ﻪﻠﺠﻣ مﻮﻠﻋ يزار ﻲﻜﺷﺰﭘ هرود
20
، هرﺎﻤﺷ 113 نﺎﺑآ ،
http://rjms.tums.ac.ir 1392 ﻲﺸﻫوﮋﭘ ﻪﻟﺎﻘﻣ
ﻪﻣﺪﻘﻣ
لﻮﻠـﺳ ﻚـﻴﭘوﺮﺗﻮﻔﻨﻟ سوﺮﻳو Tيﺎـﻫ
ﭗـﻴﺗ ﻲﻧﺎـﺴﻧا 1
HTLV-1) (
رد ﻪـﻛ ﺖـﺳا ﻲﻧﺎـﺴﻧا سوﺮﻳووﺮﺗر ﻦﻴﻟوا
لﺎــﺳ ﻞـﻳاوا 1980
ﺪــﺷ ﻒــﺸﻛ )
1 ( . رد سوﺮــﻳو ﻦــﻳا
،ﺐـﻴﺋارﺎﻛ يﺎـﻳرد هزﻮـﺣ ،ﻦـﭘاژ ﻞﺜﻣ نﺎﻬﺟزا ﻲﻘﻃﺎﻨﻣ
ﺖـﺳا ﻚﻴﻣﺪـﻧا ناﺮـﻳا نﺎﺳاﺮﺧ و ﺎﻘﻳﺮﻓا )
2 ( . لﺎـﺣ رد
ﺮﺿﺎﺣ 20 سوﺮـﻳو ﻦـﻳا ﻪـﺑ ﺎﻴﻧد ﺖﻴﻌﻤﺟزاﺮﻔﻧ نﻮﻴﻠﻴﻣ
هدﻮــﻟآ دوﺪــﺣ ﻪــﻛ ﺪــﻧا 5
- 3 يﻮــﺳ ﻪــﺑ ﺎــﻫ نآ ﺪــﺻرد
يرﺎــﻤﻴﺑ هﺪــﻤﻋ يرﺎــﻤﻴﺑ ود ﻪــﻠﻤﺟ زا ﻒــﻠﺘﺨﻣ يﺎــﻫ
ﻪﺑ ﻪﺘﺴﺑاو ﻲﺗﺎﭘﻮﻠﻴﻣ HTLV-1
/ رﺎﭘ ﻚﻴﺘـﺳﺎﭙﺳا يزرﺎﭘا
لﺎﻜﻴﭘوﺮﺗ HAM/TSP)
( ﻲﻤﺳﻮﻟ و لﻮﻠـﺳ مﻮﻔﻨﻟ/
يﺎـﻫ
نﻻﺎــﺴﮔرﺰﺑT ATLL)
( ﻲــﻣ اﺪــﻴﭘ قﻮــﺳ ﺪــﻨﻨﻛ
) 3 (.
يرﺎﻤﻴﺑ ATLL
هﺪﻧوﺮـﺸﻴﭘ يرﺎـﻤﻴﺑ ﻚﻳ ﻂـﺳﻮﺘﻣ ﺎـﺑ ،
زا ﺮﺘﻤﻛ ﺮﻤﻋ لﻮﻃ 6
د هﺎﻣ ﻪﺑ ﻪﻛ ﺪﺷﺎﺑ ﻲﻣ دﺎﺣ عﻮﻧر 4
،ﻦﻣﺰﻣ ،دﺎﺣ عﻮﻧ smoldering
يﺪـﻨﺑ ﻢﻴﺴﻘﺗ ﺎﻣﻮﻔﻨﻟ و
ﻲﻣ دﻮﺷ ) 4 ( . درﻮـﻣ رد ﻦﻴـﺗور ﻲﻧﺎﻣرد ﻲﻤﻴﺷ نﻮﻨﻛﺎﺗ
ﻲﻤﺳﻮﻟ ﺮﮕﻳد ﺖﺳا هدﻮﺒﻧ ﺮﺛﻮﻣ يرﺎﻤﻴﺑ ﻦﻳا ﻪﻴﻠﻋ ﺮﺑ ،ﺎﻫ
تﺎﻴـﺻﻮﺼﺧ ﻪـﺑ ﻪـﺟﻮﺗ ﺎـﺑ ﻲـﻤﻛ ﻲـﻳوراد تﺎﻌﻟﺎﻄﻣ و ﺖﺳا ﻪﺘﻓﺮﮔ ترﻮﺻ نآ يور ﺮﺑ سوﺮﻳو )
5 (.
سوﺮﻳو HTLV-1 لﻮﻠـﺳ ﻪـﺑ ﻪﺘـﺴﺑاو سوﺮـﻳو ﻚﻳ
ﻖﻳﺮﻃ زا ًﻻﻮﻤﻌﻣ نآ لﺎﻘﺘﻧا و ﺖﺳا ﺖﻴﺳﻮﻔﻨﻟ لﺎﻘﺘﻧا
ﺎـﻫ
ﻲﻣ ترﻮﺻ دﺮﻴﮔ
. ﺖـﺳا ﻲﻜﻴﺘﻴﻟﻮﺘﻴـﺳ ﺮﻴﻏ سوﺮﻳو ﻦﻳا
شور ﺎﺑ ﻪﻛ ﺖـﺸﻛ رد ﻲـﺳﺎﻨﺷ سوﺮـﻳو لﻮـﻤﻌﻣ يﺎﻫ
زا ًﻻﻮــﻤﻌﻣ و ﺖــﺴﻴﻧ ﻲــﺳرﺮﺑ ﻞــﺑﺎﻗ ﻲــﺘﺣاﺮﺑ ﻲﻟﻮﻠــﺳ شور ﺶﺠﻨـﺳ ﺎـﻳ و لاﺮﻳووﺮﭘ ﺶﺠﻨﺳ و ﻲﻟﻮﻜﻠﻣ يﺎﻫ
ﺪــﻨﻧﺎﻣ سوﺮــﻳو نژ ﻲــﺘﻧآ ﻲــﻤﻛ يﺮــﻴﮔ هزاﺪــﻧاP19
هداز يﺪﺒﻋ ﻲﺣﺎﺘﻓ ﻲﺒﺘﺠﻣ :
ﻲﺳﺎﻨﺷ سوﺮﻳو يﺮﺘﻛد يﻮﺠﺸﻧاد رﻮﺘﺳﺎﭘ ﻮﺘﻴﺘﺴﻧا ،ﻲﺳﺎﻨﺷ سوﺮﻳو ﺶﺨﺑ و زاﻮﻫا ﻲﻜﺷﺰﭘ مﻮﻠﻋ رﻮﭘﺎﺷ يﺪﻨﺟ هﺎﮕﺸﻧاد ،ﻲﺳﺎﻨﺷ سوﺮﻳو ﺶﺨﺑ
،ناﺮﻳا
ناﺮﻳا ،ناﺮﻬﺗ [email protected] .
* يﺪﻧﻮﻜﻣ ﺮﻬﭼﻮﻨﻣ ناﺮﻳا ،زاﻮﻫا ،زاﻮﻫا ﻲﻜﺷﺰﭘ مﻮﻠﻋ رﻮﭘﺎﺷ يﺪﻨﺟ هﺎﮕﺸﻧاد ،ﻲﺳﺎﻨﺷ سوﺮﻳو ﺶﺨﺑ ،يﺮﻴﺴﻣﺮﮔ ﻲﻧﻮﻔﻋ يﺎﻫ يرﺎﻤﻴﺑ ﺰﻛﺮﻣ ،ﻲﺳﺎﻨﺷ سوﺮﻳو دﺎﺘﺳا:
*) ﺌﺴﻣ هﺪﻨﺴﻳﻮﻧ لﻮ .(
هداز فﺎﺑ ﺮﻤﺳ ﺎﺿﺮﻴﻠﻋ ﻲﺳﺎﻨﺷ سوﺮﻳو رﺎﻴﺸﻧاد:
، ناﺮﻳا ،زاﻮﻫا ،زاﻮﻫا ﻲﻜﺷﺰﭘ مﻮﻠﻋ رﻮﭘﺎﺷ يﺪﻨﺟ هﺎﮕﺸﻧاد ،ﻲﺳﺎﻨﺷ سوﺮﻳو ﺶﺨﺑ [email protected].
ﺎﻴﻧ ﻒﻴﻄﻟ ﻢﻳﺮﻣ :
ﺖﻧﺪﻳزر ،ناﺮﻬﺗ ،مﺮﻛا لﻮﺳر تﺮﻀﺣ نﺎﺘﺳرﺎﻤﻴﺑ ،ﻲﻠﺧاد ناﺮﻳا
ﺶﻨﻣدازآ نﺎﻬﻴﻛ :
رﻮﺘﺳﺎﭘ ﻮﺘﻴﺘﺴﻧا ،ﻲﺳﺎﻨﺷ سوﺮﻳو ﺶﺨﺑ يژﻮﻟﻮﻨﻜﺗﻮﻴﺑ رﺎﻴﺸﻧاد ،ناﺮﻬﺗ ،ناﺮﻳا
ناﺮﻳا [email protected] .
رﻮﺘﻛو ﺖﺧﺎﺳ ﺮﺗرﻮﭙﻳر
ﻲﻳﺎﻘﻟا زاﺮﻔﻴﺳﻮﻟ
ﻲﺑﺎﻳدر ياﺮﺑ ﺖﻴﻟﺎﻌﻓ
سوﺮﻳو HTLV-1
هﺪﻴﻜﭼ
ﻪﻨﻴﻣز و : فﺪﻫ سوﺮﻳو HTLV-1 (Human T_cell lymphotropic virus type )
دوﺪﺣ ﺎﺑ 20 ﺖـﺷاﺪﻬﺑ ﻞﻜـﺸﻣ ﻚـﻳ نﺎـﻬﺟ رد هدﻮﻟآ ﺮﻔﻧ نﻮﻴﻠﻴﻣ
ﺖﺳا ﻚﻴﻣﺪﻧا ناﺮﻳا نﺎﺳاﺮﺧ و ﻦﭘاژ ﻞﺜﻣ ﻲﻘﻃﺎﻨﻣ رد ﻪﻛ ﺖﺳا ﻲﻧﺎﻬﺟ .
يﺎﻫ لﻮﻠﺳ ﻲﻤﺳﻮﻟ هﺪﻧوﺮﺸﻴﭘ يرﺎﻤﻴﺑ ﻞﻣﺎﻋ سوﺮﻳو ﻦﻳا نﻻﺎﺴﮔرﺰﺑT
ATL ) ( ﻲﻣ ﺪﺷﺎﺑ
دراﺪﻧ دﻮﺟو نﻮﻨﻛﺎﺗ نآ ﻪﻴﻠﻋ ﺮﺑ ﺮﺛﻮﻣ هﺪﺷ ﺪﻴﺋﺎﺗ ﻲﻳوراد ﻪﻛ .
ﻴﻏ تﺎﻴﺻﻮﺼﺧ ﻞﻴﻟد ﻪﺑ رد ﻲـﻳوراد تﺎـﻌﻟﺎﻄﻣ ،سوﺮـﻳو ﻦـﻳا لﻮﻠﺳ ﻪﺑ لﻮﻠﺳ لﺎﻘﺘﻧا و ﻲﻜﻴﺘﻴﻟﻮﺘﻴﺳ ﺮ
هﺎﮕﺸﻳﺎﻣزآ رد لﻮﻤﻌﻣ يﺎﻫ شور ﺎﺑ سوﺮﻳو ﻦﻳا يور ﺮﺑ ﻲﻟﻮﻠﺳ ﺖﺸﻛ In vitro )
( ﻲﻣ نآ ﻪﺑ هدﻮﻟآ ﻲﻟﻮﻠﺳ هدر ﺪﻨﭼ ﻪﺑ ﺮﺼﺤﻨﻣ و هدﻮﺑ ﻢﻛ .ﺪﺷﺎﺑ
ﺖﺧﺎﺳ ﻦﻳاﺮﺑﺎﻨﺑ
سوﺮﻳو ﺖﻧﻮﻔﻋ ﻲﺑﺎﻳزرا ياﺮﺑ ﺮﺗرﻮﭙﻳر رﻮﺘﻛو HTLV1
ﺪﺳر ﻲﻣ ﺮﻈﻧ ﻪﺑ يروﺮﺿ ﻲﻳوراد تﺎﻌﻟﺎﻄﻣ ﺖﻬﺟ ﻪﺑ ﻲﻟﻮﻠﺳ ﺖﺸﻛ رد .
ياﺮـﺑ هﺪـﺷ ﻪﺘﺧﺎﺳ يﺎﻫ ﺮﺗرﻮﭙﻳر
ﻪﻴﺣﺎﻧ ﻦﺸﻳﻮﻴﺘﻛا ﺲﻧاﺮﺗ سﺎﺳا ﺮﺑ ًﻻﻮﻤﻌﻣ ﺎﻫ سوﺮﻳووﺮﺗر ﺪﺷﺎﺑ ﻲﻣLTR
. ﻪﻴﺣﺎﻧ ﻪﺨـﺴﻧ وﺮـﻴﺜﻜﺗ رد ﻪـﻛ ﺖـﺳا سوﺮﻳوﺮﺗﻮـﻣوﺮﭘ ﻞﻣﺎﺷ سوﺮﻳو مﻮﻧژ ردLTR
ﻲﺳوﺮﻳو ﻦﻴﺌﺗوﺮﭘ ﺮﻴﺛﺎﺗ ﺖﺤﺗ ،نآ يرادﺮﺑ د ﺶﻘﻧTax
درا .
شور رﺎﻛ : يﺮﺗﻮﻣوﺮﭘ ﻪﻘﻄﻨﻣ ﺪﻴﻤﺳﻼﭘ زا هﺪﻨﻨﻛ دوﺪﺤﻣ ﻢﻳﺰﻧآ زا هدﺎﻔﺘﺳا ﺎﺑ سوﺮﻳوLTR
pUCLTR-Lacz ﺮﺗﻮـﻣوﺮﭘ نوﺪﺑ رﻮﺘﻛو رد و هﺪﻳﺮﺑ
pGL4.17
ﺪﺷ نﻮﻠﻛ بﺎﺳزاﺮﻔﻴﺳﻮﻟ نژ ﺖﺳدﻻﺎﺑ رد ﺖﺳا زاﺮﻔﻴﺳﻮﻟ ﺮﺗرﻮﭙﻳر نژ ﻞﻣﺎﺣ ﻪﻛ .
ﺎﺑ ﮓﻨﻴﻧﻮﻠﻛ اﺪﺘﺑا colony PCR
ﻲﻟاﻮﺗ ﻦﻴﻴﻌﺗو ﻲﻤﻳﺰﻧآ ﻢﻀﻫ ، ﺪﺷ ﺪﻴﻳﺎﺗ
. ﺲﭙـﺳ
Tلﻮﻠﺳ 293 ﺖﻓﺮﮔ راﺮﻗ ﺪﻴﻳﺎﺗ درﻮﻣ زاﺮﻔﻴﺳﻮﻟ ﻲﻳﺎﻘﻟا نﺎﻴﺑو ﺪﺷ ﺖﻜﻔﺴﻧاﺮﺗ ﺐﻴﻛﺮﺗﻮﻧ رﻮﺘﻛوﺎﺑ .
ﻪﺘﻓﺎﻳ ﺎﻫ : لﻮﻠﺳرد هﺪﺷ ﺪﻴﻟﻮﺗ ﺐﻴﻛﺮﺗﻮﻧ رﻮﺘﻛو 293T
ﻲﻧﺎﻴﺑ رﻮﺘﻛو ﺎﺑ ﺖﻜﻔﺴﻧاﺮﺗﻮﻛ زا ﺲﭘ ﺎﺗ زاﺮﻔﻴﺳﻮﻟ ي ﻪﻈﺣﻼﻣ ﻞﺑﺎﻗ نﺎﻴﺑ ﺚﻋﺎﺑTax
50 لﻮﻠﺳرد ﺮﺑاﺮﺑ يﺎـﻫ
ﺪﺷ لﺮﺘﻨﻛ ﻪﺑ ﺖﺒﺴﻧ ﺶﻳﺎﻣزآ درﻮﻣ .
ﻪﺠﻴﺘﻧ يﺮﻴﮔ : سوﺮـﻳو ياﺮـﺑ ﺮﮕﻧﺎـﺸﻧ ﻲﻟﻮﻠﺳ هدر ﺖﺧﺎﺳرد يﺪﻌﺑ تﺎﻌﻟﺎﻄﻣرد ﺪﻧاﻮﺗ ﻲﻣ ،هﺪﺷ ﺪﻴﻟﻮﺗ ﺐﻴﻛﺮﺗﻮﻧ رﻮﺘﻛو يﻻﺎﺑ ﺖﻴﻠﺑﺎﻗ ﻪﺑ ﻪﺟﻮﺗ ﺎﺑ HTLV-1
ﻪـﺑ ،
ور رﺎﻛ ﻪﺑ ﻲﻳوراد و يا ﻪﻳﺎﭘ تﺎﻌﻟﺎﻄﻣ ﺖﻬﺟ د
.
ﻠﻛ ﻴ هژاوﺪ :ﺎﻫ ﺮﺗرﻮﭙﻳر رﻮﺘﻛو ،زاﺮﻔﻴﺳﻮﻟ HTLV-1،
. ﺖﻓﺎﻳرد ﺦﻳرﺎﺗ :
27 / 5 / 91 شﺮﻳﺬﭘ ﺦﻳرﺎﺗ
: 26 / 9 / 91
ﻲﺑﺎﻳدر ياﺮﺑ زاﺮﻔﻴﺳﻮﻟ ﻲﻳﺎﻘﻟا ﺮﺗرﻮﭙﻳر رﻮﺘﻛو ﺖﺧﺎﺳ 61 ...
ﻲﻣ دﻮﺷ . نژ ﻲﺘﻧآ يﺮﻴﮔ هزاﺪﻧا ﻲﻓﺮﻃزا ﻲـﺳوﺮﻳو يﺎـﻫ
ﺑ ﻪ ﻪﻠﻴـﺳو ELISA و ﻲـﺳوﺮﻳو ﺮـﺘﻴﺗ ﻲـﺳرﺮﺑ ﺖـﻬﺟ
ناﺮــﮔ سوﺮــﻳو ﺖﻓﺮــﺸﻴﭘ ﮓــﻨﻳرﻮﺘﻴﻧﻮﻣ ﺪــﺷﺎﺑ ﻲــﻣ
.
هزاﺪﻧا ﺰﻴﻧ ﻲﺳوﺮﻳو مﻮﻧژ يﺮﻴﮔ ﺖـﻴﻠﺑﺎﻗ
ﺰﻳﺎـﻤﺗ نﻮـﻳﺮﻳو
نآﺮــﻴﻏزا هﺪــﻨﻨﻛ هدﻮــﻟآ دراﺪــﻧ ار
) 6 و 7 (.
شور يﺎــﻫ
نﻮـﭽﻤﻫ يﺮﮕﻳد Cell Viability assay
RT assay ، ،
نﻮﻴﺳاﺪﻳﺮﺒﻴﻫ ،ﻲﻧوﺮﺘﻜﻟا ﭗﻜﺳوﺮﻜﻴﻣ ﺎﺑ سوﺮﻳو نﺪﻳد شور و ﻣ يﺎﻫ ﻪﻳﺎﭘ ﺮﺑ ﻒﻠﺘﺨ ﺖﺳا دﻮﺟﻮﻣPCR
) 8 (.
ﺪﻨﺘـﺴﻫ ﻲﺷزرا ﺎﺑ راﺰﺑا ﺎﻫﺮﺗرﻮﭙﻳر تﺎـﻌﻟﺎﻄﻣ رد ﻪـﻛ
ﺮـﮕﻳد يرﺎﻴـﺴﺑ دراﻮﻣ و مﺎﻏدا ،لﺎﻘﺘﻧا ،ﺮﻴﺜﻜﺗ ،نژ نﺎﻴﺑ ﻊﻴـﺳو دﺮﺑرﺎـﻛ ﻲﻜﺷﺰﭘ و ﻲﻟﻮﻜﻠﻣ يژﻮﻟﻮﻴﺑ ﻢﻠﻋ رد ﻪﻛ ﺪﻧراد . زاﺮﻔﺴﻧاﺮﺗ ﻞﻴﺘﺳا ﻞﻜﻴﻨﻔﻣاﺮﻠﻛ ﻪﻠﻤﺟ زا (CAT)
،
زاﺪــﻳزﻮﺘﻛﻻﺎﮔ ﺎـﺘﺑ β gal)
( GFPو ) ﻪــﺘﻓﺮﮔ ﻦﻴﺌﺗوﺮــﭘ
ﺲﻧﺎـﺳرﻮﻠﻓ ﺖﻴـﺻﺎﺧ ﺎـﺑ ﻲﻫﺎﻣ ﻲﻋﻮﻧ زا هﺪﺷ (
ﺎـﺑ ﻪـﻛ
ﻪﻘﻄﻨﻣ LTR HIV هﺪﺷ ﺖﻔﺟ
ﺪـﻧا ) 12 - 9 (.
ﻦـﻳا ﺎـﻣا
شور لﻮﺼﺤﻣ يﺮﻴﮔ هزاﺪﻧا ﺪﻨﻣزﺎﻴﻧ ﺎﻫ رد ﻪـﺘﻓﺎﻳ ﻊﻤﺠﺗ
ﺖﺸﻛ ﻂﻴﺤﻣ CAT)
و لﻮﻠﺳ ﺲﻜﻴﻓ β gal)
( ﻲﻣ ﺪﺷﺎﺑ .
نﺎــﻴﻣ ﻦــﻳا رد ﻲــﻠﻋGFP
ﺖﻴــﺳﺎﺴﺣ ،ﻲﮔدﺎــﺳ ﻢــﻏر
ـﺑ زاﺮﻔﻴـﺳﻮﻟ زا هدﺎﻔﺘﺳا ﻪﺑ ﺖﺒﺴﻧ ﻲﻨﻴﻳﺎﭘ ﻪ
نژ ناﻮـﻨﻋ
دراد ﺮﮕـﺷراﺰﮔ .
ــﺑ ﻪ يرﻮــﻃ يﻻﺎــﺑ ًﺎﺘﺒــﺴﻧ ناﺰــﻴﻣ ﻪــﻛ
نﺎــﻴﺑ GFP
ﺖــﺳا زﺎــﻴﻧ ﺢــﺿاو ﺲﻧﺎــﺳرﻮﻠﻓ ياﺮــﺑ
) ﻞﻗاﺪﺣ 106 لﻮﻠﺳ ﺮﻫ رد لﻮﻜﻠﻣ .(
ﻚﻴﻨﻜﺗ ﺮـﻛذ يﺎـﻫ
هدر ﻪﻌـﺳﻮﺗ ﺖـﻬﺟ هﺪﺷ ياﺮـﺑ ﻒـﻠﺘﺨﻣ ﻲﻟﻮﻠـﺳ يﺎـﻫ
سوﺮﻳو
،هﮋﻳو ي ﺎﻫ ﺑ
ﻪ صﻮـﺼﺧ ـﺑ HIV
ﻪ هدﺮـﺑ رﺎـﻛ
ﺖﺳا هﺪﺷ )
12 (.
يﺎﻳاﺰﻣ ﻪﺑ ﻪﺟﻮﺗ ﺎﺑ ﻻﺎﺑ ﺖﻴﺳﺎﺴﺣ
ﻲﻜﻴﻣﺎـﻨﻳد ﻪـﻨﻣاد ،
ﻮﻟ ﻲــﻠﺧاد ﺖــﻴﻟﺎﻌﻓ مﺪــﻋ و دﺎــﻳز ﺐــﻠﻏا رد يزاﺮﻔﻴــﺳ
لﻮﻠــﺳ رد زاﺮﻔﻴــﺳﻮﻟ زا هدﺎﻔﺘــﺳا ،ﻲﺗﻮﻳرﺎــﻛﻮﻳ يﺎــﻫ
لﺎﺳ ﺖﺳا ﻪﺘﺷاد يﺮﻴﮕﻤﺸﭼ ﺪﺷر ﺮﻴﺧا يﺎﻫ )
13 ( .
سوﺮـﻳو ﻲﻧﻻﻮـﻃ ﻲﻳﺎـﻬﺘﻧا راﺮﻜﺗ ﻪﻘﻄﻨﻣ LTR)
( ود رد
ﺖﺳا ﻪﺘﻓﺮﮔ راﺮﻗ سوﺮﻳووﺮﭘ يﺎﻬﺘﻧا .
ﻮﻤﻌﻣ ﻻ
ً–LTR 5ˊ
يرادﺮـﺑ ﻪﺨـﺴﻧ و ﺮﻴﺜﻜﺗ ياﺮﺑ سوﺮﻳو ﺮﺗﻮﻣوﺮﭘ ناﻮﻨﻋ ﻪﺑ ﺮﺑ ﻞﻣﺎﺷ و ﺪﺷﺎﺑ ﻲﻣ سوﺮﻳو يﺎﻫ نژ
3 ﻪﻘﻄﻨﻣ U3, R,
U5
ﺖﺳا . ﻪﻘﻄﻨﻣ رد U3
زا ﻲـﻨﻏ ﻪﻴﺣﺎﻧ ود ﻦﻴﺑ رد ، GC
يراﺮﻜﺗ هﺪﺷ ﻆﻔﺣ ﻲﻧژ ﺮﺼﻨﻋ ﻪﺳ 21
مﺎـﻧ ﻪـﺑ ﻪﻛ يزﺎﺑ
(TREs) ﻪـﺑ هﺪـﻨﻫد ﺦـﺳﺎﭘ ﻲﻧژ ﺮﺻﺎﻨﻋ ﺎﻳ
هﺪـﻴﻣﺎﻧTax
ﻲﻣ
دراد دﻮـﺟو ،ﺪﻧﻮـﺷ )
14 (
ﻪـﺑ ﻪﻴﺒـﺷ يرﺎﺘﺧﺎـﺳ ﻪـﻛ
(Cyclic AMP Response Element) ﺪــﻧرادCRE
.
ﻦﻳا 3 ﻪﻴﺣﺎﻧ سوﺮـﻳووﺮﭘ زا ﻲﺴﻳﻮﻧور ﻦﻳﺮﺘﺸﻴﺑ لﻮﺌﺴﻣ
HTLV-1 لﺮـﺘﻨﻛ ﺖﺤﺗ
ﺪﻨﺘـﺴﻫ Tax )
15 )( ﺮﻳﻮـﺼﺗ
هرﺎﻤﺷ (1 . ﺮﺗرﻮــﭙﻳر رﻮــﺘﻛو ﺖﺧﺎــﺳ ﻖــﻴﻘﺤﺗ ﻦــﻳا زا فﺪــﻫ
سوﺮﻳو ﺖﻧﻮﻔﻋ ﻲﺑﺎﻳزرا ياﺮﺑ يزاﺮﻔﻴﺳﻮﻟ HTLV1
رد
هﺪـﻨﻳآ رد ﻲـﻳوراد تﺎـﻌﻟﺎﻄﻣ ﺖـﻬﺟ ﻪﺑ ﻲﻟﻮﻠﺳ ﺖﺸﻛ ﻲﻣ ﺪﺷﺎﺑ . رد ﺖـﻴﻘﻓﻮﻣ زا ﻲﻛﺎـﺣ هﺪـﻣآ ﺖﺳد ﻪﺑ ﺞﻳﺎﺘﻧ
رﺎـﻛ ﺖﻴﻠﺑﺎﻗ و رﻮﺘﻛو ﻦﻳا ﺖﺧﺎﺳ ﺖﺧﺎـﺳ ياﺮـﺑ نآ دﺮﺑ
ﺪﺷﺎﺑ ﻲﻣ ﺮﮕﻧﺎﺸﻧ لﻮﻠﺳ هدر ﻚﻳ .
شور رﺎﻛ
HTLV1 – LTR :
سوﺮـﻳو يﺮﺗﻮـﻣوﺮﭘ ﻪـﻘﻄﻨﻣ
،LTR HTLV-1 ﻲﻣ
،ﻲـﻠﺒﻗ تﺎـﻌﻟﺎﻄﻣ رد ﻪـﻛ ﺪﺷﺎﺑ
سوﺮﻳوLTR HTLV1 ،سوﺮـﻳو ﻞﻗﺎﻧ رﺎﻤﻴﺑ ﻚﻳ زا
و ﺮﻴﺜﻜﺗ رﻮﺘﻛو رد
LacZ pUC LTR- هﺪـﺷ نﻮـﻠﻛ
دﻮﺑ ) 16 ( .
ﻪــﻌﻄﻗ زا هدﺎﻔﺘــﺳا ﺎــﺑ هﺪــﺷ ﺮــﻛذ رﻮــﺘﻛو زاLTR
ﻢﻳﺰــﻧآ Hind III )
سﺎــﺘﻨﻣﺮﻓ (
هﺎــﮕﻳﺎﺟ رد و هﺪــﻳﺮﺑ
زاﺮﻔﻴــــﺳﻮﻟ ﺮﺗرﻮــــﭙﻳر رﻮــــﺘﻛوMCS PGL4.17
(Promega.USA) بﺎﺳ زاﺮﻔﻴﺳﻮﻟ نژ ﺖﺳد ﻻﺎﺑ رد
ﺪﺷ نﻮﻠﻛ .
دوﺪـﺣ ﻪـﻌﻄﻗ ﻪـﻛ ﺐﻴﺗﺮﺗ ﻦﻳﺪﺑ 515 bp
رﻮــﺘﻛو زاLTR LacZ
pUC LTR- يور و هﺪــﻳﺮﺑ
لژ 1 % ﺪـﺷ زرﻮﻓوﺮﺘﻜﻟا زررﺎﮔآ )
هرﺎﻤـﺷ ﺮﻳﻮـﺼﺗ 2
.(
ﺎــﺑ و هﺪــﻳﺮﺑ لژ يور زا ﺮــﻈﻧ درﻮــﻣ ﻪــﻌﻄﻗ ﺲﭙــﺳ
ﺖـﻴﻛ زا هدﺎﻔﺘـﺳا (Qiagen) High Pure PCR
Product ﺪﺷ ﺺﻴﻠﺨﺗ
.
Tax(TREs) ﻦﻴﺌﺗوﺮﭘ ﻪﺑ هﺪﻨﻫد ﺦﺳﺎﭘHTLV-1LTR ﻪﻴﺣﺎﻧ رد ﻲﻧژ ﺮﺼﻨﻋ3-1 ﺮﻳﻮﺼﺗ
نارﺎﻜﻤﻫ و هداز يﺪﺒﻋ ﻲﺣﺎﺘﻓ ﻲﺒﺘﺠﻣ 62
لﻮﻠــﺳ ﻪــﻴﻬﺗ Competent
: يﺮﺘﻛﺎــﺑ E.coli
αﻪﻳﻮﺳ DH5
ﺐﺷ لﻮﻃ رد overnight)
( ﻂﻴﺤﻣ رد
ﻊﻳﺎﻣLB (Luria Bertani) و ﺪﺷ هداد ﺖﺸﻛ
100
ﻦـﻟرا ﻪـﺑ هدﺮﻛ ﺪﺷر هزﺎﺗ يﺮﺘﻛﺎﺑ زا ﺮﺘﻴﻟوﺮﻜﻴﻣ 500
يوﺎـﺣ يﺮـﺘﻴﻟ ﻲﻠﻴﻣ 50
يﺮـﺘﻴﻟ ﻲـﻠﻴﻣ ﻊﻳﺎـﻣLB
نﺪﻴـﺳر زا ﺲـﭘ و ﺪﺷ هداد لﺎﻘﺘﻧا OD
دوﺪـﺣ ﻪـﺑ
35 / 0 جﻮــﻣ لﻮــﻃ رد 600
زا هدﺎﻔﺘــﺳا ﺎــﺑ ،ﺮﺘﻣﻮﻧﺎــﻧ
ﺪـــﻳﺮﻠﻛ ﻢﻴـــﺴﻠﻛ
1 / 0 ﻞـــﻜﺗوﺮﭘ ﻖـــﺒﻃ و رﻻﻮـــﻣ
(Sambrook&Russell) ﺪﺷ ﻪﻴﻬﺗ ﺪﻌﺘﺴﻣ يﺮﺘﻛﺎﺑ
.
Ligation ﺮﺗﻮـﻣوﺮﭘ نوﺪـﺑ رﻮﺘﻛو :
PGL4.17 ﻪـﺑ
هﺪﺷ ﺺﻴﻠﺨﺗ ﻪﻌﻄﻗ هاﺮﻤﻫ ﻢﻳﺰﻧآ زا هدﺎﻔﺘﺳا ﺎﺑ LTR
T4
زﺎــﮕﻴﻟ (TAClone Fermentas)،
ﺖﺒــﺴﻧ ﺎــﺑ و
ﻲﻟﻮﻣ 1 ﻪﺑ 5 ﺶﻳﺎﻣزآ ﺖﺤﺗ ligation
يﺎﻣد رد 15
ﻲﺘﻧﺎﺳ ﻪﺟرد ترﻮﺻ ﻪﺑ داﺮﮔ
overnight ﺮﻗ
ﺖﻓﺮﮔ را .
نﻮﻴﺳﺎﻣرﻮﻔﺴﻧاﺮﺗ :
يﺮﺘﻛﺎﺑ α DH5
،هﺪـﺷ ﺪﻌﺘـﺴﻣ
لﻮﺼﺤﻣ ﺎﺑ ligation
و ﺪﺷ مرﻮﻔﺴﻧاﺮﺗ ﻞﻜﺗوﺮﭘ ﻖﺒﻃ ،
ﻂﻴﺤﻣ رد ﺪﺷر ﺖﻋﺎﺳ ﻚﻳ زا ﺲﭘ يﺮﺘﻛﺎﺑ ﻊﻳﺎﻣLB
رد 37 ﺖـﻴﻠﭘ يور ﻪـﺑ داﺮﮔ ﻲﺘﻧﺎﺳ ﻪﺟرد رﺎـﮔآLB
يوﺎﺣ 50 ﺪـﺷ هداد ژﺎﺳﺎﭘ ﺮﺘﻴﻟ ﻲﻠﻴﻣ ﺮﺑ مﺮﮔوﺮﻜﻴﻣ .
يﺎـﻫ يﺮﺘﻛﺎـﺑ ﺰـﻴﻧ و نﻮﻴـﺳﺎﻣرﻮﻔﺴﻧاﺮﺗ رﺎـﻛ ﺖﺤﺻ ﺪﻴﻤﺳﻼﭘ زا هدﺎﻔﺘﺳا ﺎﺑ هﺪﺷ ﺪﻌﺘﺴﻣ pTZ57R
درﻮﻣ
ﺖﻓﺮﮔ راﺮﻗ ﻲﺳرﺮﺑ .
Colony PCR :
نﺪﻴﺒـﺴﭼ لﺎـﻤﺘﺣا ﻪـﻛ ﻲﻳﺎﺠﻧآ زا
رﻮـﺘﻛو دﻮﺧ ﻪﺑ دﻮﺧ (backbone self ligattion)
و
رد يﺮﺘﻛﺎـﺑ ﻪـﺑ ار ﺪﺷر ﺖﻴﻠﺑﺎﻗ ،يﺮﺘﻛﺎﺑ ﻪﺑ نآ دورو يﺮﮕﻟﺎــﺑﺮﻏ ،ﺪــﻫد ﻲــﻣ ﻦﻴﻠﻴــﺳ ﻲــﭙﻣآ رﻮــﻀﺣ يﺮﺘﻛﺎﺑ لﺎﺳرﻮﻴﻧﻮﻳ ﺮﻤﻳاﺮﭘ زا هدﺎﻔﺘﺳا ﺎﺑ هدﺮﻛ ﺪﺷر يﺎﻫ
CTAGCAAAATAGGCTGTCCCC RV3 F:
ﺮــــﻤﻳاﺮﭘ و R: TAGGTGGAAGCGTTTGGC
PGL4-LTR-Rev شور ﺎــﺑ و
Touchdown PCR
ﺖﻓﺮﮔ مﺎﺠﻧا .
يﺎﻣد Annealing لوا ﻞﻜﻴﺳ
60 ﻪﺟرد
تﺪـﻣ ياﺮـﺑ داﺮـﮔ ﻲﺘﻧﺎﺳ 40
ﺎـﺑ ﻪـﻴﻧﺎﺛ 5
/ 0 ﻪـﺟرد
ﻞﻜﻴﺳ ﺮﻫ رد ﺶﻫﺎﻛ داﺮﮔ ﻲﺘﻧﺎﺳ ياﺮـﺑ
10 ﻞﻜﻴـﺳ
ﺪـﺷ ﻪـﺘﻓﺮﮔ ﺮﻈﻧ رد .
ﻞﻜﻴـﺳ داﺪـﻌﺗ ﺎـﻫ
20 ﻞﻜﻴـﺳ
ﺪــﺷ ﺺﺨــﺸﻣ .
ﻪــﻌﻄﻗ ﻪــﻛ ﻲﻳﺎــﻫ ﻲــﻨﻠﻛ ردLTR
لﻮﺼﺤﻣ نآPCR
دوﺪـﺣ ﺎـﻫ 1700bp
ـﻴﻳﺎﺗ ،دﻮـﺑ ﺪ
ﺪﺷ PCR . ﺮﻤﻳاﺮﭘ زا هدﺎﻔﺘﺳا ﺎﺑ مود ناﻮﻨﻋ ﻪﺑ RV3
و دراورﻮـــــﻓ ﺮـــــﻤﻳاﺮﭘ ﺮـــــﻤﻳاﺮﭘ
LTR-Rev) R:(
ACTAAGCTTGAACGCGCTCAACCGGCGTGGAT
ﺎـﺑ ﺪـﺷ مﺎﺠﻧا ﻲﻠﺒﻗ ﻞﻜﺗوﺮﭘ ﺎﺑ سرﻮﻳر ﺮﻤﻳاﺮﭘ ناﻮﻨﻋ ﻪﺑ يﺎﻣد ﻪﻛ توﺎﻔﺗ ﻦﻳا Annealing
لوا ﻞﻜﻴﺳ 63
ﻪﺟرد
ﺪﺷ ﻪﺘﻓﺮﮔ ﺮﻈﻧ رد داﺮﮔ ﻲﺘﻧﺎﺳ .
جاﺮﺨﺘـﺳا و هﺪـﺷ مرﻮﻔـﺴﻧاﺮﺗ يﺎﻫ يﺮﺘﻛﺎﺑ ﺮﻴﺜﻜﺗ
لﻮـﺼﺤﻣ رد ﻪـﻛ ﻲﻳﺎـﻫ ﻲـﻨﻠﻛ ﺪﻴﻤـﺳﻼﭘ Colony
هﺪــﺷ ﻞــﺧاد ﻪــﻌﻄﻗ يوﺎــﺣ ،PCR رد ﺪــﻧدﻮﺑLTR
ﻂﻴﺤﻣ تﺪـﻣ ﻪﺑ ﻦﻴﻠﻴﺳ ﻲﭙﻣآ يوﺎﺣ ﻊﻳﺎﻣ LB
16 -
12 زا هدﺎﻔﺘـﺳا ﺎـﺑ ﺲﭙﺳ و هﺪﺷ هداد ﺖﺸﻛ ﺖﻋﺎﺳ
ﺖــﻴﻛ miniprep (Qiagen) ﻞﻤﻌﻟارﻮﺘــﺳد ﻖــﺒﻃ
ﺐـــﻴﻛﺮﺗﻮﻧ ﺮﺗرﻮـــﭙﻳر رﻮـــﺘﻛو جاﺮﺨﺘـــﺳا ،ﺖـــﻴﻛ PGL4LTR-Luc
، ﺖﻓﺮﮔ ترﻮﺻ .
ﻦﺸﻜﻔﺴﻧاﺮﺗ :
لﻮﻠـﺳ
،293T ﻚـﻧﺎﺑ زا هﺪـﺷ ﻪـﻴﻬﺗ
ﻂﻴـﺤﻣ رد ،ناﺮـﻳا رﻮﺘـﺳﺎﭘ ﻮﺘﻴﺘﺴﻧا لﻮﻠﺳ DMEM
يوﺎﺣ 10 FBS% ، L2 ﻲـﻨﭘ ،لﻮـﻣ ﻲﻠﻴﻣ ﻦﻴﻣﺎﺗﻮﻠﮔ
ﻦﻴﻠﻴــــﺳ 100
،ﺮــــﺘﻣ ﻲــــﻠﻴﻣ ﺮــــﻫ رد ﺪــــﺣاو
ﻦﻴﺴﻳﺎﻣﻮﺘﭘﺮﺘﺳا ،ﺮـﺘﻣ ﻲـﻠﻴﻣ ﺮﻫ رد مﺮﮔوﺮﻜﻴﻣ 100
ﻂﻳاﺮﺷرد 37
و داﺮـﮔ ﻲﺘﻧﺎﺳ ﻪﺟرد 5
Co2 % ﺖـﺸﻛ
ﺪﺷ هداد .
ﻦﺸﻜﻔﺴﻧاﺮﺗ زا ﻞﺒﻗ ﺐﺷ 104
8× ﺖﻴﻠﭘ رد لﻮﻠﺳ
24 ﻲﻜﻫﺎﭼ (SPL)
،ﺪﻌﺑ زور و ﺪﺷ ﻪﺘﺷﺎﻛ 3
ﺖﻋﺎﺳ
،ﻦﺸﻜﻔﺴﻧاﺮﺗ زا ﻞﺒﻗ هزﺎﺗ ﺖﺸﻛ ﻂﻴﺤﻣ ﺎﺑ نآ ﻂﻴﺤﻣ
ﻢﻳ ﺰـﻧآ ﺎـﺑ هﺪـﺷهﺪـﻳﺮﺑ LTR ﻪﻌﻄﻗ ﭗﭼ ﺖﻤﺳ-2 ﺮﻳﻮﺼﺗ Hind III
زا
رﻮﺘﻛو pUCLTR-LacZ وررد
ي ﻤﻛ لژ ﻲ ﺪﻧﺎﺑ زاﺮﺗﻻﺎﺑ 500bp
ﺮﻛرﺎﻣ
اﺪﺒﻣﻻ 1 ﺖﻳﺎﺑﻮﻠﻴﻛ ) ﻦﻴﻳﺎﭘ زا مود ﺪﻧﺎﺑ (
د ﻳ هﺪ ﻣ ﻲ .دﻮﺷ رﻮـﺘﻛو ﺖـﺳار ﺖﻤـﺳ
دﻮﺷ ﻲﻣ هﺪﻳد هﺪﺸﻧ هﺪﻳﺮﺑ .
ﻲﺑﺎﻳدر ياﺮﺑ زاﺮﻔﻴﺳﻮﻟ ﻲﻳﺎﻘﻟا ﺮﺗرﻮﭙﻳر رﻮﺘﻛو ﺖﺧﺎﺳ 63 ...
لﻮﻠﺳ ﺲﭙﺳ و ﺪﺷ ﻦﻳﺰﮕﻳﺎﺟ ﺖـﻴﻛ زا هدﺎﻔﺘـﺳا ﺎﺑ ﺎﻫ
polyfect (Qiagen)
و 4 / 0 رﻮــــﺘﻛو مﺮــــﮔوﺮﻜﻴﻣ
ﺐﻴﻛﺮﺗﻮﻧ ﻦﻴﺌﺗوﺮـﭘ ﻲﻧﺎﻴﺑ رﻮﺘﻛو ﺎﺑ هاﺮﻤﻫو ﻲﻳﺎﻬﻨﺗ ﻪﺑ
)Tax pCDNA3.1+Tax (
) 16 ( ﺪﻧﺪـﺷ ﺖﻜﻔﺴﻧاﺮﺗ .
،ﺶﻳﺎﻣزآ لﺮﺘﻨﻛ ناﻮﻨﻋ ﻪﺑ لﻮﻠﺳ
نوﺪـﺑ رﻮـﺘﻛو ﺎﺑ ﺎﻫ
ﺮﺗﻮﻣوﺮﭘ PGL4.17
)
ﻲـﻔﻨﻣ لﺮـﺘﻨﻛ ناﻮـﻨﻋ ﻪﺑ (
ﻪـﺑ
ﻦﻴﺌﺗوﺮــﭘ ﻲﻧﺎــﻴﺑ رﻮــﺘﻛو ﺎــﺑ هاﺮــﻤﻫو ﻲﻳﺎــﻬﻨﺗ Tax
pCDNA3.1+Tax) (
ﺪﻧﺪﺷ ﺖﻜﻔﺴﻧاﺮﺗ .
زا ﺲـﭘ 48
ﺖــﻴﻛ زا هدﺎﻔﺘــﺳا ﺎــﺑ زاﺮﻔﻴــﺳﻮﻟ نﺎــﻴﺑ ﺖﻋﺎــﺳ (Promega) OneGlo ﻞﻤﻌﻟارﻮﺘــﺳد سﺎــﺳا ﺮــﺑ و
ﺮﺘﻣﻮــــﻨﻴﻣﻮﻟ هﺎﮕﺘــــﺳد ﺎــــﺑ ﺖــــﻴﻛ Synergy4
(BioTeK.USA) ﺪـﺷ ﻲﺳرﺮﺑ
. لﺮـﺘﻨﻛ ناﻮـﻨﻋ ﻪـﺑ
زا ﺖﺒﺜﻣ (Promega)
Quantilum هدﺎﻔﺘﺳا يرﺎﺠﺗ
ﺪــﺷ . رﻮــﺘﻛو زا هدﺎﻔﺘــﺳا ﺎــﺑ ﻦــﺸﻜﻔﺴﻧاﺮﺗ ﻂﻳاﺮــﺷ
(Clontech) pEGFP-N1 ﺪﺷ ﺰﻳﻻﺎﻣﺮﻧ
.
ﻪﺘﻓﺎﻳ ﺎﻫ
ﮓﻨﻴﻧﻮﻠﻛ ﻲﺑﺎﻳزرا :
لﺎـﻤﺘﺣا ﻪـﻛ ﻦـﻳا ﻪـﺑ ﻪﺟﻮﺗ ﺎﺑ
ﻪﻌﻄﻗ نﺪﺷ دراو نوﺪﺑرﻮﺘﻛو دﻮﺧ ﻪﺑ دﻮﺧ نﺪﻴﺒﺴﭼ ﺖــﻴﻠﺑﺎﻗ ،يﺮﺘﻛﺎــﺑ ﻪــﺑ نآ دورو و ،دراد دﻮــﺟوLTR
ﻲﻣ ﻦﻴﻠﻴﺳ ﻲﭙﻣآ رﻮﻀﺣ رد يﺮﺘﻛﺎﺑ ﻪﺑ ار ﺪﺷر ،ﺪـﻫد
،نﻮﻴـﺳﺎﻣرﻮﻔﺴﻧاﺮﺗ زا ﺲﭘ 80
ﻲـﻨﻠﻛ زا ﻲـﻨﻠﻛ يﺎـﻫ
ﻂﻴـــﺤﻣ يور هدﺮـــﻛ ﺪـــﺷر يوﺎـــﺣ رﺎـــﮔآ LB
ﻲﭙﻣآ ﺶﻳﺎـﻣزآ درﻮـﻣ ،ﻦﻴﻠﻴـﺳ Colony PCR
راﺮـﻗ
ﻪﻛ ﺪﻨﺘﻓﺮﮔ 30
ﻪﻌﻄﻗ يوﺎﺣ ﻲﻨﻠﻛ هﺪـﺷ دراو LTR
رﻮﺘﻛو ﻪﺑ PGL4.17
ﺪﻧدﻮﺑ . ﻪـﻜﻨﻳا ﻪـﺑ ﺮﻈﻧ ﻲﻓﺮﻃ زا ﺮـﺳ ود ﺮﻫ
3ˊ ˊ، LTR5 ﻢﻳﺰـﻧآ ﻚـﻳ ﺎـﺑ (Hind III)
يﺮـﻴﮔ راﺮﻗ لﺎﻤﺘﺣا دﻮﺑ هﺪﺷ هﺪﻳﺮﺑ رﻮـﻃ ﻪـﺑ LTR
ﺖﺷاد دﻮﺟو سﻮﻜﻌﻣ .
ندﻮـﺑ ﺖـﺳرد ﻲـﺳرﺮﺑ ياﺮﺑ
يﺮــﻴﮔ راﺮــﻗ ﺖــﻬﺟ
،LTR ا رد ﻪــﻛ ﻲﻣﻮــﺳﺮﻤﻳاﺮﭘ ز
ﻪـﻌﻄﻗ ﻞﺧاد ناﻮـﻨﻋ ﻪـﺑ دﻮـﺑ هﺪـﺷ ﻲـﺣاﺮﻃ LTR
لﺎـﺳرﻮﻴﻧﻮﻳ ﺮـﻤﻳاﺮﭘ زا و ﺪﺷ هدﺎﻔﺘﺳا سرﻮﻳر ﺮﻤﻳاﺮﭘ ﺪـﺷ هدﺎﻔﺘﺳا دراورﻮﻓ ﺮﻤﻳاﺮﭘ ناﻮﻨﻋ ﻪﺑ RV3 .
زا 30
ﻪـﻌﻄﻗ يوﺎـﺣ ﻲﻨﻠﻛ ﻂـﻘﻓ ،LTR
16 ﻞـﻣﺎﺣ،ﻲﻨﻠﻛ
LTRﻪﻌﻄﻗ هﺪـﺷ نﻮﻠﻛ ﺢﻴﺤﺻ ﺖﻬﺟ رد ﻪﻛ ﺪﻧدﻮﺑ
)دﻮﺑ هرﺎﻤﺷ ﺮﻳﻮﺼﺗ (3
.
ﻲﻨﻠﻛ ﻦﻳا ﺎﺑ ﺎﻫ
ﻲـﻤﻳﺰﻧآ ود ﻢـﻀﻫ شور Double ،
Digestion (SmaI/XbaI)
راﺮــﻗ ﺪــﻴﻳﺎﺗ درﻮــﻣ ﺰــﻴﻧ
ﺪﻨﺘﻓﺮﮔ . هﺪـﺷ بﺎـﺨﺘﻧا يﺎﻫ ﻲﻨﻠﻛ ﻦﻴﺑ زا 2
ﻲـﻨﻠﻛ
نآ ﻪﺳاﺮﺗ و ﺪﺷ ﻲﻟاﻮﺗ ﻦﻴﻴﻌﺗ Blast
رﻮـﻀﺣ و هﺪـﺷ
ﻪﻌﻄﻗ HTLV-LTR هﺪﻨﻫد ﺦﺳﺎﭘ ﺮﺼﻨﻋ ﻪﺳ يوﺎﺣ
(TREs) Tax ﻪﺑ ﺪﺷ ﺪﻴﻳﺎﺗ
.
زاﺮﻔﻴﺳﻮﻟ نﺎﻴﺑ :
يﻻﺎـﺑ ناﺰـﻴﻣ رد زاﺮﻔﻴـﺳﻮﻟ نﺎـﻴﺑ
ﻦﺸﻜﻔﺴﻧاﺮﺗﻮﻛ (co-transfection)
T لﻮﻠﺳ 293 ﺎﺑ
ﻲﻧﺎـﻴﺑ رﻮـﺘﻛو ﺎـﺑ ﺰﻴﻧو ﺐﻴﻛﺮﺗﻮﻧ ﺮﺗرﻮﭙﻳر رﻮﺘﻛو Tax
ﺪﺷ هﺪﻳد .
لﻮﻠﺳ 293T
ﻪـﻴﻠﻛ ﻦﻴـﻨﺟ زا ﻲﻟﻮﻠﺳ هدر
ندﻮﺑ اﺮﻳﺬﭘ ﻪﻛ ﺖﺳا نﺎﺴﻧا Premissive)
( ياﺮﺑ نآ
سوﺮﻳو HTLV1 يﺎﻫ شراﺰﮔ رد ﻪﻛ
نﺎـﺸﻧ ﻲـﻠﺒﻗ
نﺎـﻜﻣا و دﻮﺑ لﻮﻠﺳ ﻦﻳا بﺎﺨﺘﻧا ﺖﻠﻋ ،دﻮﺑ هﺪﺷ هداد ﺪﺷ ظﺎﺤﻟ هﺪﻨﻳآ تﺎﻌﻟﺎﻄﻣ رد نآ هدﺎﻔﺘﺳا .
ﺶﻳﺎـﻣزآ رد يﺎــﻫ
يﺎـﻫ لﻮﻠــﺳ ﻪﺑﺎـﺸﻣ 293T
ﺎــﺑ
ﺮﻳﻮﺼﺗ 3 - ﺐﻴﻛﺮﺗﻮﻧ رﻮﺘﻛو ﻪﺸﻘﻧ PGL4-LTR-Luc
. ﮓﻨﻴﻧﻮﻠﻛ HTLV-1LTR رﻮﺘﻛو رد زاﺮﻔﻴﺳﻮﻟ ﺮﺗرﻮﭙﻳر نژ ﺖﺳدﻻﺎﺑ رد
pGL4.17
ﻪﺑ ﺎﻫ ﺮﻤﻳاﺮﭘ هاﺮﻤﻫ ﻳد
دﻮﺷ ﻲﻣ هﺪ .
نارﺎﻜﻤﻫ و هداز يﺪﺒﻋ ﻲﺣﺎﺘﻓ ﻲﺒﺘﺠﻣ 64
ﻲﻧﺎــﻴﺑ ﺪﻴﻤــﺳﻼﭘ نوﺪــﺑ و ﺐــﻴﻛﺮﺗﻮﻧ رﻮــﺘﻛو Tax
ﺖﻜﻔــــﺴﻧاﺮﺗ (transiant transfection)
ﺪــــﺷ .
رﻮــﺘﻛو ﺎــﺑ لﻮﻠــﺳ ﻦﻴــﻨﭽﻤﻫ PGL4.17
نوﺪــﺑ وﺎــﺑ
ﻧﺎـﻴﺑ رﻮﺘﻛو Tax ﻲ
ﺪﻧﺪـﺷ ﺖﻜﻔـﺴﻧاﺮﺗ ، )
ناﻮـﻨﻋ ﻪـﺑ
ﻲﻔﻨﻣ لﺮﺘﻨﻛ .(
زا ﺮﺘـﺸﻴﺑ نﺎـﻴﺑ زا ﻲﻛﺎـﺣ ﺞﻳﺎﺘﻧ 50
ﺎــﺑ نﺎــﻣﺰﻤﻫ ﻪــﻛ ﻲﻳﺎــﻫ لﻮﻠــﺳ رد زاﺮﻔﻴــﺳﻮﻟ ﺮــﺑاﺮﺑ PGL4-LTR-Luc ﺰـــــــﻴﻧ و
pCDNA3.1+Tax
لﺮﺘﻨﻛ ﻪﺑ ﺖﺒﺴﻧ ﺪﻧدﻮﺑ هﺪﺷ ﺖﻜﻔﺴﻧاﺮﺗ ﻲـﻔﻨﻣ يﺎـﻫ
دﻮﺑ ) رادﻮﻤﻧ هرﺎﻤﺷ 1 .(
ﺚﺤﺑ يﺮﻴﮔ ﻪﺠﻴﺘﻧ و
سوﺮـﻳو ﻲـﺳرﺮﺑ ياﺮـﺑ يدوﺪﺤﻣ راﺰﺑا HTLV-1
ﺮــﻴﻏ تﺎﻴــﺻﻮﺼﺧ ﺖــﻬﺟ ﻪــﺑ ﻲﻟﻮﻠــﺳ ﺖــﺸﻛرد لﻮﻠﺳ ﻪﺑ ﻪﺘﺴﺑاو و ﻲﻜﻴﺘﻴﻟﻮﺘﻴﺳ سوﺮـﻳو ﻦـﻳا ندﻮﺑ
سوﺮﻳو فﻼﺧﺮﺑ ﺖﺳا ﻢﻫاﺮﻓHIV
. ﺮﺑ هوﻼـﻋ ﻲـﻧاﺮﮔ
ﺎـﻫ نآ ﺐـﻳﺎﻌﻣ ﺮـﮕﻳد زا ،دﻮـﺟﻮﻣ يﺎﻫ شور ﻲﻀﻌﺑ نﺎﻜﻣا مﺪﻋ سوﺮﻳو ﻲﮔﺪﻨﻨﻛ هدﻮﻟآ ﮓﻨﻳرﻮﺘﻴﻧﻮﻣ
ﻪﻛ ،
يدﺎـﻴﻨﺑ ﻒﻠﺘﺨﻣ تﺎﻌﻟﺎﻄﻣ ياﺮﺑ ﻲﺗﺎﻴﺣ و مزﻻ طﺮﺷ ﻮﻣ ناﺰــﻴﻣ ﻲــﺳرﺮﺑ ﻪــﻠﻤﺟ زا ﻲــﻜﻴﻨﻴﻠﻛ و نﻮﻴــﺳﺎﺗ
،
ﺰﻴﻟﺎــﻧآ و سوﺮــﻳو ﺮــﻴﺜﻜﺗ ﻪــﺧﺮﭼ ﻒــﻠﺘﺨﻣ ﻞــﺣاﺮﻣ ﻲﻳوراد ﺖﻣوﺎﻘﻣ
،ﺖﺳا ﻲﻣ ﺪﺷﺎﺑ .
ياﺮﺑ ﻲﻜﻳژﻮﻟﻮﻴﺑ ﻢﺘﺴﻴﺳ ﻚﻳ ﺖﺧﺎﺳ ﺖﻬﺟ ﻦﻳا زا
ﺪـﺳر ﻲـﻣ ﺮـﻈﻧ ﻪـﺑ يروﺮﺿ سوﺮﻳو ﻦﻳا .
يﺎـﻫ نژ
ﻪــﻠﻤﺟ زا يدﺪــﻌﺘﻣ ﺮﺗرﻮــﭙﻳر CAT)
GFP، Luc، (
ﻢﺘـﺴﻴﺳ رد ﻪـﻛ دراد دﻮﺟو درﻮـﻣ ﻲﻜﻳژﻮـﻟﻮﻴﺑ يﺎـﻫ
ﺪﻧﺮﻴﮔ ﻲﻣ راﺮﻗ هدﺎﻔﺘﺳا .
ﻪـﺑ ﻪﺟﻮﺗ ﺎﺑ ،ﻪﻌﻟﺎﻄﻣ ﻦﻳا رد
يﺎــﻨﺒﻣ ﺮــﺑ يرﻮــﺘﻛو ،زاﺮﻔﻴــﺳﻮﻟ يﻻﺎــﺑ ﺖﻴــﺳﺎﺴﺣ ﻦﺸﻳﻮﻴﺘﻛا ﺲﻧاﺮﺗ HTLV-1LTR
ﺮﺗرﻮـﭙﻳر نﺎـﻴﺑ و
رد زاﺮﻔﻴــﺳﻮﻟ ﻲﻳﺎــﻘﻟا نﺎــﻴﺑ و ﺪــﺷ ﻪﺘﺧﺎــﺳزاﺮﻔﻴﺳﻮﻟ لﻮﻠﺳ 293 ﻲﻧﺎـﻴﺑ رﻮﺘﻛو ﻂﺳﻮﺗ زا ﺮﺘـﺸﻴﺑ ،Tax
50
ﺪﺷ هﺪﻳد ﻲﻔﻨﻣ لﺮﺘﻨﻛ ﻪﺑ ﺖﺒﺴﻧ ﺮﺑاﺮﺑ .
ﺶﻧارﺎـــﻜﻤﻫ و ﺶﻨـــﻣدازآ ﻪـــﻛ ي ﻪـــﻌﻟﺎﻄﻣ رد ﺮﺗرﻮﭙﻳر رﻮﺘﻛو زا هدﺎﻔﺘﺳاﺎﺑ زاﺪﻳزﻮﺘﻛﻻﺎﮔ ﺎﺘﺑ
،ﺪﻨﺘﺷاد
ﻲﻧﺎـﻴﺑ رﻮـﺘﻛو ﺮـﺑاﺮﺑ رد ﻲﻳﺎﻘﻟا نﺎﻴﺑ ،Tax
10 ﺮـﺑاﺮﺑ
دﻮﺑ ﺮﺘﺸﻴﺑ لﺮﺘﻨﻛ ﻪﺑ ﺖﺒﺴﻧ )
17 .(
ﺮـﺿﺎﺣ ﻪﻌﻟﺎﻄﻣرد
و دﻮﺑ ﺮﺘﺸﻴﺑ رﺎﻴﺴﺑ فﻼﺘﺧا ﻦﻳا ﻦـﻳا ﺮـﺑ ﺎـﻣ دﺎـﻘﺘﻋا
رﻮـﺘﻛو زا ﺎﻫ نآ هدﺎﻔﺘﺳا ،توﺎﻔﺗ ﻦﻳا ﻞﻴﻟد ﻪﻛ ﺖﺳا ﺮﺗرﻮﭙﻳر زاﺪﻳزﻮﺘﻛﻻﺎﮔ ﺎﺘﺑ ﺖﻴـﺳﺎﺴﺣ ﻪـﻛ ﺪـﺷﺎﺑ ﻲـﻣ
دراد زاﺮﻔﻴﺳﻮﻟ ﻪﺑ ﺖﺒﺴﻧ يﺮﺗ ﻦﻳﺎﭘ .
ﻲـﻣ سوﺮﻳو ﺮﺗﻮﻣوﺮﭘ ﻪﻛ ﻦﻳا ﻪﺑ ﻪﺟﻮﺗ ﺎﺑ ﻲﻓﺮﻃ زا ﺎـﺑ ﻲﻟﻮﻠـﺳ ﮓﻨﻴﻟﺎﻨﮕﻴﺳ يﺎﻫ ﺮﻴﺴﻣ ﺮﻴﺛﺎﺗ ﺖﺤﺗ ﺪﻧاﻮﺗ
ﻪﺑﺎﺸﺗ ﻪﺑ ﻪﺟﻮﺗ )
ﺒﻗ ﻪﻛ رﻮﻃ نﺎﻤﻫ ﻪﺑﺎﺸﺗ ﺪﺷ هرﺎﺷا ﻼ
ﺎـﺑTRE Cyclic AMP Response Element ﺎـﻳ
CREنﺎﻤﻫ ( ي ﻪـﻨﻴﻣز نﺎـﻴﺑ نﺎﻜﻣا ،دﺮﻴﮔ راﺮﻗ نآ
رادﻮـــﻤﻧ 1 - ﻦـــﻳا رد رادﻮـــﻤﻧ يﺎـــﻫ لﻮﻠـــﺳ رد زاﺮﻔﻴـــﺳﻮﻟ نﺎـــﻴﺑ ناﺰـــﻴﻣ ﻪـــﻛ ﺖـــﺳا هﺪـــﺷ هداد نﺎـــﺸﻧ 293
ﺐـــﻴﻛﺮﺗﻮﻧ رﻮـــﺘﻛو ﺎـــﺑ هﺪـــﺷ ﺖﻜﻔـــﺴﻧاﺮﺗ
PGL4-LTR-Luc ﺎﺑ ﻪﺴﻳﺎﻘﻣ رد
رﻮﺘﻛو pGL4.17 رﻮﻀﺣ رد
ﻲﻧﺎﻴﺑ رﻮﺘﻛو pCDNA3.1+ Tax
زا ﺮﺘﺸﻴﺑ 50 ﺖـﺳا هدﻮﺑ ﺮﺑاﺮﺑ .
ﻦﻴﮕﻧﺎـﻴﻣ ﻞـﺻﺎﺣ ،ﺞﻳﺎـﺘﻧ
رد ﺎﻫ ﺶﻳﺎﻣزآ 3
رد و يﺮﺳ ﺪﺷﺎﺑ ﻲﻣ توﺎﻔﺘﻣ زور3
. Quantilum زا يﺎﻫ ﺖﻗر رد
6 - 10 و 5 - 10 ﻮﻟ ﺖﺒﺜﻣ لﺮﺘﻨﻛ ناﻮﻨﻋ ﻪﺑ ﺪﺷ هدﺎﻔﺘﺳا زاﺮﻔﻴﺳ
.
0 100 200 300 400 500 600 700 800 900 1000
pGL4.
17 + pCDN A3.1t ax
pGL4.
17
pGL4L TR-luc + pCDN A3.1t ax
pGL4L TR-luc
quant ilum
10-5
quant ilum
10-6
Series1 9448 7677 545303 17013 915875 109765
RL U × 10
3رادقمزارفيسول نايب
زارفيسول نايب هسياقم
ﻲﺑﺎﻳدر ياﺮﺑ زاﺮﻔﻴﺳﻮﻟ ﻲﻳﺎﻘﻟا ﺮﺗرﻮﭙﻳر رﻮﺘﻛو ﺖﺧﺎﺳ 65 ...
ﻦﻴﺌﺗوﺮﭘ ﻂﺳﻮﺗ ﺎﻘﻟا نوﺪﺑ زاﺮﻔﻴﺳﻮﻟ دراد دﻮﺟو Tax
.
ﻪﺑ ﺖﺒﺴﻧ ﺮﺘﻤﻛ رﺎﻴﺴﺑ ﻪﻌﻟﺎﻄﻣ ﻦﻳا رد ي ﻪﻨﻴﻣز نﺎﻴﺑ نﺎﻴﺑ ﻪﺑ ﺖﺒﺴﻧ ﺖﺴﺗ نﺎﻴﺑ توﺎﻔﺗ و دﻮﺑ ﻲﻠﺒﻗ ﻪﻌﻟﺎﻄﻣ ﺎﺗ ي ﻪﻨﻴﻣز 30
ﺮﺑاﺮﺑ ﻪـﻌﻟﺎﻄﻣ فﻼـﺧ ﺮﺑ و ﺪﺷ هﺪﻳد
ﻪﻨﻴﻣز نﺎﻴﺑ ﻲﻠﺒﻗ دﻮﺑ ضﺎﻤﻏا ﻞﺑﺎﻗ ي
. ،ﻦـﻳا ﺮﺑ هوﻼﻋ
نﺎـﻜﻣا ،ﺮـﺿﺎﺣ شور ﻪﺑ ﺎﻫ نآ شور ﺖﻳﺰﻣ ﻪﭼ ﺮﮔا موﺰـــﻟ ﻲـــﻟو دﻮـــﺑ شور نآ رد ﻲـــﻔﻴﻛ ﻲـــﺳرﺮﺑ نآ شور ﺐــﻳﺎﻌﻣ زا يﺰــﻴﻣآ ﮓــﻧرو نﻮﻴــﺳﺎﺴﻜﻴﻓ ﺖــﺳا ﻪــﻌﻟﺎﻄﻣ ﻦــﻳا ﻪــﺑ ﺖﺒــﺴﻧﺎﻫ .
ﻪــﻌﻟﺎﻄﻣ ﻦــﻳا رد
ﻮﻠﺳ ﺰﻴﻟ زا هدﺎﻔﺘﺳا ﺎﺑ ﻂﻘﻓ ﺶﺠﻨﺳ ﺎـﺑ ﻦﻴـﻨﭽﻤﻫ ﻲﻟ
ﺖﺳا مﺎﺠﻧا ﻞﺑﺎﻗ ﻲﺘﺣاﺮﺑ ﺮﺘﻤﻛ لﻮﻠﺳ داﺪﻌﺗ .
ﺎـﺑ ﺎﺘﺳار ﻢﻫ ﻪﻌﻟﺎﻄﻣ ﻦﻳا رد هﺪﻣآ ﺖﺳد ﻪﺑ ﺞﻳﺎﺘﻧ تﺎـــﻌﻟﺎﻄﻣ Yoshida
، ﺶﻧارﺎـــﻜﻤﻫ و دﻮـــﺑ
. يو رد
ياﺮـﺑ ﻲﻟﻮﻠـﺳ هدر ﻚـﻳ ﺖﺧﺎﺳ يور ﺮﺑ ﻪﻌﻟﺎﻄﻣرﺎﻨﻛ ﻲﻤﺘــﺴﻴﺳ يﮋﺗاﺮﺘــﺳا نﺎــﻤﻫ زا هدﺎﻔﺘــﺳا ﺎــﺑ ،HIV
سﺎـــﺳاﺮﺑ HTLV-1LTR
هدر زا هدﺎﻔﺘـــﺳا ﺎـــﺑ و
ﻠﺳ H9ﻲﻟﻮ دﻮﻤﻧ دﺎﺠﻳا ار زاﺮﻔﻴـﺳﻮﻟ ﻲﻳﺎﻘﻟا نﺎﻴﺑ و
ﺎـﺗ
زا ﺮﺘﺸﻴﺑ 40
دﻮﻤﻧ هﺪﻫﺎﺸﻣ ﺮﺑاﺮﺑ .
شور ﻚـﻳزا ﻪﺘﺒﻟا
لﻮﻠﺳ بﺎﺨﺘﻧا ياﺮﺑ ﻲﻤﻳﺪﻗ ﺮﺗرﻮﭙﻳر
رﻮـﺘﻛو ﻚـﻳ ﺎـﺑ
دﺮﻛ هدﺎﻔﺘﺳا لﻮﻠﺳ ندﺮﻛ راﺪﻳﺎﭘ ﺖﻬﺟ ﻪﻧﺎﮔاﺪﺟ .
ﺮـﺑ
رﻮـﺘﻛو مرﺎـﻬﭼ ﻞـﺴﻧ زا ﻪـﻌﻟﺎﻄﻣ ﻦـﻳا رد نآ فﻼﺧ ﺎﻴﻧ و هدﻮﺑ ﺮﻛرﺎﻣ ﻞﻣﺎﺣ ﻪﻛ ﺪﺷ هدﺎﻔﺘﺳا ﻞـﺣاﺮﻣ ﻪﺑ ز
ﺖﺷاﺪﻧ قﻮﻓ .
ﺪـﻧاﻮﺗ ﻲـﻣ هﺪﺷ ﻪﺘﺧﺎﺳ ﺐﻴﻛﺮﺗﻮﻧ رﻮﺘﻛو ﻦﻳاﺮﺑﺎﻨﺑ ياﺮـﺑ ، هﺪﻨﻳآ رد ﺮﮕﻧﺎﺸﻧ ﻲﻟﻮﻠﺳ هدر ﻚﻳ ﺖﺧﺎﺳ رد ﺎـﺑ وراد ﻒـﺸﻛ تﺎـﻌﻟﺎﻄﻣ ﻪﻠﻤﺟ زا ي ﻪﻳﺎﭘ تﺎﻌﻟﺎﻄﻣ ﻲـﺷﺎﻧ يﺎﻫ يرﺎﻤﻴﺑ ياﺮﺑ ﺮﺛﻮﻣ يوراد دﻮﺒﻧ ﻪﺑ ﻪﺟﻮﺗ سوﺮﻳو ﻦﻳا زا ﺮـﻴﺜﻜﺗ و دورو ﻞـﺣاﺮﻣ ﻲـﺳرﺮﺑ ﺎـﻳ و
ور رﺎﻛ ﻪﺑ سوﺮﻳو د
.
ﺮﻜﺸﺗ و ﺮﻳﺪﻘﺗ
سوﺮـﻳو ﺶـﺨﺑ رد كﺮﺘـﺸﻣ ترﻮﺻ ﻪﺑ حﺮﻃ ﻦﻳا و زاﻮﻫا ﻲﻜﺷﺰﭘ مﻮﻠﻋ رﻮﭘﺎﺷ يﺪﻨﺟ هﺎﮕﺸﻧاد ﻲﺳﺎﻨﺷ ناﺮـﻬﺗ رﻮﺘـﺳﺎﭘ ﻮﺘﻴﺘـﺴﻧا ﻲﺳﺎﻨﺷ سوﺮﻳو ﺶﺨﺑ ﺰﻴﻧ مزﻻ دﻮـﺧ ﺮـﺑ ﻪـﻟﺎﻘﻣ ﻦﻳا نﺎﮔﺪﻨﺴﻳﻮﻧو ﺖﻓﺮﮔ مﺎﺠﻧا يﺮﻴـﺴﻣﺮﮔ ﻲﻧﻮﻔﻋ يﺎﻫ يرﺎﻤﻴﺑ ﺰﻛﺮﻣزا ﺎﺗ ﺪﻨﻧاد ﻲﻣ ﻲﻜﺷﺰﭘ مﻮﻠﻋ رﻮﭘﺎﺷ يﺪﻨﺟ هﺎﮕﺸﻧاد زاﻮﻫا
) ﻲﺘﻤـﺴﻗ
بﻮـــــﺼﻣ حﺮـــــﻃ زا 1290
/ د / 20 / 8 / خرﻮـــــﻣ پ
28 / 4 / 1389 ( ﺮﻃﺎﺧ ﻪﺑ ناﺮﻬﺗ رﻮﺘﺳﺎﭘ ﻮﺘﻴﺘﺴﻧا ﺰﻴﻧ و
ﺪﻨﻳﺎﻤﻧ ﻲﻧاد رﺪﻗ حﺮﻃ ﻦﻳا ﻪﺟدﻮﺑ ﻦﻴﻣﺎﺗ .
ﻊﺑﺎﻨﻣ
1. Cooper SA, van der Loeff MS, Taylor GP. The neurology of HTLV-1 infection.
Pract Neurol. 2009 Feb; 9(1):16-26.
2. Balestrieri E, Ascolani A, Igarashi Y, Oki T, Mastino A, Balzarini J, et al.
Inhibition of cell-to-cell transmission of human T-cell lymphotropic virus type 1 in vitro by carbohydrate-binding agents.
Antimicrob Agents Chemother. 2008 Aug;
52(8):2771-9.
3. Tsukasaki K, Tanosaki S, DeVos S, Hofmann WK, Wachsman W, Gombart AF, et al. Identifying progression-associated genes in adult T-cell leukemia/lymphoma by using oligonucleotide microarrays. Int J Cancer. 2004 May 10; 109(6):875-81.
4. Balestrieri E, Matteucci C, Ascolani A, Piperno A, Romeo R, Romeo G, et al.
Effect of phosphonated carbocyclic 2'-oxa- 3'-aza-nucleoside on human T-cell leukemia virus type 1 infection in vitro.
Antimicrob Agents Chemother. 2008 Jan;
52(1):54-64.
5. Ishikawa T. Current status of therapeutic approaches to adult T-cell leukemia. Int J Hematol. 2003 Nov;
78(4):304-11.
6. Yoshida A, Piroozmand A, Sakurai A, Fujita M, Uchiyama T, Kimura T, et al.
Establishment of a biological assay system for human retroviral protease activity.
Microbes Infect. 2005 May; 7(5-6):820-4.
7. Nagao T, Yoshida A, Sakurai A, Piroozmand A, Jere A, Fujita M, et al.
Determination of HIV-1 infectivity by lymphocytic cell lines with integrated luciferase gene. Int J Mol Med. 2004 Dec;
14(6):1073-6.
8. Yarchoan R, Broder S. Progress in the development of antiviral therapy for HTLV-III-associated diseases. Important Adv Oncol. 1987:293-311.
9. Merzouki A, Patel P, Cassol S, Ennaji M, Tailor P, Turcotte FR, et al. HIV-1 gp120/160 expressing cells upregulate HIV- 1 LTR directed gene expression in a cell
نارﺎﻜﻤﻫ و هداز يﺪﺒﻋ ﻲﺣﺎﺘﻓ ﻲﺒﺘﺠﻣ 66 line transfected with HIV-1 LTR-reporter gene constructs. Cell Mol Biol (Noisy-le- grand). 1995 May; 41(3):445-52.
10. Gervaix A, West D, Leoni LM, Richman DD, Wong-Staal F, Corbeil J. A new reporter cell line to monitor HIV infection and drug susceptibility in vitro.
Proc Natl Acad Sci U S A. 1997 Apr 29;
94(9):4653-8.
11. Kimpton J, Emerman M. Detection of replication-competent and pseudotyped human immunodeficiency virus with a sensitive cell line on the basis of activation of an integrated beta-galactosidase gene. J Virol. 1992 Apr; 66(4):2232-9.
12. Rizzuto RB, Piazzo M, Murgia P, Welsh M, Hall SB, Chimeric JC. Green fluorscent protein as a tool for visualizing subcellular organelles in living cells.
Currbiol. 1995; 5635-642.
13. Spenlehauer C, Gordon CA, Trkola A, Moore JP. A luciferase-reporter gene- expressing T-cell line facilitates neutralization and drug-sensitivity assays that use either R5 or X4 strains of human immunodeficiency virus type 1. Virology.
2001 Feb 15; 280(2): 292-300.
14. Connor LM, Marriott SJ. Sequences flanking the cAMP responsive core of the HTLV-I tax response elements influence CREB protease sensitivity. Virology. 2000 May 10; 270(2):328-36.
15. Kitado H, Chen IS, Shah NP, Cann AJ, Shimotohno K, Fan H. U3 sequences from HTLV-I and -II LTRs confer pX protein response to a murine leukemia virus LTR. Science. 1987 Feb 20;
235(4791):901-4.
16. Azadmanesh K, Roohvand F, Arashkia AS, Kazanji M. Evaluation of stimulatory effects of HTLV-I Tax protein on CREB and NFkB related signaling pathways using two newly designed beta galactosidase based reporter plasmids.
Yakhteh Medical Journal. 2005; 6(24):218- 20.
17. Saffar SKA, Golmohammadi T, Golkar M, Amminian M, Mirshahabi H, Rafatpanah H. Production of recombinant Human T Lymphotropic Virus type 1 Tax
protein in Rosetta (DE3) bacterial host.Journal of Paramedical Sciences. 2010;
1(4):35-42.
Original Article http://rjms.tums.ac.ir
Construction of an inducible luciferase reporter vector for detection of HTLV-1 virus activity
Mojtaba Fatahi Abdizadeh, PhD. Virology Department, Ahvaz Jondishapor University of Medical Sciences, Ahvaz and Virology Department, Pasteur Institute of Iran, Tehran, Iran. [email protected]
*Manoochehr Makvandy, PhD. Tropical Medicine Research Center, Virology Department Ahvaz Jondishapor University of Medical Sciences, Ahvaz, Iran (*Corresponding author). [email protected] Alireza Samarbafzadeh, PhD. Virology Department, Ahvaz Jondishapor University of Medical Sciences,
Ahvaz, Iran. [email protected].
Maryam Latifnia, MD. Rasuol akram hospital, Tehran, Iran. [email protected].
Keyhan Azadmanesh, MD PhD. Virology Department, Pasteur Institute of Iran, Tehran, Iran.
Abstract
Background: HTLV-1 (Human T_cell lymphotropic virus type), with about 20 million individuals infected worldwide, is a global health problem and is endemic in certain area such as Japan and Khorasan province of Iran.
HTLV-1 is the causative agent of progressive diseases, Adult T cell Leukemia (ATL), and HTLV-I Associated Myelopathy/Tropical Spastic Paraparesis (HAM/TSP) which have no yet approved effective treatment. Due to non cytolytic characteristic of this virus and the cell associated properties, there is no routine producer for drug study in vitro and its confined to some HTLV infected cell lines. Therefore construction of a reporter vector is necessary to evaluate HTLV-1 infectivity in cell culture for drug studies. Designed reporters for retroviruses are usually based on LTR transactivatin. LTR region of HTLV-1 contains virus promoter that plays the most important role in replication and transcription by Tax transactivation effect.
Methods: LTR region was digested from pUCLTR-Lacz by HindIII and subcloned into MSC region of a promoterless reporter vector, pGL4.17, upstream to luciferase gene. Colonies were screened by Colony PCR, then selected colonies were confirmed by RE digestion and sequencing. HEK 293T cell line was transfected by recombinant vector and inducibility expressing of luciferase was evaluated.
Results: Recombinant vector has expressing levels more than 50 folds compared to control when co-transfected with Tax expressing vector into HEK293T cells.
Conclusions: According to high functionality of produced recombinant vector, it seems a good applicable tool to make an indicator cell line in subsequent basic and drug studies.
Keywords: Reporter vector, HTLV-1, Luciferase.
