Lampiran 2. Gambar tumbuhan sirsak
Lampiran 2. (lanjutan)
a
b
Keterangan : a. Daun sirsak (Annona muricata folium)
Lampiran 2. (Lanjutan)
Serbuk Simplisia Daun Sirsak
Keterangan: 1. Epidermis atas 5. Serabut
2. Jaringan palisade 6. Rambut penutup
3. Stomata tipe anomositik 7. Pembuluh kayu dengan penebalan 4. Parenkim bernoktah tangga
Lampiran 3. Perhitungan Hasil Pemeriksaan Karakteristisasi Simplisia
1. Perhitungan Penetapan Kadar Air
a. Berat sampel = 5,009 g Volume air = 0,35 ml Kadar air = 0,35
5,009 � 100% = 6,99%
b. Berat sampel = 5,003 g
Volume air = 0,35 ml Kadar air = 0,35
5,003 � 100% = 6,99%
c. Berat sampel = 5,002 g
Volume air = 0,35 ml Kadar air = 0,35
5,002 x 100% = 6,99%
Kadar air rata-rata = (6,99+6,99+6,99)%
3 = 6,99%
Kadar air simplisia = Volume air
Lampiran 3. (Lanjutan)
a. Perhitungan Penetapan Kadar Sari Larut dalam Air
a. Berat sampel = 5,013 g Berat sari = 0,195 g Kadar sari = 0,195
5,013 � 100
20 � 100% = 19,5%
b. Berat sampel = 5,008 g Berat sari = 0,192 g
Kadar sari = 0,192
5,008 � 100
20 � 100% = 19,2%
c. Berat sampel = 5,009 g Berat sari = 0,192 g Kadar sari = 0,192
5,009 x 100
20 x 100% = 19,2%
Kadar sari rata-rata = (19,5+19.2+19.2)%
3 = 19,3%
Kadar sari = Berat sari Berat Sampel x
100
Lampiran 3. (Lanjutan)
b. Perhitungan Penetapan Kadar Sari Larut dalam Etanol
a. Berat sampel = 5,001 g Berat sari = 0,235 g Kadar sari = 0,235
5,001 � 100
20 � 100% = 23,5%
b. Berat sampel = 5,005 g Berat sari = 0,238 g
Kadar sari = 0,238
5,005 � 100
20 � 100% = 23,8%
c. Berat sampel = 5,011 g Berat sari = 0,238 g Kadar sari = 0,238
5,011 x 100
20 x 100% = 23,8%
Kadar sari rata-rata = (23,5+23,8+23,8)%
3 = 23,7%
Lampiran 3. (Lanjutan)
Kadar sari = Berat sari Berat Sampel x
100
c. Perhitungan Penetapan Kadar Abu Total
a. Berat sampel = 2,012 g Berat abu = 0,061 g Kadar abu = 0,061
2,012 � 100% = 3,03%
b. Berat sampel = 2,003 g Berat abu = 0,060 g Kadar abu = 0,060
2,003 � 100% = 2,99%
c. Berat sampel = 2,021 g Berat abu = 0,061 g Kadar abu = 0,061
2,021 x 100% = 3,02%
Kadar abu total rata-rata = (3,03+2,99+3,02)%
3 = 3,01%
Lampiran 3. (Lanjutan)
Kadar abu total = Berat Abu
d. Perhitungan Penetapan Kadar Abu Tidak Larut Asam
a. Berat sampel = 2,012 g Berat abu = 0,18 g Kadar abu = 0,18
2,012 � 100% = 0,89%
b. Berat sampel = 2,003 g Berat abu = 0,021 g
Kadar abu = 0,021
2,003 � 100% = 1,05%
c. Berat sampel = 2,021 g
Berat abu = 0,020 g Kadar abu = 0,020
2,021 x 100% = 0,99%
Kadar abu total rata-rata = (0,89+1,05+0,99)%
3 = 0,98%
Lampiran 4. Perhitungan Hasil Pemeriksaan Karakteristisasi Ekstrak Kadar abu tidak larut asam = Berat Abu
1. Perhitungan Penetapan Kadar Air
a. Berat sampel = 5,014 g Volume air = 0,1 ml Kadar air = 0,1
5,014 � 100% = 1,99%
b. Berat sampel = 5,002 g Volume air = 0,1 ml Kadar air = 0,1
5,002 � 100% = 2%
c. Berat sampel = 5,001 g Volume air = 0,1 ml Kadar air = 0,1
5,001 x 100% = 2%
Kadar air rata-rata = (1,99+2+2)%
3 = 1,99%
Lampiran 4. (Lanjutan)
a. Perhitungan Penetapan Kadar Abu Total Kadar air simplisia = Volume air
a. Berat sampel = 2,001 g Berat abu = 0,042 g Kadar abu = 0,042
2,001 � 100% = 2,1%
b. Berat sampel = 2,021 g Berat abu = 0,051 g Kadar abu = 0,051
2,021 � 100% = 2,52%
c. Berat sampel = 2,058 g Berat abu = 0,045 g Kadar abu = 0,045
2,058 x 100% = 2,19%
Kadar abu total rata-rata = (2,1+2,52+2,19)%
3 = 2,27%
Lampiran 4. (Lanjutan)
d. Perhitungan Penetapan Kadar Abu Tidak Larut Asam Kadar abu total = Berat Abu
a. Berat sampel = 2,001 g Berat abu = 0,013 g Kadar abu = 0,013
2,001 x 100%=0,65%
b. Berat sampel = 2,021 g Berat abu = 0,016 g
Kadar abu = 0,016
2,021 x 100% = 0,79%
c. Berat sampel = 2,058 g
Berat abu = 0,022 g Kadar abu = 0,022
2,058 x 100% = 1,07%
Kadar abu total rata-rata = (0,65+0,79+1,07)%
3 = 0,84%
Lampiran 5. Bagan Alur Penelitian
Dicuci sampai bersih, ditiriskan ., ditimbang
Dikeringkan pada suhu ± 40oC Dihaluskan Ditimbang
Lampiran 6. Gambar Alat dan Bahan
Berat kering 604 g
563 g serbuk simplisia
Maserat I Ampas
Karakterisasi Simplisia (± 100 g)
• Pemeriksaan makroskopik
• Pemeriksaan mikroskopik
• Penetapan kadar abu total
• Penetapan kadar abu tidak
larut dalam asam
• Penetapan kadar air
• Penetapan kadar sari larut
dalam air
• Penetapan kadar sari larut
dalam etanol
Ekstraksi (400g)
( Dimaserasi menggunakan etanol
96 % yang telah didestilasi (3 L)
selama 5 hari
Berat basah 1728 g
Dimaserasi menggunakan etanol 96 % yang telah didestilasi (1 L) selama 2 jam sambil diaduk-aduk
Maserat II Ampas
Diuapkan menggunakan
rotary evaaporator
Ekstrak kental 74,6 g
Uji pengaruh terhadap kreatinin dan urea serum
Hasil Pemeriksaan
a
b
Keterangan : a. Spektrofotometer UV-Visible (Shimadzu) b. Oral sonde + Spuit
a
Keterangan: a. Reagen Kreatinin dan Reagen Urea
a Keterangan: a. Tikus Jantan Berat ±200 g
a. Contoh perhitungan dosis gentamisin yang akan diberikan pada tikus secara intra peritonial (i.p.)
Dosis gentamisin yang akan diberikan adalah 80 mg/kg bb. Tiap ampul mengandung 40 mg/ml gentamisin.
Berapa volume gentamisin yang akan diberikan pada tikus? - Mis : BB tikus = 200 g
Jumlah gentamisin dosis 80 mg/kg bb = 200g
1000g x 80 mg = 16 mg
Volume larutan yang diberi = 16mg
40mg/ml = 0,4 ml
b. Contoh perhitungan dosis ekstrak etanol daun Sirsak yang akan diberikan pada tikus
Dosis suspensi ekstrak etanol daun Sirsak yang akan diberikan adalah 100 mg/kg bb, 200 mg/kg bb, dan 300 mg/kg bb.
a. Cara pembuatan suspensi ekstrak daun sirsak:
Timbang 800 mg ekstrak daun sirsak digerus di dalam lumpang, kemudian ditambahkan sedikit CMC 0,5% digerus sampai homogen. Dituang ke dalam labu tentukur 10 ml, ditambah CMC 0,5% sampai batas tanda.
a. Berapa volume suspensi ekstrak daun Sirsak yang akan diberikan pada tikus? - Mis : BB tikus = 200 g
8%= 8g 100ml=
8000mg
100ml = 80 mg/ml
Jumlah EEDS dosis 100 mg/kg bb = 200g
1000g x 100 mg = 20 mg
Volume larutan yang diberi = 20mg
80mg/ml = 0,25 ml
Jumlah EEDS dosis 200 mg/kg bb = 200g
Volume larutan yang diberi = 40mg
80mg/ml = 0,50 ml
Jumlah EEDS dosis 300 mg/kg bb = 200g
1000g x 300 mg = 60 mg
Volume larutan yang diberi = 60mg
80mg/ml = 0,75 ml
Reagen Kreatinin
Reagen Urea
Lampiran 11. Contoh Perhitungan dan Tabel Kadar Kreatinin dalam Serum
∆Absorbansi Standar = 0,004 C (mg/dL) = 2,0 x ∆ASampel
∆AStandar = 2,0 x 0,001
0,004 = 0,5 mg/dL
Kelompok ∆Absorbansi Kadar (mg/dL)
Kontrol 0,001 0,003 0,002 0,001 0,5 1,5 1,0 0,5 GTM 0,005 0,014 0,015 0,006 2,5 7,0 7,5 3,0
EEDS 100 mg + GTM
0,003 0,003 0,004 0,003 1,5 1,5 2,0 1,5
EEDS 200 mg + GTM
0,002 0,004 0,001 0,002 1,0 2,0 0,5 1,0
EEDS 300 mg + GTM
Lampiran 12. Contoh Perhitungan dan Tabel Kadar Urea dalam Serum Absorbansi Standar = 0,416
C (mg/dL) = 80 x ASampel AStandar = 80 x 0,226
0,416 = 43,46153 mg/dL
Kelompok ∆Absorbansi Kadar (mg/dL)
Kontrol 0,226 0,200 0,065 0,294 43,4615 38,4615 12,5000 56,5384 GTM 0,501 0,623 0,512 0,573 96,3461 119,8077 98,4615 110,1923
EEDS 100 mg + GTM
0,454 0,432 0,737 0,382 87,3076 83,0769 141,730 73,4615
EEDS 200 mg + GTM
0,216 0,094 0,309 0,246 41,5384 18,0769 59,4230 47,3076
EEDS 300 mg + GTM
DAFTAR PUSTAKA
Ali, B.H. (2003). Agents ameliorating or augmenting experimental gentamicin nephrotoxicity: some recent research. Food and Chemical Toxicology. 41: 1447–1452.
Ali, B.H., Isehaq, A., Sumyia, B., Ahmed, A., Abderrahim, N., Simone, S., Nina, Q., dan Nicole, S. (2013). Effect of gum Arabic on oxidative stress and
inflammation in adenine-induced chronic renal failure in rats. PLoS ONE. 8(2): 542-552.
Anonim. (2014). Urea. Tanggal akses 09 Februari 2014.
Baskar, R., Rajeswari, V., dan Kumar, T.S. (2007). In vitro Antioxidant Studies in Leaves of Annona species. Indian J Exp Biol. 45(5): 480-485.
Chatterjee, P., Aniruddha, M., dan Subhangkar, N. (2012). Protective effects of the aqueous leaf extract of Aloe barbadensis on gentamicin and cisplatin-induced nephrotoxic rats. Elsevier. Asian Pacific Journal of Tropical Biomedicine. 5: 1754-1763.
Ditjen POM. (1979). Farmakope Indonesia. Edisi Ke III. Jakarta: Departemen Kesehatan RI. Hal. 33.
Ditjen POM. (1989). Materia Medika Indonesia. Jilid V. Jakarta: Departemen Kesehatan RI. Hal. 41.
Ditjen POM. (1995). Materia Medika Indonesia. Jilid VI. Jakarta: Departemen Kesehatan RI. Hal. 300-306, 321, 325, 333-337.
Ditjen POM. (2000). Parameter Standar Umum Ekstrak Tumbuhan Obat. Cetakan Pertama. Jakarta: Departemen Kesehatan RI. Hal. 5, 10-11.
Effendi, I. (2004). Efek renoprotektif ekstrak petai (Parkia speciosa Hassk.) terhadap nefrotoksisitas cisplatin pada tikus. Disertasi. Universitas Indonesia. Lamp. 3 dan 4.
Gandjar, I.G. dan Rohman, A. (2007). Kimia Farmasi Analisis. Yogyakarta: Pustaka Pelajar. Hal. 252-256.
Harborne, J.B. (1987). Metode Fitokimia, Penuntun Cara Modern Menganalisa Tumbuhan. Terjemahan Kosasih Padmawinata. Edisi II. Bandung: ITB Press. Hal. 152.
Jorres, A., Gahl, G.M., Dobis, C., Polenakovic, M.H., Cakalaroski, K., Rutkowski, B., Kisielnicka, E., Krieter, D.H., Rumpf, K.W., Guenther, C., Gaus, W., dan Hoegel, J. (1999). Haemodialysis-Membrane Biocompatibility and Mortality of Patients With Dialysis-Dependent Acute Renal Failure: A Prospective Randomized Multicentre Trial. Lancet. 354: 1337-1341.
Kamal, S. (2010). Nephroprotection of Lacidipine Against Gentamycin-Induced Nephrotoxicity in Albino Rats. Journal of Experimental Pharmacology. 2: 59–63.
Kore, K.J., Rajkumar, V., Shete, Babasaheb, N.K., dan Amit, S.B. (2011). Protective Role of Hydroalcoholic Extract of Ficus carica in Gentamicin Induced Nephrotoxicity in Rats. Int. J. of Pharm. & Life Sci. (IJPLS). 2(8): 978-982. Lopez, N. J. M., Yaremi, Q., Laura, V., Ana, I.M., dan Fransisco, J. (2010). New
Insights Into The Mechanism of Aminoglycoside Nephrotoxicity: An Integrative Point of View. International Society of Nephrology. 79: 33-45. Lu, Y., dan Foo, L.Y. (2000). Antioxidant and Radical Scavenging Activities of
Polyphenols From Apple Pomace. Food Chemistry. 68(1): 81-85.
Mardiana, L., dan Ratnasari, J. (2011). Ramuan dan Khasiat Sirsak. Jakarta: Penebar Swadaya. Hal. 17, 38-40.
Moulds, Robert, dan Jeyasingham. (2010). Gentamicin: A Great Way to Start. Australian Prescriber. 33: 134-135.
Murray, R.K., Granner, D.K., Mayes, P.A., dan Rodwell, V.W. (2003). Harper’s Ilustrated Biochemistry. New York: McGraw-Hill Companies. Hal. 124, 246, 268.
Myo, K.K., dan David, P.N. (2007). Antimicrobial Pharmacodynamics in Theory and Clinical Practice. Editor: Charles Nightingale, Paul Ambrose, George Drusano, dan Takeo Murakawa. Edisi Kedua. New York: Informa Healthcare. Hal. 159.
Nash, K., Hafeez, A., dan Hou, S. (2002). Hospital-acquired renal insufficiency. Am J Kidney Dis. 39: 930-36.
Nawwar, M., Nahla, A., Sahar, H., Amani, H., El-Sharawy, R., Kristian, W., Manuela, H., dan Ulrike, L. (2012). A Flavonol Triglycoside and
Investigation of The Antioxidant and Cellstimulating Activities of Annona muricata Linn. Archieves of Pharmacal Research. 35: 761-767.
Rianes, R. (2013). Karakterisasi Simplisia dan Skrining Fitokimia Serta Uji Aktivitas Antioksidan Jus Buah Sirsak dan Ekstrak Etanol Daun Sirsak. Skripsi.
Medan: Fakultas Farmasi Universitas Sumatera Utara.
Selby, N., Susan, S., Nicholas, W., Richard, J.F., dan Nitin, V.K. (2009). Gentamicin-Associated Acute Kidney Injury. QJ Med. 102: 873-880. Sunarjono, H. (2005). Sirsak dan Srikaya. Cetakan Pertama. Jakarta: Penebar
Swadaya. Hal. 14-15, 22-25.
Silalahi, J. (2006). Makanan Fungsional. Yogyakarta: Kanisius. Hal. 56. Untung (2012). Tanaman Khasiat Obat. Jakarta: Tribun media. Hal: 501.
Tournaire, C., Croux, S., Maurette, M.T. (1993). Antioxidant Activity of Flavonoids: Efficiency of Singlet Oxygen (1∆g) Quenching. Journal of Photochemistry and Photobiology B: Biology. 19(3): 205-215.
Tung, Y.W., Yang, I.H., Tsai, Y.T., Wang, J.Y., Shiurba, R., Hsieh, T.J., Chang, F.R., dan Chang, W.C. (2012). Isodesacetyluvaricin, an Annonaceous Acetogenin, Specifically Inhibits Gene Expression of Cyclooxygenase-2. Journal of Natural Products. 75(4): 572-576.
WHO. (1998). Quality Control Methods For Medicinal Plant Material. Switzerland: WHO. Hal. 19-33.
Yanagida, C., Ito, K., Komiya, I., dan Horie, T. (2004). Protective Effect of
BAB III
METODE PENELITIAN
Metode yang digunakan dalam penelitian ini adalah metode eksperimental, meliputi pengumpulan tumbuhan, pembuatan simplisia, karakterisasi dan skrining fitokimia simplisia, pembuatan ekstrak etanol daun sirsak, karakterisasi dan skrining fitokimia ekstrak, penyiapan hewan percobaan, perlakuan pada hewan percobaan, pengukuran kadar kreatinin dan urea serum darah. Data hasil penelitian dianalisis dengan metode analisis variansi (ANAVA) dengan tingkat kepercayaan 95%,
dilanjutkan dengan metode uji post hoc Duncan untuk melihat perbedaan nyata antar perlakuan menggunakan program SPSS (Statistical Product and Service Solution) versi 17. Penelitian ini dilakukan di Laboratorium Farmakognosi, Laboratorium Farmakologi dan Laboratorium Farmasi Fisik Fakultas Farmasi Universitas Sumatera Utara pada bulan Agustus 2013 sampai Desember 2013.
3.1 Alat-alat
Alat-alat yang digunakan pada penelitian ini meliputi blender (Philip), lemari pengering, neraca listrik (Mettler Toledo), neraca hewan (GW-1500), rotary
evaporator (Heidolph WB 2000), water bath, hotplate, tanur (Nabertherm), vortex V1 plus (Boeco Germany), alat sentrifugasi (Dynamica), spektrofotometer UV-Visible (Shimadzu), spuit, oral sonde, mortar dan stamfer, dan alat-alat gelas lainnya. 3.2 Bahan-bahan
Molish, timbal (II) asetat 0,4 M, asam sulfat 6 N, asam klorida 2 N, LiebermanBurchard, toluena, kloroform, asam klorida, kloralhidrat, NaCMC (Natrium -Carboxy Methyl Cellulose), gentamisin dan akuades (teknis).
3.3 Prosedur Pembuatan Simplisia 3.3.1 Pengumpulan bahan tumbuhan
Bahan tumbuhan yang digunakan adalah daun sirsak (Annona muricata L.) yang segar. Pengambilan bahan tumbuhan dilakukan secara purposif tanpa
membandingkan dengan tumbuhan yang sama dari daerah lain. Bahan tumbuhan diambil dari Kelurahan Simalingkar B, Kecamatan Medan Tuntungan, Kota Medan, Provinsi Sumatera Utara
3.3.2 Identifikasi tumbuhan
Identifikasi tumbuhan dilakukan di “Herbarium Bogoriense”, Bidang Botani Pusat Penelitian Biologi – LIPI Bogor.
3.3.3 Pembuatan simplisia
Bahan tumbuhan daun sirsak yang masih segar dikumpulkan, dicuci bersih di bawah air mengalir, ditiriskan dan ditimbang berat basahnya (3,289 kg). Daun sirsak selanjutnya dikeringkan di lemari pengering hingga kering, dibuang benda-benda asing atau pengotoran-pengotoran lain yang masih tertinggal pada simplisia (sortasi kering), ditimbang berat keringnya (604 gram) kemudian diserbuk dan disimpan dalam wadah plastik yang tertutup rapat.
3.4 Pemeriksaan Karakteristik Simplisia dan Ekstrak
penetapan kadar sari larut etanol, penetapan kadar abu total dan penetapan kadar abu tidak larut dalam asam (WHO, 1998; Ditjen POM, 1995).
3.4.1 Pemeriksaan makroskopik
Pemeriksaan makroskopik dilakukan dengan mengamati bentuk dari daun sirsak segar dan simplisia daun sirsak.
3.4.2 Pemeriksaan mikroskopik
Pemeriksaan mikroskopik dilakukan terhadap serbuk simplisia daun sirsak. Daun sirsak dipotong melintang lalu diletakkan di atas kaca objek yang telah ditetesi dengan larutan kloralhidrat dan ditutup dengan kaca penutup, selanjutnya diamati di bawah mikroskop.
3.4.3 Penetapan kadar air
Penetapan kadar air dilakukan menurut metode Azeotropi (destilasi toluen). Alat terdiri dari labu alas bulat 500 ml, pendingin, tabung penyambung, tabung penerima 5 ml berskala 0,05 ml, alat penampung dan pemanas listrik.
Cara kerja: Dimasukkan 200 ml toluen dan 2 ml air suling ke dalam labu alas bulat, lalu didestilasi selama 2 jam. Setelah itu, toulen dibiarkan mendingin selama 30 menit, dan dibaca volume air pada tabung penerima dengan ketelitian 0,05 ml. Kemudian ke dalam labu tersebut dimasukkan 5 g serbuk simplisia yang telah ditimbang seksama, labu dipanaskan hati-hati selama 15 menit. Setelah toluen mendidih, kecepatan tetesan diatur lebih kurang 2 tetes tiap detik sampai sebagian besar air terdestilasi, kemudian kecepatan tetesan dinaikkan hingga 4 tetes tiap detik. Setelah semua air terdestilasi, bagian dalam pendingin dibilas dengan toluen.
Destilasi dilanjutkan selama 5 menit, kemudian tabung penerima dibiarkan
dibaca dengan ketelitian 0,05 ml. Selisih kedua volume air yang dibaca sesuai dengan kandungan air yang terdapat dalam bahan yang diperiksa. Kadar air dihitung dalam persen (WHO, 1998; Ditjen POM, 1995).
3.4.4 Penetapan kadar sari larut air
Sebanyak 5 g serbuk simplisia dimaserasi selama 24 jam dalam 100 ml air-kloroform (2,5 ml air-kloroform dalam air suling sampai 1 liter) dalam labu bersumbat sambil dikocok sesekali selama 6 jam pertama, kemudian dibiarkan selama 18 jam, lalu disaring. Sejumlah 20 ml filtrat pertama diuapkan sampai kering dalam cawan penguap yang berdasar rata yang telah ditara dan sisa dipanaskan pada suhu 105°C sampai bobot tetap. Kadar dalam persen sari yang larut dalam air dihitung terhadap bahan yang telah dikeringkan (WHO, 1998; Ditjen POM, 1995)
3.4.5 Penetapan kadar sari larut etanol
Sebanyak 5 g serbuk simplisia dimaserasi selama 24 jam dalam 100 ml etanol 96% dalam labu bersumbat sambil dikocok sesekali selama 6 jam pertama, kemudian dibiarkan selama 18 jam. Kemudian disaring cepat untuk menghindari penguapan etanol. Sejumlah 20 ml filtrat diuapkan sampai kering dalam cawan penguap yang berdasar rata yang telah dipanaskan dan ditara. Sisa dipanaskan pada suhu 105°C sampai bobot tetap. Kadar dalam persen sari yang larut dalam etanol 96% dihitung terhadap bahan yang telah dikeringkan (WHO, 1998; Ditjen POM, 1995)
3.4.6 Penetapan kadar abu total
sama. Masukkan filtrat ke dalam krus, uapkan, pijarkan hingga bobot tetap, timbang. Kadar abu dihitung terhadap bahan yang telah dikeringkan (WHO, 1998; Ditjen POM, 1995).
3.4.7 Penetapan kadar abu tidak larut asam
Abu yang diperoleh dalam penetapan kadar abu didihkan dalam 25 ml asam klorida encer selama 5 menit, bagian yang tidak larut dalam asam dikumpulkan, disaring melalui kertas saring bebas abu, cuci dengan air panas, dipijarkan, kemudian didinginkan dan ditimbang sampai bobot tetap. Kadar abu yang tidak larut dalam asam dihitung terhadap bahan yang telah dikeringkan (WHO, 1998; Ditjen POM, 1995).
3.5 Skrining Fitokimia Simplisia dan Ekstrak
Skrining fitokimia serbuk simplisia dan ekstrak meliputi pemeriksaan senyawa golongan flavonoid, alkaloid, saponin, tannin, glikosida dan steroid/triterpenoid.
3.5.1 Pemeriksaan flavonoid
Serbuk simplisia dan ekstrak masing-masing ditimbang 0,5 g, lalu
ditambahkan 10 ml metanol, direfluks selama 10 menit, disaring panas-panas melalui kertas saring. Filtrat diencerkan dengan 10 ml air suling, setelah dingin ditambahkan 5 ml petroleum eter, dikocok hati-hati, lalu didiamkan sebentar.
a. sebanyak 1 ml filtrat diuapkan sampai kering, sisa dilarutkan dalam 2 ml etanol 96%, lalu ditambah 0,5 g serbuk Zn dan 2 ml asam klorida 2 N. Didiamkan selama 1 menit. Kemudian ditambahkan 10 tetes asam klorida pekat. Jika dalam waktu 2-5 menit terjadi warna merah intensif menunjukkan adanya flavonoid (glikosida-3-flavonol).
b. sebanyak 1 ml filtrat diuapkan sampai kering, sisa dilarutkan dalam 1-2 ml etanol 96%, lalu ditambah 0,1 g serbuk Mg dan 10 tetes asam klorida pekat. Jika terjadi warna merah jingga sampai warna merah ungu menunjukkan adanya flavonoid. Jika terjadi warna kuning jingga menunjukkan adanya flavon, kalkon dan auron (Ditjen POM, 1995).
3.5.2 Pemeriksaan alkaloid
Serbuk simplisia dan ekstrak masing-masing ditimbang sebanyak 0,5 g kemudian ditambahkan 1 ml asam klorida 2N dan 9 ml air suling, dipanaskan di atas penangas air selama 2 menit, didinginkan dan disaring. Filtrat yang diperoleh dipakai untuk tes alkaloid. Diambil 3 tabung reaksi, lalu ke dalamnya dimasukkan 0,5 ml filtrat. Pada masing-masing tabung reaksi:
a. ditambahkan 2 tetes pereaksi Mayer b. ditambahkan 2 tetes pereaksi Bouchardat c. ditambahkan 2 tetes pereaksi Dragendorff
3.5.3 Pemeriksaan saponin
Serbuk simplisia dan ekstrak masing-masing ditimbang sebanyak 0,5 g dan dimasukkan ke dalam tabung reaksi, lalu ditambahkan 10 ml air panas, didinginkan, kemudian dikocok kuat-kuat selama 10 menit. Jika terbentuk busa setinggi 1 - 10 cm yang stabil tidak kurang dari 10 menit dan buih tidak hilang dengan penambahan 1 tetes asam klorida 2 N menunjukkan adanya saponin (Ditjen POM, 1995).
3.5.4 Pemeriksaan tanin
Sebanyak 0,5 g serbuk simplisia dan ekstrak disari dengan 10 ml air suling lalu disaring, filtratnya diencerkan dengan air suling sampai tidak berwarna. Diambil 2 ml larutan dan ditambahkan 1 - 2 tetes pereaksi besi (III) klorida 1%. Jika terjadi warna biru kehitaman atau hijau kehitaman menunjukkan adanya tanin (Ditjen POM, 1995).
3.5.5 Pemeriksaan glikosida
3.5.6 Pemeriksaan steroid/triterpenoid
Serbuk simplisia dan ekstrak masing-masing ditimbang sebanyak 1 g, dimaserasi dengan 20 ml n-heksana selama 2 jam, disaring. Filtrat diuapkan dalam cawan penguap dan pada sisanya ditambahkan pereaksi Liebermann-Burchard melalui dinding cawan. Apabila terbentuk warna ungu atau merah yang berubah menjadi biru ungu atau biru hijau menunjukkan adanya steroid/triterpenoid (Harborne, 1987).
3.6 Pembuatan Ekstrak Etanol Daun Sirsak
Sebanyak 200 g serbuk simplisia dimasukkan ke dalam wadah kaca, ditambahkan dengan etanol 96% sebanyak 1,5 L, tutup, biarkan selama 5 hari terlindung dari cahaya sambil sering diaduk, serkai, peras, cuci ampas dengan cairan penyari secukupnya hingga diperoleh 2 L. Pindahkan ke dalam bejana tertutup, biarkan di tempat sejuk, terlindung dari cahaya, selama 2 hari. Dienap tuangkan atau saring. Hasil yang diperoleh dipekatkan dengan alat rotary evaporator lalu di freeze drying untuk menghilangkan kandungan pelarutnya (Ditjen POM, 1979).
3.7 Pembuatan Pereaksi
Pembuatan pereaksi mencakup pembuatan Na-CMC 0,5% dan pembuatan suspensi Ekstrak Etanol Daun Sirsak (EEDS) 8%.
3.7.1 Pembuatan Na-CMC 0,5%
dihomogenkan dan dimasukkan ke labu tentukur 100 ml, dicukupkan volumenya dengan air suling hingga 100 ml.
3.7.2 Pembuatan suspensi ekstrak etanol daun sirsak (EEDS) 8%
Sebanyak 2 g ekstrak etanol daun sirsak dimasukkan ke dalam lumpang dan ditambahkan Na-CMC 0,5% b/v sedikit demi sedikit sambil digerus sampai homogen hingga 25 ml.
3.8 Penyiapan Hewan Percobaan
Hewan percobaan yang digunakan dalam penelitian adalah tikus putih jantan galur Wistar dengan berat badan 180 - 200 g. Sebelum perlakuan, hewan percobaan dikondisikan terlebih dahulu selama 1 minggu dengan kondisi lingkungan, makanan, suhu dan minuman yang sama. Setelah 1 minggu, dipilih tikus yang sehat ditandai dengan berat badan yang stabil atau meningkat.
3.9 Perlakuan Hewan Percobaan
Tikus jantan galur Wistar sebanyak 20 ekor dengan berat badan 180 - 200 g ditimbang berat badannya, dikelompokkan secara acak menjadi 5 kelompok, sehingga setiap kelompok terdiri dari 4 ekor tikus dan diberi perlakuan sebagai berikut:
Kelompok I : Tikus diberikan 0,5% CMC-Na dosis 1% bb secara oral.
Kelompok III : Tikus diberikan suspensi EEDS dosis 100 mg/kg bb secara oral dan 60 menit kemudian tikus diberikan gentamisin 40 mg/ml dosis 100 mg/kg bb secara intraperitonial.
Kelompok IV : Tikus diberikan suspensi EEDS dosis 200 mg/kg bb secara oral dan 60 menit kemudian tikus diberikan gentamisin 40 mg/ml dosis 100 mg/kg bb secara intraperitonial.
Kelompok V : Tikus diberikan suspensi EEDS dosis 300 mg/kg bb secara oral dan 60 menit kemudian tikus diberikan gentamisin 40 mg/ml dosis 100 mg/kg bb secara intraperitonial.
Seluruh perlakuan dilakukan selama 8 hari dan semua hewan percobaan dibunuh pada hari kedelapan dengan cara dibius dengan kloroform, kemudian diambil cuplikan darah melalui jantung tikus (Kore, et al., 2011; Chatterjee, et al., 2012). 3.10 Penyiapan Serum Darah Tikus
Diambil 1 ml cuplikan darah dimasukkan ke dalam tabung sentrifuge, didiamkan selama 20 menit dan disentrifugasi dengan kecepatan 4000 rpm selama 20 menit. Diambil supernatan, dimasukkan ke dalam vial, dan disimpan dalam lemari pembeku suhu 2-5 °C.
3.11 Pengukuran Kadar Kreatinin dan Urea Pada Serum 3.11.1 Penentuan panjang gelombang maksimum kreatinin
3.11.2 Penentuan panjang gelombang maksimum urea
Dipipet 10 µl larutan urea standar dan dimasukkan ke dalam kuvet, ditambahkan 1000 µl reagen 1 (dapat dilihat pada Lampiran 9halaman 56) kemudian diinkubasi pada suhu 37°C. Setelah 3 menit, ditambahkan 1000 µl reagen 2 (dapat dilihat pada Lampiran 9halaman 56) kemudian diinkubasi pada suhu 37°C. Setelah 5 menit diukur serapan pada panjang gelombang 400 - 800 nm (hasil dapat dilihat pada Lampiran 13halaman 62).
3.11.3 Pengukuran kadar kreatinin dalam serum
Sebanyak 100 µl serum dimasukkan kedalam kuvet, ditambahkan 1000 µl working reagent kemudian dihomogenkan. Setelah 30 detik diukur serapan pada panjang gelombang 493 nm (Absorban 1), 2 menit kemudian diukur lagi serapan pada panjang gelombang 493 nm (Absorban 2) (hasil dapat dilihat pada Lampiran 11 halaman 60)
3.11.4 Pengukuran kadar urea dalam serum
Sebanyak 10 µl serum dimasukkan ke dalam kuvet, ditambahkan 1000 µl reagen 1 kemudian diinkubasi pada suhu 37°C. Setelah 3 menit, ditambahkan 1000 µl reagen 2 kemudian diinkubasi pada suhu 37°C. Setelah 5 menit diukur serapan pada panjang gelombang 576 nm (hasil dapat dilihat pada Lampiran 12halaman 61) 3.12 Analisis Data
BAB IV
HASIL DAN PEMBAHASAN
4.1 Simplisia dan Ekstrak
Tumbuhan yang digunakan telah diidentifikasi di Herbarium Bogoriense, Bidang Botani Pusat Penelitian Biologi - LIPI. Hasil identifikasi tumbuhan dapat dilihat pada Lampiran 1, halaman 38.
Hasil pemeriksaan karakteristik simplisia secara makroskopik (Lampiran 2, halaman 40) yaitu daun tunggal, rapuh, warna kuning kecoklatan, bentuk bundar panjang, lanset atau bundar telur terbalik, ujung dan pangkal daun runcing, tepi rata.
Hasil pemeriksaan mikroskopik serbuk simplisia dijumpai adanya epidermis atas, epidermis bawah dengan stomata tipe anomositik, rambut penutup, pembuluh kayu, sel batu dan berkas pengangkut. Pengamatan serbuk simplisia menggunakan mikroskop dapat dilihat pada Lampiran 2, halaman 41.
[image:42.595.113.511.551.700.2]Hasil skrining fitokimia pada simplisia dan ekstrak daun sirsak dapat dilihat pada Tabel 4.1.
Tabel 4.1 Hasil skrining fitokimia serbuk simplisia dan ekstrak daun sirsak
No. Golongan Senyawa Hasil
Simplisia Ekstrak
1. Alkaloida + +
2. Flavonoida + +
3. Tanin + +
4. Steroid/Triterpenoida + +
5. Saponin + +
6. Glikosida + +
Hasil pemeriksaan skrining fitokimia menunjukkan bahwa alkaloid, flavonoida, tanin, steroida/triterpenoida, saponin dan glikosida terdapat pada serbuk simplisia dan ekstrak daun sirsak.
Hasil pemeriksaan karakterisasi simplisia daun sirsak dapat dilihat pada Tabel 4.2.
Tabel 4.2 Hasil pemeriksaan karakterisasi serbuk simplisia daun sirsak
No. Parameter Hasil (%) Persyratan MMI (%)
1. Kadar air 6,99 -
2. Kadar sari larut dalam air 19,3 ≥ 18 3. Kadar sari larut dalam etanol 23,7 ≥ 12 4. Kadar abu total 3,01 ≤ 6 5. Kadar abu tidak larut dalam asam 0,84 ≤ 1,5
Perhitungan hasil pemeriksaan karakterisasi simplisia dapat dilihat pada Lampiran 3 halaman 42. Hasil pemeriksaan karakterisasi simplisia yaitu kadar air, kadar sari larut air, kadar sari larut etanol, kadar abu total, kadar abu tidak larut asam memenuhi syarat yang telah tercantum dalam Materia Medika Indonesia.
[image:43.595.110.542.547.642.2]Hasil pemeriksaan karakterisasi ekstrak daun sirsak dapat dilihat pada Tabel 4.3.
Tabel 4.3 Hasil pemeriksaan karakterisasi ekstrak daun sirsak
P erhi
tun gan hasil pemeriksaan karakterisasi ekstrak dapat dilihat pada Lampiran 4 halaman 47. Dalam Materia Medika Indonesia belum tercantum monografi dari ekstrak daun sirsak, dengan demikian, perlu dilakukan pembakuan secara nasional mengenai
No. Parameter Hasil (%)
1. Kadar air 1,99
2. Kadar sari larut dalam air 1,36
3. Kadar sari larut dalam etanol 27,47
4. Kadar abu total 2,31
parameter karakterisasi ekstrak daun sirsak agar ada sebuah acuan bagi peneliti dalam melakukan karakterisasi terhadap ekstrak daun sirsak.
Hasil penyarian 200 g serbuk simplisia daun sirsak dengan pelarut etanol 96% diperoleh ekstrak kental yang kemudian diuapkan dengan menggunakan rotari evaporator, diperoleh 37,3 g ekstrak (rendemen 18,65%).
4.2 Hasil Pengukuran Kadar Kreatinin dan Urea dalam Serum
Pengukuran kadar kreatinin dan urea dilakukan secara spektrofotometri UV-Vis. Pengukuran kreatinin dilakukan dengan menggunakan pereaksi asam pikrat dan natrium hidroksida dimana kreatinin dalam suasana basa akan membentuk kompleks dengan asam pikrat berwarna jingga kemerahan yang diukur pada panjang gelombang 493 nm. Pengukuran urea dilakukan dengan menggunakan pereaksi buffer posfat (pH 7 dan pH < 13), natrium salisilat, natrium nitroprusit, EDTA, natrium hipoklorit, dan urease. Urea akan dihidrolisis oleh kehadiran air dan urease membentuk amonia dan karbon dioksida, ion amonia akan bereaksi dengan hipoklorit dan salisilat membentuk larutan berwarna hijau yang diukur pada panjang gelombang 576 nm (Effendi, 2004).
Gambar 4.1 Grafik Kadar Urea dalam Serum
Gambar 4.2 Grafik Kadar Kreatinin dalam Serum Keterangan gambar:
GTM : Gentamisin
EEDS : Ekstrak Etanol Daun Sirsak * : p < 0,05 dengan GTM
Penelitian ini menggunakan 5 kelompok yaitu kelompok I (Kontrol), kelompok II (GTM), kelompok III (EEDS100 + GTM), kelompok IV (EEDS200 +
0 20 40 60 80 100 120
Kontrol GTM EEDS 100 EEDS 200 EEDS 300
K a d a r u rea s eru m ( m g /d L ) Kelompok (p<0,05) 0 1 2 3 4 5 6 7
Kontrol GTM EEDS 100 EEDS 200 EEDS 300
[image:45.595.111.500.345.573.2]GTM), dan kelompok V (EEDS300 + GTM). Penggunaan kelompok kontrol pada penelitian bertujuan untuk mengetahui kadar kreatinin serum darah pada tikus yang diberikan larutan pembawa ekstrak (0,5% CMC-Na). Hasil pengukuran pada kelompok kontrol diperoleh kadar kreatinin 0,875 ± 0,2393 mg/dL dan kadar urea 37,74038 ± 9,2362 mg/dL. Hasil ini menunjukkan bahwa pemberian larutan pembawa ekstrak (0,5% CMC-Na) tidak mempengaruhi kadar kreatinin dan urea normal serum darah tikus dimana kadar kreatinin normal ialah 0,7-1,1 mg/dL dan kadar normal urea ialah 18-55 mg/dL (Effendi, 2004).
Hasil pengukuran pada kelompok II, yang diberikan gentamisin dosis tunggal diperoleh kadar kreatinin 5 ± 1,3070 mg/dL dan kadar urea 106,2019 ± 5,4626 mg/dL. Hasil ini menunjukkan bahwa pemberian gentamisin dosis tunggal 100 mg/kg BB dapat meningkatkan kadar kreatinin dan urea pada serum secara signifikan dibandingkan dengan kelompok kontrol (p < 0,05). Kamal (2010), menyatakan pemberian gentamisin 80 mg/kg bb selama 14 hari dapat meningkatkan kadar kreatinin dan urea secara signifikan (p < 0,05). Sementara Kore, et al., (2011), meyatakan kadar serum kreatinin dan urea juga meningkat secara signifikan (p < 0,001) setelah pemberian dosis gentamisin 100 mg/kg BB setiap hari selama 8 hari. Banyak penelitian menunjukkan mekanisme gentamisin menginduksi gagal ginjal akut melalui beberapa kejadian meliputi pembentukan reactive oxygen species (ROS), peroksidasi membran lipid, denaturasi protein, dan kerusakan DNA. Gentamisin juga bertindak sebagai pengikat besi dimana ikatan besi-gentamisin merupakan katalisator dalam pembentukan radikal bebas (Chatterjee, et al., 2012).
1,625 ± 0,125 mg/dL dan kadar urea 96,39423 ± 15,3873 mg/dL. Hasil ini menunjukkan adanya penurunan kadar kreatinin secara signifikan (p < 0,05) dibandingkan dengan kelompok II (gentamisin) namun tidak menunjukkan adanya penurunan kadar urea secara signifikan. Hal ini mempunyai makna bahwa pemberian EEDS dosis 100 mg/kg bb tidak dapat menurunkan kadar urea serum darah yang dihasilkan oleh gentamisin dosis 100 mg/kg bb.
Hasil pengukuran pada kelompok IV, yang diberikan EEDS dosis 200 mg/kg bb sebelum pemberian gentamisin dosis 100 mg/kg bb, diperoleh kadar kreatinin 1,125 ± 0,3145 mg/dL dan kadar urea 41,58654 ± 8,6774 mg/dL. Hasil ini menunjukkan adanya penurunan kadar kreatinin secara signifikan (p < 0,05) dibandingkan dengan kelompok II (gentamisin) yang mempunyai makna bahwa pemberian EEDS dosis 200 mg/kg bb dapat menurunkan kadar kreatinin dan urea yang dihasilkan oleh gentamisin dosis 100 mg/kg bb.
Hasil pengukuran pada kelompok V, yang diberikan EEDS dosis 300 mg/kg bb sebelum pemberian gentamisin dosis 100 mg/kg bb, diperoleh kadar kreatinin 1,25 ± 0,25 mg/dL dan urea 40,14422 ± 13,8604 mg/dL. Hasil ini menunjukkan adanya penurunan kadar kreatinin dan urea secara signifikan (p < 0,05) dibandingkan dengan kelompok II (gentamisin) yang mempunyai makna bahwa pemberian EEDS dosis 300 mg/kg bb dapat menurunkan kadar kreatinin dan urea yang dihasilkan oleh gentamisin dosis 100 mg/kg bb.
BAB V
KESIMPULAN DAN SARAN
5.1 Kesimpulan
Berdasarkan hasil penelitian dapat disimpulkan bahwa:
a. pemberian ekstrak etanol daun sirsak dosis 100 mg/kg bb, dosis 200 mg/kg bb dan dosis 300 mg/kg bb dapat menghambat peningkatan kadar kreatinin darah tikus yang diinduksi oleh gentamisin.
b. pemberian ekstrak etanol daun sirsak dosis 200 mg/kg bb dan dosis 300 mg/kg bb dapat menghambat peningkatan kadar urea darah tikus yang diinduksi oleh gentamisin.
5.2 Saran
BAB II
TINJAUAN PUSTAKA
2.1 Uraian Tumbuhan
Uraian tumbuhan meliputi sistematika tumbuhan, nama daerah dan nama asing, habitat (daerah tumbuhan), morfologi tumbuhan, kandungan kimia, dan khasiat tumbuhan.
2.1.1 Sistematika Tumbuhan
Sistematika dari tumbuhan sirsak adalah sebagai berikut: Kingdom : Plantae
Divisi : Spermatophyta Sub divisi : Angiospermae Kelas : Dicotyledonae Ordo : Polycarpiceae Famili : Annonaceae Genus : Annona
Spesies : Annona muricata L. ( Sunarjono, 2005) 2.1.2 Nama Daerah dan Nama Asing
2.1.2.1 Nama Daerah
2.1.2.2 Nama Asing
Ai ata malai (Timor), Brazilian pawpaw, soursop, prickly custard apple, soursapi (Inggris), guanabana, anona, catche, catoche, catuche, zapote agrio (Spanyol), sauersack, stachelannone, anona, flashendaum, satchel anone, stachlieger (Jerman), zuurzak (Belanda), corossol, corossolier, epineux (Perancis), graviola, pinha azeda (Portugis), tapotapo urepe (Tahiti), sarifa, seremaia (Fiji) (Untung, 2012).
2.1.3 Habitat (Daerah Tumbuh)
Sirsak dapat tumbuh pada semua jenis tanah dengan derajat keasaman (pH) antara 5-7. Jadi, tanah yang sesuai adalah tanah yang agak asam sampai agak alkalis. Ketinggian tempat antara 100- 1000 m di atas permukaan laut lebih cocok untuk tamanan sirsak. Pada daerah dengan ketinggian 1000 m di atas permukaan laut tanaman sirsak enggan tumbuh dan berbuah. Suhu udara yang sesuai untuk tanaman sirsak adalah 22-32 °C. Curah hujan yang dibutuhkan tanaman sirsak antara 1500- 3000 mm/tahun (Sunarjono, 2005).
2.1.4 Morfologi Tumbuhan a. Daun
Daun berbentuk bulat telur terbalik, berwarna hijau muda sampai hijau tua, ujung daun meruncing, pinggiran rata dan permukaan daun mengkilap (Radi, 1998). b. Bunga
segi tiga, tebal dan kaku, berwarna kuning keputih-putihan, dan setelah tua mekar, kemudian lepas dari dasar bunganya. Putik dan benang sari lebar dengan banyak karpel (bakal buah). Bunga keluar dari ketiak daun, cabang, ranting, atau pohon. Bunga umumnya sempurna, tetapi terkadang hanya bunga jantan dan bunga betina saja dalam satu pohon. Bunga melakukan penyerbukan silang, karena umumnya tepung sari matang lebih dahulu sebelum putiknya (Radi, 1998).
c. Buah
Buah sejati berganda yakni buah yang berasal dari satu bunga dengan banyak bakal buah tetapi membentuk satu buah. Buah memiliki duri sisik halus. Apabila sudah tua daging buah berwarna putih, lembek, dan berserat dengan banyak biji berwarna coklat kehitaman (Radi, 1998).
d. Biji
Berwarna coklat agak kehitaman dan keras, berujung tumpul, permukaan halus mengkilat dengan ukuran panjang kira-kira 16,8 mm dan lebar 9,6 mm. Jumlah biji dalam satu buah bervariasi, berkisar antara 20-70 butir biji normal, sedangkan yang tidak normal berwarna putih kecoklatan dan tidak berisi (Radi, 1998).
e. Pohon
Ketinggian pohon mencapai 8-10 meter, dan diameter batang 10-30 cm (Radi, 1998).
2.1.5 Kandungan Kimia
2.1.6 Khasiat Tumbuhan
Daun sirsak dimanfaatkan sebagai pengobatan alternatif untuk pengobatan kanker, yakni dengan mengkonsumsi air rebusan daun sirsak. Selain untuk pengobatan kanker, tanaman sirsak juga dimanfaatkan untuk pengobatan demam, diare, anti kejang, anti jamur, anti parasit, anti mikroba, sakit pinggang, asam urat, gatal-gatal, bisul, flu, dan lain-lain (Mardiana, 2011).
2.2 Ekstraksi
Ekstraksi adalah kegiatan penarikan kandungan kimia yang dapat larut sehingga terpisah dari bahan yang tidak dapat larut dengan pelarut cair (Ditjen POM, 2000).
Hasil dari ekstraksi disebut dengan ekstrak yaitu sediaan kental yang diperoleh dengan mengekstraksi zat aktif dari simplisia nabati atau simplisia hewani menggunakan pelarut yang sesuai, kemudian semua atau hampir semua pelarut diuapkan dan massa atau serbuk yang tersisa diperlakukan sedemikian sehingga memenuhi baku yang telah ditetapkan (Ditjen POM, 1995).
Farmakope Indonesia menetapkan bahwa cairan penyari untuk ekstraksi adalah air, etanol, dan etanol-air atau eter. Penyarian pada perusahaan obat tradisional masih terbatas pada penggunaan penyari air, etanol, atau etanol-air (Ditjen POM, 1995).
2.2.1. Metode-Metode Ekstraksi
Ekstraksi dengan menggunakan pelarut terdiri dari 2 cara, yaitu: 1. Cara dingin
a. Maserasi
Maserasi adalah proses pengekstrakan simplisia dengan menggunakan pelarut dengan beberapa kali pengocokan atau pengadukan pada temperatur ruangan.
b. Perkolasi
Perkolasi adalah ekstraksi dengan pelarut yang selalu baru sampai sempurna yang umumnya dilakukan pada temperatur ruangan. Proses terdiri dari tahapan pengembangan bahan, tahap maserasi antara, tahap perkolasi sebenarnya (penetesan/penampungan ekstrak), terus-menerus sampai diperoleh ekstrak (perkolat).
2. Cara panas
Ekstraksi menggunakan pelarut dengan cara panas terdiri dari: a. Refluks
Refluks adalah ekstraksi dengan pelarut pada temperatur titik didihnya, selama waktu tertentu dan jumlah pelarut terbatas yang relatif konstan dengan adanya pendingin balik.
b. Sokletasi
Sokletasi adalah ekstraksi menggunakan pelarut yang selalu baru yang umumnya dilakukan dengan alat khusus sehingga terjadi ekstraksi kontinu dengan jumlah pelarut relatif konstan dengan adanya pendingin balik.
c. Digesti
d. Infus
Infus adalah ekstraksi dengan pelarut air pada temperatur penangas air (bejana infus tercelup dalam penangas air mendidih, temperatur terukur 96-98 °C) selama waktu tertentu (15-20 menit).
e. Dekok
Dekok adalah infus pada waktu yang lebih lama (30 menit) dan temperatur sampai titik didih air (Ditjen POM, 2000).
2.3 Gentamisin
Gentamisin adalah antibiotik golongan aminoglikosida dan aktif melawan bakteri gram – negatif seperti Pseudomonas, Proteus, Serratia, Yersinia pestis, Francisella tularensis dan gram – positif yakni Staphylococcus. Gentamisin disintesis oleh Micromonospora, keluarga bakteri gram – positif yang banyak terdapat di lingkungan (air dan tanah). Antibiotik ini bekerja dengan cara berikatan dengan ribosom subunit 30S dari bakteri, sehingga mengganggu sintesis dari protein.
Sama seperti golongan aminoglikosida lainnya, gentamisin tidak aktif saat diberikan secara oral. Hal ini dikarenakan gentamisin tidak dapat diserap oleh saluran pencernaan., sehingga pada penggunaannya gentamisin diberikan secara intravena, intramuskular, atau secara topikal. Obat ini ditemukan 99% dalam bentuk tak berubah pada urin (Moulds, et al., 2010).
nekrosis sel tubular. Penggunaanya bersama agen – agen protektif seperti Vitamin C dan Vitamin E diyakini dapat mengurangi efek samping nefrotoksisitasnya (Myo dan Nicolau, 2007).
2.4 Kreatinin
Kreatinin adalah produk akhir dari kreatin posfat pada otot, dan biasanya diproduksi dengan kadar yang konstan (tergantung massa otot). Kreatinin dikeluarkan dari darah sebagian besar melalui ginjal, terutama melalui filtrasi glomerulus juga melalui sekresi tubulus proksimal. Jika filtrasi pada ginjal menurun, kadar kreatinin dalam darah akan meningkat. Setiap hari, 1 – 2% kreatin diubah menjadi kreatinin. Pria cenderung untuk memiliki kadar kreatinin yang lebih tinggi daripada wanita. Diet tinggi kreatin dan banyak makan daging dapat meningkatkan ekskresi kreatinin harian. Serum kreatinin adalah indikator penting dari kesehatan ginjal karena kreatinin merupakan produk metabolisme otot yang diekskresi dalam bentuk tak berubah melalui ginjal (Howard, 1989).
[image:56.595.116.253.517.584.2]Struktur kimia kreatinin dapat dilihat pada gambar 2.1
Gambar 2.1 Struktur Kimia Kreatinin (Murray, et al., 2003).
2.5 Urea
tetapi amonia adalah toksik bagi sel dan harus diekskresi dari tubuh. Oleh karena itu, hati akan mengubah amonia menjadi senyawa yang tidak toksik yakni urea yang akan ditransportasi melalui darah menuju ginjal, untuk dieliminasi bersama urin.
Setiap orang dewasa akan mengekskresi kira-kira 25 gram urea setiap harinya. Kondisi yang mengakibatkan kerusakan pada eliminasi urea oleh ginjal mengakibatkan uremia yaitu peningkatan kadar urea dalam darah. Keadaan ini dapat berakibat fatal. Untuk mengatasinya, penyebab kegagalan ginjal harus diatasi atau pasien harus menjalani dialisis untuk membuang urea dan produk sisa lainnya (Anonim, 2014).
Struktur kimia urea dapat dilihat pada gambar 2.2
Gambar 2.2 Struktur Kimia Urea (Murray, et al., 2003).
2.6 Spektrofotometri UV-Visible
Ada beberapa hal yang harus diperhatikan dalam analisis dengan spektrofotometri UV-Vis terutama untuk senyawa yang semula tidak berwarna yang akan dianalisis dengan spektrofotometri visibel karena senyawa tersebut harus diubah terlebih dahulu menjadi senyawa yang berwarna. Berikut adalah tahapan-tahapan yang harus diperhatikan :
a. Pembentukan molekul yang dapat menyerap sinar UV-Vis
direaksikan dengan pereaksi tertentu. Pereaksi yang digunakan harus memenuhi persyaratan yaitu :
i. reaksinya selektif dan sensitif
ii. reaksinya cepat, kuantitatif dan reprodusibel iii. hasil reaksi stabil dalam jangka waktu yang lama b. Pemilihan panjang gelombang
Panjang gelombang yang digunakan untuk analisis kuantitatif adalah panjang gelombang yang mempunyai absorbansi maksimal. Untuk memilih panjang gelombang maksimal, dilakukan dengan membuat kurva hubungan antara absorbansi dengan panjang gelombang dari suatu larutan baku pada konsentrasi tertentu. Ada beberapa alasan mengapa harus menggunakan panjang gelombang maksimal, yaitu :
i. pada panjang gelombang maksimal tersebut, perubahan absorbansi untuk setiap satuan konsentrasi adalah yang paling besar.
ii. Di sekitar panjang gelombang maksimal, bentuk kurva absorbansi datar dan pada kondisi tersebut hukum Lambert - Beer akan terpenuhi.
iii. Jika dilakukan pengukuran ulang maka kesalahan yang disebabkan oleh pemasangan ulang panjang gelombang akan kecil sekali, ketika digunakan panjang gelombang maksimal.
c. Pembacaan absorbansi sampel atau cuplikan
BAB I PENDAHULUAN
1.1 Latar Belakang
Daun sirsak diketahui memiliki aktivitas antioksidan yang kuat (Rianes, 2013; Baskar, et al., 2007). Hal ini diduga disebabkan karena daun sirsak mengandung senyawa-senyawa flavonoid (Nawwar, et al., 2012) sehingga tumbuhan ini dapat bermanfaat terhadap pengobatan penyakit degeneratif yang disebabkan oleh stres oksidatif. Stres oksidatif adalah suatu kondisi di mana aktivitas dari radikal bebas lebih tinggi daripada kemampuan antioksidan. Pemberian antioksidan menunjukkan adanya pengaruh yang positif pada kondisi ini (Silalahi, 2006). Stres oksidatif dapat menyebabkan kerusakan sel di dalam tubuh terutama pada organ-organ penting diantaranya adalah ginjal. Kerusakan ginjal dapat dipengaruhi beberapa faktor, salah satunya adalah pemakaian antibiotik gentamisin.
Gentamisin adalah antibiotik golongan aminoglikosida yang penggunaannya sangat luas terutama untuk mengatasi infeksi yang disebabkan oleh bakteri gram-negatif. Namun, nefrotoksisitas dari antibiotik ini menjadi hambatan dalam penggunaannya. Meskipun dipantau dengan ketat, nefrotoksisitas terjadi pada 8 - 26% (Selby, et al., 2009), 15 - 30% (Ali, 2003) pasien yang menggunakannya, namun resikonya meningkat pada pasien usia lanjut, insufisiensi renal, diabetes, gagal jantung dan sepsis (Nash, et al., 2002).
mitokondria korteks renal, pembentukan lipid peroksidase (Yanagida, et al., 2004), serta nitrogen monoksida (NO) (Lopez, et al., 2010). Gentamisin juga bertindak sebagai pengikat besi. Kompleks besi-gentamisin merupakan katalis yang poten dalam pembentukan senyawa-senyawa radikal (Chatterjee, et al., 2012).
Nefrotoksisitas yang disebabkan gentamisin dicirikan oleh nekrosis pada tubulus ginjal yang bersifat letal dan sub-letal (Lopez, et al., 2010) tanpa adanya perubahan morfologi pada glomerulus. Manifestasinya ditandai oleh proteinuria tubulus, glukosuria ringan, penurunan laju filtrasi glomerulus (LFG) serta peningkatan kadar urea dan kreatinin dalam darah (Chatterjee, et al., 2012).
Kreatinin dan urea merupakan parameter yang penting untuk menentukan keadaan gagal ginjal akut dan melihat keadaan fungsi ginjal (Jorres, et al., 1999).
1.2 Perumusan Masalah
Berdasarkan uraian pada latar belakang, maka perumusan masalah pada penelitian ini adalah:
a. apakah pemberian ekstrak etanol daun sirsak dapat menurunkan kadar kreatinin pada serum darah tikus yang diinduksi oleh gentamisin?
b. apakah pemberian ekstrak etanol daun sirsak dapat menurunkan kadar urea pada serum darah tikus yang diinduksi oleh gentamisin?
1.3 Hipotesis
Berdasarkan perumusan masalah di atas, maka hipotesis pada penelitian ini adalah:
a. pemberian ekstrak etanol daun sirsak dapat menurunkan kadar kreatinin pada serum darah tikus.
b. pemberian ekstrak etanol daun sirsak dapat menurunkan kadar urea pada serum darah tikus.
1.4 Tujuan Penelitian
Tujuan penelitian ini adalah untuk mengetahui:
a. kadar kreatinin serum darah tikus yang diinduksi gentamisin setelah pemberian ekstrak etanol daun sirsak
1.5 Manfaat Penelitian
1.6 Kerangka Pikir Penelitian
EFEK EKSTRAK ETANOL DAUN SIRSAK (Annona muricata L.) TERHADAP KADAR KREATININ DAN UREA SERUM TIKUS YANG
DIINDUKSI GENTAMISIN Abstrak
Daun sirsak diketahui memiliki aktivitas antioksidan yang kuat sehingga tumbuhan ini dapat bermanfaat terhadap pengobatan penyakit yang berhubungan dengan stres oksidatif. Gentamisin adalah antibiotik golongan aminoglikosida. Penggunaannya terbatas karena menyebabkan nefrotoksik. Nefrotoksisitas yang diakibatkan oleh gentamisin sebagian besar disebabkan oleh stres oksidatif yang manifestasinya diantaranya ditandai oleh peningkatan kadar kreatinin dan urea. Penelitian ini bertujuan untuk mengetahui efek pemberian ekstrak etanol daun sirsak terhadap kadar kreatinin dan urea serum darah yang diinduksi gentamisin.
Penelitian ini meliputi karakterisasi simplisia dan ekstrak, skrining fitokimia simplisia dan ekstrak, pengujian pada tikus yaitu pengukuran kadar kreatinin dan urea pada serum darah. Tikus dibagi dalam 5 kelompok masing-masing terdiri dari 4 ekor, yaitu kelompok kontrol (CMC 0,5%), kelompok gentamisin 100 mg/kg bb, kelompok EEDS (ekstrak etanol daun sirsak) 100 mg/kg bb + gentamisin 100 mg/kg bb, kelompok EEDS 200 mg/kg bb + gentamisin 100 mg/kg bb dan kelompok EEDS 300 mg/kg bb + gentamisin 100 mg/kg bb. Pemberian dilakukan setiap hari selama 8 hari. Kadar kreatinin dan urea ditentukan secara spektrofotometri UV-Vis pada panjang gelombang 493 dan 576 nm berturut-turut.
Hasil pemeriksaan karakteristik simplisia dan ekstrak secara berturut-turut diperoleh kadar air 6,99% dan 1,99%, kadar sari larut air 19,3%, kadar sari larut etanol 23,7%, kadar abu total 3,01% dan 2,31% serta kadar abu tidak larut asam 0,84% dan 0,73%. Hasil skrining fitokimia simplisia dan ekstrak menunjukkan adanya senyawa golongan alkaloid, flavonoid, glikosida, saponin, tanin dan steroid/triterpenoid. Hasil menunjukkan peningkatan kadar kreatinin dan urea darah secara signifikan (n = 4, p < 0,05) kelompok gentamisin (kadar kreatinin 5 ± 1,3070 mg/dl dan kadar urea 106,2019 ± 5,4626 mg/dl) dibandingkan dengan kelompok kontrol (kadar kreatinin 0,875 ± 0,2393 mg/dl dan kadar urea 37,7403 ± 9,2362 mg/dl). Pemberian ekstrak menunjukkan penurunan kadar kreatinin dan urea signifikan (n = 4, p < 0,05) pada kelompok yang diberikan EEDS 100 mg/kg bb + gentamisin 100 mg/kg bb (kadar kreatinin 1,625 ± 0,125 mg/dl), kelompok EEDS 200 mg/kg bb + gentamisin 100 mg/kg bb (kadar kreatinin 1,125 ± 0,3145 mg/dl dan kadar urea 41,5865 ± 8,6774 mg/dl) dan kelompok EEDS 300 mg/kg bb + gentamisin 100 mg/kg bb (kadar kreatinin 1,25 ± 0,25 mg/dl dan urea 40,1442 ± 13,8604 mg/dl) dibandingkan dengan kelompok yang dinduksi gentamisin.
Dari hasil penelitian dapat disimpulkan bahwa pemberian ekstrak etanol daun sirsak pada tikus yang diinduksi gentamisin dapat menghambat peningkatan kadar kreatinin dan urea darah tikus.
EFFECTS OF ETHANOLIC LEAF EXTRACT OF SOURSOP (Annona
muricata L.) ON BLOOD SERUM CREATININE AND UREA ON
GENTAMICIN-INDUCED RATS Abstract
Leaf of soursop has strong activity of antioxidant so it can be use to treat disease related to stress oxidative. Gentamicin is an antibiotic class of aminoglycoside antibiotic, but its use limited due to its nephrotoxic. Nephrotoxicity induced by gentamicin caused by stress oxidative could increase the creatinine and urea serum. The aim of the study was to determine the effects of ethanolic leaf extract of soursop on creatinine and urea serum gentamicin-induced rats.
This research include the characterization of simplex and extract, phytochemical screening of simplex and extract, animal testing, and measurement of blood serum creatinine and urea level. This study used 5 groups, control group (0.5% CMC), gentamicin 100 mg/kg bb group, EEDS (ethanolic leaf extract of soursop) 100 mg/kg bb + gentamicin 100 mg/kg bb group, EEDS 200 mg/kg bb + gentamicin 100 mg/kg bb group, and EEDS 300 mg/kg bb + gentamicin 100 mg/kg bb group. All the groups treat everyday for 8 days. Creatinine and urea level were measured using UV-Vis spectrophotometer at wavelength 493 and 576 nm respectively.
The results of the examination showed characteristic of simplex and extract respectively were water content 6.99% and 1.99%, water-soluble extract 19.3%, ethanol-soluble extract 23.7%, total ash content 3.01% and 2.31% and acid-insoluble ash 0.84% and 0.73%. Phytochemical screening results indicated the presence of alkaloid, flavonoid, glycosides, saponins, tannins, and steroids/triterpenoids compounds in both simplex and extract. Results showed significant increase of blood serum creatinine and urea level (n = 4, p < 0.05) in gentamicin-induced group (creatinine level 5 ± 1.3070 mg/dl and urea level 106.2019 ± 5.4626 mg/dl) compared to the control group (creatinine level 0.875 ± 0.2393 mg/dl and urea level 37.7403 ± 9.2362 mg/dl). Extract of soursop showed significant decreased of blood serum creatinine and urea level (n = 4, p < 0,05) in group given with EEDS 100 mg/kg bb + gentamisin 100 mg/kg bb (creatinine level 1.625 ± 0.125 mg/dl), EEDS 200 mg/kg bb + gentamisin 100 mg/kg bb (creatinine level 1.125 ± 0.3145 mg/dl and urea level 41.5865 ± 8.6774 mg/dl) and EEDS 300 mg/kg bb + gentamisin 100 mg/kg bb (creatinine level 1.25 ± 0.25 mg/dl and urea level 40.1442 ± 13.8604 mg/dl) compared to the group induced by gentamicin.
From the research it can be concluded that ethanolic leaf extract of soursop significantly attenuated elevations in serum creatinine and urea level in gentamicin-induced rats.
EFEK EKSTRAK ETANOL DAUN SIRSAK (Annona muricata L.) TERHADAP KADAR KREATININ DAN UREA SERUM TIKUS YANG DIINDUKSI
GENTAMISIN
SKRIPSI
OLEH:
JIRO HASEGAWA SITUMORANG NIM 101501078
PROGRAM STUDI SARJANA FARMASI FAKULTAS FARMASI
UNIVERSITAS SUMATERA UTARA MEDAN
EFEK EKSTRAK ETANOL DAUN SIRSAK (Annona muricata L.) TERHADAP KADAR KREATININ DAN UREA SERUM TIKUS YANG
DIINDUKSI GENTAMISIN
SKRIPSI
Diajukan untuk melengkapi salah satu syarat untuk memperoleh Gelar Sarjana Farmasi pada Fakultas Farmasi
Universitas Sumatera Utara
OLEH:
JIRO HASEGAWA SITUMORANG NIM 101501078
PROGRAM STUDI SARJANA FARMASI FAKULTAS FARMASI
UNIVERSITAS SUMATERA UTARA MEDAN
PENGESAHAN SKRIPSI
EFEK EKSTRAK ETANOL DAUN SIRSAK (Annona muricata L.) TERHADAP KADAR KREATININ DAN UREA SERUM TIKUS YANG
DIINDUKSI GENTAMISIN OLEH:
JIRO HASEGAWA SITUMORANG NIM 101501078
Dipertahankan di Hadapan Panitia Penguji Skripsi Fakultas Farmasi Universitas Sumatera Utara
Pada Tanggal: 13 Juni 2014 Pembimbing I, Panitia Penguji,
Dr. Poppy Anjelisa Hasibuan, M.Si., Apt. Prof. Dr. Rosidah, M.Si., Apt. NIP 197506102005012003 NIP 195103261978022001
Pembimbing II, Dr. Poppy Anjelisa Hasibuan, M.Si., Apt. NIP 197506102005012003
Drs. Panal Sitorus, M.Si., Apt. Marianne, S.Si., M.Si., Apt. NIP 195310301980031002 NIP 198005202005012006
Dra. Aswita Hafni Lubis, M.Si., Apt.
NIP 195304031983032001 Medan, Juli 2014
Fakultas Farmasi
Universitas Sumatera Utara Dekan,
KATA PENGANTAR
Puji syukur kepada Tuhan Yang Maha Kuasa yang hanya karena berkat dan kasih karunia yang berlimpah sehingga penulis dapat menjalani masa perkuliahan dan penelitian hingga akhirnya menyelesaikan penyusunan skripsi ini dengan baik.
Pada kesempatan ini penulis menyampaikan terima kasih yang sebesar-besarnya kepada Prof. Dr. Sumadio Hadisahputra, Apt. selaku Dekan Fakultas Farmasi Universitas Sumatera Utara yang telah memberikan bantuan dan fasilitas selama pendidikan. Penulis juga mengucapkan terima kasih yang mendalam kepada Dr. Poppy Anjelisa Hasibuan, M.Si., Apt. selaku Dosen Pembimbing I dan Drs. Panal Sitorus, M.Si., Apt. selaku Dosen Pembimbing II yang telah membimbing dengan penuh kesabaran, tulus, dan ikhlas selama penelitian dan penulisan skripsi ini berlangsung. Ucapan terima kasih juga penulis sampaikan kepada Prof. Dr. Rosidah, M.Si., Apt., selaku ketua penguji dan penasehat akademik yang telah memberikan saran untuk menyempurnakan skripsi ini dan telah membimbing penulis selama masa perkuliahan hingga selesai, dan kepada Marianne, S.Si., M.Si., Apt., dan Dra. Aswita Hafni Lubis, M.Si., Apt. selaku anggota penguji yang memberikan saran demi sempurnanya skripsi ini.
doa, dorongan dan pengorbanan baik moril maupun materil dalam penyelesaian skripsi ini.
Penulis menyadari sepenuhnya bahwa penulisan skripsi ini jauh dari sempurna. Oleh karena itu, penulis mengharapkan saran dan kritik demi sempurnanya skripsi ini. Semoga skripsi ini bermanfaat bagi ilmu pengetahuan khususnya di bidang farmasi.
Medan, Juni 2014 Penulis,
EFEK EKSTRAK ETANOL DAUN SIRSAK (Annona muricata L.) TERHADAP KADAR KREATININ DAN UREA SERUM TIKUS YANG
DIINDUKSI GENTAMISIN Abstrak
Daun sirsak diketahui memiliki aktivitas antioksidan yang kuat sehingga tumbuhan ini dapat bermanfaat terhadap pengobatan penyakit yang berhubungan dengan stres oksidatif. Gentamisin adalah antibiotik golongan aminoglikosida. Penggunaannya terbatas karena menyebabkan nefrotoksik. Nefrotoksisitas yang diakibatkan oleh gentamisin sebagian besar disebabkan oleh stres oksidatif yang manifestasinya diantaranya ditandai oleh peningkatan kadar kreatinin dan urea. Penelitian ini bertujuan untuk mengetahui efek pemberian ekstrak etanol daun sirsak terhadap kadar kreatinin dan urea serum darah yang diinduksi gentamisin.
Penelitian ini meliputi karakterisasi simplisia dan ekstrak, skrining fitokimia simplisia dan ekstrak, pengujian pada tikus yaitu pengukuran kadar kreatinin dan urea pada serum darah. Tikus dibagi dalam 5 kelompok masing-masing terdiri dari 4 ekor, yaitu kelompok kontrol (CMC 0,5%), kelompok gentamisin 100 mg/kg bb, kelompok EEDS (ekstrak etanol daun sirsak) 100 mg/kg bb + gentamisin 100 mg/kg bb, kelompok EEDS 200 mg/kg bb + gentamisin 100 mg/kg bb dan kelompok EEDS 300 mg/kg bb + gentamisin 100 mg/kg bb. Pemberian dilakukan setiap hari selama 8 hari. Kadar kreatinin dan urea ditentukan secara spektrofotometri UV-Vis pada panjang gelombang 493 dan 576 nm berturut-turut.
Hasil pemeriksaan karakteristik simplisia dan ekstrak secara berturut-turut diperoleh kadar air 6,99% dan 1,99%, kadar sari larut air 19,3%, kadar sari larut etanol 23,7%, kadar abu total 3,01% dan 2,31% serta kadar abu tidak larut asam 0,84% dan 0,73%. Hasil skrining fitokimia simplisia dan ekstrak menunjukkan adanya senyawa golongan alkaloid, flavonoid, glikosida, saponin, tanin dan steroid/triterpenoid. Hasil menunjukkan peningkatan kadar kreatinin dan urea darah secara signifikan (n = 4, p < 0,05) kelompok gentamisin (kadar kreatinin 5 ± 1,3070 mg/dl dan kadar urea 106,2019 ± 5,4626 mg/dl) dibandingkan dengan kelompok kontrol (kadar kreatinin 0,875 ± 0,2393 mg/dl dan kadar urea 37,7403 ± 9,2362 mg/dl). Pemberian ekstrak menunjukkan penurunan kadar kreatinin dan urea signifikan (n = 4, p < 0,05) pada kelompok yang diberikan EEDS 100 mg/kg bb + gentamisin 100 mg/kg bb (kadar kreatinin 1,625 ± 0,125 mg/dl), kelompok EEDS 200 mg/kg bb + gentamisin 100 mg/kg bb (kadar kreatinin 1,125 ± 0,3145 mg/dl dan kadar urea 41,5865 ± 8,6774 mg/dl) dan kelompok EEDS 300 mg/kg bb + gentamisin 100 mg/kg bb (kadar kreatinin 1,25 ± 0,25 mg/dl dan urea 40,1442 ± 13,8604 mg/dl) dibandingkan dengan kelompok yang dinduksi gentamisin.
Dari hasil penelitian dapat disimpulkan bahwa pemberian ekstrak etanol daun sirsak pada tikus yang diinduksi gentamisin dapat menghambat peningkatan kadar kreatinin dan urea darah tikus.
EFFECTS OF ETHANOLIC LEAF EXTRACT OF SOURSOP (Annona
muricata L.) ON BLOOD SERUM CREATININE AND UREA ON
GENTAMICIN-INDUCED RATS Abstract
Leaf of soursop has strong activity of antioxidant so it can be use to treat disease related to stress oxidative. Gentamicin is an antibiotic class of aminoglycoside antibiotic, but its use limited due to its nephrotoxic. Nephrotoxicity induced by gentamicin caused by stress oxidative could increase the creatinine and urea serum. The aim of the study was to determine the effects of ethanolic leaf extract of soursop on creatinine and urea serum gentamicin-induced rats.
This research include the characterization of simplex and extract, phytochemical screening of simplex and extract, animal testing, and measurement of blood serum creatinine and urea level. This study used 5 groups, control group (0.5% CMC), gentamicin 100 mg/kg bb group, EEDS (ethanolic leaf extract of soursop) 100 mg/kg bb + gentamicin 100 mg/kg bb group, EEDS 200 mg/kg bb + gentamicin 100 mg/kg bb group, and EEDS 300 mg/kg bb + gentamicin 100 mg/kg bb group. All the groups treat everyday for 8 days. Creatinine and urea level were measured using UV-Vis spectrophotometer at wavelength 493 and 576 nm respectively.
The results of the examination showed characteristic of simplex and extract respectively were water content 6.99% and 1.99%, water-soluble extract 19.3%, ethanol-soluble extract 23.7%, total ash content 3.01% and 2.31% and acid-insoluble ash 0.84% and 0.73%. Phytochemical screening results indicated the presence of alkaloid, flavonoid, glycosides, saponins, tannins, and steroids/triterpenoids compounds in both simplex and extract. Results showed significant increase of blood serum creatinine and urea level (n = 4, p < 0.05) in gentamicin-induced group (creatinine level 5 ± 1.3070 mg/dl and urea level 106.2019 ± 5.4626 mg/dl) compared to the control group (creatinine level 0.875 ± 0.2393 mg/dl and urea level 37.7403 ± 9.2362 mg/dl). Extract of soursop showed significant decreased of blood serum creatinine and urea level (n = 4, p < 0,05) in group given with EEDS 100 mg/kg bb + gentamisin 100 mg/kg bb (creatinine level 1.625 ± 0.125 mg/dl), EEDS 200 mg/kg bb + gentamisin 100 mg/kg bb (creatinine level 1.125 ± 0.3145 mg/dl and urea level 41.5865 ± 8.6774 mg/dl) and EEDS 300 mg/kg bb + gentamisin 100 mg/kg bb (creatinine level 1.25 ± 0.25 mg/dl and urea level 40.1442 ± 13.8604 mg/dl) compared to the group induced by gentamicin.
From the research it can be concluded that ethanolic leaf extract of soursop significantly attenuated elevations in serum creatinine and urea level in gentamicin-induced rats.
DAFTAR ISI
Halaman
JUDUL ... i
HALAMAN JUDUL ... ii
HALAMAN PENGESAHAN ... iii
KATA PENGANTAR ... iv
ABSTRAK ... vi
ABSTRACT ... vii
DAFTAR ISI ... viii
DAFTAR TABEL ... xii
DAFTAR GAMBAR ... xiii
DAFTAR LAMPIRAN ... xiv
BAB I PENDAHULUAN ... 1
1.1 Latar Belakang ... 1
1.2 Perumusan Masalah ... 3
1.3 Hipotesis ... 3
1.4 Tujuan Penelitian ... 3
1.5 Manfaat Penelitian ... 4
1.6 Kerangka Pikir Penelitian ... 5
BAB II METODE PENELITIAN ... 6
2.1 Uraian Tumbuhan ... 6
2.1.1 Sistematika tumbuhan ... 6
2.1.2 Nama daerah dan nama asing ... 6
2.1.2.2 Nama asing ... 7
2.1.3 Habitat (daerah tumbuh) ... 7
2.1.4 Morfologi tumbuhan ... 7
2.1.5 Kandungan kimia... 8
2.1.6 Khasiat tumbuhan ... 9
2.2 Ekstraksi ... 9
2.2.1 Metode-metode ekstraksi ... 9
2.3 Gentamisin ... 11
2.4 Kreatinin ... 12
2.5 Urea ………... ... 13
2.6 Spektrofotometri UV-Visible ... 14
BAB III METODE PENELITIAN ... 16
3.1 Alat-alat ... 16
3.2 Bahan-bahan ... 17
3.3 Prosedur Pembuatan Simplisia ... 17
3.3.1 Pengumpulan bahan tumbuhan ... 17
3.3.2 Identifikasi tumbuhan ... 17
3.3.2 Pembuatan simplisia ... 17
3.4 Pemeriksaan Karakteristik Simplisia dan Ekstrak ... 18
3.4.1 Pemeriksaan makroskopik ... 18
3.4.2 Pemeriksaan mikroskopik ... 18
3.4.3 Penetapan kadar air ... 18
3.4.4 Penetapan kadar sari larut air ... 19
3.4.6 Penetapan kadar abu total ... 20
3.4.7 Penetapan kadar abu tidak larut asam ... 20
3.5 Skrining Fitokimia Simplisia dan Ekstrak ... 20
3.5.1 Pemeriksaan flavonoid ... 20
3.5.2 Pemeriksaan alkaloid ... 21
3.5.3 Pemeriksaan saponin ... 22
3.5.4 Pemeriksaan tanin ... 22
3.5.5 Pemeriksaan glikosida ... 22
3.5.6 Pemeriksaan steroid/triterpenoid ... 23
3.6 Pembuatan Ekstrak Etanol Daun Sirsak ... 23
3.7 Pembuatan Pereaksi ... 23
3.7.1 Pembuatan Na-CMC 0,5% ... 23
3.7.2 Pembuatan suspensi ekstrak etanol daun sirsak 8% ... 24
3.8 Penyiapan Hewan Percobaan ... 24
3.9 Perlakuan Hewan Percobaan ... 24
3.10 Penyiapan Serum Darah Tikus ... 25
3.11 Pengukuran Kadar Kreatinin dan Urea Pada Serum ... 25
3.11.1 Penentuan panjang gelombang maksimum kreatinin ... 25
3.11.2 Penentuan panjang gelombang maksimum urea ... 25
3.11.3 Pengukuran kadar kreatinin dalam serum ... 26
3.11.4 Pengukuran kadar urea dalam serum ... 26
3.12 Analisis Data ... 26
BAB IV HASIL DAN PEMBAHASAN ... 27
4.2 Hasil Pengukuran Kadar Kreatinin dan Urea dalam Serum ... 29
BAB V KESIMPULAN DAN SARAN ... 34
5.1 Kesimpulan ... 34
5.2 Saran ... 34
DAFTAR PUSTAKA ... 35
DAFTAR TABEL
Halaman Tabel 3.1 Hasil skrining fitokimia serbuk simplisia dan ekstrak daun
DAFTAR GAMBAR
Halaman
Gambar 1.1 Kerangka Pikir Penelitian ... 5
Gambar 2.1 Struktur Kimia Kreatinin ... 12
Gambar 2.2 Struktur Kimia Urea ... 13
Gambar 3.1 Grafik Kadar Kreatinin dalam Serum ... 30
DAFTAR LAMPIRAN
Halaman
Lampiran 1 Hasil Identifikasi Tumbuhan ... 38
Lampiran 2 Gambar Karakteristik Tumbuhan Sirsak ... 39
Lampiran 3 Perhitungan Hasil Pemeriksaan Karakteristisasi Simplisia 42 Lampiran 4 Perhitungan Hasil Pemeriksaan Karakterisasi Ekstrak .. .. 47
Lampiran 5 Bagan Alur Penelitian ... 50
Lampiran 6 Gambar Alat dan Bahan ... 51
Lampiran 7 Gambar Hewan Percobaan ... 53
Lampiran 8 Contoh Perhitungan Dosis ... 54
Lampiran 9 Komposisi Reagen Yang Digunakan ... 56
Lampiran 10 Hasil Analisis ANAVA ... 57
Lampiran 11 Contoh Perhitungan Dan Tabel Kadar Kreatinin Dalam Serum ... 60
Lampiran 12 Contoh Perhitungan Dan Tabel Kadar Urea Dalam Serum ... 61
Lampiran 13 Panjang Gelombang Maksimum Kreatinin ... 62
[image:79.595.113.505.132.567.2]
