KELOMPOK 10
PENETAPAN KADAR AMOKSISILIN
DALAM TABLET SEDIAAN
FARMASI
DENGAN METODE
HIGH PERFORMANCE LIQUID
CHROMATOGRAPHY
ALAT DAN BAHAN
ALAT :
BAHAN:
1.MORTIR + STAMPER 1.TABLET AMOKSISILIN
2.BEAKER GLASS
2.KALIUMDIHIDROFOSFAT(KH2PO4)
3.BATANG PENGADUK 3.AQUADEST
4.LABU UKUR
4.NAOH
5.GELAS UKUR
5.ASETONITRIL P
6.PIPET TETES
6.STANDAR AMOKSISILIN
7.ALAT HPLC
7.METANOL
8.TMBANGAN
8.WATER FORIRRIGATION(WFI)
9.SYRINGE
10.ULTRASONIK
11.PH METER
PROSEDUR KERJA
PEMBUATAN LARUTAN BUFFER FOSFAT 0,02M
PH 4,8LARUTAN BUFFER FOSFAT YANG
DIBUAT SEJUMLAH 500ML.
CARA KERJA :
1.DITIMBANG 1,3609 G KALIUM
DIHIRDOFOSFAT, KEMUDIAN DILARUTKAN
DALAM 500ML
WATER FOR IRRIGATION.
PEMBUATAN FASE GERAK
FASE GERAK YANG AKAN DIGUNAKAN ADALAH :
I. METANOL (SEBAGAI FASE GERAK PENCUCI KOLOM)
CARA KERJA :
-DIPIPET 100 ML ETANOL, DIMASUKKAN KE DALAM
BOTOL/WADAH FASE GERAK.
II.WFI : ASETONITRIL (95 : 5) DIBUAT SEJUMLAH 100ML.
(SEBAGAI FASE GERAK PENCUCI KOLOM)
CARA KERJA :
1.DIPIPET 95 ML WFI DIMASUKKAN KE DALAM LABU UKUR 100
ML.
2.DITAMBAHKAN ASETONITRIL P HINGGA TANDA BATAS (AD
100 ML)
3.DIGOJOG HINGGA HOMOGEN.III.
DAPAR FOSFAT : ASETONITRIL P (95 : 5) DIBUAT SEJUMLAH
300ML.(FASE GERAK UNTUK ELUSI)
CARA KERJA :
1.DIPIPET 285 ML DAPAR FOSFAT DIMASUKKAN KE DALAM
BEAKER GLASS.
PEMBUATAN NAOH 0,2M
1.DITIMBANG 200 MG NAOH DIMASUKKAN DALAM LABU
UKUR 25ML.
2.DITAMBAHKAN WFI HINGGA TANDA BATAS.
PENYIAPAN SAMPEL
1.SEJUMLAH 3 TABLET AMOKSISILIN DITIMBANG DAN
DIHITUNG BOBOT RATA-RATANYA.
2.TABLET DIGERUS HINGGA HOMOGEN, LALU DITIMBANG
HINGGA DIPEROLEH 100 MGAMOKSISILIN.
3.SERBUK DI MASUKKAN KE DALAM LABU UKUR 100 ML,
TAMBAHKAN WFI, GOJOG HINGGA HOMOGEN (LARUTAN 1)
4.LAKUKAN PENGENCERAN TERHADAP LARUTAN 1
DENGAN FACTOR PENGENCERAN 100X DENGAN
PELARUT FASE GERAK HINGGA KONSENTRASINYA 5
ΜG/ML (LARUTAN 2)
5.SAMPEL YANG SUDAH DIIENCERKAN (LARUTAN 2)
PENETAPAN KADAR AMOKSISILIN DALAM TABLET
1.DIINJEKSIKAN10 ΜL STANDAR AMOKSISILIN, DENGAN
KOSENTRASI 2 ΜL/ML, 4 ΜL/ML, 6ΜL/ML, 8 ΜL/ML,
MASING-MASING KE DALALAM HPLC DENGAN
MENGGUNAKAN SYRINGE.
2.DILIHAT WAKTU RETENSI, MAU, LUAS PUNCAK
KROMATOGRAM YANG TERBENTUK DALAMSPEKTUM
PADA MASING-MASING KOSENTRASI SENYAWA
STANDAR AMOKSISILIN, KEMUDIANDICATAT
SPEKTUMNYA.
3.DIBUAT PERSAMAAN REGRESI LINIER ANTARA
KONSENTRASI SENYAWA STANDAR TERHADAPLUAS
PUNCAK KROMATOGRAM.
4.DIINJEKSIKAN 20 ΜL SAMPEL, KE DALALAM HPLC
DENGAN MENGGUNAKANSYRINGE.
5.DICATAT SPEKTRUM YANG TERBENTUK, KEMUDIAN DI
TENTUKAN KADAR SENYAWAAMOKSISILIN DALAM
SAMPEL DENGAN MEMASUKKAN NILAI LUAS PUNCAK
KROMATOGRAM KEDALAM PERSAMAAN REGRESI
SKEMA KERJA
1.PEMBUATAN LARUTAN BUFFER FOSFAT 0,02M PH 4,8
DITIMBANG 1,3609 G KALIUM DIHIDROFOSFAT, KEMUDIAN DILARUTKAN DALAM 500 ML WFI15DIATUR PH LARUTAN DENGAN NATRIUM HIRDOKSIDA DALAM PH METER HINGGA KONDISI PH
LARUTAN BERADA PADA 4,8 ± 0,1. 2.PEMBUATAN FASE GERAK
DIPIPET 285 ML BUFFER FOSFAT DIMASUKKAN KE DALAM BEAKER GLASS DITAMBAHKAN 15 ML ASETONITRIL P, DIADUK HINGGA HOMOGEN.
3.PEMBUATAN NAOH 0,2M
DITIMBANG 200MG NAOH DIMASUKKAN DALAM LABU UKUR 25ML. DITAMBAHKAN WFI HINGGA TANDA BATAS.
4.PREPARASI SAMPEL
SEJUMLAH 3 TABLET AMOKSISILIN DITIMBANG DAN DIHITUNG BOBOT RATA-RATANYA TABLET DIGERUS HINGGA HOMOGEN, LALU DITIMBANG HINGGA DIPEROLEH 100 MG
AMOKSISILIN.SERBUK DI MASUKKAN KE DALAM LABU UKUR 100ML, TAMBAHKAN WFI, GOJOG HINGGA
HOMOGEN. (LARUTAN 1)LAKUKAN PENGENCERAN TERHADAP LARUTAN 1 DENGAN FACTOR PENGENCERAN 100X DENGANPELARUT FASE GERAK HINGGA
KONSENTRASINYA 5ΜG/ML. (LARUTAN 2)SAMPEL YANG SUDAH DIIENCERKAN (LARUTAN 2) DISARING, DIULTRASONIK DAN SAMPEL SIAP
5.PEMBUATAN KURVA KALIBRASI
DIPIPET 10ΜL STANDAR AMOKSISILIN, DENGAN KOSENTRASI 2 ΜL/ML, 4 ΜL/ML, 6 ΜL/ML,
8 ΜL/ML, 10 ΜL/ML KEMUDIAN MASING-MASING DIIJEKSIKAN KE DALALAM HPL DENGAN MENGGUNAKANSYRINGE.
DILIHAT NILAI LUAS PUNCAK KROMATOGRAM YANG TERBENTUK DALAM SPEKTUM PADA
MASING-MASING KOSENTRASI SENYAWA STANDAR AMOKSISILIN, KEMUDIAN DICATAT SPEKTUMNYA.
DARI DATA YANG DIPEROLEH, KEMUDIAN DIBUAT KURVA BAKU ATAU KURVA KALIBRASINYA.
DIBUAT PERSAMAAN REGRESI LINIER ANTARA KONSENTRASI SENYAWA STANDAR TERHADAP LUAS
PUNCAK KROMATOGRAM.
6.PENETAPAN KADAR AMOKSISILIN DALAM TABLET
DIINJEKSIKAN 10ΜL SAMPEL, KE DALALAM HPLC DENGAN MENGGUNAKAN SYRINGE.
DICATAT SPEKTRUM YANG TERBENTUK, KEMUDIAN DI TENTUKAN KADAR SENYAWA AMOKSISILIN
PERHITUNGAN
PEMBUATAN LARUTAN BUFFER FOSFAT 0,02M PH 4,8LARUTAN BUFFER FOSFAT YANG DIBUAT SEJUMLAH 500ML. JADI, PERHITUNGANNYA
ADALAH
SEBAGAI BERIKUT :
BM KH2PO4= 136,09 G/MOL
MASA KALIUM DIHIRDOFOSPAT YANG DITIMBANG = 0,02M X 136,09 G/MOL X 0,5 L= 1,3609 G
PEMBUATAN FASE GERAK
A.WFI : ASETONITRIL (95 : 5) DIBUAT SEJUMLAH 100ML.(SEBAGAI FASE GERAK PENCUCI KOLOM)
PERHITUNGANNYA ADALAH SEBAGAI BERIKUT :
WFI YANG DIAMBIL = 95:100 X 100 = 95 ML
ASETONITRIL P YANG DIAMBIL = 5:100 X 100 = 5 ML
B.BUFER FOSFAT : ASETONITRIL P (95 : 5) DIBUAT SEJUMLAH 300ML. (FASE GERAK UNTUK ELUSI)
PERHITUNGANNYA ADALAH SEBAGAI BERIKUT :
PEMBUATAN NAOH 0,2M
NAOH YANG DIBUAT SEJUMLAH 25ML. JADI PERHITUNGANNYA ADALAH SEBAGAI BERIKUT :
MASSA NAOH YANG DITIMBANG = M X BM X VOLUME MASAA = 0,2M X 40G/MOL X 25 ML
MASSA = 200MG
PEMBUATAN LARUTAN STANDAR
A.INGIN DIBUAT LARUTAN STANDAR PRIMER DENGAN KONSENTRASI = 1MG/ML SEJUMLAH 25ML.
SEHINGGA JUMLAH AMOKSISILIN YANG DITIMBANG ADALAH 25 MG. KARENA STANDAR YANG TERSEDIA DI LAB ADALAH AMOKSISILIN TRIHIDRAT MAKA BOBOT
AMOKSISILIN SEBENARNYA DIKONVERSIKAN KE JUMAH AMOKSISILIN TRIHIDRAT.
JADI PERHITUNGANNYA ADALAH :
MASSA AMOKSISILIN TRIHIDRAT = BM TRIHIDRAT : BM ANHIDRAT X MASSA AMOKSISILIN ANHIDRAT
MASSA AMOKSISILIN TRIHIDRAT YANG DITIMBANG = 419,45 : 365,9 X 25MG= 28,66 MG
JADI UNTUK MEMBUAT LARUTAN STANDAR DENGAN KONSENTRASI 1MG/ML DILARUTKAN 28,66 MG
B. UNTUK MEMUDAHKAN PEMBUATAN LARUTAN
STANDAR, MAKA DIBUAT LARUTAN STANDAR
SEKUNDER DENGAN KONSENTRASI 0,1MG/ML
DENGAN MENGENCERKAN LARUTAN STANDAR
PRIMER.
M1 X V1 = M2 X V2
1MG/ML X V1 = 0,1MG/ML X 10ML
V1
= 1 ML
C.DARI LARUTAN STANDAR SEKUNDER DIBUAT
LARUTAN DENGAN KONSENTRASI 2 ΜG/ML, 4ΜG/ML,
6 ΜG/ML, DAN 8 ΜG/ML
I. STANDAR 2 ΜG/ML
M1 X V1
= M2 X V2
PENETAPAN KADAR AMPISILIN
DALAM TABLET DENGAN
NAMA GENERIK DAN DAGANG
MENGGUNAKAN
ALAT
ALAT YANG DIGUNAKAN DALAM PENELITIAN INI ADALAH SATU UNIT ALAT KCKT (PERKIN-ELMER) YANG TERDIRI DARI
VACUUM DEGASSER, POMPA, UV/VIS DETECTOR, INTEGRATOR, PRINTER (OKIDATA), KOLOM SELECTOSPHERE CL8 (4,6 X 250 MM).
BAHAN
BAHAN KIMIA YANG TIDAK DISEBUTKAN ASALNYA SEMUA DARI (E.MERCK DENGAN DERAJAT P.A., ATAU PHARMACEUTICAL GRADE), LAKTOSA, AMYLUM MANIHOT, TALKUM, MG STEARAT, AQUADES, AMPISILIN BPFI (PPOM JAKARTA), AMPISILIN BAKU (PHAPROS), KAPLET AMPICILLIN (KIMIA FARMA), KAPLET
AMPICILLIN (INDOFARMA), KAPLET AMPICILLIN (PHAPROS), KAPLET BINOTAL (BAYER), KAPLET KALPICILLIN (KALBE FARMA), KAPLET PARPICILLIN (PRAFA), KAPLET CETACILLIN (SOHO).
PEMBUATAN LARUTAN KH2PO4 1 M (DILARUTKAN SEBANYAK 136,09 GRAM KH2PO4 DALAM AIR BEBAS CO2, SAMPAI 1000,0 ML), ASAM ASETAT 1 N
DIBUAT DARI 60 ML ASAM ASETAT GLASSIAL DIENCERKAN DENGAN AIR BEBAS OKSIGEN SAMPAI 1000,0 ML. PEMBUATAN PENGENCER DIGUNAKAN UNTUK MELARUTKAN YANG DIBUAT DARI 10 ML KH2PO4 1 M DICAMPUR DENGAN 1 ML ASAM ASETAT 1 N, KEMUDIAN DIENCERKAN DENGAN AIR SAMPAI 1000,0 ML. PEMBUATAN FASE GERAK
PENENTUAN KUALITATIF
AMPISILIN BPFI, AMPISILIN BAKU (PHAPROS), KAPLET
AMPICILLIN (KIMIA FARMA), KAPLET AMPICILLIN
(INDOFARMA), KAPLET AMPICILLIN (PHAPROS), KAPLET
BINOTAL (BAYER), KAPLET KALPICILLIN (KALBE FARMA),
KAPLET PARPICILLIN (PRAFA), DAN KAPLET CETACILLIN
(SOHO), DENGAN KONSENTRASI 500 G/ML
MASING-MASING DISUNTIKKAN KE SISTEM KCKT DENGAN VOLUME
PENYUNTIKAN 20 L. PUNCAK YANG DITUNJUKKAN
DIPERHATIKAN DAN DICATAT WAKTU TAMBATNYA.
PENENTUAN KUANTITATIF
PEMBUATAN LARUTAN INDUK AMPISILIN BPFI (LIB)
DITIMBANG SEKSAMA SEJUMLAH 25,0 MG AMPISILIN BPFI
LALU DIMASUKKAN DALAM LABU TENTUKUR 25 ML
,
DILARUTKAN DENGAN PENGENCER SAMPAI GARIS
TANDA HINGGA DIPEROLEH LARUTAN DENGAN
PEMBUATAN KURVA KALIBRASI AMPISILIN BPFI
DARI LIB DIPIPET SEBANYAK 2,0; 3,0; 4,0; 5,0; 6,0; 7,0 ML DAN MASING-MASING DIMASUKKAN KE DALAM LABU TENTUKUR 10 ML LALU DICUKUPKAN DENGAN PENGENCER SAMPAI GARIS TANDA
SEHINGGA DIPEROLEH KONSENTRASI 200, 300, 400, 500, 600, DAN 700 G/ML. KEMUDIAN MASING-MASING KONSENTRASI DIINJEKSIKAN SEBANYAK 6 KALI KE SISTEM KCKT PADA PANJANG GELOMBANG 254 NM DENGAN LAJU ALIR FASE GERAK 2,5 ML/MENIT, LALU DICATAT LUAS PUNCAKNYA YANG DITUNJUKKAN PADA KROMATOGRAM DAN DIBUAT KURVA KALIBRASI SERTA PERSAMAAN REGRESINYA.
UJI PEROLEHAN KEMBALI
DITIMBANG SEBANYAK 10 GRAM AMPISILIN BAKU (PHAPROS), 600 MG AMYLUM MANIHOT, 120 MG TALKUM 120 MG MG STEARAT, DAN 1,16 GRAM LAKTOSA, DICAMPURKAN LALU DIGERUS HOMOGEN.
KEMUDIAN DITIMBANG SEKSAMA SEJUMLAH 120 MG SERBUK CAMPURAN, DIMASUKKAN DALAM LABU TENTUKUR 100 ML DAN
DILARUTKAN DENGAN PENGENCER SAMPAI LARUT SEMPURNA. LALU DITAMBAHKAN PENGENCER SAMPAI GARIS TANDA SEHINGGA
PENETAPAN KADAR KAPLET AMPISILLIN
DITIMBANG 20 KAPLET AMPISILIN, KEMUDIAN DIGERUS,
DITIMBANG SEKSAMA SEJUMLAH SERBUK AMPISILIN SETARA DENGAN 100 MG AMPISILIN ANHIDRAT, DIMASUKKAN DALAM LABU TENTUKUR 100 ML, DILARUTKAN DENGAN PENGENCER SAMPAI LARUT SEMPURNA, DAN DITAMBAHKAN PENGENCER
SAMPAI GARIS TANDA SEHINGGA DIPEROLEH LARUTAN DENGAN KONSENTRASI 1000 G/ML, DISARING, FILTRATNYA DIGUNAKAN SEBAGAI LARUTAN UJI. KEMUDIAN DARI LARUTAN INI DIPIPET 5,0 ML, DIMASUKKAN DALAM LABU TENTUKUR 10 ML DAN
DITAMBAHKAN PENGENCER SAMPAI GARIS TANDA SEHINGGA DIPEROLEH LARUTAN DENGAN KONSENTRASI 500 G/ML.
LARUTAN INI DIINJEKSIKAN SEBANYAK 6 KALI KE SISTEM KCKT PADA PANJANG GELOMBANG 254 NM DENGAN LAJU ALIR 2,5
