ﺎﮕﺸﻧاد ﻪﻠﺠﻣ ه ﻲﺘﺷاﺪﻬﺑ تﺎﻣﺪﺧ و ﻲﻜﺷﺰﭘ مﻮﻠﻋ دﺰﻳ ﻲﻗوﺪﺻ ﺪﻴﻬﺷ ﻲﻧﺎﻣرد –
ﺰﻧﺎﭘ هرود هرﺎﻤﺷ ، ﻢﻫد رﺎﻬﺑ ، لوا
1386 تﺎﺤﻔﺻ ، 84 - 79
ﺳرﺮﺑ ﻲ ﺎﻫ ﺶﻬﺟ ى
ﺑﻮﻠﮔﺎﺘﺑ نژ ردﺎﻧ ﻴ
لﺎﻤﺷ رد ﻦ رﻮﺸﻛ بﺮﻏ
ﻠﻋﺪﻤﺤﻣ ﺮﺘﻛد ﻲ
ﺴﺣ ﻴ ﻓرﻮﭙﻨ ﻴ ﻀ
*ﻲ
،1 ﻲﻠﻌﺳﺎﺒﻋ ﺮﺘﻛد ﻲﻀﻴﻓرﻮﭙﻨﻴﺴﺣ
،2 يدﻻﻮﭘ ﺮﺻﺎﻧ
، 3 يﺪﻬﻣ ﻘﺣ 4ﻲ
، مﺎﻓرذآ ﻦﻳوﺮﭘ
5
ﻜﭼ ﻴ هﺪ
ﻪﻣﺪﻘﻣ
ﺧا تﺎﻌﻟﺎﻄﻣ :
ﻴ ﺮ ورﺮﺑ ي ﺑﻮﻠﮔﺎﺘﺑ نژ ﻴ
ا رد ﻦ ﻳ ﻣ نﺎﺸﻧ ناﺮ ﻲ
ﺎﺷ ﺶﻬﺟ ﺖﺸﻫ دوﺪﺣ ﻪﻛ ﺪﻫد ﻳ
ﺑ ﻊ ﻴ ﺮﺘﺸ ﻳ ﻧاواﺮﻓ ﻦ ﻲ د ار ﻌﻤﺟ ر ﻴ ﺑ ﺖ ﻴ نارﺎﻤ
ﻤﺳﻻﺎﺗﺎﺘﺑ ﻲ ﺪﻧراد رﻮﺸﻛ .
ﻤﻫ ﺎﻣا ﻴ ﺎﻫ ﺶﻬﺟ دﻮﺟو ﻪﺸ ي
و ردﺎﻧ ز تﻼﻜﺸﻣ ﻪﺘﺧﺎﻨﺷﺎﻧ ﻳ
دﺎ ي ر ﻪﻣﺎﻧﺮﺑ رد ار ﻳ
ﺰ ي ﺨﺸﺗ ﺖﻬﺟ ﻴ
ﺪﻟﻮﺗ زا ﻞﺒﻗ ﺺ
اﻳ ﻣ دﺎﺠ ﻲ ﻛ ﻨ ﺪﻨ . ﻧ رﻮﺸﻛ بﺮﻏ لﺎﻤﺷ رد ﻴ
ﺎﻫ ﺶﻬﺟ ﺰ ي
ﺎﺷ ﻳ ﺳرﺮﺑ ﻊ ﻲ و ﺖﺳا هﺪﺷ شراﺰﮔ .
ﺳرﺮﺑ ﻲ و ﺎﻫ ﺶﻬﺟ شراﺰﮔ ي
و ردﺎﻧ ﻪﺘﺧﺎﻨﺷﺎﻧ
ﻣ ﻲ راﻮﻣ رد ﺪﻧاﻮﺗ ﺨﺸﺗ د
ﻴ ﺼ ﻲ و ﺎﻫ ﻪﻣﺎﻧﺮﺑ حﺮﻃ رد ي
ﭘ ﻴ ﮕﺸ ﻴ ﻔﻣ ﻪﻧاﺮ ﻴ دﻮﺷ ﻊﻗاو ﺪ
ﺳرﺮﺑ شور :ﻲ
ﺶﻫوﮋﭘ ﻦﻳا رد
، 5 ﻲﻄﻴﺤﻣ نﻮﺧ ي ﻪﻧﻮﻤﻧ ﺮﺘﻴﻟ ﻲﻠﻴﻣ زا
20 يرذآ رﺎﻤﻴﺑ ﻲﻤﺳﻻﺎﺗﺎﺘﺑ ﻪﺑ ﻼﺘﺒﻣ
ﻪﻛ ﻲﺳرﺮﺑ رد ﺎﻬﻧآ ﺶﻬﺟ ﻲﻠﺒﻗ
ﻲﻳﺎﺳﺎﻨﺷ دﻮﺑ هﺪﺸﻧ
، ﺖﻓﺎﻳرد
DNA و ﺎﻨﻴﺌﺗوﺮﭘ شور ﻪﺑ ﺎﻫ ﻪﻧﻮﻤﻧ
Kز - ﻞﻧﺎﭘوﺮﭘوﺰﻳا ﻳدﺮﮔ جاﺮﺨﺘﺳا
ﺪ .
،ﺖﺴﺨﻧ ي ﻪﻠﺣﺮﻣ رد ﺲﭙﺳ ﺶﻬﺟ
يﺎﻫ
Codon22(-AAGTTGG) Codon36/37(-T)
Codon16(-C) ،
-88(C-A), Codon41/42(-TCTT) ,Codon6(-A) ، شور ﺎﺑ
ARMS-PCR
ﺖﻓﺮﮔ راﺮﻗ ﻲﺳرﺮﺑ درﻮﻣ و
يﺎﻫ ﺶﻬﺟ ﻪﻛ يدراﻮﻣ ﺪﺷ لﺎﺳرا ﻲﻟاﻮﺗ ﻦﻴﻴﻌﺗ ﺖﻬﺟ ﺪﻧداﺪﻧ نﺎﺸﻧ ار قﻮﻓ
.
ﺎﺘﻧ ﻳ :ﺞ
ﺮﺑ ﺞﻳﺎﺘﻧ سﺎﺳا اﻳ
ﻪﻌﻟﺎﻄﻣ ﻦ
، ﺎﻫ ﺶﻬﺟ
,Codon15(TGG-TGA)ي
Codon16(-C) Codon 36/37(-T) ،
Codon25/26(+T), ،
IVSII-848(C-A) -28(A-C) ،
IVSII-745(C-G)و ﺎﺳﺎﻨﺷ
ﻲﻳ ﺎﻫ ﺶﻬﺟ ﻊﻤﺟ ﻪﺑو ي
هﺪﺷ ﻪﺘﺧﺎﻨﺷ ي
دﺮﮔ ﻪﻓﺎﺿا رﻮﺸﻛو ﻪﻘﻄﻨﻣ ﻳ
ﺪ ﺪﻧ .
ﻨﭽﻤﻫ ﻴ ﺎﺟ رﺎﻬﭼ ﻦ ﻳ
SNP هﺎﮕ
5’UTR+20(C-T) :
Codon2(CAC-CAT) ، ،
G) (C-
-16 IVSII
و
T-C)
666 (
IVSII- رد ﺑﻮﻠﮔﺎﺘﺑ نژ ﻴ
ﻦ
ﺑﻴ دﺮﮔ ﺺﺨﺸﻣ ﻪﻌﻟﺎﻄﻣ درﻮﻣ نارﺎﻤ ﻳ
ﺪ .
يﺮﻴﮔ ﻪﺠﻴﺘﻧ
ﺎﺘﻧ:
ﻳ ا ﺞ ﻳ ﺳرﺮﺑ ﻦ ﻲ ﻣ ﻲ ﺪﻧاﻮﺗ رد ﺮﮕﻟﺎﺑﺮﻏ ي ﺪﻟﻮﺗ زا ﻞﺒﻗ ﺺﻴﺨﺸﺗ و ﺑ
ﻴ ﻤﺳﻻﺎﺗﺎﺘﺑ ﻪﺑ ﻼﺘﺒﻣ نارﺎﻤ ﻲ
ﺎﺑرذآ رد ﻳ ا ،نﺎﺠ ﻳ و ناﺮ ﺎﺳ ﻳ ﺮ
ﺎﻫرﻮﺸﻛ ي ﺎﺴﻤﻫ ﻳ ﻔﻣ ﻪ ﻴ ﺪﺷﺎﺑ ﺪ .
يﺎﻫ هژاو ﻠﻛ
ﻴ ﺪ ي ﺶﻬﺟ :
،ردﺎﻧ يﺎﻫ ﺑﻮﻠﮔ ﺎﺘﺑ
ﻴ ﻦ
، بﺮﻏ لﺎﻤﺷ ا
ﻳ ناﺮ
ﻪﻣﺪﻘﻣ ﻲﻤﺳﻻﺎﺗﺎﺘﺑ ﺖﺳا ﻲﻣوزﻮﺗا بﻮﻠﻐﻣ تﻻﻼﺘﺧا ﻦﻳﺮﺗ ﻊﻳﺎﺷ زا
زا ﺶﻴﺑ ﻂﺳﻮﺗ ﻪﻛ 200
دﻮﺷ ﻲﻣ دﺎﺠﻳا ﻦﻴﺑﻮﻠﮔ ﺎﺘﺑ نژ رد ﺶﻬﺟ عﻮﻧ .
ﺎﻳ نﺪﺷ ﻪﻓﺎﺿا ، يا ﻪﻄﻘﻧ يﺎﻫ ﺶﻬﺟ عﻮﻧ زا ﺎﻫ ﺶﻬﺟ ﻦﻳا ﺮﺜﻛا ﺪﻨﺷﺎﺑ ﻲﻣ ﻚﭼﻮﻛ يﺎﻫ ﻲﮔﺪﺷ فﺬﺣ .
ﻲﺧﺮﺑ ﺎﻫ ﺶﻬﺟ ﺚﻋﺎﺑ
1* - لﻮﺌﺴﻣ هﺪﻨﺴﻳﻮﻧ :
ﺳا
،يژﻮﻟﻮﻴﺑﻮﻳدار دﺎﺘ مﻮﻠﻋ هﺪﻜﺸﻧاد ﻲﺳﺎﻨﺷ ﺖﺴﻳز هوﺮﮔ
ﺒﻃ ﻲﻌﻴ ﺰﻳﺮﺒﺗ هﺎﮕﺸﻧاد ﻦﻔﻠﺗ ،
04113362280 E-Mail: [email protected]
2 - يژﻮﻟﻮﻜﻧا يژﻮﻟﻮﺗﺎﻤﻫ رﺎﻳدﺎﺘﺳا نﺎﻛدﻮﻛ نﺎﺘﺳرﺎﻤﻴﺑ
، ﻲﻜﺷﺰﭘ مﻮﻠﻋ هﺎﮕﺸﻧاد ﺰﻳﺮﺒﺗ
3 -
، ﻲﻟﻮﻜﻟﻮﻣ و ﻲﻟﻮﻠﺳ ﺪﺷرا سﺎﻨﺷرﺎﻛ مﻮﻠﻋ هﺪﻜﺸﻧاد ﻲﺳﺎﻨﺷ ﺖﺴﻳز هوﺮﮔ
ﺎﮕﺸﻧاد نﺎﺠﻳﺎﺑرذآ ﻢﻠﻌﻣ ﺖﻴﺑﺮﺗ ه
4 -
،ﻚﻴﺘﻧژ ﺪﺷرا سﺎﻨﺷرﺎﻛ ﺒﻃ مﻮﻠﻋ هﺪﻜﺸﻧاد ﻲﺳﺎﻨﺷ ﺖﺴﻳز هوﺮﮔ
ﻲﻌﻴ - ﺰﻳﺮﺒﺗ هﺎﮕﺸﻧاد
5 -
،ﻲﻜﺷﺰﭘ ﻚﻳﺰﻴﻓ ﺪﺷرا سﺎﻨﺷرﺎﻛ ﺒﻃ مﻮﻠﻋ هﺪﻜﺸﻧاد ﻲﺳﺎﻨﺷ ﺖﺴﻳز هوﺮﮔ
ﻲﻌﻴ
ﺰﻳﺮﺒﺗ هﺎﮕﺸﻧاد
ﺖﻓﺎﻳرد ﺦﻳرﺎﺗ :
20 / 4 / 1385 شﺮﻳﺬﭘ ﺦﻳرﺎﺗ
: 10 / 12 / 1385
ﺶﻫﺎﻛ ﻦﻴﺑﻮﻠﮔﺎﺘﺑ نژ نﺎﻴﺑ ناﺰﻴﻣ هﺪﺷ
+ و ﻲﻤﺳﻻﺎﺗ β دﺎﺠﻳا ﺪﻨﻨﻛ ﻲﻣ
و ﺰﻴﻧ ﺎﻫ ﺶﻬﺟ ﻲﺧﺮﺑ ﺐﺒﺳ
ﻲﻣ ﻮﺷ ﻧ ﺎﺘﺑ هﺮﻴﺠﻧز ﺪ رﺎﻛ ﻦﻴﺑﻮﻠﮔ
آ يﺪﻣ
دﻮﺸﻧ ﺪﻴﻟﻮﺗ و
دﺎﺠﻳا ﻲﻤﺳﻻﺎﺗ βº
ﻲﻣ
)ﺪﻨﻨﻛ
1
.(
آ ﻊﻳزﻮﺗ يﺎﻫ ﻞﻟ
ﻒﻴﻃ ﻲﺘﻴﻌﻤﺟ و مﻮﻗ ﺮﻫ ﻪﻜﻠﺑ ،ﺖﺴﻴﻧ ﻲﻓدﺎﺼﺗ ﺎﻴﻧد رد ﻲﻤﺳﻻﺎﺗﺎﺘﺑ راد ار دﻮﺧ صﺎﺧ يﺎﻫ ﺶﻬﺟ ﻧ
ﺪ . ا ﻲﻤﻛ داﺪﻌﺗ ،ﺎﻫ ﺶﻬﺟ ز
واﺮﻓ ﻴﺑ ﻲﻧا ﺪﻧراد يﺮﺘﺸ زا ﺶﻴﺑ و
80 % ﻞﻣﺎﺷ ار ﺎﻫ ﺶﻬﺟ و هﺪﺷ
ﺪﻧﻮﺷ ﻲﻣ هﺪﻴﻣﺎﻧ ﻪﻘﻄﻨﻣ نآ ﻊﻳﺎﺷ يﺎﻫ ﺶﻬﺟ .
داﺪﻌﺗ ﻞﺑﺎﻘﻣ رد
و ﺪﻧراد يﺮﺘﻤﻛ ﻲﻧاواﺮﻓ ﻪﻛ ﺪﻧراد دﻮﺟو ﺰﻴﻧ ﺎﻫ ﺶﻬﺟ زا يدﺎﻳز ﻪﻘﻄﻨﻣ نآ ردﺎﻧ يﺎﻫ ﺶﻬﺟ هﺪﻧاﻮﺧ
ﺪﻧﻮﺷ ﻲﻣ
) 2
.(
ﻪﻫد ﻚﻳ زا ﺶﻴﺑ
ﺘﺒﻣ داﺮﻓا ﻦﻴﺑﻮﻠﮔﺎﺘﺑ نژ يﺎﻫ ﺶﻬﺟ ،ناﺮﻳا رد ﻪﻛ ﺖﺳا ﻪﺑ ﻼ
ﺳرﺮﺑ ﺎﻫ ﺶﻬﺟ ﻲ ى لﺎﻤﺷ رد ﻦﻴﺑﻮﻠﮔﺎﺘﺑ نژ ردﺎﻧ رﻮﺸﻛ بﺮﻏ
80
دﻮﺷ ﻲﻣ ﻲﺳرﺮﺑ ﻲﻤﺳﻻﺎﺗﺎﺘﺑ د نﺎﺸﻧ ﺞﻳﺎﺘﻧ و
زا ﻲﻌﻴﺳو ﻒﻴﻃ هﺪﻨﻫ
ﺷﺎﺑ ﻲﻣ ﺎﻫ ﺶﻬﺟ ﺎﻫ ﺶﻬﺟ ،ﺪ
ي ﻲﻔﻠﺘﺨﻣ ماﻮﻗا ﻦﻴﺑ رد ﻦﻴﺑﻮﻠﮔﺎﺘﺑ نژ
ا ﺪﻨﻨﻛ ﻲﻣ ﻲﮔﺪﻧز ناﺮﻳا رد ﻪﻛ توﺎﻔﺘﻣ ﻲﻧاواﺮﻓ و عﻮﻧ ﺮﻈﻧ ز
)ﺖﺳا
3،4،5
.(
ماﻮﻗا زا ﻚﻳ ﺮﻫ رد ﻪﻛ ﺖﺳا مزﻻ ﻦﻳاﺮﺑﺎﻨﺑ
، ﻲﺳرﺮﺑ
ﺎﻫ ﺶﻬﺟ رﻮﻃ ﻪﺑ
د ﺎﺑ و اﺰﺠﻣ دﺮﻴﮔ مﺎﺠﻧا ﺮﺘﺸﻴﺑ ﺰﻛﺮﻤﺗ و ﺖﻗ
ﻪﻘﻄﻨﻣ.
بﺮﻏ لﺎﻤﺷ رﻮﺸﻛ
زا ﻲﺨﻳرﺎﺗ ﺮﻈﻧ اد يدﺎﻳز ﺖﻣﺪﻗ
ﻪﺘﺷ و ﺑ ﻪ راﺮﻗ ﺮﻃﺎﺧ
ﻢﺸﻳﺮﺑا ي هدﺎﺟ ﺮﻴﺴﻣ رد ﻦﺘﻓﺮﮔ ﻞﺤﻣ
و ﻲﻳﺎﻴﺳآ يﺎﻫ نﺪﻤﺗ ﻲﻗﻼﺗ
ﺖﺳا هدﻮﺑ ﻲﻳﺎﭘورا .
و ﻞﻳﻻد ﻦﻴﻤﻫ ﻪﺑ ﻦﻴﻨﭽﻤﻫ
يﺎﻫ ﻲﺸﻛﺮﻜﺸﻟ يدﺎﻳز
ﻪﻛ ﺖﺳا هﺪﺷ ﻪﻘﻄﻨﻣ ﻦﻳا ﻪﺑ و ناﺮﻳا ﻪﺑ ﺦﻳرﺎﺗ لﻮﻃ رد
، رﺎﻈﺘﻧا ﻒﻴﻃ
رد ﺎﻫ ﺶﻬﺟ زا ﻲﻌﻴﺳو دﻮﺑ ﺪﻫاﻮﺧ ﻲﻌﻴﺒﻃ ﻪﻘﻄﻨﻣ ﻦﻳا
. رد ﻪﻘﻄﻨﻣ ي
يﺎﻫ ﺶﻬﺟ شراﺰﮔ زا ﺲﭘ رﻮﺸﻛ ﻖﻃﺎﻨﻣ ﺮﻳﺎﺳ ﺪﻨﻧﺎﻣ ﺰﻴﻧ نﺎﺠﻳﺎﺑرذآ ﻲﻤﺳﻻﺎﺗﺎﺘﺑ ﻊﻳﺎﺷ ﺎﺑ
شور
ARMS-PCR )
6
،(
يﺎﻫ ﺶﻬﺟ ﻲﺳرﺮﺑ
و ردﺎﻧ و ﺪﻟﻮﺗ زا ﻞﺒﻗ ﺺﻴﺨﺸﺗ ياﺮﺑ ﻪﺘﺧﺎﻨﺷﺎﻧ يﺮﻴﮕﺸﻴﭘ
ا ز ﺪﻟﻮﺗ
ﻼﺘﺒﻣ ناﺪﻧزﺮﻓ
، ﺿ رﺎﻴﺴﺑ يروﺮ ﺪﻴﺳر ﻲﻣ ﺮﻈﻧ ﻪﺑ .
ﺶﻬﺟ عﻮﻧ ﻦﺘﺴﻧاد
ﻲﺘﺣ هداﻮﻧﺎﺧ ﺮﻫ ﺎﺑ
ﻪﻣﺎﻧﺮﺑ رد دﻮﺷ ﻲﻣ ﺐﺟﻮﻣ ،ﻢﻛ ﺪﺻرد
ﻢﻴﻨﻛ ﻞﻤﻋ ﻖﻓﻮﻣ ﺰﻴﻧ ردﺎﻧ يﺎﻫ ﺶﻬﺟ درﻮﻣ رد ﺪﻟﻮﺗ زا يﺮﻴﮕﺸﻴﭘ .
ﻲﺳرﺮﺑ شور
ﺶﻫوﮋﭘ ﻦﻳا هﺪﻜﺸﻧاد يژﻮﻟﻮﻴﺑﻮﻳدار هﺎﮕﺸﻳﺎﻣزآ رد ﻪﻛ
، ﺖﺳا هﺪﺷ مﺎﺠﻧا ﺰﻳﺮﺒﺗ هﺎﮕﺸﻧاد ﻲﻌﻴﺒﻃ مﻮﻠﻋ زا
20 رﺎﻤﻴﺑ ﻼﺘﺒﻣ ﻪﺑ
نﺎﺑز يرذآ ﺖﻴﻌﻤﺟ ﻲﻤﺳﻻﺎﺗﺎﺘﺑ بﺮﻏ لﺎﻤﺷ
ﺎﻬﻧآ ﺶﻬﺟ ﻪﻛ رﻮﺸﻛ
ًﻼﺒﻗ لﺎﻤﺷ ﻊﻳﺎﺷ يﺎﻫ ﺶﻬﺟ ﻲﺳرﺮﺑ رد بﺮﻏ
رﻮﺸﻛ دﻮﺑ هﺪﺸﻧ ﻲﻳﺎﺳﺎﻨﺷ
) 6
و ﻪﻴﻬﺗ ﻲﻄﻴﺤﻣ نﻮﺧ ﻪﻧﻮﻤﻧ ( DNA
زﺎﻨﻴﺌﺗوﺮﭘ شور ﻪﺑ ﺎﻫ ﻪﻧﻮﻤﻧ ﺪﻳدﺮﮔ جاﺮﺨﺘﺳا K
. يﺎﻫ ﺶﻬﺟ ﺲﭙﺳ
, Codon22(-AAGTTGG) Codon36/37(-T)
Codon16(-C) ،
-88(C-A), Codon41/42(-TCTT) ,Codon6(-A), ، رد ﻪﻛ
ﺪﻧا هﺪﺷ شراﺰﮔ ناﺮﻳا رد يدوﺪﺤﻣ دراﻮﻣ
) 7
شور ﺎﺑ ،(
ARMS-PCR
ﺖﻓﺮﮔ راﺮﻗ ﻲﺳرﺮﺑ درﻮﻣ .
ﺲﭙﺳ ﻪﻛ يدراﻮﻣ
لﺎﺳرا ﻲﻟاﻮﺗ ﻦﻴﻴﻌﺗ ﺖﻬﺟ ﺪﻧداﺪﻧ نﺎﺸﻧ ار قﻮﻓ يﺎﻫ ﺶﻬﺟ ﺪﻳدﺮﮔ
.
جاﺮﺨﺘﺳا DNA
ﺌﺗوﺮﭘ شور ﻴ
Kزﺎﻨ SDS -
ml : 5 ار نﻮﺧ ﺴﻘﺗ ﺖﻤﺴﻗ ود ﻪﺑ ﻴ
ﻢ
و هدﺮﻛ ﺎﺑ 3000 رود رد ﻗد ﻴ تﺪﻣ ﻪﺑ ﻪﻘ 10
ﻗد ﻴ ﺮﺘﻧﺎﺳ ﻪﻘ ﻳ ژﻮﻔ و هدﺮﻛ
ﺎﻤﺳﻼﭘ ي ار نﻮﺧ ﻣ رود
ﻴ ﺮ ﻳ ﺰ ﻳ ﻢ و ور ﺲﭙﺳ ي
ﺎﻬﻟﻮﻠﺳ ي ﺸﻧ ﻪﺗ ﻴ ﻦ
mlهﺪﺷ 5 دﺮﺳ بآ ﻣ ﻪﻓﺎﺿا
ﻲ ﻧ ﺎﻤ ﻳ ﻢ ﺎﺑ و 3000 رود رد ﻗد ﻴ ﻪﻘ ﻪﺑ
تﺪﻣ 25 ﻗد ﻴ ﺮﺘﻧﺎﺳ ﻪﻘ ﻳ ﻣ ژﻮﻔ ﻲ ﻨﻛ ﻴ ﻢ ور لﻮﻠﺤﻣ و ﻲﻳ
ر رود ار ﻳ و ﻪﺘﺨ ﻠﺤﻣ نﺪﺷ فﺎﻔﺷ ﺎﺗ ار قﻮﻓ ﻞﻤﻋ
ور لﻮ ﻲﻳ راﺮﻜﺗ ﻣ ﻲ ﻨﻛ ﻴ ﻢ . ﺮﺑ
ور ي ﺎﻬﻟﻮﻠﺳ ي ﺸﻧ ﻪﺗ ﻴ هﺪﺷ ﻦ 4ml
ﻟ ﻴ ﺑﻮﺧ ﻪﺑ و هدوﺰﻓا ﺮﻓﺎﺑ ﺰ ﻲ
نﺎﻜﺗ
ﻣ ﻲ ﻫد ﻴ ﻢ . ور ﺮﺑ ﺲﭙﺳ ي
لﻮﻠﺤﻣ ﺖﺳد ﻪﺑ هﺪﻣآ 250µl
) SDS
10 (%
mlو 7 / 1
µg/ml ) 200 ( ﺌﺗوﺮﭘ ﻴ ﺎﻨ
Kز تﺪﻣ ﻪﺑ و هدﺮﻛ ﻪﻓﺎﺿا 3
ﻟا ﻲ
24 رد ﺖﻋﺎﺳ ﺎﻣد
ي 47 ﻪﺑﻮﻜﻧا ﻪﺟرد ﻣ
ﻲ ﻨﻛ ﻴ ﻢ .
ml ﺲﭙﺳ 7 / 1
ﻚﻤﻧ مﺎﻌﻃ ا ر هﺪﺷ عﺎﺒﺷ ﻳ
و ﻪﺘﺨ ﺎﺑ 3000 ﻗد رد رود ﻴ
ﻪﻘ تﺪﻣ ﻪﺑ ﻧ ﻴ ﻢ
ﺮﺘﻧﺎﺳ ﺖﻋﺎﺳ ﻳ
ﻣ ژﻮﻔ ﻲ ﻨﻛ ﻴ ﻢ . ور لﻮﻠﺤﻣ ﻲﻳ ﻪﺑ ار ﻪﻟﻮﻟ ﻤﺗ ﻴ
،هدﺮﻛ ﻞﻘﺘﻨﻣﺰ
4ml
اﻳ ﻣ ﻪﻓﺎﺿا لﻮﻧﺎﭘوﺮﭘوﺰ ﻲ
ﻨﻛ ﻴ ﺎﺗ ﻢ دﻮﺷ ﺪﻘﻌﻨﻣ DNA
DNA. ي
هﺪﺷ ﺪﻘﻌﻨﻣ ﺎﺑ ار
Hook outing شور زا
و جاﺮﺨﺘﺳا لﻮﻠﺤﻣ ﻞﺧاد
ﺎﺑ لﻮﻧﺎﺗا 70 % و ﻪﺘﺴﺷ نآ ﻪﺑ ﺮﻄﻘﻣ بآ ﻣ
ﻲ اﺰﻓا ﻴﻳ
)ﻢ
8
.(
مﺎﺠﻧا :PCR
5µl
هﺪﺷ جاﺮﺨﺘﺳاDNA
ﻪﻛ ﺲﻜﻴﻣﺮﺘﺴﻣ ﻞﺧاد ﻪﺑ ار
µl يوﺎﺣ 5 /
Buffer2
10x-PCR
) نژﺎﻨﻴﺳ ﺖﻛﺮﺷ زا هﺪﺷ ﻪﻴﻬﺗ -
ناﺮﻬﺗ (
µl ، 75 / 0
50 mM)
MgCl2(
µl ، 5 /
(10mM)0
dNTPs
،
5U
/
Taq 2 زاﺮﻤﻴﻠﭘ ) نژ ﺎﻨﻴﺳ ﺖﻛﺮﺷ ﺖﺧﺎﺳ -
ناﺮﻬﺗ
µM ,( 25 / 0
ﺮﻤﻳاﺮﭘ
Common µM ،
25 / 0 ﺎﻣﺮﻧﺮﻤﻳاﺮﭘ ﻳ ل
ﺎ ﻪﺘﻓﺎﻳ ﺶﻬﺟ ﻪﻓﺎﺿا
25µM ,
/ 0 ﺮﻤﻳاﺮﭘ
Internal ControlA(Cont.A) µM و
25 / 0
ﺮﻤﻳاﺮﭘ
Internal ControlB(Cont. B)
هدوﺰﻓا هدﺎﻔﺘﺳا ﺎﺑ ﺲﭙﺳ و
بآ زا ﻪﺑ ار لﻮﻠﺤﻣ ﻲﻳﺎﻬﻧ ﻢﺠﺣ هﺰﻴﻧﻮﻳد 25µl
ﻲﻣ ﻧﺎﺳر ﻢﻴ و ﺖﻬﺟ
ﺖﺳد ﻪﺑ ژﻮﻔﻳﺮﺘﻧﺎﺳ هﺎﺗﻮﻛ تﺪﻣ ﻪﺑ ﻦﮕﻤﻫ لﻮﻠﺤﻣ ندروآ
ﻲﻣ ﻢﻴﻨﻛ . ﺎﺑ ﺲﭙﺳ ﺳا
ﺮﻠﻜﻳﺎﺳ لﺎﻣﺮﺗزا هدﺎﻔﺘ )
ﺖﻛﺮﺷ ﺖﺧﺎﺳ
Techne Geneus لﺪﻣ
،(
،ﻞﻳذ ﻪﻣﺎﻧﺮﺑ نﻮﻴﺳارﻮﺗﺎﻧد
C
94˚
ﻚﻳ
ﻪﻘﻴﻗد
، لﺎﺼﺗا
C
65˚
ﻪﻘﻴﻗد ﻚﻳ و
ﻪﻌﺳﻮﺗ
Extension)
C ( 72˚
ﻪﺑ
تﺪﻣ 5 / 1 ﻪﻘﻴﻗد ﻢﻴﻫد ﻲﻣراﺮﻗ هدﺎﻔﺘﺳا درﻮﻣ ار .
ﺎﻫ ﻞﻜﻴﺳ داﺪﻌﺗ 25
و هدﻮﺑ ﻞﻜﻴﺳ لوا ﻞﻜﻴﺳ رد
ﻪﻠﺣﺮﻣ نﻮﻴﺳارﻮﺗﺎﻧد تﺪﻣ ﻪﺑ
3 ﻘﻴﻗد ﻪ
و ﻪﻠﺣﺮﻣ ﺮﺧآ ﻞﻜﻴﺳ ﻪﻌﺳﻮﺗ 5
ﻢﻴﻨﻛ ﻲﻣ ﻞﻤﻋ ﻪﻘﻴﻗد
) 9،10
. (
ARMS-PCR
شراﺰﮔ ردﺎﻧ و ﻊﻳﺎﺷ يﺎﻫ ﺶﻬﺟ ياﺮﺑ شور ﻦﻳا رد :
ﺮﻤﻳاﺮﭘ عﻮﻧ ود ، هﺪﺷ
، و لﺎﻣﺮﻧ ﺖﺳا هﺪﺷ ﻲﺣاﺮﻃ ﻪﺘﻓﺎﻳ ﺶﻬﺟ )
لوﺪﺟ 1 (
و ي ﻪﻧﻮﻤﻧ ﺮﻫ ياﺮﺑ ﺮﻤﻳاﺮﭘ ود ﻦﻳا ،DNA
رﻮﻃ ﻪﺑ و ﻪﻧﺎﮔاﺪﺟ ﻚﻳ ﺎﺑ
ﺮﻤﻳاﺮﭘ
Common PCR،
ﺷ ﻲﻣ مﺎﺠﻧا دﻮ
. لﺎﻣﺮﻧ ﺮﻤﻳاﺮﭘ ﻪﺑ ﻂﻘﻓ ﻪﻧﻮﻤﻧ ﺮﮔا
رد ﺶﻳﺎﻣزآ درﻮﻣ دﺮﻓ ، داد باﻮﺟ و ﺖﺳا لﺎﻣﺮﻧ ﻪﻄﻘﻧ ﻦﻳا
ﺮﮔا ﻪﺑ ﻂﻘﻓ
دﻮﺷ ﻲﻣ ﺺﺨﺸﻣ ﺶﻬﺟ عﻮﻧ داد ﺦﺳﺎﭘ ﺖﻧﺎﺗﻮﻣ ﺮﻤﻳاﺮﭘ .
ﺶﻨﻛاو ﺮﮔا ﺮﻫ ﺎﺑ PCR
تﻮﮕﻳزوﺮﺘﻫ دﺮﻓ دﺮﻛ رﺎﻛ ﺮﻤﻳاﺮﭘ ود
ﺪﺷﺎﺑ ﻲﻣ
) 9،10
. (
ﻲﻀﻴﻓرﻮﭙﻨﻴﺴﺣ ﻲﻠﻋﺪﻤﺤﻣ ﺮﺘﻛد ،
ﻲﻠﻌﺳﺎﺒﻋ ﺮﺘﻛد ﻲﻀﻴﻓرﻮﭙﻨﻴﺴﺣ
، يدﻻﻮﭘ ﺮﺻﺎﻧ
، يﺪﻬﻣ ﻘﺣ ﻲ
، مﺎﻓرذآ ﻦﻳوﺮﭘ
81
لوﺪﺟ ) 1 :(
عﻮﻧ و درﻮﻣ يﺎﻫﺮﻤﻳاﺮﭘ ﻲﻟاﻮﺗ د هدﺎﻔﺘﺳا
ر ردﺎﻧ يﺎﻫ ﺶﻬﺟ ﺺﻴﺨﺸﺗ ﻲﻤﺳﻻﺎﺗﺎﺘﺑ
رد ناﺮﻳا بﺮﻏ لﺎﻤﺷ ﻪﻘﻄﻨﻣ .
5'→ 3'ﺮﻤﻳاﺮﭘ ﻲﻟاﻮﺗ ﺶﻬﺟ
GTGGGGCAAGGTGAACGTGGATGAAGTGAG GTGGGGCAAGGTGAACGTGGATGTGGTTGG ACCTCACCCTGTGGAGCCAC
Codon 22 (Reverse) Normal (Reverse) Common C (Forward) TCACTTAGACCTCACCCTGTGGAGCCTCAT
TCACTTAGACCTCACCCTGTGGAGCCTCAC GGGCCTATGATAGGGTAAT
-88M (Forward) Normal (Forward) Common E (Reverse) GAGTGGACAGATCCCCAAAGGACTCAACCT
GAGTGGACAGATCCCCAAAGGACTCAAAGA ACCTCACCCTGTGGAGCCAC
Codon 41-42 (Reverse) Normal (Reverse) Common C (Forward) TCACCACCAACTTCATCCACGTTCACGTTC
TCACCACCAACTTCATCCACGTTCACGTTG ACCTCACCCTGTGGAGCCAC
Codon 16 (Reverse) Normal (Reverse) Common C (Forward) GGTAAGGACTCAAAGAACCTATGGGTCCAG
GGTAAGGACTCAAAGAACCTATGGGTCCAA GGGCCTATGATAGGGTAAT
Codon 36-37 (Forward) Normal (Forward) Common E (Reverse) CCCACAGGGCAGTAACGGCAGACTTCTGCC
CCCACAGGGCAGTAACGGCAGACTTCTGCT ACCTCACCCTGTGGAGCCAC
Codon 6 (Reverse) Normal (Reverse) Common C (Forward)
ﻌﺗ ﻴﻴ ﻟاﻮﺗ ﻦ
: ﻲ ﺎﻫ ﻪﻧﻮﻤﻧ ﻲﻳ ﺎﻬﻧآ ﺶﻬﺟ ﻪﻛ ﻪﻠﻴﺳو ﻪﺑ
ﺳ ﻴ
ARMS-PCR ﻢﺘﺴ
اﺮﭘﺎﺑ ﺪﻧﺪﺸﻧ ﺺﺨﺸﻣ ﻳ
ﺎﻫ ﺮﻤ ي ﺣاﺮﻃ ﻲ هﺪﺷ ) ﻬﺗ ﻴ هﺪﺷ ﻪ ﺖﻛﺮﺷ زا
ناﺮﻬﺗ هوﮋﭘاﺰﻓ (
PCR ، و ﺪﺷ لﻮﺼﺤﻣ ﺖﻛﺮﺷ ﻂﺳﻮﺗ PCR
اﺰﻓ اﺮﺑ ناﺮﻬﺗ هوﮋﭘ ي
ﻌﺗ ﻴﻴ ﻟاﻮﺗ ﻦ ﻲ دﺮﮔ لﺎﺳرا ﻳ
ﺪ . ﺎﺘﻧ ﻳ ﻌﺗ ﺞ ﻴﻴ ﻟاﻮﺗ ﻦ ﻲ
اﺮﺑ ي ﺗﻮﺌﻠﻛﻮﻧ ﻴ ﺌﺗوﺮﭘ ﻪﺑ ﻪﻤﺟﺮﺗ و ﺪ ﻴ
ﺎﺑ ﻦ ﺎﻘﻣ NCBI
ﻳ ﻪﺴ
BLAST) ( ﺷ .ﺪ
ﺎﺘﻧ ﻳ ﺞ زا 40 ﻪﺑ طﻮﺑﺮﻣ موزﻮﻣوﺮﻛ 20
داﺪﻌﺗ ،ﺮﻔﻧ 4
ﺎﺑ موزﻮﻣوﺮﻛ
ﺮﻤﻳاﺮﭘ
Codon36/37(-T)
، 4 ﺮﻤﻳاﺮﭘ ﺎﺑ موزﻮﻣوﺮﻛ
Codon16(-C)
ﺪﻧداد ﺖﺒﺜﻣ باﻮﺟ .
يﺎﻫﺮﻤﻳاﺮﭘ ﺎﺑ
Codon22(-AAGTTGG)
Codon6(-A), -88(C-A), Codon41/42(-TCTT) ,
رد ﻲﺸﻬﺟ
ﺪﺸﻧ ﻲﻳﺎﺳﺎﻨﺷ ﻲﺳرﺮﺑ درﻮﻣ داﺮﻓا .
ﺪﻌﺑ ي ﻪﻠﺣﺮﻣ رد 32
موزﻮﻣوﺮﻛ
ﻪﺑ طﻮﺑﺮﻣ هﺪﻧﺎﻤﻴﻗﺎﺑ 16
شور ﺎﺑ ﻪﻛ ﺮﻔﻧ ﺎﻬﻧآ رد ﻲﺸﻬﺟ ، ARMS
ﻳﺎﺳﺎﻨﺷ ﺪﺷ هدﺎﺘﺳﺮﻓ ﻲﻟاﻮﺗ ﻦﻴﻴﻌﺗ ياﺮﺑ ﺪﺸﻧ ﻲ ﺪﻧ
. زا ﻞﺻﺎﺣ ﺞﻳﺎﺘﻧ
نﺎﺸﻧ ﻲﻟاﻮﺗ ﻦﻴﻴﻌﺗ ﻪﻛ داد
ﺶﻬﺟ
Codon 15(TGG-TGA)
ﺎﺑ 8
ﺶﻬﺟ ،موزﻮﻣوﺮﻛ
IVSII-848(C-A) ﺎﺑ
4 ﺶﻬﺟ ،موزﻮﻣوﺮﻛ
–
28(A-C)
ﺎﺑ ود موزﻮﻣوﺮﻛ
،
Codon 25/26(+T) ﺶﻬﺟ ﺎﺑ
ود
موزﻮﻣوﺮﻛ ﺶﻬﺟ و
IVSII-745(C-G)
موزﻮﻣوﺮﻛ ود ﺎﺑ ﺰﺟ
ء
ﺶﻬﺟ ﺪﻨﺷﺎﺑ ﻲﻣ ﻪﻘﻄﻨﻣ رد ﻦﻴﺑﻮﻠﮔﺎﺘﺑ نژ يﺎﻫ .
ﻲﺳرﺮﺑ ﻦﻳا رد ﻦﻳاﺮﺑﺎﻨﺑ
ﻲﻳﺎﺳﺎﻨﺷ ﺮﮕﻳد ﺶﻬﺟ ﺖﻔﻫ و
هﺪﺷ ﻪﺘﺧﺎﻨﺷ يﺎﻫ ﺶﻬﺟ ﻊﻤﺟ ﻪﺑ ي
و ﻪﻘﻄﻨﻣ ﺪﻳدﺮﮔ ﻪﻓﺎﺿا رﻮﺸﻛ .
رد 14 ﻪﻴﺣﺎﻧ رد ﻲﺸﻬﺟ موزﻮﻣوﺮﻛ
رد ﺖﺳا ﻦﻜﻤﻣ داﺮﻓا ﻦﻳا ﺶﻬﺟ ﻪﻛ ﺪﻳدﺮﮕﻧ هﺪﻫﺎﺸﻣ هﺪﺷ ﻲﻟاﻮﺗ ﻦﻴﻴﻌﺗ ﺪﺷﺎﺑ ﻦﻴﺑﻮﻠﮔﺎﺘﺑ نژ زا جرﺎﺧ ﻲﺣاﻮﻧ ﺪﻧدﺮﮔ ﻲﻣ ﻲﻤﺳﻻﺎﺗﺎﺘﺑ ﺐﺟﻮﻣ ﻪﻛ
.
ﻨﭽﻤﻫ ﻴ ﺎﺟرﺎﻬﭼ ﻦ ﻳ
SNP هﺎﮕ
5’UTR+20(C-T) :
Codon ،
2(CAC-CAT)
،
G) (C-
-16 IVSII
و
T-C)
666 (
IVSII- رد
ﺑﻮﻠﮔﺎﺘﺑ نژ ﻴ
ﺑ ﻦ ﻴ ﺺﺨﺸﻣ ﻪﻌﻟﺎﻄﻣ درﻮﻣ نارﺎﻤ دﺮﮔ
ﻳ ﺪ . ﻞﻜﺷ ) 1 (
Codon 15(TGG-TGA) ﺶﻬﺟ ﻌﺗ ﺎﺑ ﻪﻛار
ﻴﻴ ﻟاﻮﺗ ﻦ ﻲ ﺺﺨﺸﻣ
ﻣ نﺎﺸﻧ ار ﺖﺳا هﺪﺷ ﻲ
ﺪﻫد . ﻳ ﺮﻫ ﺪﺻرد ﻚ
ردﺎﻧ يﺎﻫ ﺶﻬﺟ زا
ﻪﺘﺧﺎﻨﺷ هﺪﺷ عﻮﻤﺠﻣ زا ﻪﻛ ﻲﺳرﺮﺑ ﻦﻳا رد 200
ﻪﻛ ﻲﻣوزﻮﻣوﺮﻛ
درﻮﻣ رد ﺪﻧا ﻪﺘﻓﺮﮔ راﺮﻗ ردﺎﻧ ﻢﻫ و ﻊﻳﺎﺷ يﺎﻫ ﺶﻬﺟ ﻢﻫ ﻲﺳرﺮﺑ
لوﺪﺟ ) 2 ( ﺖﺳا هﺪﺷ هدروآ .
ﺳرﺮﺑ ﺎﻫ ﺶﻬﺟ ﻲ ى لﺎﻤﺷ رد ﻦﻴﺑﻮﻠﮔﺎﺘﺑ نژ ردﺎﻧ رﻮﺸﻛ بﺮﻏ
82
ﻞﻜﺷ ) 1 ( : ﻟاﻮﺗ ﻲ ا ﻪﻌﻄﻗ ي ﺑﻮﻠﮔﺎﺘﺑ نژ زا ﻴ
ﺶﻬﺟ ﺎﺑ ﻦ Codon
15(TGG-TGA)
لوﺪﺟ ) 2 :(
ﻲﻧاواﺮﻓ ردﺎﻧ يﺎﻫ ﺶﻬﺟ ﻪﻘﻄﻨﻣ ﻲﻤﺳﻻﺎﺗ ﺎﺘﺑ نﺎﻳﻼﺘﺒﻣ
ناﺮﻳا بﺮﻏ لﺎﻤﺷ
ﺶﻬﺟ موزﻮﻣوﺮﻛداﺪﻌﺗ
ﺪﺻرد
Codon15(TGG-TGA)Codon16(-C) Codon 36/37(-T)
IVSII-848(C-A) IVSII-745(C-G)
-28(A-C) Codon25/26(+T) 8
4 4 4 2 2 2 4
2 2 2 1 1 1
ﺚﺤﺑ ﻤﺳﻻﺎﺗﺎﺘﺑ ﻲ ﻊﻳﺎﺷ ﺮﺗ ﻳ ﺑ ﻦ ﻴ رﺎﻤ ي ﺘﻧژ ﻴ ﻜ ﻲ ا رد ﻳ ناﺮ ﺷﺎﺑ ﻲﻣ ﺪ
رﻮﺸﻛ بﺮﻏ لﺎﻤﺷ و لﺎﻤﺷ رد ﻪﻛ ﺰﻴﻧ
ﻧاواﺮﻓ شﺮﺘﺴﮔ ﻲ
دراد
) 3
. (
ﺎﻫ ﺶﻬﺟ ﺮﺜﻛا ي
ﺎﺷ ﻳ ﺎﺳﺎﻨﺷ رﻮﺸﻛ ﻊ ﻲﻳ
ﺖﺳا هﺪﺷ شراﺰﮔ و .
ﺎﻣا
ﺎﻫ ﺶﻬﺟ دﻮﺟو ي
و ردﺎﻧ ﺑ رد ﻪﺘﺧﺎﻨﺷﺎﻧ ﻴ
ﻤﺳﻻﺎﺗﺎﺘﺑ نارﺎﻤ ﻲ
تﻼﻜﺸﻣ
ز ﻳ دﺎ ي ر ﻪﻣﺎﻧﺮﺑ رد ار ﻳ
ﺰ ي ﭘ ﺖﻬﺟ ﻴ ﮕﺸ ﻴ ﺮ ي و ا لﺮﺘﻨﻛ ﻳ ﺑ ﻦ ﻴ رﺎﻤ ي
اﻳ ﻣ دﺎﺠ ﻲ ﻛ ﻨ ﺪ . ﻤﻫ ﻪﺑ ﻴ ﻘﺤﺗ ﺮﻃﺎﺧ ﻦ ﻴ
تﺎﻘ ﺳو ﻴ ﻌ ﻲ اﺮﺑ ي ﺎﺳﺎﻨﺷ ﻲﻳ ا ﻳ ﻦ
هﺪﺷ مﺎﺠﻧا ﺎﻫ ﺶﻬﺟ ﻳ
ﺖﺳا مﺎﺠﻧا لﺎﺣ رد ﺎ .
ﻤﻫد رد ﻴ ﺲﻧاﺮﻔﻨﻛ ﻦ
ﺑﻴ ﻠﻠﻤﻟا ﻦ ﻲ ﻤﺳﻻﺎﺗ ﻲ ﺑﻮﻠﮔﻮﻤﻫو ﻴ
ﺗﺎﭘﻮﻨ ﻲ ﺎﻫ ﺶﻬﺟ ي دﺪﻌﺘﻣ ردﺎﻧ ي
دﺮﮔ شراﺰﮔ رﻮﺸﻛ نﺎﻘﻘﺤﻣ ﻂﺳﻮﺗ ﻳ
ﺮﺗ ﺺﺧﺎﺷ رد ﻪﻛ ﺪ ﻳ
ﻦ
شراﺰﮔ ﻪﻳارا هﺪﺷ 21 ﺎﻤﺘﻣ ردﺎﻧ ﺶﻬﺟ ﻳ
ﻌﻤﺟ رد ﺰ ﻴ
ا ﺖ ﻳ د ناﺮ ﻳ هﺪ
ﻣ ﻲ
)دﻮﺷ
11
.(
رد اﻳ ﻟﺎﻄﻣ ﻦ ﺎﻫ ﺶﻬﺟ ﻪﻌ
Codon16(-C) ي
Codon15(TGG-،
،TGA) Codon 36/37(-T) Codon25/26(+T)،
-28(A-C) ،
،
IVSII-848(C-A)
IVSII-745(C-G) و ﺎﻫ شور ﻂﺳﻮﺗ
ي
ARMS-PCR
و ﻌﺗ ﻴﻴ ﻟاﻮﺗ ﻦ ﻲ و ﺺﺨﺸﻣ ﺎﻫ ﺶﻬﺟ ﻊﻤﺟ ﻪﺑ
ي
هﺪﺷ ﻪﺘﺧﺎﻨﺷ ي
دﺮﮔ ﻪﻓﺎﺿا رﻮﺸﻛو ﻪﻘﻄﻨﻣ ﻳ
ﺪ . ﻨﭽﻤﻫ ﻴ رﺎﻬﭼ ﻦ ﺎﺟ
ﻳ
SNP هﺎﮕ
5’UTR+20(C-T) :
Codon2(CAC-CAT) ،
،
G)
(C-
-16 IVSII
و
T-C)
666 (
IVSII- رد ﺑﻮﻠﮔﺎﺘﺑ نژ ﻴ
ﺑ ﻦ ﻴ نارﺎﻤ
دﺮﮔ ﺺﺨﺸﻣ ﻪﻌﻟﺎﻄﻣ درﻮﻣ ﻳ
ﺪ .
Codon15(TGG-TGA) ﺶﻬﺟ لﺎﻤﺷ ﻪﻘﻄﻨﻣ رد رﺎﺑ ﻦﻴﻟوا ﻪﻛ ،
لﺎﻐﺗﺮﭘ رد ﻊﻳﺎﺷ يﺎﻫ ﺶﻬﺟ زا ﻲﻜﻳ ،ﺖﺳا هﺪﺷ هﺪﻫﺎﺸﻣ نﻮﺒﺴﻴﻟ ﺪﺷﺎﺑ ﻲﻣ
) 12
نوﺪﻛ دﻮﺷ ﻲﻣ ﺐﺟﻮﻣ ﻪﻛ (
ﺪﻴﺳا ﻪﺑ طﻮﺑﺮﻣ ﻪﻛ TGG
ﻴﻣآ نوﺪﻛ ﻪﺑ ﺖﺳا نﺎﻓﻮﺘﭙﻳﺮﺗ ﻪﻨ ﻞﻳﺪﺒﺗ ﺖﺳا نﺎﻳﺎﭘ نوﺪﻛ ﻪﻛ TGA
و دﻮﺷ ﺪﻴﻟﻮﺗ ﺺﻗﺎﻧ ﻦﻴﺌﺗوﺮﭘ .
Codon15(TGG- ﺶﻬﺟ
ﺶﻬﺟ زا توﺎﻔﺘﻣTGA) Codon15(TGG-TAG)
رد ﻊﻳﺎﺷ
ﺪﺷﺎﺑ ﻲﻣ ﻲﻳﺎﻴﺳآ يﺎﻫرﻮﺸﻛ
) 13
.(
رد ﺶﻬﺟ ﻦﻳاﺮﺑﺎﻨﺑ
Codon15
رد
ﻪﻘﻄﻨﻣ بﺮﻏ لﺎﻤﺷ ﺪﺷﺎﺑ ﻲﻣ لﺎﻐﺗﺮﭘ رد ﻊﻳﺎﺷ ﺶﻬﺟ ﻪﺑﺎﺸﻣ رﻮﺸﻛ
.
Codon16(-C) ﺶﻬﺟ ﺶﻬﺟ ﻚﻳ
º
يﺪﻨﻫ β
- ﻲﻳﺎﻴﺳآ
ﺪﺷﺎﺑ ﻲﻣ
) 13
و ( Codon36/37(-T) ﺶﻬﺟ
رد رﺎﺑ ﻦﻴﻟوا ﺖﻴﻌﻤﺟ
هﺪﺷ اﺪﻴﭘ ﺎﻫدﺮﻛ
)ﺖﺳا
,14 13
.(
Codon 36/37(-T) ﺶﻬﺟ رد ﻪﻛ
ﻳ ﻌﻤﺟ ﻚ ﻴ ﺑﺎﺨﺘﻧاو دوﺪﺤﻣ ﺖ ﻲ
ﻣا ﻂﺳﻮﺗ رﻮﺸﻛ رد ﻴ
ﺮ ي نارﺎﻜﻤﻫو هداز
) 7
،ﺖﺳا هﺪﺷ شراﺰﮔ (
ﻳ ﻧ درﻮﻣ ﻚ ﻴ
ا رد ﺰ ﻳ ﺳرﺮﺑ ﻦ ﻲ ﻣ هﺪﻫﺎﺸﻣ ﻲ
رد دﻮﺷ ﻟﺎﺣ ﻴ ﻛ ﻪﻜ ﻴ ﻧﺎ ﻲ و
ا نارﺎﻜﻤﻫ ﻳ
ﺎﺑ ار ﺶﻬﺟ ﻦ 84
/ 33 ﺎﺷ ﺪﺻرد ﻳ
ﺮﺗ ﻊ ﻳ رد ﺶﻬﺟ ﻦ
ﻣ شراﺰﮔ نﺎﺘﺳﺮﻟ نﺎﺘﺳا ﻲ
ﺪﻨﻨﻛ
) 15
.(
ﺘﺨﺑ لﺎﺤﻣرﺎﻬﭼ نﺎﺘﺳا رد ﻴ
رﺎ ي
ﻧﻴ ا ﺰ ﻳ ﺎﺷ ناﻮﻨﻋ ﻪﺑ ﺶﻬﺟ ﻦ ﻳ
ﺮﺗ ﻊ ﻳ ﻦ ﺶﻬﺟ ﻣ شراﺰﮔ ﻲ
)دﻮﺷ
16
.(
ﺶﻬﺟ
IVSII-848(C-A ) ﻪﻛ
ﺮﻣآ رد ﻳ ﺮﺼﻣو ﺎﻜ ناﺮﻳا و شراﺰﮔ
ﺖﺳا هﺪﺷ
) 3،13
و (
ﺎﻣ ﻳا ﺰﻴﻧ ار ﺶﻬﺟ ﻦ ﻪﻧﻮﻤﻧ ود رد
، شراﺰﮔ
ﻲﻣ ﻪﻧﻮﻤﻧ ﻚﻳ رد ﻪﻛ ﻢﻴﻨﻛ رد ﻲﻟو ﺪﺸﻧ هﺪﻫﺎﺸﻣ ﻲﺻﺎﺧ SNP
ﺶﻬﺟ ﻦﻳا ﺮﮕﻳد ﻪﻧﻮﻤﻧ ار
هاﺮﻤﻫ
SNPﺎﺑ
Codon2 (C-T) يﺎﻫ
IVSII-666(T-C) , IVSII- 16 (C-G),
ﻲﻣ شراﺰﮔ ﻢﻴﻨﻛ
. ﻪﻛ
ﻲﻣ ﺪﻨﻫد نﺎﺸﻧ ﺪﻧاﻮﺗ ه
ﺪﺷﺎﺑ ﻪﻘﻄﻨﻣ رد ﺶﻬﺟ ﻦﻳا توﺎﻔﺘﻣ ﺎﺸﻨﻣ ود .
IVSII-745(C-G) ﺶﻬﺟ دراد يا ﻪﻧاﺮﺘﻳﺪﻣ ﺎﺸﻨﻣ ﻪﻛ
) 13
ﺶﻴﺑﺎﻤﻛ (
ﺖﺳا هﺪﺷ شراﺰﮔ رﻮﺸﻛ ﻒﻠﺘﺨﻣ ﻖﻃﺎﻨﻣ رد
) 5 .(
ﻲﺳرﺮﺑ ﻦﻳا رد
IVSII-745(C-G)ﺶﻬﺟ
SNP ﺎﺑ يﺎﻫ دﻮﺑ هاﺮﻤﻫ ﺮﻳز :
+20 UTR (C-T) , Codon 2 (C-T) , IVSII – 16 (C-G) , IVSII -666(T-C)
ﻤﻫ اﺮ ﺶﻬﺟ ﻲﻫ
IVSII-745(C-G) +20 UTR (C-T) ﺎﺑ
رد
ﻪﻘﻄﻨﻣ ﻪﻧاﺮﺘﻳﺪﻣ
) 17
و (
ﺖﺳا هﺪﺷ شراﺰﮔ ﺰﻴﻧ نﺎﮔﺰﻣﺮﻫ
) 5
ﻪﻛ (
ﻲﻀﻴﻓرﻮﭙﻨﻴﺴﺣ ﻲﻠﻋﺪﻤﺤﻣ ﺮﺘﻛد ،
ﻲﻠﻌﺳﺎﺒﻋ ﺮﺘﻛد ﻲﻀﻴﻓرﻮﭙﻨﻴﺴﺣ
، يدﻻﻮﭘ ﺮﺻﺎﻧ
، يﺪﻬﻣ ﻘﺣ ﻲ
، مﺎﻓرذآ ﻦﻳوﺮﭘ
83
ﻲﻣ ﺪﻨﻤﺷزرا و ﻢﻬﻣ ،ﻪﻘﻄﻨﻣ رد ﺶﻬﺟ ﻦﻳا ﺎﺸﻨﻣ ﻲﺑﺎﻳدر ﺮﻈﻧ زا ﺪﻧاﻮﺗ
ﺪﺷﺎﺑ
Codon 2(C-T) . ﻢﻳﺰﻧآ ﺎﺑ
HgiA1 IVSII-16 و
ﻢﻳﺰﻧآ ﺎﺑ
AvaII RFLP ، ﺪﻧراد
) 18
ﻧآ رد ناﻮﺗ ﻲﻣ ﻪﻛ (
ﺎ و ﻲﮕﺘﺳﻮﻴﭘ ﺰﻴﻟ
ﺪﻟﻮﺗ زا ﺶﻴﭘ ﺺﻴﺨﺸﺗ درﻮﻣ
هدﺎﻔﺘﺳا ﻧﺮﻴﮔ راﺮﻗ ﺪ .
-28(A-C)ﺶﻬﺟ هﺪﻫﺎﺸﻣ ﺎﻫدﺮﻛ ﺖﻴﻌﻤﺟ رد رﺎﺑ ﻦﻴﻟوا ياﺮﺑ ﻪﻛ
ﺖﺳا هﺪﺷ
) 19
ﺎﺘﺑ نژ ﺮﺗﻮﻣوﺮﭘ يور ﺮﺑ (
دراد راﺮﻗ ﻦﻴﺑﻮﻠﮔ .
ﺶﻬﺟ ﻦﻳا
ﺐﺟﻮﻣ ﺶﻫﺎﻛ ﻪﻴﺣﺎﻧ ﻦﻳا ﻪﺑ ﻦﻴﺑﻮﻠﮔﺎﺘﺑ نژ ﻲﺴﻳﻮﻧور ﻞﻣاﻮﻋ لﺎﺼﺗا
دﻮﺷ ﻲﻣ ناﺰﻴﻣ ﺖﻳﺎﻬﻧ رد و ﺶﻫﺎﻛ ﻦﻴﺑﻮﻠﮔﺎﺘﺑ نژ نﺎﻴﺑ
ﻪﺘﻓﺎﻳ
+ و β
ﻲﻤﺳﻻﺎﺗ دﺎﺠﻳا ﻲﻣ
)ﺪﻨﻛ
13
.(
Codon25/26(+T)
رﺎﺑ ﻦﻴﻟوا ياﺮﺑ ﻪﻛ ﺖﺳا يردﺎﻧ رﺎﻴﺴﺑ ﺶﻬﺟ
ﻲﺴﻧﻮﺗ هداﻮﻧﺎﺧ ﻚﻳ رد ﺖﺳا هﺪﺷ شراﺰﮔ
) 20
.(
زﺎﺑ نﺪﺷ ﻪﻓﺎﺿا
نوﺪﻛ ﻦﻴﺑ ﻦﻴﻤﻴﺗ 25
و 26 نوﺪﻛ ﺎﺗ دﻮﺷ ﻲﻣ ﺐﺟﻮﻣ 26
نوﺪﻛ ﻪﺑ
و هﺪﺷ ﺪﻴﻟﻮﺗ ﻲﺼﻗﺎﻧ ﻦﻴﺑﻮﻠﮔﺎﺘﺑ ﻪﺠﻴﺘﻧ رد دﻮﺷ ﻞﻳﺪﺒﺗ نﺎﻳﺎﭘ
βº
ﻲﻤﺳﻻﺎﺗ ددﺮﮔ دﺎﺠﻳا
) 13
.(
يﺮﻴﮔ ﻪﺠﻴﺘﻧ
ﺑ ﺎﻫ ﺶﻬﺟ بﺎﺴﺘﺣا ﺎ ي
ﺎﺷ ﻳ هﺪﺷ شراﺰﮔ ﻊ ﻪﻘﻄﻨﻣ رد
) 6
،(
ﻃ ﻴ ﺳو ﺎﺘﺒﺴﻧ ﻒ ﻴ
ﻌ ﻲ ﺘﺴﻫ ﺪﻫﺎﺷ ار ﺎﻫ ﺶﻬﺟ زا ﻴ
ﻣ ﻪﻛ ﻢ ﻲ ﺪﻧاﻮﺗ
ﺮﮕﻧﺎﺸﻧ ﻣﻮﻗ عﻮﻨﺗ ﻲ و ﻗﻼﺗ ﻲ ﻌﻤﺟ ﻴ و ﻪﻘﻄﻨﻣ رد ﺎﻫ ﺖ اﻳ
ﺪﺷﺎﺑ ناﺮ . ﺑ ﻪ
ﻟد ﻴ ﺷ ﻞ ﻴ و ﻻﺎﺑ عﻮ ﺴﺑ عﻮﻨﺗ ﻴ ز رﺎ ﻳ دﺎ ﺶﻬﺟ ﺎﻫ ي ﻤﺳﻻﺎﺗﺎﺘﺑ ﻲ ا رد ﻳ ناﺮ ،
يﺎﻫ ﺶﻬﺟ ﻲﺳرﺮﺑ ا
ﻳ ﺑ ﻦ ﻴ رﺎﻤ ي ﻤﻫا زا ﻴ ﺴﺑ ﺖ ﻴ ﻻﺎﺑ رﺎ ﻲﻳ رادرﻮﺧﺮﺑ
ﺖﺳا . اﻳ ﺒﻗ ﻦ ﻴ ﻣ تﺎﻌﻟﺎﻄﻣ ﻞ ﻲ
ﺘﻧژ هروﺎﺸﻣ رد ﺪﻧاﻮﺗ ﻴ
ﻜ ﻲ ﺨﺸﺗ و ﻴ ﺺ
ﭘﻴ ﺴﺑ ﺪﻟﻮﺗ زا ﺶ ﻴ
ﻔﻣ رﺎ ﻴ دﻮﺷ ﻊﻗاو ﺪ ..
References
1- Weatherall DJ, Clegg JB, Higgs DR . The hemoglobinopathies. In: Ch.R. Scriver, A.L.
Beaudet, W.S. Sly et al.The Metabolic and Molecular Bases of Inherited Disease 8 th ed Mc Graw-Hill, New York 2001: 4571–4636.
2- Kazazian HH, Boehm CD. Molecular basis and prenatal diagnosis of β-thalassemia. Blood1988;
72: 1107-1116.
3- Merat A, Haghshenas M, Mostafavi Pour Z, Plonczynski MW, Harrell AN, Coleman MB, Steinberg MH. β – thalassemia in southwestern
Iran. Hemoglobin 1993; 17:427-437.
4- Najmabadi H, Karimi-Nejad R, Sahebjam S, Pourfarzad F, Teimourian S, Sahebjam F, Amirizadeh N, Karimi-Nejad MH. The β – thalassemia mutation spectrum in the Iranian population. Hemoglobin 2005; 25: 285 – 296.
5- Yavarian M, Harteveld CL, Batelaan D, Bernini
LF, Giordano PC. Molecular spectrum of beta- thalassemhan in the Iranian Province of Hormozgan. Hemoglobin. 2001; 25:35-34
6 ﺣ ،ﻲﻠﻋﺪﻤﺤﻣ ﻲﻀﻴﻓرﻮﭙﻨﻴﺴﺣ - مﺎﻓرذآ،ﻲﻠﻌﺳﺎﺒﻋ ﻲﻀﻴﻓرﻮﭙﻨﻴﺴ
ﺮﺻﺎﻧ يدﻻﻮﭘ،ﻦﻳوﺮﭘ
،
ﻪﻘﻄﻨﻣ ﻲﻤﺳﻻﺎﺗﺎﺘﺑ ﻊﻳﺎﺷ يﺎﻬﻧﻮﻴﺳﺎﺗﻮﻣ لﺎﻤﺷ
بﺮﻏ ناﺮﻳا
و ﻲﻜﺷﺰﭘ مﻮﻠﻋ هﺎﮕﺸﻧاد ﻲﺸﻫوﮋﭘ و ﻲﻤﻠﻋ ﻪﻠﺠﻣ .
لﺎﺳ ، دﺰﻳ ﻲﻗوﺪﺻ ﺪﻴﻬﺷ ﻲﻧﺎﻣرد ﻲﺘﺷاﺪﻬﺑ تﺎﻣﺪﺧ 12
هرﺎﻤﺷ ،
نﺎﺘﺴﻣز ، مرﺎﻬﭼ 1383
.
7 ﺮﺻﺎﻧ ، هداز يﺮﻴﻣا - -
ﻦﺴﺣ،يدﺎﺑآ ﻢﺠﻧ ﷲا ﺢﺘﻓرﻮﭘ –
ﺮﺒﻛا ﻲﻠﻋ ،
نارﺎﻜﻤﻫ و ﻒﺳﻮﻳ ،ﻲﺘﻘﻔﺷ – .
ﺎﺘﺑ نژ ردﺎﻧ ﺶﻬﺟ ﺶﺷ ﻲﺳرﺮﺑ
ناﺮﻳا ﻲﻤﺳﻻﺎﺗ ﺎﺘﺑ ﻦﻴﻠﻗﺎﻧ و نارﺎﻤﻴﺑ رد ﻦﻴﺑﻮﻠﮔ
. ﺶﻳﺎﻤﻫ ﻦﻴﺘﺴﺨﻧ
ناﺮﻳا ﻲﻣﻼﺳا يرﻮﻬﻤﺟ يژﻮﻟﻮﻨﻜﺗﻮﻴﺑ -
، ناﺮﻬﺗ 5
- 3 ﺪﻨﻔﺳا
1378 .
8- Miller SA, Dykes DD, Polesky HF. A simple salting out procedure for extracting DNA from human nucleated cell. Nucleic Acids Res 1988;
16: 1215-1216.
9- Mahboudi. F, Zeinali.S et al . The Molecular
ﺳرﺮﺑ ﺎﻫ ﺶﻬﺟ ﻲ ى لﺎﻤﺷ رد ﻦﻴﺑﻮﻠﮔﺎﺘﺑ نژ ردﺎﻧ رﻮﺸﻛ بﺮﻏ
84
basis of β- thalassaemia mutations in Fars province, Iran . Iranian Journal of Medical Science 1998;
21: 99-104.
10 ﺮﻴﻣ ، ﻲﻧاﺮﻤﻋ -
.دواد
ﺎﺘﺑ ﻪﺑ ﻼﺘﺒﻣ نارﺎﻤﻴﺑ رد ﻊﻳﺎﺷ يﺎﻫ ﺶﻬﺟ
شور ﺎﺑ ﻲﺑﺮﻏ نﺎﺠﻳﺎﺑرذا نﺎﺘﺳا ﺢﻄﺳ رد ﻲﻤﺳﻻﺎﺗ ARMS/PCR
.
، مود هرﺎﻤﺷ ، ﻢﻫدرﺎﻬﭼ لﺎﺳ ، ﻪﻴﻣورا ﻲﻜﺷﺰﭘ مﻮﻠﻋ ﻪﻠﺠﻣ ص : 126 - 117 نﺎﺘﺴﺑﺎﺗ ، 1382 .
11- Azimifar B . Rare beta-globin gene mutations detected in 1256 prental diagnosis cases in Iran.
10th international conference on Thalassemia &
Hemoglobinopathies; Dubai 7-10 January.
12- Tamagnini GP, Goncalves P, Ribeiro ML, Kaeda J, Kutlar F, Baysal E, Huisman TH. Beta- thalassemia mutations in the Portuguese; high frequencies of two alleles in restricted populations.
Hemoglobin 1993;17: 31-40.
13- Globin Gene Server. Pennsylvania State University. http://www.globin.cse.psu.edu/
14- Rund D, Cohen T, Filon D, Dowling CE, Warren TC, Barak I, Rachmilewitz E, KazazianHH,Oppenheim A. Evolution of a genetic disease in an ethnic isolate: beta- thalassemia in the Jews of Kurdistan. Proc Natl Acad Sci USA. 1991; 88: 310-314.
15- Kiani.A.A . The molecular analysis of β- thalassaemia mutations in lorestan province,
Iran"9th Iranian genetic congress Millad Hospital Halls Center, Tehran - Iran : May 2006: 267.
16- Hashemzadeh.M, Kheirollahi.M: The β- thalassaemia mutation spectrum in the Iranian province of Chaharmahal- Bakhtiari: 9th Iranian genetic congress Millad Hospital Halls Center, Tehran - Iran : May 2006:303.
17- Orkin SH, Kazazian HH, Antonarakis SE, Goff SC, Boehm CD, Sexton JP, Waber PG, Giardina PV. Linkage of β- thalassemia mutation and β- globin gene polymorphisms with DNA polymorphisms in human β-globin gene cluster. Nature 1982; 296:627-631.
18- Lee Y, Park S, Kim J, Cho H. RFLP Haplotypes of β- globin gene complex of β- thalassemic chromosomes in Koreans. J. Korean Med. Sci.
2002;17:475-478
19- Poncz M, Ballantine M, Solowiejczyk D, Barak I, Schwartz E, Surrey S. Beta-Thalassemia in a Kurdish Jew. Single base changes in the T-A-T-A
box. J. Biol. Chem. 1982; 257: 5994-5996.
20- S. Fattoum F, Guemira C, Oner R, Oner HW, Kutlar L F., Huisman TH. Beta-thalassemia, HB S-beta-thalassemia and sickle cell anemia among Tunisians. Hemoglobin 1991; 15: 11-21.
