LAPORAN PRAKTIKUM BIOKIMIA
LAPORAN PRAKTIKUM BIOKIMIA
Nama PercobaanNama Percobaan : Pengaruh pH terhadap aktivitas enzim: Pengaruh pH terhadap aktivitas enzim
H
Haarri / i / TTaannggggaal Pl Peerrccoobbaaaann : Raab: R bu / u / 222 O2 Okkttoobbeer 2r 200!!
"
"eelloommppookk :: ##
Nama $ahasis%a / NRP
Nama $ahasis%a / NRP : & 'ransiska P& (amabela%a ) 2!!*0*2+2 ,: & 'ransiska P& (amabela%a ) 2!!*0*2+2 ,
2&
2& (ailatun (ailatun Ni-mah Ni-mah ) ) 2!!*0*2+. 2!!*0*2+. ,,
*&
*& nna nna melia melia ) ) 2!!*0*2. 2!!*0*2. ,,
!
!& & 11rrnna a uunni i ssttuuttiikk ) ) 22!!!!**00****3 3 ,,
+
+& & ((oovviieena na 44eerrooninicca a NN&& ) ) 2!2!!!**00****. . ,,
&
& 1lla 1lla smo smo #e%ant5 #e%ant5 ) ) 2!!*0**20 2!!*0**20 ,,
6
6&&77tteevvaanni i ((eell5 5 88eeaattrriicc ) ) 22!!!!**00****223 3 ,,
II.. TTUUJJUUAAN N PPEERRCCOOBBAAAANN
7etelah mengikuti praktikum9 mahasis%a diharapkan: 7etelah mengikuti praktikum9 mahasis%a diharapkan:
•
• memahami dan menelaskan ;ungsi enzim amilasememahami dan menelaskan ;ungsi enzim amilase •
• memahami pengaruh pH terhadap aktivitas enzim pada umumn5a9 dan enzim amilasememahami pengaruh pH terhadap aktivitas enzim pada umumn5a9 dan enzim amilase
secara khusus secara khusus
IIII.. DDAASSAAR R TTEEOORRII
#al
#alam am mahmahklukluk k hidhidup9 up9 reareaksi ksi metmetabolabolismisme e berberlanlangsugsung ng dengdengan an melmelibaibatkan tkan suasuatutu sen5a%a protein 5ang disebut enzim& 1nzim merupakan protein 5ang khusus disintesis oleh sen5a%a protein 5ang disebut enzim& 1nzim merupakan protein 5ang khusus disintesis oleh sel hidup untuk mengkatalisis reaksi 5ang berlangsung di dalamn5a& 'ungsi khusus dari sel hidup untuk mengkatalisis reaksi 5ang berlangsung di dalamn5a& 'ungsi khusus dari enzim adalah untuk menurunkan energi aktivasi9 mempercepat reaksi pada suhu dan tekanan enzim adalah untuk menurunkan energi aktivasi9 mempercepat reaksi pada suhu dan tekanan 5an
5ang g tetetatap p tatanpa npa memengngubaubah h bebesasarn5rn5a a tetetatapan pan kekeseseimimbabangangan n dadan n sesebabagagai i pepengengendndalalii reaksin5a )$artoharsono9 ..!,&
1nzim adalah substansi 5ang dihasilkan oleh sel<sel hidup dan berperan sebagai katalisator pada reaksi kimia 5ang berlangsung dalam organisme& "atalisator adalah substansi 5ang mempercepat reaksi tetapi pada hasil reaksi9 substansi tersebut tidak berubah& 1nzim mempun5ai ciri dimana keran5a dipengaruhi oleh lingkungan& 7alah satu lingkungan 5ang berpengaruh terhadap kera enzim adalah pH& pH optimal enzim adalah sekitar pH 6 )netral, dan ika medium menadi sangat asam atau sangat alkalis enzim mengalami inaktivasi )=aman > 7herrington9 ..!,&
1nzim digolongkan menurut reaksi 5ang diikutin5a9 sedangkan masingmasing enzim diberi nama menurut nama substratn5a9 misaln5a urease9 arginase dan lain<lain& #i samping itu ada pula beberapa enzim 5ang dikenal dengan nama lama misaln5a pepsin9 tripsin dan lain<lain& Oleh ?ommision on 1nz5mes o; the @nternational Anion o; 8iochemistr59 enzim dibagi dalam enam golongan besar& Penggolongan ini didasarkan atas reaksi kimia di mana enzim memegang peranan&
1nam golongan tersebut ialah )Poediadi9 200,: & Oksidoreduktase 2& Trans;erase *& Hidrolase !& (iase +& @somerase & (igase
da beberapa ;aktor untuk menentukan aktivitas enzim berdasarkan e;ek katalisn5a 5aitu persamaan reaksi 5ang dikatalis9 kebutuhan ko;aktor9 pengaruh konsentrasi substrat dan ko;aktor9 pH optimal9 daerah temperatur9 dan penentuan berkurangn5a substrat atau bertambahn5a hasil reaksi& Penentuan ini biasa dilakukan di pH optimal dengan konsentrasi substrat dan ko;aktor berlebih9 menadikan lau reaksi 5ang teradi merupakan tingkat ke 0 ) zero order reaction, terhadap substrat& Pengamatan reaksin5a dengan berbagai cara kimia atau spektro;otometri& da dua teori tentang mekanisme pengikatan substrat oleh enzim9 5aitu teori kunci dan anak kunci )lock and key, dan teori induced fit )Birahadikusumah9 .3.,&
7uasana 5ang terlalu asam atau alkalis men5ebabkan denaturasi protein dan hilangn5a secara total aktivitas enzim& Pada sel hidup9 perubahan pH sangat kecil& 1nzim han5a akti; pada kisaran pH 5ang sempit& Oleh karena itu media harus benar<benar dipelihara dengan
menggunakan bu;;er )larutan pen5angga,& Cika enzim memiliki lebih dari satu substrat9 maka pH optimumn5a akan berbeda pada suatu substrat )Tranggono > 7utardi9 ..0,&
7i;at<si;at enzim antara lain : & 7pesi;itas
ktivitas enzim sangat spesi;ik karena pada umumn5a enzim tertentu han5a akan mengkatalisis satu reaksi saa& 7ebagai contoh9 laktase menghidrolisis gula laktosa tetapi tidak berpengaruh terhadap disakarida 5ang lain& Han5a molekul laktosa saa 5ang akan sesuai dalam sisi akti; molekul )=aman > 7herrington9 ..!,&
2& Pengaruh suhu
ktivitas enzim sangat dipengaruhi oleh suhu& Antuk enzim he%an suhu optimal antara *+D? dan !0D?9 5aitu suhu tubuh& Pada suhu di atas dan di ba%ah optimaln5a9 aktivitas enzim berkurang& #i atas suhu +0D? enzim secara bertahap menadi inakti; karena protein terdenaturasi& Pada suhu 00D? semua enzim rusak& Pada suhu 5ang sangat rendah9 enzim tidak benar<benar rusak tetapi aktivitasn5a sangat ban5ak berkurang )=aman > 7herrington9 ..!,& 1nzim memiliki suhu optimum 5aitu sekitar 30<2*0? atau maksimal !00? karena
pada suhu !+0? enzim akan terdenaturasi karena merupakan salah satu bentuk protein&
)Tranggono9 .3.,&
7uhu 5ang tinggi akan menaikkan aktivitas enzim namun sebalikn5a uga akan mendenaturasi enzim )$artoharsono9 ..!,& Peningkatan temperatur dapat meningkatkan kecepatan reaksi karena molekul atom mempun5ai energi 5ang lebih besar dan mempun5ai kecenderungan untuk berpindah& "etika temperatur meningkat9 proses denaturasi uga mulai berlangsung dan menghancurkan aktivitas molekul enzim& Hal ini dikarenakan adan5a rantai protein 5ang tidak terlipat setelah pemutusan ikatan 5ang lemah sehingga secara keseluruhan
kecepatan reaksi akan menurun )(ee9 ..2,& *& Pengaruh pH
pH optimal enzim adalah sekitar pH 6 )netral, dan ika medium menadi sangat asam atau sangat alkalis enzim mengalami inaktivasi& kan tetapi beberapa enzim han5a beroperasi
dalam keadaan asam atau alkalis& 7ebagai contoh9 pepsin9 enzim 5ang dikeluarkan ke lambung9 han5a dapat ber;ungsi dalam kondisi asam9 dengan pH optimal 2 )=aman > 7herrington9 ..!,&
1nzim memiliki konstanta disosiasi pada gugus asam ataupun gugus basa terutama pada residu terminal karboksil dan asam aminon5a& Namun dalam suatu reaksi kimia9 pH untuk suatu enzim tidak boleh terlalu asam maupun terlalu basa karena akan menurunkan kecepatan reaksi dengan teradin5a denaturasi& 7ebenarn5a enzim uga memiliki pH optimum tertentu9 pada umumn5a sekitar !9+E39 dan pada kisaran pH tersebut enzim mempun5ai kestabilan
5ang tinggi )Billiamson > 'ieser9 ..2,& !& "o<enzim dan aktovator
"o<enzim adalah substansi bukan protein 5ang mengakti;kan enzim& 8eberapa ion anorganik9 misaln5a ion kalsium dan ion klorida9 menaikkan aktivitas beberapa enzim dan dikenal sebagai aktivator )=aman > 7herrington9 ..!,&7alah satu enzim 5ang diperlukan untuk pertumbuhan adalah amilase& milase dapat diartikan sebagai segolongan enzim 5ang merombak pati9 glikogen dan polisakarida 5ang lain& Tumbuhan mengandung F dan G amilase9 he%an memiliki han5a F amilase9 diumpai dalam cairan pankreas dan uga )pada manusia dan beberapa spesies lain, dalam ludah& milase memotong rantai polisakarida 5ang panang9 menghasilkan campuran glukosa dan maltosa& milosa merupakan polisakarida
5ang terdiri dari 00<000 molekul glukosa 5ang saling berikatan membentuk rantai lurus& #alam air9 amilosa bereaksi dengan iodin memberikan %arna biru 5ang khas )'o9 ..,&
7alah satu enzim 5ang diperlukan untuk pertumbuhan adalah amilase& milase dapat diartikan sebagai segolongan enzim 5ang merombak pati9 glikogen9 dan polisakarida 5ang lain& Tumbuhan mengandung F dan I am5laseJ he%an memiliki han5a F am5lase9 diumpai dalam cairan pankreas dan uga )pada manusia dan beberapa spesies lain, dalam ludah& milase memotong rantai polisakarida 5ang panang9 menghasilkan campuran glukosa dan maltosa& milosa merupakan polisakarida 5ang terdiri dari 00<000 molekul glukosa 5ang saling berikatan membentuk rantai lurus& #alam air9 amilosa bereaksi dengan iodine memberikan %arna biru 5ang khas )'o9 ..,&
milase adalah enzim pemecah karbohidrat dari bentuk meemuk menadi bentuk 5ang lebih sederhana& $isaln5a9 pati dan glikogen dipecah menadi maltosa9 maltotriosa atau
oligosakarida& 1nzim ini terdapat dalam air liur )ptialin, dan getah pankreas 5ang membantu pencernaan karbohidrat dalam makanan& #arah normal uga mengandung sedikit amilase dari
hasil pemecahan sel 5ang berlangsung secara normal& Pada pen5akit radang pankreas9 gondongan9 kencing manis9 kadarn5a dalam darah meningkat& 7ebalikn5a pada pen5akit hati9 kadarn5a menurun )nonim9 ..0,&
III. ALAT DAN BAHAN
Alat : < 7pektro;otomer
- "uvet
- 7top%atch
- Penangas air terkontrol
- Tabung reaksi
- Pipet volume
- $ikropipet
- Rak tabung reaksi
- 4orte
Bahan : < (arutan ekstrak kasar enzim amilase )dikondisikan selalu dingin9 dalam penangas air,
- (arutan pati 290K )%/v,
- (arutan pen5angga 090!$ pH ! J + J 9+ J 3 dan 0
- (arutan @odine
- (arutan H?l 09N
Preparas Lar!tan Ker"a I#$ne :
- 1ncerkan 90 m( larutan stock )+00mg iodine/@2 dan +90 gram "l/00m(
air, 00 kali& 7impan dalam botol gelap&
Preparasa Lar!tan Pat %&'( )*+, :
- (arutan pati 290K )%/v, diencerkan : dengan
- (arutan pen5angga 090!$ pada pH ui
I,. SKEMA KERJA
7et : 0 ml larutan pati K
, RO M +00 μl air suling 4ORT1 #iamkan 0 menit
1 M +0 μl 1nzim 4ORT1 #iamkan 0 menit
8, Tepat 0 menit9 M + ml Hcl 09 N M + ml Hcl 09 N 1 RO ?, 7iapkan set 2 8langko + ml larutan iodine +00 μl 9 Hcl 09 N #, mbil dari 8
+00 mikro ( dari masing<masing tabung ke tabung set 2 5ang sudah diberi +90 larutan @2 kemudian 4orte
1, eroing spektro;otometer dengan blangko ', mati serapan pada 20 nm
=, Hitung aktivitas enzim Q #
(
Ro
−
RRo
)
00,. DATA HASIL PENAMATAN
Hasil praktikum 5ang kami dapatkan adalah sebagai berikut:
pH ! pH 9+ pH 0 R 96* 092.! 9+ Ro *900 *900 29!*2 ktivitas 1nzim ) Ro
−
R Ro , 00 !29** .092 *69 pH Ro 1/R! 8iruPekat 8iru Pekat
9+ 8iru Pekat ?oklat transparan
0 8iru Pekat Angu Pekat
gambar 2& Hasil pada pH 9+
gambar *& Hasil pada pH !
,II. PEMBAHASAN
Pada praktikum kinetika enzim pengaruh PH terhadap aktivitas enzim9 menggunakan larutan ekstrak kasar enzim amilase& $etode penguian aktivitas amilase 5ang digunakan didasarkan pada metode 8irds and Hopkins9 Pada metode ini menghasilkan %arna biru dengan serapan maksimum panang gelombang 20 nm& 7ediakan tiga buang tabung reaksi9 satu tabung untuk RS )pembanding tanpa enzim, dan dua tabung untuk 1S )aktivitas enzim,9 kemudian dengan pipet volume + ml atau mikropipet 000 (9 tambahkan +900 ml larutan pati K %/v dalam ph 9+ pada tabung R dan 19 setelah itu masukkan kedalam penangas air suhu 2+D? selama U0 menit& Tambahkan +00 ml air suling untuk tabung R dan +00 ml larutan enzim untuk tabung 19 kemudian di vorte lalu inkubasi pada penangas air selama U0 menit&9 setelah tepat 0
menit tambahkan +900 ml larutan H?( 09 N lalu vorte kembali9 di pipet +00( masing< masing campuran kedalam tabung reaksi berisi +900 m( larutan iodin dan vorte& "emudian amati %arna biru larutan dengan spektro;otometer dengan panang gelombang 20 nm& (arutan @odin pada reaksi tersebut digunakan untuk mendeteksi sisa am5lum&
8erdasarkan hasil 5ang kami peroleh melalui praktikum ini9 denganpH %' : R# / 0er1arna 0r! pe2at& AE / !n3! pe2at& pH 4&5 : R# / 0r! pe2at AE / 6#2lat transparan& pH 7 : R# / 0r! pe2at AE / !n3! pe2at& Teradi perubahan %arna pada ketiga enis tersebut dikarenakan aktivitas enzim pada PH tersebut optimal dan dapat memecah am5lum menadi non polisakarida 5ang tidak terikat dengan iodin& #engan pH ui 9+ diperoleh Ro : *900 1 : 092.! dan nilai rata<rata aktivitas enzim sebesar .092 mg pati/ml enzim& Hasil ini merupakan nilai terbesar dari rata<rata aktivitas enzim dengan pH
lainn5a dan pH 9+ merupakan pH 5ang optimal&
I8. DA9TAR PUSTAKA
nonim& )..0,& Ensiklopedi Nasional Indonesia&PT ?ipta di Pustaka& Cakarta& 'o9 P&'& )..,& Food Enzymology Vol 2& 1lsevier pplied 7cience& (ondon&
=aman9 P&$ > "&8& 7herrington& )..!,& Ilmu Pangan, Pengantar Ilmu Pangan, Nutrisi dan Mikrobiologi& Aniversitas =adah $ada press& og5akarta&
(ee9 C& $& )..2,& Biocemical Engineering & Prentice Hall @nc& Ne% Cerse5&
$artoharsono9 7& )..!,& Biokimia !ilid "& =adah $ada Aniversit5 Press& og5akarta& Poediadi9 nna9 200& #asar$dasar Biokimia9 Aniversitas @ndonesia PR1779
Cakarta&
Tranggono98&7& ).3.,& Petun!uk %aboratorium Biokimia Pangan& Pusat 'ntar (ni)ersitas Pangan dan *izi& og5akarta&
Tranggono > 7utardi& )..0,& Biokimia dan +eknologi Pasca Panen& =aah $ada universit5 Press& og5akarta&
Billiamson9"&( > (&'&'ieser& )..2,& rganic E-periment . t Edition& # ? Health ang
?ompan5& Anited 7tates o; merica&
Birahadikusumah9 $& ).3.,& Biokimia / protein, enzim, dan asam nukleat & @nstitut Teknologi 8andung& 8andung&
