ... 44
5.5 Hasil Pengukuran Aktivitas Antioksidan Secara Spektrofotometri UV-Vis ... 45
5.5.1 Hasil Pengukuran Panjang Gelombang Maksimum Larutan DPPH ... 45
5.5.2 Hasil Pengukuran Operating Time ... 48
5.5.3 Hasil Pengukuran Absorbansi ... 50
5.6 Hasil Analisis Data ... 52
5.6.1 Hasil Analisis Data Deskriptif... 52
xv
BAB VI PEMBAHASAN ... 56
BAB VII KESIMPULAN DAN SARAN ... 63
7.1 Kesimpulan ... 63
7.2 Saran ... 63
xvi
DAFTAR TABEL
Tabel Halaman
II.1 Skrining Fitokimia Kualitatif Daun Jarak Merah ... 8 V.1 Nilai Moisture Content Simplisia Serbuk Daun Jarak Merah ... 39 V.2 Rendemen Hasil Ekstraksi Daun Jarak Merah ... 40 V.3 Nilai Rf dari Identifikasi Profil KLT Ekstrak Etanol Daun Jarak Merah 44 V.4 Data Pengukuran λ Maksimum DPPH pada Operating Time Larutan Uji 45
V.5 Data Pengukuran λ Maksimum DPPH pada Operating Time Larutan
Kontrol Positif ... 46
V.6 Data Pengukuran λ Maksimum DPPH pada Pengukuran Absorbansi
Larutan Uji ... 46 V.7 Data Pengukuran λ Maksimum DPPH pada Pengukuran Absorbansi
Larutan Kontrol Positif ... 47 V.8 Data Pengukuran Operating Time pada Absorbansi Larutan Uji dengan
DPPH pada λ Maksimum 515 nm ... 48 V.9 Data Pengukuran Operating Time pada Absorbansi Larutan Kontrol
Positif dengan DPPH pada λ Maksimum 514 nm ... 49 V.10 Data Pengukuran Absorbansi Larutan Uji Ekstrak Etanol Daun Jarak
Merah ... 50 V.11 Data Pengukuran Absorbansi Larutan Kontrol Positif ... 51 V.12 Data Hasil Perhitungan Persen Inhibisi dan IC50 Larutan Uji Ekstrak
Remaserasi Non Kinetik ... 53 V.13 Data Hasil Perhitungan Persen Inhibisi dan IC50 Larutan Uji Ekstrak
xvii
DAFTAR GAMBAR
Gambar Halaman
2.1 Tanaman Jarak Merah ... 5
2.2 Daun Jarak Merah ... 6
5.1 Ekstrak Etanol 96% Daun Jarak Merah (Jatropha gossypifolia L.) ... 40
5.2 Hasil Identifikasi Golongan Alkaloid dengan KLT ... 41
5.3 Hasil Identifikasi Golongan Terpenoid dengan KLT... 42
5.4 Hasil Identifikasi Golongan Flavonoid dengan KLT ... 42
5.5 Hasil Identifikasi Golongan Polifenol dengan KLT ... 43
xviii
DAFTAR LAMPIRAN
Lampiran Halaman
1 Daftar Riwayat Hidup ... 72
2 Surat Pernyataan ... 73
3 Determinasi Tanaman Jarak Ulung ... 74
4 Perhitungan Konsentrasi Larutan ... 75
5 Bagan Kerja Penelitian ... 80
6 Penentuan Panjang Gelombang Maksimum ... 90
7 Penentuan Waktu Inkubasi / Operating Time ... 96
8 Pengukuran Nilai Absorbansi Ekstrak Kinetik Daun Jarak Merah ... 98
9 Pengukuran Nilai Absorbansi Ekstrak Non Kinetik Daun Jarak Merah .. 103
10 Pengukuran Nilai Absorbansi Vitamin C ... 108
11 Grafik Perbandingan Kadar dan Persen Inhibisi ... 113
12 Hasil Analisis SPSS ... 116
xix
DAFTAR SINGKATAN
µg mikrogram
µl mikroliter
µm mikrometer
8-OH-dG 8-hydroxy-20-deoxyguanosine
ABTS 2,2’-azino-bis-(3-ethyl-benzthiazoline-6-sulfonic acid) ACFTA ASEAN China Free Trade Agreement
AGE Advanced Glycation End products BHA Butylated hydroxyanisole
BHT Butylated hydroxytoluene
BM berat molekul
BPOM Badan Pengawas Obat dan Makanan BPTP Balai Penelitian Tanaman Pangan
Ca2+ kalsium
DNA deoxyribonucleic acid
DPPH 2,2-Diphenyl-1-picrylhydrazyl
Fe++ fero
Fe+++ feri
FRAP Ferric Reducing Ability of Plasma GSH reduced glutathione
GSSG oxidised glutathione
IC50 inhibitor concentration 50% KLT kromatografi lapis tipis
mM miliMolar
ppm part per million (contoh: 1 gram dalam 1 liter)
Rf retention factor
RNS reactive nitrogen species ROS reactive oxygen species
rpm rotasi per menit
64
DAFTAR PUSTAKA
Apak, R., Güçlü, K., Demirata, B., Özyürek, M., Çelik, S. E., Bektaşoğlu, B., Berker, K.I., and Özyurt, D. 2007. Comparative Evaluation of Various Total Antioxidant Capacity Assay Applied to Phenolic Compunds with The CUPRAC Assay. Molecules, Vol. 12, pp. 1496-1547.
Ardhie, A.M. 2011. Radikal Bebas dan Peran Antioksidan dalam Mencegah Penuaan. Medicinus, Scientific Journal of Pharmaceutical Development and Medical Application, Vol. 24 No. 1, pp. 4-9.
BPOM. 2010. Acuan Sediaan Obat Herbal, Edisi ke-1. Jakarta: Badan
Pengawas Obat Dan Makanan, pp. 1-8.
Budiyati, E., Tridayana, A. 2013. Pengaruh Kecepatan Putaran Pengaduk Terhadap Konsentrasi Polifenol, kca, dan De pada Ekstraksi Polifenol dari Kulit Apel Malang. Surakarta: Simposium Nasional RAPI XII FT UMS,
pp. 82-88.
Cahyadi, Wisnu. 2006. Analisis dan Aspek Kesehatan Bshan Tambahan Pangan. Jakarta: PT Bumi Aksara. pp. 120-121.
Cao, G., Alessio, H.M., Cutler, R.G. 1993. Oxygen Radical Absorbance Capacity Assay for Antioxidants. Free Radical Biology and Medicine, Vol. 14, pp. 303-311.
Depkes RI. 2000. Parameter Standar Umum Ekstrak Tanaman Obat. Cetakan
Pertama, Jakarta: Direktorat Jenderal POM, Departemen Kesehatan Republik Indonesia, pp. 1 - 12.
Depkes RI, 2009. Farmakope Herbal Indonesia. Jakarta: Direktorat Jenderal
POM, Departemen Kesehatan Republik Indonesia.
Ditjen POM. 1995. Farmakope Indonesia. Edisi IV, Jakarta: Departemen
Kesehatan RI.
65
Edawati, Z. 2012. Uji Aktivitas Antioksidan Ekstrak Metanol Ascidia Didemnum sp. Dari Kepulauan Seribu dengan Metode 1,1-difenil-2-pikrilhidrazil (DPPH) dan Identifikasi Golongan Senyawa dari Fraksi Teraktif. Skripsi Sarjana S1 Program Studi Farmasi Ekstensi, Fakultas Matematika dan Ilmu Pengetahuan Alam, Universitas Indonesia. Depok, p. 25.
Fauzana, D. L. 2010. Perbandingan Metode Maserasi, Remaserasi, Perkolasi dan Reperkolasi Terhadap Rendemen Ekstrak Temulawak (Curcuma Xanthorrhiza Roxb). Skripsi Departemen Teknologi Industri Pertanian, Fakultas Teknologi Pertanian, Institut Pertanian Bogor, pp. 19-32.
Finkel, T., and Holbrook, N.J. 2000. Oxidants, Oxidative Stress and Biology of Ageing, Nature, Vol. 408, pp. 239–247.
Giorgio. P. 2000. Flavonoid An Antioxidant. Journal National Product, Vol. 63,
pp. 1035-1045.
Gordon, M.H. 1990. The Mechanism of Antioxidant Action In Vitro. In: Hudson B.J.F. (Ed.). Food Antioxidant. New York: Elsevier Applied Science.
Halliwell, B., Hoult, J.R., Blake, D.R. 1988. Oxidants, inflammation, and anti-inflammatory drugs. FASEB J, Vol. 2, pp. 2867–2873.
Hamid, A. A., Aiyelaagbe, O.O., Usman, L.A., Ameen, O.M., and Lawal, A. 2010. Antioksidants: Its Medicinal and Pharmacological Applications.
African Journal of Pure and Applied Chemistry, Vol. 4 No. 8, pp.
142-151.
Hanani, E. Mun’im, A. dan Sekarin, R. 2005. Identifikasi Senyawa Antioksidan dalam Spons Callyspongia sp. dari Kepulauan Seribu. Majalah Ilmu Kefarmasian, Vol. 2 No. 3, pp. 127-133.
Handa, S. S.,Khanuja, S.P.S., Longo, G., and Rakesh, D.D. 2008. Extraction Technologies for Medicinal and Aromatic Plants. International Centre for Science and High Technology.
Harborne, J.B. 1997. Metode Fitokimia: Penuntun Cara Modern Menganalisa Tumbuhan. Penerjemah: K. Padmawinata. Terjemahan dari: Phytochemical
Methods: A Guide to Modern Techniques of Plant Analysis. Bandung: ITB Press.
Harmita. 2004. Petunjuk Pelaksanaan Validasi Metode dan Cara Perhitungannya.
66
Heinrich, M., Barnes, J., Simon, G., Williamso, and Elizabeth, M. 2004.
Fundamental of Pharmacognosy and Pyhtotherapy. Hungary: Elsevier.
Hernani, and M. Raharjo. 2005. Tanaman Berkhasiat Antioksidan. Jakarta:
Penebar Swadaya.
Huang, D., Ou, B., Hampsch-Woodill, M., Flanagan, J.A., Deemer, E.K. 2002. Development and Validation of Oxygen Radical Absorbance Capacity
Assay for Lipophilic Antioxidants Using Randomly Methylated β -cyclodextrin as The Solubility Enhancer. Journal of Agriculture and Food Chemistry, Vol. 50, pp. 1815-1821.
Igbinosa, O.O., Igbinosa, E.O., and Aiyegoro, O. A. 2009. Antimicrobial Activity and Phytochemical Screening of Stem Bark Extracts from Jatropha curcas (Linn). African Journal of Pharmacy and Pharmacology, Vol. 3 No. 2,
pp. 058-062.
Igbinosa, O.O., Igbinosa, I.H., Chigor, V.N., Uzunuigbe, O. E., Oyedemi, O. S., Odjadjare, E.E., Okoh, A.I., and Igbinosa, E.O. 2011. Polyphenolic Contents and Antioxidant Potential of Stem Bark Extracts from Jatropha curcas (Linn). Int. J. Mol. Sci, pp. 1-14.
Kalt, W., Forney, C.F., Martin, A. and Prior, R.L., 1999, Antioxidant Capacity, Vitamin C, Phenolics and Anthicyaninns After Presh Storage of Small Fruits. J. Agric. Food Chem., Vol. 47, pp. 463-464.
Kikuzaki, H., Hisamoto, M., Hirose, K., Akiyama, K. and Taniguchi, H., 2002. Antioxidants Properties of Ferulic Acid and Its Related Compound. J. Agric. Food Chem., Vol. 50, pp. 2161-2168.
Khyade, M.s., and Vaikos, N.P. 2011. Pharmacognostical and Phytochemical Evaluation of Leaf of Jatropha gossypifolia. International Journal of Research in Ayurveda and Pharmacy, Vol. 2 No. 1, pp. 177-180.
Kristanti, A.N., Aminah, N.S. Tanjung, M., Yusamsutin, Azizah, dan Marwati, D.S. 2006. Isolasi Senyawa Antrakuinon dari Cassia multijuga (Leguminosae). Jurnal Kimia Indonesia, Vol. 1 No. 1, pp.17-21.
Levine, S. A., and J. H. Reinhardt. 1983. Biochemical-Pathology Initiated by Free Radicals, Oxidant Chemicals, and Therapeutic Drugs in the Etiology of Chemical Hypersensitivity Disease. Orthomolecular Psychiatry, Vol. 12
67
Manoi, F. 2006. Pengaruh Cara Pengeringan Terhadap Mutu Simplisia Sambiloto.
Bul. Littro, Vol. 17 No. 1, pp. 1-5.
Masrifah, Y.R. 2006. Isolasi dan Uji Aktivitas Anti Radikal Bebas Senyawa Fenolik Fraksi Etil Asetat dari Kulit Batang Cassia spectabilis DC. Skripsi Fakultas MIPA Universitas Airlangga. Surabaya, pp. 1-2.
Meydani, S.N., Wu, D., Santos, M.S., and Hayek, M.G. 1995. Antioxidants and Immune Response in Aged Persons: Overview of Present Evidence. The
American Journal of Clinical Nutrition, Vol. 62.
http://www.ajcn.nutrition.org. Accessed at June 25, 2015.
Miller, A.L., 1996. Antioxidant Flavonoid: Structure, Function and Clinical Usage. Alt Med Rev., Vol. 1 No. 2, pp. 103-111.
Molyneux, P. 2004. The Use of The Stable Free Radical Diphenylpicrylhydrazyl (DPPH) for Estimating Antioxidant Activity. Songklanakarin Journal Science Technology, Vol. 26 No. 2, pp. 211-219.
Morton, J.F. 1981. Atlas of Medicinal Plants of Middle America: Bahamas to Yucatan. Charles C. Thomas, Springfield, USA, p. 1420.
Mukhriani. 2014. Ekstraksi, Pemisahan Senyawa, dan Identifikasi Senyawa Aktif.
Jurnal Kesehatan, Vol. 7 No. 2, pp. 361-367.
Ncube, N.S., Afolayan, A.J., Okoh, A.I. 2008. Assessment Techniques of Antimicrobial Properties of Natural Compounds of Plant Origin: Current Methods and Future Trends. African Journal of Biotechnology, Vol. 7 No.
12, pp. 1797-1806.
Nose, K. 2000. Role of Reactive Oxygen Species in Regulation of Physiological Functions. Biol. Pharmaceut. Bull., Vol. 22, pp. 897–903.
Nurdiansyah., dan Redha, A. 2011. Efek Lama Maserasi Bubuk Kopra Terhadap Rendemen, Densitas, dan Bilangan Asam Biodiesel yang Dihasilkan dengan Metode Transesterifikasi In Situ. Jurnal Belian, Vol. 10 No. 02, pp. 218 –
224.
Nwokocha., Blessing, A., Agbagwa, I.O., and Okoli, B.E. 2011. Comparative Phytochemical Screening of Jatropha L. Species in The Niger Delta.
68
Omoregbe, R.E., Ikuebe, O.M., Ihimire, I.G. 1996. Antimicrobial Activity of Some Medicinal Plants Extracts on Eschericia Coli, Salmonella paratyphi and Shigella dysentriae. Afr. J. Med. Med. Sci., Vol. 25, pp. 373–375.
Oskoueian, H., Abdullah, N., Saad, W.S., Omar, A.R., Ahmad, S., Kuan, W.B., Zolkifli, N.A., Hendra, R., and Ho, Y.W. 2011. Antioksidant, Anti-inflamatory and Anticancer Activities of Methanolic Extracts from Jatropha curcas Linn. Journal of Medicinal Plants Research, Vol. 5 No. 1, pp.
49-57.
Otohinoyi, D.A., Ekpo, O., and Ibraheem, O. 2014. Effect of Ambient Temperature Storage On 2,2-Diphenyl-1-Picrylhydrazyl (DPPH) as a Free Radical for The Evaluation of Antioxidant Activity. Int. J. Biol. Chem. Sci., Vol. 8 No. 3, pp. 1262-1268.
Ou, B., Hampsch-Woodill, M., Prior, R.L. 2001. Development and Validation of An Improved Oxygen Radical Absorbance Capacity Assay Using Fluorescein as The Fluorescent Probe. Journal of Agriculture and Food Chemistry, Vol. 49, pp. 4610-4626.
Ozenirler, S., Erkan, G., Gulbahar, O., Bostankolu, O., Demirel, O.O., Bilgihan, A., Akyol, G. 2011. Serum Levels of Advanced Oxidation Protein Products, Malonyldialdehyde, and Total Radical Trapping Antioxidant Parameter in Patients with Chronic Hepatitis C. The Turkish Journal of Gastroenterology, Vol. 22 No. 1, pp. 47-53.
Parwata, I.M.O.A., Ratnayani, K., and Listya, A. 2010. Aktivitas Antiradikal Bebas serta Kadar Beta Karoten pada Madu Randu (Ceiba pentandra) dan Madu Kelengkeng (Nephelium longata L.). Jurnal Kimia, Vol. 4 No. 1,
pp. 54-62.
Pinnell, S.R. 2003. Cutaneous Photodamage, Oxidative Stress, and Topical Antioxidant Protection. J. Am. Acad. Dermatol., No. 48, pp. 1-19.
Prakash, A., Rigelhof, F., and Miller, E. 2001. Antioxidant Activity. Med Lab Anal Prog, Vol. 19 No.2, pp. 1–6.
Pratiwi, D., Wahdaningsih, S., dan Isnindar. 2013. Uji Aktivitas Antioksidan Daun Bawang Mekah (Eleutherine americana Merr.) dengan Metode DPPH (2,2-difenil-1-pikrilhidrazil). Trad. Med. Journal, Vol. 18 No. 1, pp. 9-16.
69
Prayitno, E., dan Nuryandani, E. 2011. Optimalisasi Ekstraksi DNA Jarak Pagar (Jatropha curcas) Melalui Pemilihan Daun yang Sesuai. Bioteknologi, Vol.
8 No. 1, pp. 24-31.
Percival, M. 1998. Antioxidants. Clinical Nutrition Insight, pp. 1-4.
Pérez-Jiménez, J., S. Arranz, M. Tabernero, M. E. Díaz-Rubio, J. Serrano, I. Goñi, and F. Saura-Calixto. 2008. Updated Methodology to Determine Antioxidant Capacity in Plant Foods, Oils and Beverages: Extraction, Measurement and Expression of Results. Food Research International,
Vol. 41 No. 3, pp. 274-285.
Pollastri S., Tattini M. 2011. Flavonols: old compounds for old roles. Ann Bot.,
Vol. 108, pp. 1225-1233.
Pokorny, J. and Korczak, J. 2001. Preparation of Natural Antioxidant. In: M. Gordon (Ed.). Antioxidant In Food. New York, Washington D.C. : CRC
Press.
Prior, R. L., G. Cao, A. Martin, E. Sofic, J. McEwen, and C. O_Brien. 1998. Antioxidant Capacity as Influenced by Total Phenolic and Anthocyanin Content, Maturity, and Variety of Vaccinium Species. Journal of Agricultural and Food Chemistry, Vol. 46, pp. 2686-2693.
Rohmatussolihat. 2009. Antioksidan, Penyelamat Sel-Sel Tubuh Manusia.
BioTrends, Vol. 4 No. 1, pp. 1-6.
Sabandar, C.W., Ahmat, N., Jaafar, F.M., and Sahidin, I., 2013. Medicinal Property, Phytochemistry and Pharmacology of Several Jatropha Species (Euphorbiaceae): A Review. Phytochemistry, Vol. 85, pp.7–2.
Safaryani, N., Haryanti, S., Hastuti, E.D., 2007. Pengaruh Suhu dan Lama Penyimpanan terhadap Penurunan Kadar Vitamin C Brokoli (Brassica oleracea L). Buletin Anantomi dan Fisiologi, Vol. 15 No. 2, p. 2.
Sarker, S. D., Latif, Z., and Gray, A.I. 2005. Natural Products Isolation. Second
Edition. Humana Press Inc., pp. 29-44.
70
Sastrohamidjojo, H. 2001. Kimia Dasar. Yogyakarta: Gajah Mada University
Press, pp. 39-41.
Selawa, W., Runtuwene, M.R.J., and Citraningtyas, G. 2013. Kandungan Flavonoid dan Kapasitas Antioksidan Total Ekstrak Etanol Daun Binahong [Anredera cordifolia (Ten.) Steenis.]. Jurnal Ilmiah Farmasi, Vol. 2 No. 1.
Sen, S., R. Chakraborty, C. Sridharl, Y.S.R. Reddy, & B. De. 2010. Free Radicals, Antioxidants, Diseases and Phytomedicines: Current Status and Future Prospect. Inter. J. Pharmaceu. Sci.Rev and Res., Vol. 3 No. 1, pp. 91-100.
Seth, R., and R. Sarin. 2010. Analysis of the Phytochemical Content and Anti-microbial Activity of Jatropha gossypifolia L. Scholar Research Library,
Vol. 2 No. 5, pp. 285-291.
Silva, J.F., Giordani, R.B., Silva-Jr, A.A.d., Zucolotto, S.M., and Pedrosa, M.d.F.F., 2014. Jatropha gossypifolia L. (Euphorbiaceae): A Review of Traditional Uses, Phytochemistry, Pharmacology, and Toxicology of This Medicinal Plant. Evidence-Based Complementary and Alternative Medicine, pp. 1-32.
Sroka, Z. 2005. Antioxidative and Antiradical Properties of Plant Phenolics.
Department of Pharmacognosy, Wrocław University of Medicine.
Poland, pp. 50-140.
Stanojevic, L., Stankovic, M., Nikolic, V., Nikolic, L., Ristic, D., Canadanovic-Brunet, J. and Tumbas, V. 2009. Antioxidant Activity and Total Phenolic and Flavonoid Contents of Hieracium pilosella L. Extracts. Sensors, Vol. 9
No.7, pp. 5702-5714.
Subeki, 1998. Pengaruh Cara Pemasakan Terhadap Kandungan Antioksidan Beberapa Macam Sayuran serta Daya Serap dan Retensinya Pada Tikus Percobaan. Bogor: Tesis Program Pascasarjana, Institut Pertanian Bogor.
Syukur, R., Alam, G., Rahim, A., dan Tayeb, R. 2011. Aktivitas Antiradikal Bebas Beberapa Ekstrak Tanaman Familia Fabaceae. JST Kesehatan, Vol.
1 No. 1, pp. 61–67.
71
Tiwari, P., Kumar, B., Kaur, M., Kaur, G., Kaur, H. 2011. Phytochemical Screening and Extraction: A Review. Internationale Pharmaceutica Sciencia, Vol. 1 No. 1, pp.1-9.
Triyati, E. 1985. Spektrofotometer Ultra-Violet dan Sinar Tampak Serta Aplikasinya dalam Oseanologi. Oseana, Vol. 10, pp. 39-47.
1
BAB I
PENDAHULUAN
1.1Latar Belakang
Oksigen berperan dalam metabolisme lemak, protein, dan karbohidrat untuk energi. Namun, oksigen adalah atom yang sangat reaktif yang mampu menjadi bagian dari molekul perusak potensial yang biasa disebut radikal bebas. Radikal bebas mampu menyerang sel-sel sehat tubuh, menyebabkan mereka kehilangan struktur dan fungsinya (Percival, 1998).
Radikal bebas merupakan suatu senyawa asing yang masuk ke dalam tubuh dan merusak sistem imunitas tubuh. Radikal bebas tersebut dapat timbul akibat berbagai proses kimia yang kompleks dalam tubuh, polutan lingkungan, radiasi zat-zat kimia, racun, makanan cepat saji, dan makanan yang digoreng pada suhu tinggi. Jika jumlahnya berlebih, radikal bebas akan memicu efek patologis. Radikal bebas yang berlebih dapat menyerang apa saja terutama yang rentan seperti lipid, protein dan berimplikasi pada timbulnya berbagai penyakit degeneratif. Oleh karena itu pembentukan radikal bebas harus dihalangi atau dihambat dengan senyawa yang disebut antioksidan (Selawa et al., 2013).
Antioksidan adalah zat penghambat reaksi oksidasi akibat radikal bebas yang dapat menyebabkan kerusakan asam lemak tak jenuh, membran dinding sel, pembuluh darah, basa DNA, dan jaringan lipid sehingga menimbulkan penyakit (Subeki, 1998). Antioksidan mampu melindungi tubuh terhadap kerusakan yang disebabkan senyawa oksigen reaktif, mampu menghambat terjadinya penyakit degeneratif.
Penggunaan senyawa antioksidan semakin berkembang baik untuk makanan maupun pengobatan seiring dengan bertambahnya pengetahuan tentang radikal bebas. Stress oksidatif merupakan keadaan yang tidak seimbang antara jumlah molekul radikal bebas dan antioksidan dalam tubuh (Trilaksani, 2003).
2
Antioksidan dari bahan sintetis memberikan efek samping yang cukup berbahaya bagi kesehatan, terutama menyebabkan kanker. Oleh karena itu dicari sumber antioksidan alami yang lebih aman untuk dikembangkan. Senyawa kimia yang tergolong dalam kelompok antioksidan dan dapat ditemukan pada tanaman, antara lain berasal dari golongan polifenol, bioflavonoid, vitamin C, vitamin E, beta karoten, katekin dan resveratrol (Hernani, 2005).
Jarak merah (Jatropha gossypifolia Linn), tanaman kebun yang umum di negara-negara tropis telah digunakan sebagai obat tradisional. Tanaman yang dikenal sebagai sumber utama obat-obatan modern. Dari zaman kuno, manusia telah memanfaatkan tanaman untuk pengobatan atau pencegahan penyakit, yang mengarah ke timbulnya obat tradisional. Jatropha gossypifolia adalah salah satu golongan yang digunakan dalam pengobatan tradisional Cina, Ayurvedic dan Thailand untuk pengobatan demam, nyeri dan disentri (Wasana et al., 2008).
Metode yang paling sering digunakan untuk menguji aktivitas antioksidan tanaman obat adalah metode uji dengan menggunakan radikal bebas DPPH. DPPH merupakan radikal bebas yang dapat bereaksi dengan senyawa yang dapat mendonorkan atom hidrogen, dapat berguna untuk pengujian aktivitas antioksidan komponen tertentu dalam suatu ekstrak. Metode DPPH (1,1-difenil-2-pikrilhidrazil) merupakan metode yang mudah, cepat, dan sensitif untuk pengujian aktivitas antioksidan senyawa tertentu atau ekstrak tanaman (Widyastuti, 2010). Senyawa yang bereaksi sebagai penangkap radikal bebas akan mereduksi DPPH membentuk DPPH-H yang tereduksi. Reaksi ini diamati dengan adanya perubahan warna DPPH dari ungu menjadi kuning ketika elektron ganjil dari radikal DPPH telah berpasangan dengan hidrogen dari senyawa penangkap radikal bebas (Molyneux, 2004).
3
1.2Rumusan Masalah
1. Bagaimana aktivitas penghambatan ekstrak etanol 96% daun Jatropha gossypifolia yang diekstraksi dengan metode remaserasi non kinetik terhadap radikal bebas DPPH?
2. Bagaimana aktivitas penghambatan ekstrak etanol 96% daun Jatropha gossypifolia yang diekstraksi dengan metode remaserasi kinetik terhadap radikal bebas DPPH?
3. Bagaimana perbedaan aktivitas penghambatan ekstrak etanol 96% daun Jatropha gossypifolia yang diekstraksi dengan metode remaserasi non
kinetik dan remaserasi kinetik terhadap radikal bebas DPPH?
1.3Tujuan Penelitian
1. Untuk mengetahui aktivitas penghambatan ekstrak etanol 96% daun Jatropha gossypifolia yang diekstraksi dengan metode remaserasi non kinetik terhadap radikal bebas DPPH.
2. Untuk mengetahui aktivitas penghambatan ekstrak etanol 96% daun Jatropha gossypifolia yang diekstraksi dengan metode remaserasi kinetik terhadap radikal bebas DPPH.
3. Untuk mengetahui perbedaan aktivitas penghambatan ekstrak etanol 96% daun Jatropha gossypifolia yang diekstraksi dengan metode remaserasi non kinetik dan remaserasi kinetik terhadap radikal bebas DPPH.
1.4Hipotesis
Ekstrak etanol daun jarak merah (Jatropha gossypifolia) yang diekstraksi dengan metode remaserasi kinetik dapat memberikan aktivitas penghambatan (IC50) terhadap radikal bebas DPPH yang lebih tinggi dibandingkan dengan remaserasi non kinetik.
1.5Manfaat Penelitian
4
a. Bagi Peneliti
Peneliti dapat memperoleh pengetahuan tentang efektifitas ektrak daun jarak merah (Jatropha gossypifolia Linn) terhadap berbagai penyakit seperti aktivitas sebagai antioksidan.
b. Bagi Masyarakat
